Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

İn Vitro Periferik Sinir Rejenerasyonu için Nanosaniye Darbeli Elektrik Alanı ile Schwann Hücre Büyümesinin Düzenlenmesi

1.8K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/66097

⸱

3 Mayıs 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Orthopedics, The First Affiliated Hospital, College of Medicine, Zhejiang University, 2College of Medicine, Zhejiang University, 3Department of Orthopedics, The Second Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University, 4Department of Orthopedic Physical Therapy, Faculty of Physical Therapy, Nahda University in Beni Suef, 5Plastic & Cosmetic Center, The First Affiliated Hospital, College of Medicine, Zhejiang University

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Burada, Schwann hücrelerini in vitro olarak uyarmak için nanosaniye darbeli elektrik alanı (nsPEF) uygulamak için bir protokol sunuyoruz. İlgili faktörlerin ve hücre davranışı değişikliklerinin sentezi ve salgılanma yeteneği, nsPOF kullanılarak başarılı stimülasyonu doğruladı. Çalışma, periferik sinir rejenerasyon yönteminin olumlu bir görünümünü vermektedir.

Özet

Schwann hücreleri (SK'ler), periferik sinir sisteminin miyelinli hücreleridir ve periferik sinir rejenerasyonunda çok önemli bir rol oynarlar. Nanosaniye Darbe Elektrik Alanı (nsPEF), hücre proliferasyonunu ve diğer biyolojik süreçleri uyarmada etkili olduğu gösterilmiş, sinir elektriksel stimülasyonunda uygulanabilir yeni ortaya çıkan bir yöntemdir. SK'lerin nsPEF altında önemli değişikliklere uğrayıp uğramadığını değerlendirmek ve yeni periferik sinir rejenerasyon yöntemlerinin potansiyelini keşfetmeye yardımcı olmak amacıyla, kültürlenmiş RSC96 hücreleri 5 kV ve 10 kV'de nsPEF stimülasyonuna tabi tutuldu ve ardından 3-4 gün boyunca ekintiye devam edildi. Daha sonra, spesifik belirteç proteini, nörotrofik faktör, transkripsiyon faktörü ve miyelinasyon regülatörü dahil olmak üzere başarılı stimülasyonu göstermek için SK'ler tarafından ifade edilen bazı ilgili faktörler değerlendirildi. Temsili sonuçlar, nsPEF'in SK'lerin proliferasyonunu ve göçünü ve periferik sinirlerin rejenerasyonuna olumlu katkıda bulunan ilgili faktörleri sentezleme yeteneğini önemli ölçüde artırdığını gösterdi. Aynı zamanda, GFAP'ın daha düşük ekspresyonu periferik sinir yaralanmalarının benign prognozunu gösterdi. Tüm bu sonuçlar, nsPEF'in SK'leri uyararak periferik sinir yaralanmaları için etkili bir tedavi yöntemi olarak büyük bir potansiyele sahip olduğunu göstermektedir.

Giriş

Her yıl milyonlarca insan hem periferik sinir sistemini (PNS) hem de merkezi sinir sistemini (CNS) içeren sinir yaralanmalarından etkilenmektedir1. Çalışmalar, sinir yaralanmalarından sonra CNS'nin aksonal onarım kapasitesinin oldukça sınırlı olduğunu, PNS'nin ise SC'lerin2'nin önemli plastisitesi nedeniyle artmış kapasite gösterdiğini göstermiştir. Bununla birlikte, periferik sinir yaralanmalarından sonra tam rejenerasyonun sağlanması zorlu olmaya devam etmekte ve insan sağlığı için önemli bir zorluk teşkil etmeye devam etmektedir 3,4. Günümüzde, otogreftler, donör bölge morbiditesinin dezavantajlarına ve sınırlı kullanılabilirliğe rağmen yaygın bir tedavi olmaya devam etmektedir5. Bu durum, araştırmacıları malzeme6, moleküler faktörler7 ve elektriksel stimülasyon (ES) dahil olmak üzere alternatif tedavileri keşfetmeye sevk etti. Aksonal büyümeyi ve sinir rejenerasyonunuteşvik eden bir faktör olarak8, uygun bir ES yönteminin seçilmesi ve ES ile SK'ler arasındaki ilişkinin araştırılması zorunlu hale gelmektedir.

