Yöntem makalesi

Endometrioma ile İlgili İnfertiliteyi İncelemek için Deneysel Bir Fare Modelinin Kurulması

DOI:

10.3791/66240

⸱

5 Nisan 2024

 ,  ,  , 
1Department of Obstetrics and Gynaecology, Faculty of Medicine, The Chinese University of Hong Kong, 2Reproduction and Development, Li Ka Shing Institute of Health Sciences, The Chinese University of Hong Kong, 3School of Biomedical Sciences, Faculty of Medicine, The Chinese University of Hong Kong, 4Chinese University of Hong Kong-Sichuan University Joint Laboratory in Reproductive Medicine, The Chinese University of Hong Kong

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, endometriozisin klinik olarak anlamlı bir alt tipi olan endometrioma'yı simüle etmek için özel olarak tasarlanmış yeni bir fare modelini tanıtmaktadır. Model, C57BL / 6J farelerini kullanarak, endometrioma ile ilişkili infertilitenin altında yatan patofizyolojik mekanizmaları aydınlatmayı ve üreme tıbbındaki mevcut bilgi boşluğunu kapatmak için rafine bir araç sunmayı amaçlamaktadır.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yumurtalıklarda endometriotik kistlerin oluşumu ile karakterize bir endometriozis alt tipi olan endometrioma (OMA), endometriozis tanısı alan bireylerin %17-44'ünü etkilemektedir. OMA'lı kadınlar sıklıkla doğurganlıktan ödün verirler, ancak OMA ile ilişkili infertilitenin altında yatan kesin mekanizmalar belirsizliğini korumaktadır. Özellikle, mevcut hayvan modelleri yüzeyel peritoneal endometriozis (SUP) ve derin sızan endometriozisi (DIE) simüle etmekte ve OMA'ya odaklanan araştırmalarda kayda değer bir boşluk bırakmaktadır. Bilgi boşluğuna yanıt olarak, bu makale öncü bir OMA simüle eden fare modelini tanıtmakta ve modelde kullanılan tekniklerin ve prosedürlerin kapsamlı bir tanımını sunmaktadır. %83 gibi yüksek bir başarı oranı ve over lezyonu özgüllüğü ile bu model, özellikle infertilite bağlamında OMA anlayışımızı ilerletmek için önemli bir umut vaat etmektedir. OMA ile ilişkili doğurganlık sorunlarına yönelik hedefli araştırmalar yürütmek için değerli bir platform sunar ve potansiyel olarak üreme tıbbı alanında gelişmiş tanı ve tedavi stratejilerinin önünü açar.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Endometrioma (OMA), endometriozis tanısı alan bireylerin yaklaşık %17-44'ünde görülen endometriozisin en baskın alt tipidir 1,2. Yumurtalıklar içinde endometriotik kistlerin oluşumu ile karakterizedir. Halk arasında "çikolata kistleri" olarak adlandırılan bu kistler, isimlerini kendilerine özgü kahverengi, katran benzeri kıvamlarından alırlar3. Endometriozis, OMA'nın yanı sıra yüzeyel peritoneal endometriozis (SUP) ve derin infiltre endometriozis (DIE) olarak da ortaya çıkabilir. SUP, periton astarındaki lezyonları ifade ederken, DIE, periton yüzeyinin4 5 mm'den daha altına nüfuz eden lezyonları ifade eder. Bu endometriozis alt tipleri arasında lezyon yeri, görünümü ve derinliği açısından heterojenlik, farklı klinik semptomlara ve değişken hastalık şiddetine neden olur 5,6. OMA özellikle daha şiddetli endometriozis evreleri ile ilişkilidir ve infertilite, pelvik adezyonlar ve artmış yumurtalık kanseri riskiile ilişkilendirilmiştir 1,7,8,9.

Endometriozisin, özellikle OMA'nın infertilite ile ilişkisi klinik olarak ciddi bir endişe konusudur. İnfertil kadınların %25-50'sinde endometriozis bulunurken, endometriozis tanısı alan kadınların %30-50'sinde infertilite görülür 10,11,12,13,14. OMA ile ilişkili infertilite mekanizmaları kesin olarak bilinmemekle birlikte, bazı hipotezler ortaya atılmıştır. Biri endometriozisin normal yumurtalık fonksiyonunu bozabilen ve oosit kalitesini bozabilen kronik bir enflamatuar duruma yol açtığını göstermektedir15,16. Bir diğeri, oosit olgunlaşma bozukluğu14 ile ilişkili olduğuna inanılan yumurtalık foliküler sıvısında anormal aşırı demir yükü önermektedir. Diğer çalışmalar, hormonal düzenleme17, oosit kalitesi18 ve embriyo gelişimindeki19 bozulmaları ele almaktadır.

