Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Bitkilerde Tipik Triazol Pestisitlerin Metabolitlerinin Sitotoksisitesinin Değerlendirilmesi

1.5K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/66048

⸱

22 Aralık 2023

 ,  ,  ,  , 
1Key Laboratory of Microbial Control Technology for Industrial Pollution in Zhejiang Province, College of Environment, Zhejiang University of Technology, 2Research and Teaching Center of Agriculture, Zhejiang Open University, 3International Joint Research Center for Persistent Toxic Substances (IJRC-PTS), College of Environment, Zhejiang University of Technology

Bu makalede

Özet

Protokol, bitkilerde triazol pestisitlerinin metabolitlerinin integral sitotoksisitesini değerlendirmek için yeni bir yöntemi açıklamaktadır.

Özet

Antropojenik faaliyetler nedeniyle çevreye çeşitli organik kirleticiler salınmıştır. Bu kirleticiler, mahsul bitkileri tarafından alınabilir ve besin zinciri boyunca ekosistem ve insan sağlığı için potansiyel tehditlere neden olabilir. Bitkilerdeki kirleticilerin biyotransformasyonu, ana bileşiklerinden daha toksik olabilen bir dizi metabolit üretir, bu da toksisite değerlendirmesi sırasında metabolitlerin dikkate alınması gerektiğini ima eder. Bununla birlikte, bitkilerdeki kirleticilerin metabolitleri son derece karmaşıktır ve tüm metabolitlerin toksikolojik bilgilerinin kapsamlı bir şekilde elde edilmesini zorlaştırır. Bu çalışma, bitkilerdeki kirletici metabolitlerin bütünsel sitotoksisitesini, toksikolojik testler sırasında bir bütün olarak ele alarak değerlendirmek için bir strateji önermiştir. Geniş spektrumlu fungisitlerin bir sınıfı olan triazol pestisitler, tarımsal üretimde yaygın olarak uygulanmaktadır. Tarım arazilerindeki kalıntı kirliliği giderek daha fazla dikkat çekmiştir. Bu nedenle, test edilen kirleticiler olarak flusilazol, dinikonazol, tebukonazol ve propikonazol dahil olmak üzere dört triazol pestisit seçildi. Metabolitler, havuç kallusunun test edilmiş triazol pestisitlerle muamele edilmesiyle üretildi. 72 saatlik muameleden sonra, havuç kallustaki pestisitlerin metabolitleri ekstrakte edildi, ardından Caco-2 hücre hattı kullanılarak toksikolojik testler yapıldı. Sonuçlar, havuç kallusunda test edilen pestisitlerin metabolitlerinin, Caco-2 hücrelerinin (P>0.05) canlılığını önemli ölçüde inhibe etmediğini ve pestisit metabolitlerinin sitotoksisitesini göstermediğini gösterdi. Önerilen bu yöntem, bitkilerdeki kirletici metabolitlerin sitotoksisitesini değerlendirmek için yeni bir yol açmaktadır ve bu da kesin toksisite değerlendirmesi için değerli veriler sağlaması beklenmektedir.

Giriş

Tarım arazilerinde yetişen mahsul bitkileri, antropojenik faaliyetlerden kaynaklanan çeşitli organik kirleticilere maruz kalabilir 1,2. Kirleticiler bitkiler tarafından alınabilir ve besin zincirleri yoluyla ekosistem ve insan sağlığı için daha fazla tehdide neden olabilir 3,4. Bitkilerdeki ksenobiyotikler muhtemelen Faz I ve II metabolizmaları5 gibi bir dizi biyotransformasyona uğrar ve bir dizi metabolit üretir. Bitkilerde yeşil karaciğer kavramına göre, bitki metabolizması ksenobiyotiklerintoksisitesini azaltabilir 6,7. Bununla birlikte, bazı metabolitlerin toksisitesinin ebeveynlerinden daha yüksek olabileceği ortaya çıkmıştır. Örneğin, tetrabromobisfenol A'nın (TBBPA) debromlu ürününün ve bisfenol A'nın (BPA) O-metillenmiş ürünününebeveynlerinden çok daha toksik olduğu kanıtlanmıştır 8,9 ve debrominasyon ve O-metilasyon, bitkilerde ana Faz I metabolizma yollarını içerir. Bu nedenle, yalnızca bitkilerdeki kirletici ebeveynlere dayanan toksisite değerlendirmesi doğru değildir, ancak karşılık gelen metabolitler dikkate alınmalıdır.