SK'ler, PNS'nin ana glial hücreleridir ve PNS 9,10'un rejenerasyonunda çok önemli bir rol oynar. Periferik sinir yaralanmalarını takiben, SK'ler hızlı aktivasyona, kapsamlı yeniden programlamaya2 ve sinirinrejenerasyonunu gerçekleştirmek için miyelin oluşturan bir durumdan büyümeyi destekleyici bir morfolojiye geçiş yapar 2. Yaralı sinirin distal ucunda önemli bir SK proliferasyonu meydana gelirken, distal güdük SK'leri, aksonların hedef organa doğru büyümesine rehberlik etmek için gerekli olan Bungner bandını oluşturmak için proliferasyon ve uzamaya uğrar11. Ayrıca, proksimal ve distal sinir güdüklerinden gelen SK'ler, akson rejenerasyonunu destekleyen SC kordonları oluşturmak için sinir köprüsüne göç eder12. Ayrıca, önceki çalışmalar, transkriptiyonel faktörler 13, nörotrofik faktörler14 ve miyelinasyon düzenleyicileri13 dahil olmak üzere periferik sinir rejenerasyonu vakalarında SK'lerle ilgili ilgili faktörlerin sentezi ve sekresyonunundeğiştiğini göstermiştir. Bu aynı zamanda SK'lerin aktivitesini değerlendirmek için göstergeler sağlar. Bunlara dayanarak, periferik sinir rejenerasyonunu iyileştirmek için SK proliferasyonunun, migrasyonunun, sentezinin ve ilgili faktörlerin salgılanmasının teşvik edilmesi kapsamlı bir şekilde araştırılmıştır15.

Önceki çalışmalar, sinir rejenerasyonu için ES'nin kullanılma olasılığını göstermiştir1. Yaygın olarak kabul edilen bir açıklama, ES'nin hücre zarlarının depolarizasyonunu indükleyebileceği, zar potansiyelini değiştirebileceği ve bu biyomoleküller üzerindeki yük dağılımlarını değiştirerek zar protein fonksiyonlarını etkileyebileceğidir1. Bununla birlikte, yaygın olarak uygulanan Yoğun PEF şiddetli ağrıya, istemsiz kas kasılmalarına ve kalp fibrilasyonuna neden olabilir8. Aynı zamanda kreatin kinaz (CK) aktivitesini arttırır, kas gücünü azaltır ve gecikmiş başlangıçlı kas ağrısı (DOMS) gelişimini indükler16. nsPEF, nanosaniye darbe süresi içinde yüksek voltajlı elektrik alanlarına sahip test deneklerini uyaran gelişmekte olan bir tekniktir ve hücresel düzeydeki araştırmalarda kademeli olarak kullanılmaktadır17,18. Önceki çalışmalar, hücre proliferasyonunu ve organel aktivitesini teşvik eden nsPEF'in olası mantığının, zar nanogözeneklerinin oluşumu ve iyonik kanalların aktivasyonu olduğunu ve bunun da sitoplazmikCa2+ konsantrasyonunda bir artışa yol açtığınıbildirmiştir 19. nsPEF, hücre zarını şarj etmek için darbe gücü teknolojisini kullanır ve kısa süre, hızlı yükselme süresi, yüksek güç ve düşük enerji yoğunluğu20 ile karakterize edilen darbeler üretir. Bu özellikler, nsPEF'in minimum stimülasyon yan etkileri ile tercih edilen bir mod olabileceğini düşündürmektedir8. Ayrıca nsPEF, cerrahi girişimlere göre minimal invaziv işlemler, geri dönüşümlülük, ayarlanabilirlik ve nöral dokulara tahribatsızlık gibi avantajlar sunmaktadır. nsPEF'in biyomedikal alandaki ana araştırma yönlerinden biri, yüksek enerjili elektrik alan stimülasyonu 21,22,23 kullanılarak tümör dokusu ablasyonu için uygulanmasıdır. Bazı araştırma sonuçları, 12-nsPEF'in periferik sinirleri hasara neden olmadan uyarabildiğini göstermektedir24. Bununla birlikte, şu anda, sinir rejenerasyonu alanında nsPEF'in uygulanmasına ilişkin sınırlı kanıt bulunmaktadır. Ayrıca, nsPEF kullanarak SK'leri uyarmak, in vivo ve klinik araştırmaların ilerlemesine katkıda bulunan öncü bir girişimdir. Bu çalışma, SK'lerin nsPEF stimülasyonunun sinir rejenerasyonunu teşvik edip edemeyeceğini ve sonraki derinlemesine ve sistematik araştırmalar için güvenilir bir temel sağlayıp sağlayamayacağını araştırmaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