Tarihsel olarak, kemirgen modelleri, endometriozis anlayışımızı derinleştirmede, özellikle patolojisini, doğurganlık üzerindeki etkisini ve ağrı mekanizmalarını incelemede çok önemli bir rol oynamıştır 20,21,22,23. Kemirgenler, özellikle sıçanlar ve fareler, bu hastalık için neden-sonuç ilişkilerini, altta yatan mekanizmaları, potansiyel tanı tekniklerini ve terapötik müdahaleleri araştırmada hayvan modelleri olarak yaygın olarak kullanılmaktadır 22,24,25,26. Tüm hayvan modellerinin kendine özgü kullanımları ve sınırlamaları olduğunu kabul etmek önemlidir. Belirli bir modelin seçimi, ölçülen veya incelenen belirli sonuca veya yönüne bağlıdır27. Örneğin, bir sıçan modeli, stresin endometriozis belirtilerini şiddetlendirebileceğini ve inflamatuar parametreleri etkileyebileceğini ve hastalığın potansiyel tetikleyicileri hakkında fikir verdiğini gösterdi28.

Endometriozis araştırmaları bağlamında, kullanılan çeşitli kemirgen modelleri vardır. Yaygın olarak kullanılan bir yaklaşım, kemirgen rahim dokusunun aynı türün periton boşluğuna veya mezenterik damarlarına nakledilmesini içeren homolog modeldir29. Bu model, immünokompetasyon ve uzun süreli çalışmalara uygunluk açısından avantajlar sunmaktadır30. Bununla birlikte, implante edilen ektopik fare rahim dokusu ile insan endometriotik lezyonlarının özellikleri arasındaki kısmi eşitsizlik nedeniyle sınırlamalar ortaya çıkmaktadır31. Başka bir yaklaşım, bir insan endometriyal biyopsisinin immünosuprese edilmiş bir fareye implante edildiği heterolog modeldir32. Bu model, insan ektopik endometriyumunun lezyon gelişimi için bir donör doku olarak kullanılmasına izin vererek yapıcı geçerlilik sağlar32. Bununla birlikte, alıcı olarak bağışıklığı baskılanmış farelere dayanır ve bu da bozukluğun etiyolojisinde yer alan bağışıklık tepkilerinin kapsamlı bir değerlendirmesini engeller33. Bununla birlikte, mevcut modellerin öncelikle genelleştirilmiş SUP durumunu yansıtmaya odaklandığını, OMA ve DIE34'ün benzersiz özelliklerini yetersiz bir şekilde yakaladığını kabul etmek önemlidir. Şu anda, Yan ve ark.35 tarafından geliştirilen yeni bir kemirgen modeli de dahil olmak üzere, DIE'yi incelemek için mevcut olan belirli modellerin yetersizliği vardır. Bu kıtlık, daha fazla araştırmaya ve DIE'nin belirli özelliklerini doğru bir şekilde yakalayan modellerin geliştirilmesine duyulan ihtiyacın altını çizmektedir. Ek olarak, OMA hakkındaki anlayışımız, özellikle de doğurganlıkla olan nüanslı ilişkisi de sınırlı kalmaktadır26,36.

Mevcut zorlukları ele alan bu makale, özellikle OMA'yı simüle etmek için tasarlanmış yeni bir deneysel homolog fare modeli sunmaktadır. OMA ile ilişkili infertilitenin altında yatan patolojik mekanizmalar hakkında benzersiz bilgiler sağlamayı ve böylece üreme tıbbının bu önemli alanındaki bilgi boşluğunu kapatmayı amaçlamaktadır. Kısacası, C57BL / 6J fareleri, insan benzeri üreme özellikleri için kullanıldı. Kızgınlık döngüsü senkronizasyonunu takiben, donör farelerden alınan uterus dokuları kıyıldı ve alıcı farelerin yumurtalık bursasına 1: 2 oranında nakledildi. 4 haftalık bir aradan sonra, OMA varlığını doğrulamak ve ilişkili herhangi bir foliküler atrezi değerlendirmek için over lezyonlarının hem morfolojik hem de histolojik incelemeleri yapıldı. %83 başarı oranı ile bu model, araştırmacılara OMA çalışmaları için güvenilir bir platform sunmakta ve odaklanmış araştırmalar için özellikle yumurtalıklarda lezyon gelişimini vurgulamaktadır.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada yürütülen tüm deneysel prosedürler, Hong Kong Çin Üniversitesi Etik Komitesi tarafından 21-203-MIS_[C] numaralı protokol kapsamında onaylanmış ve düzenlenmiştir.

