Bu protokol, adacık izolasyonu ve saflaştırılması için bir domuz pankreasının satın alınması için adım adım bir kılavuz sağlar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Adacık izolasyonu için domuz pankreasının cerrahi perfüzyonu ve izolasyonu
Bu makalede
Özet
Özet
Pankreas adacık nakli, tip I diyabet için yeni ortaya çıkan bir tedavi yöntemidir; ancak, donör eşleşmesi ve mevcudiyeti ile sınırlıdır. Domuz adacığı ksenotransplantasyonu, talep üzerine, fonksiyonel adacıkların büyük ölçekli üretim potansiyeli ile allotransplantasyona umut verici bir alternatif sunmaktadır. İzole edilmiş adacıkların verimi ve canlılığı, donör pankreasın kalitesine ve tedarik yöntemine, özellikle sıcak iskemi süresinin süresine karşı oldukça hassastır. Organların korunmasını ve müteakip adacık verimini ve canlılığını iyileştirmek için, domuz pankreasının cerrahi perfüzyonu ve rezeksiyonu için bir protokol geliştirdik. Bu protokolde direkt infrarenal aort kanülasyonu ve organ perfüzyonu kullanılarak sıcak iskemi süresi en aza indirilir ve cerrahi uzmanlık alanı olmayan operatörler için prosedür basitleştirilir. Pankreasın aort yoluyla müteakip arteriyel perfüzyonu, durgun kanı mikrovasküler sistemden temizler, böylece trombozu ve dokudaki oksidatif hasarı azaltır. Bu el yazması, domuz pankreasının cerrahi perfüzyonu ve rezeksiyonu için ayrıntılı bir protokol sağlar, ardından adacık izolasyonu ve saflaştırılması sağlanır.
Giriş
Tip 1 diyabet, pankreas beta hücrelerinin1 otoimmün yıkımından kaynaklanır. Sonuç olarak, hastalar ekzojen insüline bağımlıdır ve bu da onları hiper ve hipoglisemi atakları ile yüksek riskli glisemik dalgalanmalara sokar2. Adacık allotransplantasyonu, tip I diyabet için potansiyel bir tedavidir; Bununla birlikte, pankreas organ bağışçılarının sınırlı mevcudiyeti, prosedürün yaygın olarak benimsenmesinin önünde önemli bir engel olmaya devam etmektedir 2,3. Domuz donörlerinden adacık ksenotransplantasyonu, bu hayvanlar kolayca bulu....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Hayvanlarla ilgili tüm prosedürler, Washington Üniversitesi Tıp Fakültesi Karşılaştırmalı Tıp Bölümü'ndeki Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. 35 ila 35 kg arasında değişen yetişkin Yorkshire domuzları bu prosedür için idealdir; Bununla birlikte, protokol, deneysel bağlama bağlı olarak farklı boyutlardaki domuzlar için uyarlanabilir. Tüm prosedür bir ameliyathane kurulumunda steril bir şekilde gerçekleştirilmelidir.
1. Ameliyat öncesi hazırlık ve anestezi
- Domuzu kas içine enjekte edilen 4 mg / kg tiletamin ve zolazepam, 20 mg / kg ketamin....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Ameliyat düzeneği ve orta hat laparotomisi Şekil 1'de gösterilmiştir. Laparotomi insizyonu, ürogenital açıklığı önlemek için kavisli olmalıdır (Şekil 1B). Ekartörü kurarken, Omni veya Bookwalter ekartör direğini masanın sol, alt köşesine takın. İdeal retraksiyonda sağ karın duvarı için iki, sol karın duvarı için iki ve steril bir havluya sarılmış sağ kolon ve ince barsak için 1-2 ekartör bıçağı bulunur (Şekil 1C). Gövde duvarı, spla.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Domuz donörleri kullanılarak yapılan pankreas adacık ksenotransplantasyonu, Tip I diyabetin tedavisi için umut verici bir stratejidir. Adacık izolasyonu zordur ve nihai adacık canlılığı ve verimi, organ alımı sırasında karşılaşılan hipotansiyon ve doku iskemisine oldukça duyarlıdır16,17. Pankreas tedarikini ve korunmasını optimize etmek için bu protokol, adacık izolasyonundan önce domuz pankreasının tedariki sırasında aort kanüla.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması bildirmemiştir.