Bitkilerdeki ksenobiyotiklerin metabolitleri son derece karmaşıktır10,11, bu da onları kapsamlı bir şekilde tanımlamayı ve ayırmayı zorlaştırır. Ek olarak, tanımlanmış metabolitlerin sadece birkaç standardı elde edilebilir. Bu nedenle, tüm metabolitlerin toksikolojik verileri mevcut değildir, bu da kapsamlı bir toksisite değerlendirmesini engeller. Bu çalışma, bitkilerdeki kirletici metabolitlerinin bütünsel toksisitesini, toksikolojik testler sırasında bir bütün olarak ele alarak değerlendirmek için bir strateji önerdi ve bitkilerdeki kirleticilerin kesin toksisite değerlendirmesi için yeni veriler sağladı. Önceki çalışmamız, bitki kallus kültürünün bitkilerde ksenobiyotiklerin metabolitlerini elde etmek için basit ve etkili bir yol açtığını ortaya koymuştur12. Buna göre, bu çalışmada bitkilerdeki kirleticilerin metabolitlerini oluşturmak için bitki kallus kültürü kullanılmış, ardından bir insan hücre hattı kullanılarak kimyasal ekstraksiyon ve toksikolojik testler yapılmıştır. Bağırsak sistemi, hayvanlara ve insanlara maruz kalan ksenobiyotiklerin doğrudan hedef organlarından biridir. Caco-2 hücre hattının, in vitro 13,14,15 ksenobiyotiklerin bağırsak davranışlarını ve toksisitesini araştırmak için en iyi model olduğu kanıtlanmıştır. Bu nedenle, bu çalışmada Caco-2 hücre modeli seçilmiştir.

Geniş spektrumlu fungisitlerin bir sınıfı olan triazol pestisitler, tarımsal üretimde yaygın olarak uygulanmaktadır16. Tarım arazilerindeki kalıntı kirliliği giderek daha fazla dikkat çekmektedir 17,18. Burada, flusilazol, dinikonazol, tebukonazol ve propikonazol dahil olmak üzere yaygın olarak kullanılan dört triazol pestisit, tipik kirleticiler olarak seçilmiştir. Bu çalışmada taze, yemeye hazır sebzeler için temsili bitki olarak havuç seçilmiştir. Havuç kallus başlangıçta 100 mg / L'lik bir konsantrasyonda test edilen pestisitlere maruz bırakıldı. 72 saat maruz kaldıktan sonra, Caco-2 hücre hattı kullanılarak sitotoksisiteyi değerlendirmek için metabolitler ekstrakte edildi. Bu yöntem, bitkilerdeki diğer kirletici türlerinin metabolitlerinin integral sitotoksisitesini değerlendirmek için kolayca genişletilebilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

1. Havuç nasırının farklılaşması

NOT: Havuç kallusunun farklılaşması için ayrıntılı protokol önceki bir çalışmadaaçıklanmıştır 12. İşte kısa bir açıklama.