1. Hayvan iklimlendirmesi ve seçimi

  1. Fare hazırlama
    1. Saygın bir tedarikçiden 18 adet C57BL/6J fare (ilkel dişiler, 8-9 haftalık: 6 donör, 12 alıcı) edinin. Sistem durumu sertifikalarını doğrulayın.
    2. Tüm fareleri kontrollü bir muhafaza ortamında tutun: 22-24 °C, nem seviyeleri %40 ile %60 arasında ve 12 saatlik aydınlık/karanlık döngüsüyle. Varsa HEPA filtreli hava kullanın.
    3. Stresi azaltmak için insan etkileşimini en aza indirerek, yiyecek ve suya sürekli erişimi olan fareler için 72 saat iklimlendirmeye izin verin.
  2. Östrus döngüsü senkronizasyonu
    1. Erkek feromonları içeren yatakları toplayın; 48 saat boyunca kadın kafeslerine tanıtın.
  3. Vajinal sitoloji
    1. Ertesi sabah vajinal sitoloji yapın.
      NOT: Smear işlemini günün tutarlı bir saatinde, tipik olarak saat 09:00'da yapmak gerekir.
      1. Çift başlı pamuklu çubuklar, otoklavlanmış PBS, 35 mm'lik bir Petri kabı ve cam slaytları önceden hazırlayın. Bir Petri kabına 10 mL PBS dağıtın. Sıvıyı emmesini sağlamak için pamuklu çubuğun bir ucunu PBS'ye batırın.
      2. Bir fareyi yavaşça kafesinden çıkarın ve boş bir kafesin kapağına yerleştirin.
      3. Bir elinizin baş parmağını ve işaret parmağını kullanarak kuyruğu kavrayın ve diğer elinizle nemli pamuklu çubuğu alın ve nazikçe farenin vajinasına yerleştirin. Çubukla yapılan çubuğun ucunu farenin vajinasına yaklaşık 1,0 cm derinliğe kadar dikkatlice sokun. Hayvanın vücudunun uzun eksenine yaklaşık 45°'lik bir açıyı korurken swabı nazikçe döndürün.
        NOT: Yerleştirme sırasında swabı yavaşça döndürmek, daha düzgün bir prosedürü kolaylaştırabilir ve rahim ağzına olası stimülasyonu en aza indirebilir.
      4. Swabı sürekli döndürerek hücreleri vajinal lümenden ve duvarlardan nazikçe çıkarın ve ardından swabı dikkatlice geri çekin.
        NOT: Bu işlem sırasında, çevredeki tüylerle temas etmemeye dikkat ederek swabın sürekli döndürüldüğünden emin olun. Daha sonra, herhangi bir olası kontaminasyonu önlemek için swabı dikkatlice geri çekin.
      5. Toplanan hücreleri, swab ucunu temiz, önceden etiketlenmiş bir cam slayt üzerine nazikçe yuvarlayarak aktarın.
        NOT: Hücreler slaytlara aktarıldıktan sonra sürüntü çubuğu atılmalı ve her hayvan için yeni bir tane kullanılmalıdır.
      6. Kornifiye epitel hücrelerini tespit etmek için slaytları mikroskop altında inceleyin. Östrus aşamasının göstergesi olan vajinal sitolojide kornifiye epitel hücrelerinin tekdüze varlığını arayın. Fotoğraf çekin ve gözlemleri kaydedin.
        NOT: Uygun uzmanlıkla, vajinal smearlerin boyanması gerekli değildir. Bununla birlikte, bir deneyci lekeleri lekelenmeden "okuyamıyorsa", o zaman gereklidir.

2. Endometrioma modelinin kurulması

NOT: Model kuruluşunda donör ve alıcı fareler olarak yalnızca kızgınlık aşamasındaki fareleri seçin. Bir fare üzerinde deneyler yaparken, başkalarının görüş alanı dışında olduğundan ve tamamen iyileşene kadar diğer hayvanların şirketine yeniden verilmediğinden emin olun. Model oluşturma diyagramı Şekil 1'de bulunabilir.

  1. Donör doku hazırlığı
    1. Donör fareleri ketamin (75 mg / kg) ve ksilazin (10 mg / kg) kombinasyonu ile sakinleştirin. Donör fareleri anestezi altında servikal translokasyon ile ötenazi yapın.
    2. Karın bölgesini% 70 etanol çubukla dezenfekte edin.
    3. Kas tabakasını ortaya çıkarmak için peritonun orta hattı boyunca bir kesi (1 cm) oluşturmak için steril cerrahi makas kullanın. Kas tabakasını kesmek ve pelvik boşluğu ortaya çıkarmak için başka bir çift cerrahi makas seçin.
    4. Forsepsin uçlarını kapatın ve künt merkezi kısmı kullanarak bağırsakları nazikçe kaldırın.
    5. Rahim ve yumurtalık dokularını bulun. Her iki rahim boynuzu da dahil olmak üzere tüm rahim boynuzunun steril bir diseksiyonunu yapın ve çıkarılan parçanın yaklaşık boyutunun ~ 1,5 cm uzunluğunda olduğundan emin olun. Eksize edilen dokuları PBS içeren bir petri kabına yerleştirin ve fazla yağ dokularını çıkarın.
    6. Sterilize edilmiş bir neşter kullanarak dokuları 1 mm³'lük parçalar halinde inceleyin. Periyodik olarak PBS ekleyerek dokuları nemli tutun.
  2. Transplantasyon prosedürü
    1. Alıcı fareleri ketamin (75 mg / kg) ve ksilazin (10 mg / kg) karışımı ile uyuşturun.
    2. Ameliyat sırasında göz kuruluğunu önlemek için oftalmik merhem sürün. Fareleri steril bir cerrahi tahta üzerine sırtüstü pozisyonda yerleştirin.
    3. Farenin arka bacaklarını nazikçe manipüle ederek, derinin altında hissedilebilen kemikli bir çıkıntı ile cerrahi bölgeyi belirleyin. Deriden açıkça görülebilen bu belirgin nokta, cerrahi prosedür sırasında alıcı farenin yumurtalıkları için güvenilir bir anatomik belirteç görevi görür.
    4. Ameliyat bölgesini tıraş edin ve çevresindeki alanın% 150'sinin kürkten arındırıldığından emin olun. Ardından, cildi en az 3 kez alternatif betadin ve% 70 alkol ile dezenfekte edin. Dokular, steril aletler ve dikişler ile kalan kürkler arasındaki teması önlemek için steril bir cerrahi örtü kullanın. Son olarak, önceden belirlenen cerrahi bölgede hassas bir lateral kesi (3-5 mm) oluşturun.
    5. Yumurtalığı baskın olmayan el forseps ile stabilize edin. Yumurtalık bursasına 100 μL PBS'yi nazikçe enjekte edin ve hafif ayrılmayı gözlemleyin.
    6. Bursa'da küçük bir yarık oluşturun. Rahim dokusu parçalarını (1 mm³) mikro forseps kullanarak nakledin.
      NOT: Çevredeki dokulara baskı yapmasını önlemek için aşırı doldurmaktan kaçının.
    7. Sahte cerrahi için, adım 2.2.6 dışındaki tüm adımları tekrarlayın.
  3. Ameliyat sonrası bakım
    1. Kas katmanlarını emilebilir dikişlerle (yani 5-0 vicryl) ve cildi emilmeyen dikişlerle (yani 5-0 naylon) dikin.
    2. Tam bilinç geri dönene kadar 37 °C'ye ayarlanmış bir ısıtma yastığının üzerine bir fare yerleştirin. Solunumu izleyin ve ekstremitelerin pembeye dönmesini bekleyin.
    3. Ağrı için her 12 saatte bir 48 saat boyunca buprenorfin (deri altından 0.1 mg / kg) uygulayın. İlk 24 saat boyunca her 8 saatte bir ve sonraki 3 gün boyunca günde 3 kez ağrı, enfeksiyon veya sıkıntı belirtilerini kontrol edin.
      NOT: Hayvan, sternal yaslanmayı sürdürmek için yeterli bilinci yeniden kazanana kadar gözetimsiz bırakılmaz.