1. Dondurularak saklanmış RSC96 hücrelerinin çözülmesi

  1. 1 mL hücre süspansiyonu içeren kriyoviyalı 37 °C'lik bir su banyosunda hızla çalkalayarak çözün ve ardından 4-6 mL tam kültür ortamı içeren bir santrifüj tüpüne ekleyin ve iyice karıştırın.
  2. 3-5 dakika boyunca 1000 x g'da santrifüjleyin, süpernatanı atın ve hücreleri 3 mL tam kültür ortamında yeniden süspanse edin.
  3. Hücre süspansiyonunu 6-8 mL tam kültür ortamı içeren bir kültür şişesine (veya kabına) ekleyin ve gece boyunca 37 ° C'de inkübe edin.
  4. Ertesi gün, mikroskop altında hücre büyümesini ve yoğunluğunu gözlemleyin.

2. Hücre geçişi:

NOT: Hücre yoğunluğu %80-%90'a ulaşırsa geçişe hazırdır.

  1. Kültür ortamını atın ve hücreleri kalsiyum ve magnezyum iyonları içermeyen fosfat tamponlu salin (PBS) ile 1-2 kez durulayın.
  2. Kültür şişesine% 0.25 (a / h) tripsin-0.53 mM EDTA ekleyin (bir T25 şişesi için 1-2 mL, bir T75 şişesi için 2-3 mL) ve 37 ° C'de 1-2 dakika inkübe edin.
  3. Mikroskop altında hücre ayrılmasını gözlemleyin. Hücrelerin çoğu yuvarlaklaşır ve ayrılırsa, şişeyi hızlı bir şekilde çalışma alanına geri koyun, şişeye hafifçe vurun ve sindirimi durdurmak için% 10 FBS içeren 3-4 mL kültür ortamı ekleyin.
  4. İçeriği karıştırın, çözeltiyi aspire edin ve 1000 x g'da 5 dakika santrifüjleyin. Ardından, süpernatanı atın ve 1-2 mL taze kültür ortamı ekleyerek ve hafifçe pipetleyerek hücreleri yeniden süspanse edin.
  5. Hücre süspansiyonunu 1: 2 oranında yeni bir T25 şişesine aktarın ve 7 mL kültür ortamı ekleyin.

3. nsPEF cihazının çalışması

  1. RSC96 hücrelerini 1 mL DMEM kültür ortamında yeniden süspanse edin ve her iki tarafta elektrotlar bulunan kolorimetrik çanaklara aktarın.
  2. Güç anahtarını açın.
  3. Elektrik alanının yoğunluğunu değiştirmek için cihaz üzerindeki düğmeyi çevirerek parametreleri ayarlayın. Bu çalışmada belirlenen şiddetler 5 kV/cm, 10 kV/cm, 20 kV/cm ve 40 kV/cm'dir.
  4. Elektrotları kıvılcımlar görünene kadar dikkatlice döndürün, böylece iki elektrotu hemen ayırmadan önce hücrelerin önceden ayarlanmış alan kuvveti yoğunluklarına göre 5 darbeli nsPEF almasına izin verin. Bu tedaviyi takiben, nsPEF ile muamele edilen deney grubu hücreleri ve tedavi edilmeyen kontrol grubu hücreleri, belirli bir hücre kültürü süresinden sonra (bu deneyde 1 gün) sırasıyla 4-6 bölümlerini gerçekleştirmek üzere alın.

