Yöntem makalesi

Parazitoid Yaban Arısı Trichogramma dendrolimi'den Yapay Bir Konakçı Kullanarak Zehir Çıkarılması

DOI:

10.3791/66032

⸱

6 Ekim 2023

 ,  ,  ,  , 
1Department of Entomology, Nanjing Agricultural University, 2Key Laboratory of Integrated Pest Management of Crop of East China, Ministry of Agriculture, 3Sanya Institute of Nanjing Agricultural University

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, polietilen film ve amino asit çözeltisi ile oluşturulan yapay bir konakçı kullanarak Trichogramma dendrolimi'den zehir çıkarmak için bir protokol sunuyoruz.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Parazitoid yaban arıları, haşere biyokontrolü için paha biçilmez kaynaklar olarak hizmet eden çeşitli bir hymenopteran böcek grubudur. Başarılı parazitizm sağlamak için parazitoid yaban arıları, konakçılarının bağışıklığını bastırmak, konakçıların gelişimini, metabolizmasını ve hatta davranışlarını modüle etmek için konakçılarına zehir enjekte eder. 600.000'den fazla tahmini türle, parazitoid yaban arılarının çeşitliliği,, koni salyangozları ve örümcekler gibi diğer zehirli hayvanlarınkini geride bırakıyor. Parazitoid yaban arısı zehiri, haşere kontrolü ve tıpta potansiyel uygulamaları olan, yeterince keşfedilmemiş bir biyoaktif molekül kaynağıdır. Bununla birlikte, parazitoit zehrin toplanması, doğrudan veya elektriksel stimülasyonun kullanılamaması ve küçük boyutları nedeniyle diseksiyonun zorluğu nedeniyle zordur. Trichogramma , hem tarımda hem de ormanlarda lepidopteran zararlılarının biyolojik kontrolü için yaygın olarak kullanılan küçük (~0,5 mm) yumurta parazitoid yaban arısı cinsidir. Burada, yapay konakçılar kullanarak T. dendrolimi'den zehir çıkarmak için bir yöntem bildiriyoruz. Bu yapay konakçılar, polietilen film ve amino asit çözeltileri ile oluşturulur ve daha sonra parazitizm için Trichogramma yaban arıları ile aşılanır. Zehir daha sonra toplandı ve konsantre edildi. Bu yöntem, zehir rezervuarı diseksiyon protokollerinde yaygın bir sorun olan diseksiyonun neden olduğu diğer dokulardan kontaminasyonu önlerken, büyük miktarlarda Trichogramma zehirinin çıkarılmasını sağlar. Bu yenilikçi yaklaşım, Trichogramma zehirinin incelenmesini kolaylaştırarak yeni araştırmaların ve potansiyel uygulamaların önünü açıyor.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Parazitoid yaban arıları, biyolojik mücadele için önemli kaynaklar olan parazitik hymenopteran böceklerdir1. 600.000'den fazla tahmini türe sahip çok çeşitli parazitoid yaban arıları vardır2. Parazitoid yaban arılarının çeşitliliği,, koni salyangozları, örümcekler, akrepler ve arılar gibi diğer zehirli eklembacaklılarınkinden çok daha fazladır. Zehir, parazitoid yaban arılarında önemli bir parazit faktörüdür. Başarılı bir parazitizm için, konakçıya zehir enjekte edilir ve konakçının davranışını, bağışıklığını, gelişimini ve metabolizmasını modüle eder3. Dahası, parazitoid yaban arılarının zehiri, ....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Böcek yetiştirme

  1. Corcyra cephalonica'yı mısır unu üzerinde 26 ± 1°C sıcaklıkta ve %40 ± %10 bağıl nemde besleyin.
  2. Breed T. dendrolimi suşu, iç mekanlarda Corcyra cephalonica'nın yumurtalarını konakçı olarak kullanarak Jilin böceğinden elde edilir. Yaban arısı yetişkinlerini besleyin Drosophila tüplerinde 26 ± 1 °C sıcaklıkta,% 70 ±% 10 bağıl nem, açık (L): 14 saat: 10 saat karanlık (D) döneminde% 10 sakaroz suyu.