3. Model doğrulama

  1. Brüt doğrulama
    1. 4 hafta sonra, ketamin (75 mg / kg) ve ksilazin (10 mg / kg) kombinasyonu kullanarak alıcı fareleri uyuşturun. Daha sonra, derin anestezi altında, servikal translokasyon yaparak farelere ötenazi yapın.
    2. Orta hat insizyonu yapın ve organ muayenesi için karın boşluğunu ortaya çıkarın.
    3. Görünür lezyonları olan yumurtalıkları çıkarın ve fotoğraf çekin.
    4. Yabancı endometriotik lezyonları iyice inceleyin.
  2. Histolojik doğrulama
    NOT: Histolojik deneylerde potansiyel olarak tahriş edici kokulu çözücülerin varlığı nedeniyle, çeker ocakta yapılmalıdır.
    1. Yumurtalıkları lezyonlarla birlikte% 10 nötr tamponlu formalin içinde sabitleyin.
    2. Doku tahsisi, fiksasyon ve gömme dahil olmak üzere Adeniran ve ark.37 tarafından tarif edilen aynı prosedürleri izleyerek dokuları işleyin.
    3. Dokuları 4-5 μm kalınlığında seri olarak kesit alın, 45 °C'de su banyosunda yüzdürün ve cam slaytlara monte edin. Slaytları fare numarası, yumurtalık tarafı ve bölüm numarası ile net bir şekilde etiketleyin. Gece boyunca 37 °C'de kurutun.
    4. PAS-hematoksilen boyama
      1. Deparafinizasyon: Parafini çıkarmak için slaytları ksilen veya ksilen ikamesine yerleştirin.
        NOT: Bu adımı birkaç kez gerçekleştirmeniz gerekebilir.
      2. Rehidrasyon: Slaytları bir dizi azalan etanol konsantrasyonuna (%100, %95, %80, %70) yerleştirerek doku bölümlerini kademeli olarak yeniden sulandırın.
      3. Periyodik asit tedavisi: Doku bölümlerini %1'lik bir periyodik asit çözeltisi ile örtün ve oda sıcaklığında 5-10 dakika bekletin.
        NOT: Bu adım, dokunun glikol gruplarını aldehit gruplarına oksitleyerek Schiff reaktifi ile reaksiyona ve yumurtalık yapılarını belirtmek için mor-pembe bir leke oluşumuna izin verir.
      4. Kalan periyodik asidi çıkarmak için slaytları damıtılmış suyla iyice durulayın.
      5. Doku bölümlerini 15 dakika boyunca bir Schiff solüsyonu ile boyayın.
      6. Fazla lekeyi çıkarmak için slaytları önce sıcak akan musluk suyunda, ardından damıtılmış suda durulayın.
      7. Bölümleri 1 g / L Meyer hematoksilen ile 2-3 dakika boyunca boyayın.
      8. Slaytları akan musluk suyunda 2-3 dakika durulayın.
      9. 30 saniye boyunca Bluing Reaktifi uygulayın.
      10. Slaytları damıtılmış suda durulayın.
      11. Bölümleri artan etanol konsantrasyonlarına (%70, %80, %95 ve %100) daldırarak kademeli olarak kurutun.
      12. Bölümleri şeffaf hale getirmek için bir temizleme maddesine (örneğin ksilen) batırın.
      13. Kızaklardaki bölümlere bir montaj ortamı uygulayın ve hava kabarcığı olmadığından emin olarak bölümlerin üzerine nazikçe bir lamel yerleştirin. Montaj ortamının katılaşmasını kolaylaştırmak için kızakların davlumbazda kurumasına izin verin.
    5. Işık mikroskobu altında inceleyin. Yumurtalıkta endometriozisi doğrulayan endometriyal bezler, stroma ve hemorajik kistlerin varlığını belgeleyin.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