4. Hücre sayma kiti-8 (CCK-8) testi

  1. Elektrik stimülasyonu ile uyarılan RSC96 hücrelerinden belirli bir konsantrasyonda bir hücre süspansiyonu hazırlayın. 96 oyuklu bir hücre kültürü plakasının her bir oyuğuna 100 μL hücre süspansiyonu ekleyin. CCK-8 testinin gereklilikleri göz önüne alındığında, reaktif kitindeki toplam hücre sayısını 1 x 103 ile 1 x 106 arasında kontrol edin.
  2. Kitten 10 μL CCK-8 çözeltisi alın ve 96 oyuklu hücre kültürü plakasına ekleyin. Bir CO2 inkübatöründe 37 ° C'de 30 dakika ila 4 saat daha inkübe edin.
  3. Emilimi ölçün. 430-490 nm algılama dalga boyu ve 600-650 nm referans dalga boyu ile çift dalga boyu ölçümü kullanın.
  4. Hücre proliferasyonunun deneysel sonuçlarına dayalı olarak sonraki deneyler için alan kuvveti yoğunluğunu belirleyin. Sonraki deneyler için iyi proliferasyona sahip hücreleri seçin.

5. Hücre çizik testi

  1. Altı oyuklu bir plakanın her bir oyuğunda, oyuk başına toplam hacmi 2 mL olan 3 x 105 hücre tohumlayın. Yaklaşık 72 saat sonra hücreler kuyuyu kaplayacaktır. Testi deney ve kontrol grupları üzerinde ayrı ayrı yapın.
  2. Kültür kuyusunun dibine yatay bir çizgi çizmek için bir pipet ucu kullanın. Pipet ucunun dikey olarak tutulduğundan emin olun ve eğilmesini önlemeye çalışın.
  3. Kültür ortamını aspire edin ve PBS ile 2-3 kez yıkayın.
  4. Her kuyucuğa 2 mL serumsuz ortam ekleyin.
  5. Plakayı 37 °C inkübatöre yerleştirin. Hücre göçündeki değişiklikleri gözlemlemek için ters çevrilmiş mikroskobun 0 saat ve 24 saatte dört kat büyütmesi altında fotoğraf çekin.