  1. Vernalize tohumların yüzeyini 20 dakika boyunca% 75 etanol ile sterilize edin, ardından 20 dakika% 20 H2O2 ile sterilize edin. Damıtılmış suyla en az 3 kez yıkayın.
  2. Tohumları hormonsuz agar jelleşmiş (a-h% 1) Murashige ve Skoog (MS) ortamında (pH = 5.8, 121 ° C'de otoklavlanmış) ekin ve fideleri oluşturmak için 15 gün boyunca 26 ° C'de 16 saat fotoperiyot (350 μmol / m2s) altında inkübe edin.
  3. Fidelerin hipokotil ve kotiledonunu küçük parçalara (0,5 cm) keserek eksplantları hasat edin ve eksplantları 1 mg/L, 2,4-diklorofenoksiasetik asit ve 0,5 mg/L 6-benzilaminopurin fitokinin içeren MS besiyerinde 26 °C'de karanlıkta 3-4 hafta inkübe edin ve nasırı indüklemek için 3-4 hafta inkübe edin.
  4. Nasırı (yaklaşık 1 cm çapında, kompakt) neşter ve forseps ile toplayın.

2. Havuç nasırının pestisitlerle tedavisi

  1. 10 mg flusilazol, dinikonazol, tebukonazol ve propikonazolün her birini 100 mL steril MS ortamında 100 mg / L nihai konsantrasyonlarla (pH 5.6-7.0 arasında) çözün.
    NOT: Test edilen pestisitlerin tedavi konsantrasyonu, Caco-2 hücresine maksimum %50 hücre büyümesi inhibisyon konsantrasyonu (IC50) olarak seçilmiştir.
  2. 3 g havuç kallusunu (adım 1.4'ten itibaren) 10 mL hazırlanmış pestisit solüsyonları (adım 2.1'den itibaren) ile steril koşullar altında cam şişelerde karıştırın.
  3. Steril koşullar altında cam şişelerde 3 g havuç kallusunu (adım 1.4'ten itibaren) 10 mL aseptik MS ortamı ile karıştırın.
    NOT: Tüm cam şişeler otoklavlanmıştır.
  4. Havuç kallusunu (adım 2.2 ve 2.3'ten itibaren) 130 rpm'de ve 26 °C'de karanlıkta 72 saat inkübe edin.
    Tüm tedavileri üç nüsha halinde ayarlayın.
  5. 72 saat inkübasyondan sonra cam elyaf filtreler (0.45 μm) kullanarak filtrasyon yoluyla havuç kallusunu ortamdan toplayın. Nasırı 3 kez ultra saf suyla yıkayın.
  6. Kasırı -55 °C'de dondurarak kurutun ve ardından 70 Hz'de 3 dakika boyunca yüksek verimli bir doku öğütücü kullanarak homojenize edin.

3. Havuç nasırının kimyasal ekstraksiyonu

  1. Dondurularak kurutulmuş kallusun 0.2 g öğütülmüş tozunu bir santrifüj tüpünde (10 mL) 3 mL asetonitril ile karıştırın.
  2. Santrifüj tüpünü 8 dakika boyunca vorteksleyin ve ardından 5 dakika (150 W, 40 kHz) sonikleştirin.
  3. Süpernatantları, santrifüjlemeden sonra 8.000 x g'da 4 °C'de 10 dakika pipetleyerek toplayın.
  4. Ekstraksiyon prosedürlerini 3x tekrarlayın ve ekstraktları temiz bir santrifüj tüpünde (10 mL) toplayın.
  5. Havuzlanan ekstraktları 40 °C'de bir nitrojen üfleme yoğunlaştırıcısı kullanarak kuruyana kadar konsantre edin.
  6. Ekstraktların kalıntılarını (adım 3.5'ten itibaren) 1 mL Dulbecco'nun modifiye edilmiş Eagle's besiyeri (DMEM) ile %0.3 dimetil sülfoksit (DMSO) ile yeniden çözün.
    NOT: Adım 3.6'daki kalıntılar, pestisitle muamele edilen kallus ekstraktlarından elde edilmiştir (adım 2.2'den itibaren).
  7. Ekstraktların kalıntılarını (adım 3.5'ten itibaren)% 0.3 DMSO ile 1 mL DMEM ile yeniden çözün ve sırasıyla 1 mg flusilazol, dinikonazol, tebukonazol ve propikonazolü 4 farklı tüpte çözün.
    NOT: Adım 3.7'deki kalıntılar, boş kallus ekstraktlarından elde edilmiştir (adım 2.3'ten itibaren).
    NOT: DMEM %10 fetal sığır serumu (FBS) ve %1 antibiyotik (penisilin ve streptomisin) ile hazırlandı.