OMA'nın başarılı bir şekilde kurulması


figure-results-1

figure-results-2

figure-results-3

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Küresel kadın popülasyonunda OMA prevalansı, kritik bir sağlık sorununun altını çizmektedir38. Endometriozisin genel semptomlarının ötesinde, OMA, şiddetli pelvik ağrı, yumurtalık torsiyonu potansiyeli ve diğer önemli etkiler dahil olmak üzere doğurganlık için ek zorluklar getirir39,40. OMA patogenezi ve progresyonunun anlaşılması büyük ölçüde gizemle örtülmüş olsa da, bilgi boşluğu sadece hedefe yönelik terapötik stratejilerin oluşturulmasını engellemekle kalmaz, aynı zamanda birçok kadının optimal olmayan tedavilerden ve tekrarlayan semptomlardan muzdarip olmaya devam ettiği anlamına gelir. Birçok modern kadının çocuk doğurmayı erteleme kararı, OMA ile ilgili doğurganlık endişelerini daha da artırmakta ve patofizyolojisini kapsamlı bir şekilde anlamayı ve ele almayı daha da zorunlu hale getirmektedir.

Tarihsel olarak, OMA anlayışımızı geliştirmenin önündeki en önemli engellerden biri, kararlı ve doğru bir hayvan modelinin olmaması olmuştur. Geçmişte birkaç model araştırılmış olsa da, bunlar genellikle OMA'nın özgüllüklerini yeniden üretmede veya yumurtalıklar dışındaki organlarda lezyonların tezahürü nedeniyle ek karıştırıcı değişkenler ortaya çıkarmada yetersiz kalmıştır41. OMA'yı çoğaltmak ve hastalık hakkındaki anlayışımızı geliştirmek için bir fare modeli geliştirdik. Cerrahi tekniğimiz, yumurtalıklarda endometriotik lezyonların gelişmesini sağlamak için farelerin yumurtalık bursasına kıyılmış rahim dokuları implante etmeyi içeriyordu. Ameliyat sonrası yakın izleme, OMA ilerlemesini değerlendirmemize ve farelerin refahını sağlamamıza izin verdi. Modelin alaka düzeyini artırmak için, yumurtalık bursasını çıkarmak yerine sağlam tuttuk. Bu değişiklik, implantların diğer organlara sızmasını önlemeyi ve yumurtalıklardaki lezyonların spesifik lokalizasyonunu sağlamayı amaçladı. Ek olarak, işlem sırasında kanama veya enfeksiyon gibi olası komplikasyonları ele aldık. Bu çalışmada, yumurtalık foliküllerinin histolojisini değerlendirmek için yaygın olarak yapılan mukus varlığını tespit etmek için PAS boyaması kullanılmıştır42,43. Endometriotik lezyona komşu yumurtalık bölümlerinde atretik foliküllerin tanımlanması, endometriozisin folikül gelişimini nasıl olumsuz etkilediğinin çok önemli bir kanıtıdır 43,44,45. Bu bulgu, modelimiz tarafından da desteklendiği üzere, endometrioma ile ilişkili infertilite ile ilgili daha ileri araştırmalar için büyük önem taşımaktadır. Histolojik doğrulamanın dahil edilmesi, modelimizde endometriozis ile ilişkili patolojik değişikliklerin kapsamlı bir şekilde anlaşılmasını sağladı. Bu katılım, bulgularımızın güvenilirliğini ve alaka düzeyini güçlendirir ve endometriozis ile yumurtalık disfonksiyonu arasındaki bağlantının kurulmasına yardımcı olur. Tekniğimizin sınırlamalarını kabul etmek de önemlidir. Bu model, OMA ile ilişkili yumurtalık lezyonlarını başarılı bir şekilde kopyalamış olsa da, endometriozisin karmaşıklığını tam olarak yakalayamayabilir. Hayvan modellerinden elde edilen bulguları insanlara aktarmak, türler arası farklılıklar nedeniyle doğal sınırlamalara sahiptir.

Buna karşılık, bu çalışma, uterus boynuzlarının yumurtalıklara implante edilmesi için benzer bir prosedürün gerçekleştirildiği yumurtalık endometriozisi fare modelleri üzerinde yapılan önceki araştırmalara dayanmaktadır46. Bununla birlikte, bu yöntem ile önceki modeller arasında dikkate değer farklılıklar vardır. İlk olarak, bu model sadece yumurtalıklarda lezyonlar oluştururken, önceki model sadece yumurtalıklarda değil, diğer organlarda da endometriotik lezyonlar gösterdi. Bu ayrım, modellerinin OMA'ya özgü olmaktan ziyade endometriozisin birleşik alt tiplerini taklit etme olasılığını daha yüksek hale getirir. Odaklanmış tezahürümüz, araştırmacıların diğer organlardaki lezyonların kafa karıştırıcı etkisi olmadan özellikle OMA'nın nüanslarına odaklanmalarını sağlar. Modelimiz, bu sınırlamaların üstesinden gelerek OMA'nın daha doğru bir temsilini sağlar ve gelecekteki araştırmalar için sağlam bir platform görevi görür. İkincisi, bu model, OMA'yı yansıtmada %83'lük övgüye değer bir başarı oranı göstermekte ve hastalığın üremesinde yüksek bir doğruluk sağlamaktadır.