6. İmmünofloresan

  1. Hücre geçirgenliği:
    1. Hücre süspansiyonlarını kültür kaplarına nazikçe pipetledikten sonra, hücrelerin lamel üzerinde eşit olarak dağıldığı yerlere bir histoloji kalemiyle daireler çizin. Kontrol grubunu ve farklı deney gruplarını ayrı ayrı ele alın.
    2. 50-100 μL geçirgenlik çalışma solüsyonu (% 0.25-0.5 Triton X-100) ekleyin ve oda sıcaklığında (RT) 20 dakika inkübe edin. Her seferinde 5 dakika boyunca PBS ile üç kez yıkayın.
  2. Serum Blokajı: Dokuyu düzgün bir şekilde kaplamak için daireler içinde% 3 BSA ekleyin. RT'de 30 dakika inkübe edin.
  3. Birincil antikor inkübasyonu: Bloke edici çözeltiyi nazikçe çıkarın ve uygun şekilde seyreltilmiş birincil antikoru (fareden türetilmiş, 1:300'de seyreltilmiş) hücre kuyucuklarına ekleyin. Hücre kültürü plakasını nemli bir kutuya yerleştirin ve gece boyunca 4 °C'de inkübe edin.
  4. İkincil antikor inkübasyonu: Hücre plakasını bir çalkalayıcı üzerine yerleştirin ve her seferinde 5 dakika boyunca üç kez yıkayın. Karşılık gelen ikincil antikoru (CY3 işaretli keçi anti-fare IgG, 1:300'de seyreltilmiş) ekleyin ve RT'de 50 dakika inkübe edin.
  5. DAPI nükleer boyama:
    1. Lameli PBS'ye (pH 7.4) bir çalkalayıcıya yerleştirin ve her seferinde 5 dakika boyunca üç kez yıkayın.
    2. Slaytı nazikçe kuruttuktan sonra, dairelerin içine DAPI boyama solüsyonu (2 μg / mL, daire başına 0.5 mL) ekleyin ve karanlık bir odada 10 dakika RT'de inkübe edin.
  6. Montaj: Labeli PBS'ye (pH 7.4) bir çalkalayıcı üzerine yerleştirin ve her seferinde 5 dakika boyunca üç kez yıkayın. Sürgüyü nazikçe kuruttuktan sonra, lamel floresan için solmaya karşı dayanıklı bir montaj ortamıyla kapatın.
  7. Görüntü elde etme: DAPI'yi 330-380 nm dalga boyunda uyarın ve 420 nm'de emisyonu tespit edin; AF488 için 465-495 nm'de uyarılır ve 515-555 nm'de emisyonu tespit eder; 510-560 nm'de uyarılır ve CY3 için 590 nm'de emisyonu tespit eder; 608-648 nm'de uyarılır ve CY5 için 672-712 nm'de emisyonu tespit eder.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Düşük yoğunluklu darbeli elektrik alanları hücre proliferasyonunu uyarır
CCK-8 testine göre, 5 kV / cm grubundaki RSC96'nın proliferasyon hızı, kontrol grubu hücrelerinden önemli ölçüde daha hızlıydı. Bununla birlikte, parametreler arttıkça (20 kV/cm ve 40 kV/cm), proliferasyon hızı kararsızdı, hatta kontrol grubununkinden bile daha düşüktü. RSC96 hücrelerinin hücre proliferasyon hızı, 40 kV/cm grubunda, kontrol ve 5 kV/cm gruplarından anlamlı derecede düşüktü ve istatistiksel olarak anlamlı bir fark ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Son yıllarda, bildirildiği gibi, nsPEF uygulaması artan bir büyüme yaşadı. nsPEF, yalnızca istenen alan üzerinde yüksek oranda hedeflenmiş bir etkiye sahiptir, ek termal hasara neden olmadan tedavi etmek için yeterli enerji sağlar ve insan vücudu için daha güvenli hale getirir28. Bu özellikler, tümör tedavisinde ve sinir rejenerasyonunda umut verici translasyonel beklentiler sağlar. Bununla birlikte, bazı çalışmalar nsPEF'in bazı sınırlamalarını önermiştir. Malzeme araştırmaları ile karşılaştırıld...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

Bu çalışma, Ulusal Anahtar Bilimsel Araç ve Ekipman Geliştirme Projesi (NO.82027803) tarafından finanse edilmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Antifade montaj ortamıWuhan Xavier Biyoteknoloji A.Ş., LTDG1401
Anti-GFAP Fare mAbWuhan Xavier Biyoteknoloji A.Ş., LTDGB12100-100
Anti-Nörofilament ağır polipeptit Fare mAbWuhan Xavier Biyoteknoloji A.Ş., LTDGB12144-100
Anti-S100 beta Fare mAbWuhan Xavier Biyoteknoloji A.Ş., LTDGB14146-100
BSAWuhan Xavier Biyoteknoloji A.Ş., LTDGC305010
LamelJiangsu Shitai deney ekipmanı Co., LTD10212432C
CY3 etiketli keçi anti-fare IgGWuhan Xavier Biyoteknoloji A.Ş., LTDGB21302
DAPI Boyama ReaktifiWuhan Xavier Biyoteknoloji A.Ş., LTDG1012
Renk giderici çalkalayıcıWuhan Xavier Biotechnology Co., LtdDS-2S100
Matsusada Precision Inc.için Yüksek Gerilim Güç KaynağıAU-60P1.6-L
Histokimyasal kalemWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDG6100
Membran kırma sıvısıWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDG1204
Mikroskop lamıWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDG6012
Palm santrifüjüWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDMS6000
PBS toz haline getirilmişWuhan Xavier Biyoteknoloji A.Ş., LTDG0002
PipetWuhan Xavier Biyoteknoloji A.Ş., LTD
Pozitif floresan mikroskobuNikon, JaponyaNIKON ECLIPSE C1
Tavşan Anti-SOX10/AF488 Konjuge antikorBeijing Bioss Biyoteknoloji A.Ş., LTDBS-20563R-AF488
RSC96 Schwann hücreleriWuhan Xavier Biyoteknoloji A.Ş., LTDSTCC30007G-1
scanister3DHISTECHPannoramic MIDI
nsPEFTimes Mikrodalga SistemleriM17/78-RG217
Türbin karıştırıcıWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDMV-100
nsPEF için özel kablo