4. Caco-2 hücresinin resüsitasyonu

NOT: Caco-2 hücre testlerinde yer alan tüm reaktifler ve malzemeler 20 dakika boyunca otoklavlandı ve 2 saat boyunca ultraviyole ışık altında sterilize edildi.

  1. Kriyoprezervasyon tüpünü (donmuş hücrelerin saklanması) sıvı nitrojen tankından çıkarın ve hızlı bir şekilde 37 °C'deki bir su banyosuna aktarın. Donmuş çözeltiyi çözmek için sürekli sallayın.
    NOT: Sallarken kriyoprezervasyon tüpünün kapağının üzerinden su akmasını önleyin.
  2. Donmuş çözelti çözüldükten sonra kriyoprezervasyon tüpünün yüzeyini% 75 alkol ile dezenfekte edin. Hücre çözeltisini pipetleme yoluyla hızlı bir şekilde steril bir santrifüj tüpüne aktarın.
  3. 3 dakika boyunca 4 ° C'de 1.000 x g'da santrifüjlemeden sonra kriyoprezervasyon tüpündeki süpernatanları çıkarın. 1 mL DMEM ekleyin ve hafifçe vurarak ve sallayarak hücreleri askıya alın.
  4. Hücre süspansiyonunu (adım 4.3'ten itibaren) pipetleme yoluyla bir cam şişeye aktarın. Cam şişeye 5 mL DMEM ekleyin ve hücreleri eşit şekilde dağıtmak için cam şişeyi hafifçe sallayın.
  5. Hücreleri bir inkübatörde 37 ° C'de% 5 CO2 ile inkübe edin.
    NOT: 4.2-4.4 adımları süper temiz bir tezgahta gerçekleştirilmiştir.

5. Caco-2 hücresinin geçişi

  1. Cam şişeyi inkübatörden çıkarın ve hücre yoğunluğu %80'in üzerine çıktığında kültür ortamını atın. Hücreleri PBS 3x ile yıkayın.
  2. 1 mL tripsin-EDTA çözeltisi ekleyin ve hücrelerle tam teması sağlamak için eşit şekilde yayın.
  3. Hücreler yapışık şekilden küçük yuvarlak noktaya küçüldüğünde ve mikroskopla gözlem altında asılı kalmadığında (100x büyütme) sindirim solüsyonunu çıkarın. Hücrelerin çıkarılmasını sağlamak için şişe duvarına hafifçe vurun.
  4. 2 mL DMEM ekleyin, şişe duvarının durulanmasını 10 kez tekrarlayın, şişe duvarına hafifçe vurun ve 1 mL hücre süspansiyonunu başka bir cam şişeye aktarın.
  5. Cam şişelere 5 mL DMEM ekleyin. Hücreleri eşit şekilde dağıtmak için şişe duvarına hafifçe vurun.
  6. Hücreleri inkübatörde 37 °C'de% 5 CO2 ile inkübe edin. Hücre yoğunluğu %80'in üzerine çıkana kadar kültür ortamını her 24 saatte bir taze DMEM ile değiştirin.
  7. Aşağıdaki maruz kalma testleri için yeterli hücre (yaklaşık 2 x 106) toplanana kadar hücre geçiş prosedürlerini tekrarlayın.
    NOT: 5.1-5.5 adımları süper temiz tezgahta gerçekleştirilmiştir. Hücre sayısı bir hemositometre19 ile belirlendi.