Birçok kadın ilk tedavi müdahalelerinden sonra bile tekrarlayan semptomlar yaşadığından, OMA nüksünün önemli bir endişe kaynağı olduğunu belirtmekte fayda var. Bu kapsamda endometriozis nüksü ve tanı testleri birçok çalışmada değerlendirilmiştir. Örneğin, Yıldız ve ark. transvajinal ultrasonun nüksün doğru tanısı ve izlenmesi için spesifik ultrason belirteçlerini ve paternlerini tespit etmek için bir tanı aracı olarak kullanımını tartışmışlardır47. Başka bir çalışmada endometriozisli kadınların uzun süreli takibine odaklanılmış ve cerrahi tedavi sonrası nüks oranı değerlendirilmiştir48. Bu çalışma, nüks riskini en aza indirmek için hastalık özelliklerine ve hasta faktörlerine dayalı bireyselleştirilmiş tedavi stratejilerinin önemini vurgulamaktadır. Ayrıca, bazı araştırmacılar endometriozis nüksünü tahmin etmek için dolaşımdaki biyobelirteçlerin potansiyelini incelediler49. Çalışma, spesifik moleküler belirteçleri ve bunların hastalık nüksü ile ilişkisini araştırarak, non-invaziv tanı testlerinin ve kişiselleştirilmiş yönetim yaklaşımlarının geliştirilmesine ilişkin içgörüler sağlar. Bu çalışmalar, endometriozis nüksünü anlamak ve ele almak için devam eden çabaları ve hasta sonuçlarını iyileştirmek için tanı testlerinin geliştirilmesini vurgulamaktadır. Bu çalışmalardan elde edilen bilgileri OMA fare modeli araştırmamıza dahil etmek, hastalığın, nüks paternlerinin ve OMA'nın izlenmesi ve yönetilmesi için potansiyel tanı stratejilerinin kapsamlı bir şekilde anlaşılmasına katkıda bulunabilir.

Sonuç olarak, bu özel OMA fare modelinin kurulması, endometriozis alanında yeni bir araştırma çağı için bir temel taşı görevi görmektedir. Uzun süredir devam eden bir boşluğu ele alarak, endometriyoyu anlama, tedavi etme ve potansiyel olarak önleme şeklimizde devrim yaratabilecek, etkilenen kadınlar için daha iyi klinik sonuçlara ve daha iyi yaşam kalitesine yol açabilecek bir dizi içgörü ve atılım vaat ediyor. Daha da önemlisi, bu yöntemi önceki OMA modelleriyle karşılaştırarak ve endometriozis nüksü ve tanı testleri üzerine yapılan çalışmalardan elde edilen bulguları birleştirerek, araştırmamızın endometriozis araştırması ve hasta bakımı bağlamında daha geniş bir bağlamda alaka düzeyini ve uygulanabilirliğini daha da artırabiliriz.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Hong Kong Hükümeti Özel İdari Bölgesi Araştırma Hibeleri Konseyi (T13-602/21-N) tarafından verilen Temaya Dayalı Araştırma Programı tarafından finanse edilmektedir.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
25 G iğneli 1 cc şırıngaBD Biyolojik Bilimler301320
10 mm Doku kültürü kabıDOĞAN353001
%10 Tamponlu formalinFisher BilimselSF100-4 Serisi
10x fosfat tamponlu salin (PBS) tamponuFisher BilimselAM9625 Serisi
30 gr iğneBD Biyolojik Bilimler305107
5-0 siyah örgülü ipek emilmeyen sütürEthicon Inc.W500H
%70 Etanol
Yapışkan mikroskop slaytlarıMarienfeld'in810401
Buprenorfin Enjeksiyonu Med-Vet UluslararasıRXBUPRENOR5
Çift başlı pamuklu çubukSANYO Co., LTD.HUBY-340
İnce forsepsGüzel Bilim Araçları11254-20
KetaminAlfasan Uluslararası bv2203095-08
MikrotüplerCorning MCT-150-C
İğne tutucuExcelta Şirketi2827-NH-35-SE-ND
Oftalmik merhemBaşlıca İlaçlar10033691
Periyodik Asit Schiff (PAS) Leke Kiti AbcamAb150680
Pudrasız steril eldivenlerFisher Bilimsel19020558
Kasetleri işleme/gömmeFisher Bilimsel15-197-700A
3 numara neşterFisher Bilimsel22-079-657
Küçük tırtıklı yarı kavisli forsepsRoboz Cerrahi Aletler A.Ş.RS-5135 Serisi
Küçük cerrahi makasRoboz Cerrahi Aletler A.Ş.RS-5850 Serisi
Standart ışık mikroskobuVajinal sitoloji yaymalarını ve histolojik analizleri değerlendirmek için.
Çelik neşter bıçakları #10B. BraunBB510 Serisi
Steril gazlı bezMEDİCOMHMWS 077 Serisi
Sterilize edilmiş borcam Petri kaplarıCorning70160-101
Termoregülasyonlu elektrikli ped 
VICRYL RAPIDE (poliglaktin 910) emilebilir SütürEthicon Inc.W9918
Xylazine Alfasan Uluslararası bv2110333-10