2. Polietilen plastik film yumurta kartlarının hazırlanması

  1. 16 cm uzunluğunda, 12 cm genişliğinde ve 20 μm kalın....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Temsili zehir örneklerinin protein konsantrasyonu, protein tahlil kiti kullanılarak ölçüldü ve sonuçlar Tablo 1'de sunuldu. Sonuçlar, bu yöntemle toplanan zehir proteini konsantrasyonunun 0.35 μg/μL ila 0.46 μg/μL arasında değiştiğini, amino asit çözeltisinin negatif kontrolünün ise sadece 0.03 μg/μL ila 0.05 μg/μL protein konsantrasyonuna sahip olduğunu gösterdi. Bu yöntemle toplanan zehir proteini konsantrasyonu, negatif kontrolden çok daha yüksektir, bu da bu yöntemin parazitik yaban arılarının zehiri.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, yapay konakçılar kullanarak T. dendrolimi'den zehir çıkarmak için bir yöntem sunuyoruz. Zehir toplama deneyinde kilit noktalar aşağıdaki gibidir. (1) Hazırlık sırasında, T. dendrolimi uygun bir CO2 konsantrasyonu ile hızlı bir şekilde uyuşturulmalıdır. CO2 konsantrasyonu çok düşükse, Trichogramma'yı hızlı bir şekilde uyuşturmak yetersiz olacaktır. Tersine, konsantrasyon çok yüksekse, Trichogramma ölebilir ve yapay konağı parazitleme yeteneklerini azaltabil.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarın ifşa edecek hiçbir şeyi yoktur ve rekabet eden mali çıkarları yoktur.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hainan Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı'ndan (Hibe no. 323QN262), Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı'ndan (Hibe no. 31701843 ve 32172483), Jiangsu Tarım Bilimi ve Teknoloji İnovasyon Fonu'ndan (Hibe No. CX (22) 3012 ve CX (21) 3008), Jiangsu Eyaleti "Shuangchuang Doktor" Vakfı (Hibe No. 202030472) ve Nanjing Ziraat Üniversitesi başlangıç fonu (Hibe No. 804018).

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
10 & mu; m Naylon NetKırlangıçNY1002500Yumurtaları filtrelemek için
%10 Polivinil alkolAladdinP139533Çekmek için  T. dendrolimi  yumurtlamak için
% 10 Sükroz suyuSinopharm Kimyasal Reaktifi 10021463Besleme Trichogramma dendrolimi
4x LDS yükleme tamponuAce DonanımB23010301SDS-PAGE
Toplama kutusuDeli8555T. dendrolimi parazitizm için
Konteyner Gelecek SAYFASI  4– % 12 (12 kuyu)Ace DonanımJ70236502XSDS-PAGE
GenScript eStain L1 protein boyama aparatıGenScriptL00753SDS-PAGE
Cam taşlama çubuğu   Applygentb6268Yarım daire biçimli çıkıntılar 
L-LösinSolarbioL0011Yapay konak bileşenleri
L-HistidinAladdinA2219458Yapay konak bileşenleri
L-FenilalaninSolarbioP0010Yapay konak bileşenleri
Mini-SantrifüjlerScilogexD1008Santrifüj
MOPS-SDS çalışan tamponAce DonanımB23021SDS-PAGE
Omni-Easy Anında BCA protein tahlil kitiŞangay Yamay Biyomedikal Teknolojisi & nbsp;ZJ102Zehir protein konsantrasyonunun esimasyonu için
96 delikli PCR plaka düzeniThermo FisherAB1400LYarım daire çıkıntıları 
Polietilen plastik filmSuzhou Aopang Ticaret  001c5427Yapay yumurta kartı
Önceden boyanmış renkli protein işaretleyici (10 – 180 kDa)YiFeiXue BiotechYWB007SDS-PAGE
Lastik bantGuangzhou qianrui biyoloji bilim ve teknoloji009Plastik filmi ve toplama kutusunu sıkın
Silikon kauçuk septa mat, 96 kuyulu, yuvarlak delikliSangon BiotechF504416-0001Yarım daire biçimli çıkıntılar 

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Pennacchio, F., Strand, M. R. Evolution of developmental strategies in parasitic hymenoptera. Annual Review of Entomology. 51, 233-258 (2006).
  2. Yan, Z. C., Ye, X. H., Wang, B. B., Fang, Q., Ye, G. Y. Research advances on....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Parasitoid Ar ZehriZehir EkstraksiyonuYapay Konak Y ntemiBiyolojik Zararl KontrolZehir Proteini AnaliziSDS Pagemm noterapi UygulamalarPolietilen FilmAmino Asit Sol syonu

İlgili makaleler