Kaynaklar

  1. Jing, W., et al. Study of electrical stimulation with different electric-field intensities in the regulation of the differentiation of PC12 cells. ACS Chem Neurosci. 10 (1), 348-357 (2018).
  2. Nocera, G., Jacob, C. Mechanisms of Schwann cell plasticity involved in peripheral nerve repair after injury. Cell Mol Life Sci. 77, 3977-3989 (2020).
  3. Aguilar, Z. Nanomaterials for Medical Applications. , Newnes. (2012).
  4. Xie, S., et al. Efficient generation of functional Schwann cells from adipose-derived stem cells in defined conditions. Cell Cycle. 16 (9), 841-851 (2017).
  5. Rosenbalm, T. N., Levi, N. H., Morykwas, M. J., Wagner, W. D. Electrical stimulation via repeated biphasic conducting materials for peripheral nerve regeneration. J Mater Sci Mater Med. 34 (11), 1-18 (2023).
  6. Daly, W. T., et al. Comparison and characterization of multiple biomaterial conduits for peripheral nerve repair. Biomaterials. 34 (34), 8630-8639 (2013).
  7. Lee, B. -K., et al. End-to-side neurorrhaphy using an electrospun PCL/collagen nerve conduit for complex peripheral motor nerve regeneration. Biomaterials. 33 (35), 9027-9036 (2012).
  8. Kim, V., Gudvangen, E., Kondratiev, O., Redondo, L., Xiao, S., Pakhomov, A. G. Peculiarities of neurostimulation by intense nanosecond pulsed electric fields: how to avoid firing in peripheral nerve fibers. Int J Mol Sci. 22 (13), 7051(2021).
  9. Assinck, P., Duncan, G. J., Hilton, B. J., Plemel, J. R., Tetzlaff, W. Cell transplantation therapy for spinal cord injury. Nat Neurosci. 20 (5), 637-647 (2017).
  10. Chen, Y. Y., McDonald, D., Cheng, C., Magnowski, B., Durand, J., Zochodne, D. W. Axon and Schwann cell partnership during nerve regrowth. J Neuropathol Exp Neurol. 64 (7), 613-622 (2005).
  11. Yi, S., et al. Tau modulates Schwann cell proliferation, migration and differentiation following peripheral nerve injury. J Cell Sci. 132 (6), (2019).
  12. Min, Q., Parkinson, D. B., Dun, X. Migrating Schwann cells direct axon regeneration within the peripheral nerve bridge. Glia. 69 (2), 235-254 (2021).
  13. Zhang, Y., Zhao, Q., Chen, Q., Xu, L., Yi, S. Transcriptional control of peripheral nerve regeneration. Mol Neurobiol. 60 (1), 329-341 (2023).
  14. Nishi, M., Kawata, M., Azmitia, E. C. Trophic interactions between brain-derived neurotrophic factor and S100β on cultured serotonergic neurons. Brain Res. 868 (1), 113-118 (2000).
  15. Gu, Y., et al. miR-sc8 inhibits Schwann cell proliferation and migration by targeting EGFR. PLoS One. 10 (12), e0145185(2015).
  16. Dong, H. -L., et al. AMPK regulates mitochondrial oxidative stress in C2C12 myotubes induced by electrical stimulations of different intensities. Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 38 (6), 742-747 (2018).
  17. Beebe, S. J., Blackmore, P. F., White, J., Joshi, R. P., Schoenbach, K. H. Nanosecond pulsed electric fields modulate cell function through intracellular signal transduction mechanisms. Physiol Meas. 25 (4), 1077(2004).