6. Caco-2 hücresinin maruz kalması

  1. Cam şişeleri (adım 5.7'den) inkübatörden çıkarın ve hücreleri toplamak için 5.1-5.4 adımlarını tekrarlayın.
  2. Hücreleri eşit şekilde dağıtmak ve hücre süspansiyonlarını bir santrifüj tüpüne (15 mL) aktarmak için şişe duvarına hafifçe vurun.
  3. Yaklaşık 1 x 105 hücre / mL'lik bir hücre yoğunluğuna ulaşmak için hücre süspansiyonunu (adım 6.2'den itibaren) sitometri ile kombinasyon halinde DMEM ile seyreltin. Hücreleri eşit şekilde dağıtmak için şişe duvarına hafifçe vurun.
  4. Kenar etkisi nedeniyle kültür ortamının buharlaşmasını önlemek için 96 oyuklu plakanın dış kuyucuklarına 100 μL PBS ekleyin.
    NOT: Hücre süspansiyonunu düzgün tutmak için santrifüj tüpünün duvarına sürekli olarak dokunun.
  5. 96 oyuklu plakanın sol oyuklarına 100 μL hücre süspansiyonu (adım 6.3'ten itibaren) ekleyin ve 10 dakika dinlenmeye bırakın.
  6. İnkübatördeki hücreleri 37 ° C'de% 5 CO2 ile 48 saat inkübe edin.
  7. 48 saatlik inkübasyondan sonra 96 oyuklu plakayı inkübatörden çıkarın ve kültür ortamını atın.
  8. Her oyuğa 100 μL çözelti (adım 3.6'dan itibaren) ekleyerek bir pestisit metabolit grubu ayarlayın.
    NOT: Adım 6.8'deki her kuyucukta, 0.1 mg ebeveynden üretilen pestisit metabolitleri vardı.
  9. Karşılaştırma için her bir oyuğa 100 μL çözelti (adım 3.7'den itibaren) ekleyerek bir pestisit ana grubu belirleyin.
    NOT: Adım 6.9'daki her kuyucukta 0.1 mg pestisit ebeveyni vardı.
  10. Her oyukta %0,3 DMSO ile 100 μL DMEM ekleyerek boş bir kontrol ayarlayın. Her grup için altı kuyucuk kullanın (adım 6.8-6.9).
  11. İnkübatördeki hücreleri 37 ° C'de% 5 CO2 ile 24 saat inkübe edin.
    NOT: 6.1-6.5 ve 6.7-6.10 adımları süper temiz tezgahta gerçekleştirilmiştir.

7. Hücre canlılığının değerlendirilmesi

  1. 96 oyuklu plakayı (6.11'den) inkübatörden çıkarın ve 24 saat maruz kaldıktan sonra kültür ortamını atın. Hücreleri PBS 2x ile yıkayın.
  2. Her oyuğa 100 μL DMEM ekleyin ve ardından 10 μL CCK-8 reaktifi ekleyin. Hücreleri eşit şekilde dağıtmak için plakayı hafifçe sallayın.
  3. İnkübatördeki hücreleri 37 ° C'de% 5 CO2 ile 4 saat inkübe edin.
  4. 4 saatlik inkübasyondan sonra 96 oyuklu plakayı inkübatörden çıkarın ve bir floresan spektrofotometresi ile 450 nm'de optik absorbansı (OD) ölçün.
  5. Hücre canlılığını aşağıdaki denklemle hesaplayın:
    hücre canlılığı (%) = (ODdeney grubu - ODDMEM) / (ODkontrolü - ODDMEM)×%100.
    NOT: 7.1-7.2 arası adımlar süper temiz tezgahta gerçekleştirilmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Şekil 1 , havuç kallusundaki pestisit metabolitlerinin üretimi, ekstraksiyonu ve sitotoksisite değerlendirmesi için önerilen yöntemin şemasını temsil etmektedir. Şekil 2'de, test edilen pestisitlerin alım ve metabolizma kinetik eğrileri, buradan kültür ortamındaki pestisit konsantrasyonlarının katlanarak azaldığını, havuç kallusundakilerin ise artmaya başladığını, 4 veya 8 saatte zirve yaptığını ve ardından kademeli bir düşüş olduğunu görebiliriz. Bu sonuçlar, p...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu protokol, bitki kallusları ve insan hücre modellerini birleştirerek bitkilerde triazol pestisitlerinin metabolitlerinin integral sitotoksisitesini değerlendirmek için geliştirilmiştir. Önerilen bu protokol için kritik adımlar, bitki kallus kültürü ve Caco-2 hücresidir. Bitki kallus kültürü için en zor kısım ve göreceli tavsiyeler önceki çalışmamızda verilmiştir12. Burada, hücre bakımının Caco-2 hücre kültürü için en zor kısım olduğu unutulmamalıdır, çünkü hücre...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (21976160) ve Zhejiang Eyaleti Kamu Refahı Teknolojisi Uygulama Araştırma Projesi (LGF21B070006) tarafından desteklenmiştir.