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Khan, K. N., et al. Pelvic pain in women with ovarian endometrioma is mostly associated with coexisting peritoneal lesions. Hum Reprod. 28 (1), 109-118 (2013).
  2. Gałczyński, K., Jóźwik, M., Lewkowicz, D., Semczuk-Sikora, A., Semczuk, A. Ovarian endometrioma - a possible finding in adolescent girls and young women: A mini-review. J Ovarian Res. 12 (1), 104(2019).
  3. Tan, Z., et al. Impacts of endometrioma on ovarian aging from basic science to clinical management. Front Endocrinol (Lausanne). 13, 1073261(2022).
  4. Khan, K. S., et al. Mri versus laparoscopy to diagnose the main causes of chronic pelvic pain in women: A test-accuracy study and economic evaluation. Health Technol Assess. 22 (40), 1-92 (2018).
  5. Nisenblat, V., et al. Blood biomarkers for the non-invasive diagnosis of endometriosis. Cochrane Database Syst Rev. 2016 (5), 012179(2016).
  6. Harirchian, P., et al. Lesion kinetics in a non-human primate model of endometriosis. Hum Reprod. 27 (8), 2341-2351 (2012).
  7. Santulli, P., et al. Endometriosis-related infertility: Ovarian endometrioma per se is not associated with presentation for infertility. Hum Reprod. 31 (8), 1765-1775 (2016).
  8. Dai, Y., Li, X., Shi, J., Leng, J. A review of the risk factors, genetics and treatment of endometriosis in chinese women: A comparative update. Reprod Health. 15 (1), 82(2018).
  9. Younis, J. S. Endometriosis-associated ovarian cancer: What are the implications for women with intact endometrioma planning for a future pregnancy? A reproductive clinical outlook. Biomolecules. 12 (11), 1721(2022).
  10. Bonavina, G., Taylor, H. S. Endometriosis-associated infertility: From pathophysiology to tailored treatment. Front Endocrinol (Lausanne). 13, 1020827(2022).
  11. Filip, L., et al. Endometriosis associated infertility: A critical review and analysis on etiopathogenesis and therapeutic approaches. Medicina (Kaunas). 56 (9), 460(2020).
  12. Tanbo, T., Fedorcsak, P. Endometriosis-associated infertility: Aspects of pathophysiological mechanisms and treatment options. Acta Obstet Gynecol Scand. 96 (6), 659-667 (2017).
  13. Bulletti, C., Coccia, M. E., Battistoni, S., Borini, A. Endometriosis and infertility. J Assist Reprod Genet. 27 (8), 441-447 (2010).
  14. Ni, Z., et al. Iron-overloaded follicular fluid increases the risk of endometriosis-related infertility by triggering granulosa cell ferroptosis and oocyte dysmaturity. Cell Death Dis. 13 (7), 579(2022).
  15. Mohammed Rasheed, H. A., Hamid, P. Inflammation to infertility: Panoramic view on endometriosis. Cureus. 12 (11), e11516(2020).
  16. Jing, X., et al. Systemic inflammatory response markers associated with infertility and endometrioma or uterine leiomyoma in endometriosis. Ther Clin Risk Manag. 16, 403-412 (2020).
  17. Marcellin, L., et al. Serum antimullerian hormone concentration increases with ovarian endometrioma size. Fertil Steril. 111 (5), 944-952 (2019).
  18. Deng, Y., et al. Does current ovarian endometrioma increase the time for dor patients to reach live birth in ivf. BMC Pregnancy Childbirth. 22 (1), 324(2022).
  19. Dongye, H., Tian, Y., Qi, D., Du, Y., Yan, L. The impact of endometrioma on embryo quality in in vitro fertilization: A retrospective cohort study. J Clin Med. 12 (6), 2416(2023).
  20. He, Y., et al. Re-evaluation of mouse models of endometriosis for pathological and immunological research. Front Immunol. 13, 986202(2022).
  21. Kanellopoulos, D., et al. The interplay between endometriosis and fertility in rats: A systematic review. J Med Life. 15 (6), 742-746 (2022).
  22. Tejada, M. A., et al. Rodent animal models of endometriosis-associated pain: Unmet needs and resources available for improving translational research in endometriosis. Int J Mol Sci. 24 (3), 2422(2023).
  23. Bruner-Tran, K. L., Mokshagundam, S., Herington, J. L., Ding, T., Osteen, K. G. Rodent models of experimental endometriosis: Identifying mechanisms of disease and therapeutic targets. Curr Womens Health Rev. 14 (2), 173-188 (2018).
  24. Buigues, A., et al. Evaluation of pai-1 in endometriosis using a homologous immunocompetent mouse model. Biol Reprod. 99 (2), 326-335 (2018).
  25. Tirado-Gonzalez, I., et al. Endometriosis research: Animal models for the study of a complex disease. J Reprod Immunol. 86 (2), 141-147 (2010).