  18. Haberkorn, I., Siegenthaler, L., Buchmann, L., Neutsch, L., Mathys, A. Enhancing single-cell bioconversion efficiency by harnessing nanosecond pulsed electric field processing. Biotechnol Adv. 53, 107780(2021).
  19. Ruiz-Fernández, A. R., Campos, L., Gutierrez-Maldonado, S. E., Núñez, G., Villanelo, F., Perez-Acle, T. Nanosecond pulsed electric field (nsPEF): Opening the biotechnological Pandora's box. Int J Mol Sci. 23 (11), 6158(2022).
  20. Nuccitelli, R., et al. First-in-human trial of nanoelectroablation therapy for basal cell carcinoma: proof of method. Exp Dermatol. 23 (2), 135-137 (2014).
  21. Nuccitelli, R., et al. Non-thermal nanoelectroablation of UV-induced murine melanomas stimulates an immune response. Pigment Cell Melanoma Res. 25 (5), 618-629 (2012).
  22. Carr, L., et al. A nanosecond pulsed electric field (nsPEF) can affect membrane permeabilization and cellular viability in a 3D spheroids tumor model. Bioelectrochemistry. 141, 107839(2021).
  23. Hornef, J., Edelblute, C. M., Schoenbach, K. H., Heller, R., Guo, S., Jiang, C. Thermal analysis of infrared irradiation-assisted nanosecond-pulsed tumor ablation. Sci Rep. 10 (1), 5122(2020).
  24. Zuo, K. J., Gordon, T., Chan, K. M., Borschel, G. H. Electrical stimulation to enhance peripheral nerve regeneration: Update in molecular investigations and clinical translation. Exp Neurol. 332, 113397(2020).
  25. Juckett, L., Saffari, T. M., Ormseth, B., Senger, J. -L., Moore, A. M. The effect of electrical stimulation on nerve regeneration following peripheral nerve injury. Biomolecules. 12 (12), 1856(2022).
  26. Jessen, K. R., Mirsky, R. Negative regulation of myelination: relevance for development, injury, and demyelinating disease. Glia. 56 (14), 1552-1565 (2008).
  27. Chen, Z. -L., Yu, W. -M., Strickland, S. Peripheral regeneration. Annu Rev Neurosci. 30, 209-233 (2007).
  28. Yin, D., et al. Cutaneous papilloma and squamous cell carcinoma therapy utilizing nanosecond pulsed electric fields (nsPEF). PloS One. 7 (8), e43891(2012).
  29. Qi, F., et al. Photoexcited wireless electrical stimulation elevates nerve cell growth. Colloids Surf B Biointerfaces. 220, 112890(2022).
  30. Mi, Y., Liu, Q., Li, P., Xu, J., Yang, Q., Tang, J. Targeted gold nanorods combined with low-intensity nsPEFs enhance antimelanoma efficacy in vitro. Nanotechnology. 31 (35), 355102(2020).
  31. Ho, T. -C., et al. Hydrogels: Properties and applications in biomedicine. Molecules. 27 (9), 2902(2022).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

RSC96 HücreleriHücre ProliferasyonuHücre MigrasyonuCCK-8 AnaliziÇizik AnaliziS100-Beta EkspresyonuSox10 Ekspresyonu
İn Vitro Periferik Sinir Rejenerasyonu için Nanosaniye Darbeli Elektrik Alanı ile Schwann Hücre Büyümesinin Düzenlenmesi
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.