     

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
2,4-diklorofenoksiasetik asitWAKO1 mg / L
% 20 H2< / sub>O2< / sub>Sinopharm Kimyasal Reaktif Co., Ltd.10011218-500ML
6-benzilaminopurinWAKO0.5 mg/L
%75 etanolSinopharm Kimyasal Reaktif Co., Ltd.1269101-500 mL
96 oyuklu plakaThermo Fisher
AsetonitrilSigma-Aldrich
Yapay iklim inkübatörüNingbo DongNan Lab Equipment Co., LtdRDN-1000A-4
OtoklavlarSTIKMJ-Serisi
Caco-2 hücreleriNuoyang Biotechnology Co.,Ltd.
CCK8 reaktifleriNanjing Jiancheng Biyomühendislik Enstitüsü, ÇinG021-1-3
SantrifüjThermo Fisher
CO2 inkübatörLabtripHWJ-3-160
Dimetil sülfoksitSolarbio Yaşam BilimleriD8371
Dinikonazol, %98,7J& K Scientific83657-24-3
Dulbecco'nun modifiye edilmiş Eagle'ın ortamıSolarbio Yaşam Bilimleri11965-500 mL
elektronik teraziShanghai Precision Instrument Co., LtdFA1004B
Fetal sığır serumuCellmax
Floresan spektrofotometreTecanInfinite M200
Flusilazol, %98,5J& K Bilimsel85509-19-9   
Dondurarak kurutucuSCIENTZ
Yüksek verimli doku öğütücüSCIENTZ
Ters mikroskopLeica BiosystemsDMi1
Milli-Q sistemiMilliporeMS1922801-4L
Murashige & Skoog ortamıHOPEBIOHB8469-7
Azot üfleme yoğunlaştırıcıAOSHENGMD200-2
PBSSolarbio Yaşam BilimleriP1022-500 mL
Penisilin-Streptomisin SıvıSolarbio Yaşam BilimleriP1400-100 mL
Propikonazol, %100J& K Bilimsel60207-90-1 
Araştırma artıEppendorf10-1000 μ L
Küçük Parmak Havuç Tohumları (Daucus carota var. sativus)Shouguang Tohum Sanayi A.Ş., Ltd
Sallama Kuluçka MakineleriŞangay bluepard instruments Co., Ltd.THZ-98AB
Tebukonazol, %100J& K Scientific107534-96-3
Tripsin-EDTA çözeltisiSolarbio Yaşam BilimleriT1300-100 mL
Ultrason makinesiZKIUC-6
UV ile sterilize edilmiş süper temiz tezgahAIRTECH
Vorteks aletiWuxi Laipu Enstrüman Equipment Co, LtdBV-1010