  26. Lagana, A. S., et al. Translational animal models for endometriosis research: A long and windy road. Ann Transl Med. 6 (22), 431(2018).
  27. Mukherjee, P., Roy, S., Ghosh, D., Nandi, S. K. Role of animal models in biomedical research: A review. Lab Anim Res. 38 (1), 18(2022).
  28. Cuevas, M., et al. Stress exacerbates endometriosis manifestations and inflammatory parameters in an animal model. Reprod Sci. 19 (8), 851-862 (2012).
  29. Nunez-Badinez, P., et al. Preclinical models of endometriosis and interstitial cystitis/bladder pain syndrome: An innovative medicines initiative-paincare initiative to improve their value for translational research in pelvic pain. Pain. 162 (9), 2349-2365 (2021).
  30. Umezawa, M., et al. Expression profile of extracellular matrix and adhesion molecules in the development of endometriosis in a mouse model. Reprod Sci. 19 (12), 1365-1372 (2012).
  31. Grummer, R. Animal models in endometriosis research. Hum Reprod Update. 12 (5), 641-649 (2006).
  32. Tejada, M. A., et al. Identification of altered evoked and non-evoked responses in a heterologous mouse model of endometriosis-associated pain. Biomedicines. 10 (2), 501(2022).
  33. Bruner-Tran, K. L., Carvalho-Macedo, A. C., Duleba, A. J., Crispens, M. A., Osteen, K. G. Experimental endometriosis in immunocompromised mice after adoptive transfer of human leukocytes. Fertil Steril. 93 (8), 2519-2524 (2010).
  34. Malvezzi, H., Marengo, E. B., Podgaec, S., Piccinato, C. A. Endometriosis: Current challenges in modeling a multifactorial disease of unknown etiology. J Transl Med. 18 (1), 311(2020).
  35. Yan, D., Liu, X., Guo, S. -W. The establishment of a mouse model of deep endometriosis. Human Reproduction. 34 (2), 235-247 (2018).
  36. Santulli, P., et al. Protein oxidative stress markers in peritoneal fluids of women with deep infiltrating endometriosis are increased. Hum Reprod. 30 (1), 49-60 (2015).
  37. Adeniran, B. V., Bjarkadottir, B. D., Appeltant, R., Lane, S., Williams, S. A. Improved preservation of ovarian tissue morphology that is compatible with antigen detection using a fixative mixture of formalin and acetic acid. Hum Reprod. 36 (7), 1871-1890 (2021).
  38. Sima, R. M., et al. Novel diagnosis of mesenteric endometrioma: Case report. Medicine (Baltimore). 98 (29), e16432(2019).
  39. Eskenazi, B., Warner, M. L. Epidemiology of endometriosis). Obstet Gynecol Clin North Am. 24 (2), 235-258 (1997).
  40. Laufer, M. R., Goitein, L., Bush, M., Cramer, D. W., Emans, S. J. Prevalence of endometriosis in adolescent girls with chronic pelvic pain not responding to conventional therapy. J Pediatr Adolesc Gynecol. 10 (4), 199-202 (1997).
  41. Tan, Z., et al. What we have learned from animal models to understand the etiology and pathology of endometrioma-related infertility. Biomedicines. 10 (7), 1483(2022).
  42. Meyerholz, D. K., et al. Glycogen depletion can increase the specificity of mucin detection in airway tissues. BMC Research Notes. 11 (1), 763(2018).
  43. Fang, E., et al. Cpeb3 deficiency in mice affect ovarian follicle development and causes premature ovarian insufficiency. Cell Death Dis. 13 (1), 21(2021).
  44. Zhou, J., Peng, X., Mei, S. Autophagy in ovarian follicular development and atresia. Int J Biol Sci. 15 (4), 726-737 (2019).
  45. Kitajima, M., et al. Enhanced follicular recruitment and atresia in cortex derived from ovaries with endometriomas. Fertil Steril. 101 (4), 1031-1037 (2014).
  46. Hayashi, S., et al. Novel ovarian endometriosis model causes infertility via iron-mediated oxidative stress in mice. Redox Biol. 37, 101726(2020).
  47. Yildiz, S., et al. The pain symptoms and mass recurrence rates after ovarian cystectomy or uni/bilateral oophorectomy procedures in patients over 40 years old with endometriosis. Ginekol Pol. 91 (6), 295-300 (2020).
  48. Guney, G., et al. Neutrophil gelatinase-associated lipocalin serum level: A potential noninvasive biomarker of endometriosis. Medicine (Baltimore). 102 (41), e35539(2023).
  49. Kaya, C., et al. The role of serum caspase 3 levels in prediction of endometriosis severity. Gynecol Obstet Invest. 83 (6), 576-585 (2018).

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Endometrioma Fare ModeliOver Endometriozis KistleriEndometriozis nfertilitesiOMA li kili nfertiliteReprod ktif T pEndometriozis Hayvan ModeliOver LezyonuFertilite Ara t rmalarOMA Sim lasyonu

İlgili makaleler