Teşekkürler
Bu el yazması, Orta Amerika Organ Nakli Vakfı'ndan bir klinik yenilik hibesi ile desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 1 M NaOH, 100 mL | Millipore Sigma | 1310-73-2 | |
| 10x HBSS, 500 mL (15 ila 30 &derece; C) | Thermo Fisher | 14065056 | |
| 1x D-PBS, 500 mL | Thermo Fisher | 14200075 | |
| 1x HBSS, 1 L | Thermo Fisher | 14025076 | |
| 250 mL Konik Tüpler | Millipore Sigma | CLS430236-6EA | |
| Amfoterisin B [50 mg] | |||
| %10 | Millipore Sigma | 25655-41-8 | |
| BioRad Gradyan Eski | BioRad | 395 | |
| Kalsiyum Klorür dihidrat | Thermo Fisher | 10035-04-8 | |
| COBE Hücre İşlemcisi | Ebay | 317690 & nbsp; | |
| Çürütme devresi rezervuarı, Gibco şişesi, 1 L | Thermo Fisher | 10341001 | |
| Dimetilsülfoksit (DMSO) | Thermo Fisher | 85190 | |
| Dithizone | Thermo Fisher | 60-10-6 | |
| Degrade Eski Bağlantı Kiti | BioRad | 1652008 | |
| Heparin [1000 U/mL] | Acil Tıbbi Ürünler | 0409-2720-01 | |
| HEPES Tamponu (1 M), 100 mL | Thermo Fisher | 15630080 | |
| İnsan Serumu Albümini %25, 100 mL | Celprogen | HSA2001-25-1 | |
| İzofluran | Covetrus | Ürün #: 11695067772 | |
| Ketamin | Patterson | Ürün #: 07-894-8462 | |
| Liberaz (100 mg) | Millipore Sigma | 5401020001 | |
| CANLI / ÖLÜ Canlılık / Sitotoksisite | Kiti Thermo Fisher | L3224 | |
| Lenfolit 1.1 Medya 500 mL | Cedarlane Labs | CL5020 | |
| Masterflex LS 16 Boru Masterfle | 96419-16 | ||
| Masterflex Peristaltik Pompa | Masterflex | 07522-30 | |
| PenStrep (2 mg / mL) | Celprogen | PS-30-002 | |
| Pulmozim (1 mg / mL, 2.5 mL / flakon | Dornase Alfa | 8931278 | |
| Geri Kazanım Ortamı, PIM (R) | Prodo Laboratories, Inc. | PIM-R001GMP | |
| RPMI 1640 | Millipore Sigma | R8758-1L | |
| Standart Kültür Ortamı, PIM (S) | Prodo Laboratories, Inc. | PIM-S001GMP | |
| Tzed ve ticaret; (Tiletamin ve Zolazepam) Enjeksiyon C | Patterson | Ürün #:07-894-6240 | |
| Wisconsin Üniversitesi (UW) Çözümü, 3 L | Küresel Nakil Çözümleri | 1000-0046-06 | |
| Su Banyosu | Sigma Alderich | CLS6783-1EA | |
| Ksilazin | Patterson | Ürün #:07-891-6165 |
Kaynaklar
- Gillespie, K. M. Type 1 diabetes: pathogenesis and prevention. CMAJ. 175 (2), 165-170 (2006).
- Shapiro, A. M., Pokrywczynska, M., Ricordi, C. Clinical pancreatic islet transplantation. Nat Rev Endocrinol. 13 (5), 268-277 (2017).
- Shapiro, A. M., et al.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