Kaynaklar

  1. Fan, Y., et al. Uptake of halogenated organic compounds (HOCs) into peanut and corn during the whole life cycle grown in an agricultural field. Environ Pollut. 263, 114400(2020).
  2. Wu, Q., et al. Trace metals in e-waste lead to serious health risk through consumption of rice growing near an abandoned e-waste recycling site: Comparisons with PBDEs and AHFRs. Environ Pollut. 247, 46-54 (2019).
  3. Liu, A. F., et al. Tetrabromobisphenol-A/S and nine novel analogs in biological samples from the Chinese Bohai Sea: Implications for trophic transfer. Environ Sci Technol. 50 (8), 4203-4211 (2016).
  4. Awasthi, A. K., Zeng, X., Li, J. Environmental pollution of electronic waste recycling in India: A critical review. Environ Pollut. 211, 259-270 (2016).
  5. Zhang, Q., et al. Plant accumulation and transformation of brominated and organophosphate flame retardants: A review. Environ Pollut. 288, 117742(2021).
  6. Sandermann, H. Higher plant metabolism of xenobiotics: the 'green liver' concept. Pharmacogenetics. 4, 225-241 (1994).
  7. Zhang, J. J., Yang, H. Metabolism and detoxification of pesticides in plants. Sci Total Environ. 790, 148034(2021).
  8. Debenest, T., et al. Ecotoxicity of a brominated flame retardant (tetrabromobisphenol A) and its derivatives to aquatic organisms. Comp Biochem Phys C. 152 (4), 407-412 (2010).
  9. McCormick, J. M., Van Es, T., Cooper, K. R., White, L. A., Haggblom, M. M. Microbially mediated O-methylation of bisphenol A results in metabolites with increased toxicity to the developing zebrafish (Danio rerio) embryo. Environ Sci Technol. 45 (15), 6567-6574 (2011).
  10. Zhang, Q., et al. Multiple metabolic pathways of 2,4,6-tribromophenol in rice plants. Environ Sci Technol. 53 (13), 7473-7482 (2019).
  11. Hou, X., et al. Glycosylation of tetrabromobisphenol A in pumpkin. Environ Sci Technol. 53 (15), 8805-8812 (2019).
  12. Wu, J., et al. Elucidating the metabolism of 2,4-Dibromophenol in plants. J Vis Exp. (192), e65089(2023).
  13. Zucco, F., et al. An Inter-laboratory study to evaluate the effects of medium composition on the differentiation and barrier function of Caco-2 cell lines. Atla-Altern Lab Anim. 33, 603-618 (2005).
  14. Eisenbrand, G., et al. Methods of in vitro toxicology. Food Chem Toxicol. 40, 193-236 (2002).
  15. Sambuy, Y., et al. The Caco-2 cell line as a model of the intestinal barrier: influence of cell and culture-related factors on Caco-2 cell functional characteristics. Cell Biol Toxicol. 21, 1-26 (2005).
  16. Li, H., et al. Uptake, translocation, and subcellular distribution of three triazole pesticides in rice. Environ Sci Pollut Res. 29 (17), 25581-25590 (2022).
  17. Satapute, P., Kamble, M. V., Adhikari, S. S., Jogaiah, S. Influence of triazole pesticides on tillage soil microbial populations and metabolic changes. Sci Total Environ. 651, 2334-2344 (2019).
  18. Xu, Y., et al. A possible but unrecognized risk of acceptable daily intake dose triazole pesticides exposure-bile acid disturbance induced pharmacokinetic changes of oral medication. Chemosphere. 322, 138209(2023).
  19. Louis, K. S., Siegel, A. C. Cell viability analysis using trypan blue: manual and automated methods. Methods Mol Biol. 740, 7-12 (2011).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

Triazol Pestisit MetabolitleriSitotoksisite DeğerlendirmesiBitki Kallus KültürüPestisit BiyotransformasyonuCaco-2 Hücre HattıPestisit Kalıntı AnaliziToksikolojik TestlerHavuç Kallus EkstraksiyonuHücre Canlılığı AnaliziCCK8 Reaktifi
Bitkilerde Tipik Triazol Pestisitlerin Metabolitlerinin Sitotoksisitesinin Değerlendirilmesi
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.