Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Melanom Hasta Kaynaklı Organoid Modellerle Terapötik Fırsatların Ortaya Çıkarılması

2.6K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/66509

⸱

6 Eylül 2024

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pathology and Laboratory Medicine, Perelman School of Medicine, University of Pennsylvania

Bu makalede

Özet

Burada, taze melanom dokularından ayrışmış hücre süspansiyonlarını kültürleyerek melanom hastadan türetilmiş organoidler oluşturmak için bir protokol sunuyoruz. Bu organoidler, hastaya özgü tümörleri in vitro olarak aslına uygun olarak özetleyerek, tümör immünosupresif mekanizmalarını, ilaç taramasını, ilaç direnç mekanizmalarını ve kanser sürveyans yaklaşımlarını keşfetmek için yenilikçi bir yaklaşım sunar.

Özet

İmmünoterapinin gelişmesiyle birlikte, doğal tümörlerin tümör mikroçevresini özetleyebilecek modellerin geliştirilmesine devam eden bir ihtiyaç vardır. Geleneksel iki ve üç boyutlu modeller, kanser gelişimi ve ilerlemesi hakkında fikir verebilirken, bunlar, doğal tümörlerin sadık bir taklidini engelleyen önemli yönlerden yoksundur. Çok dikkat çeken alternatif bir model, hastadan türetilen organoiddir. Bu organoidlerin gelişimi, karmaşık hücreler arası iletişimi, tümör mikroçevresini ve tümörlerin histomimarisini özetler. Bu makale, melanom hastadan türetilmiş organoid (MPDO) modellerin oluşturulmasına yönelik protokolü açıklamaktadır. Bu modelleri doğrulamak için, organoidlerin hücresel heterojenliğini doğrulamak için T hücresi aktivasyon belirteçlerinin ekspresyon seviyeleri de dahil olmak üzere bağışıklık hücresi bileşimini değerlendirdik. Ek olarak, MPDO'ların hücresel tedavilerdeki potansiyel faydasını tanımlamak için, organoidlerin γδ T hücreleri ile tedavi edilmesinin sitotoksik yeteneklerini değerlendirdik. Sonuç olarak, MPDO modelleri, tümör karmaşıklığını anlamak, terapötik stratejileri doğrulamak ve potansiyel olarak kişiselleştirilmiş tedaviyi ilerletmek için umut verici yollar sunmaktadır.

Giriş

Konvansiyonel 2 boyutlu hücre kültürü modelleri, kanserin ilerlemesini ve tedavisini incelemek için kanser araştırmalarında temel araçlardır1. Bu modeller, kanser gelişimi ve ilerlemesinin altında yatan moleküler ve hücresel mekanizmaları araştırmak için kontrollü deneysel koşullara izin vermekle kalmaz, aynı zamanda uygun maliyetli ve nispeten hızlı deneysel sonuçlar sağlar. Bununla birlikte, mono-kültür modellerinin eş düzlemli bir doğasında özetlenemeyen tümör mikroçevresindeki (TME) sınırlı hücresel çeşitlilik nedeniyle kullanımları sınırlıdır2. Ek olarak, hücre kültürü modelleri insan vücuduna kıyasla aşırı basitleştirilmiş bir ortam sunar3. Bu nedenle, kanserin ilerlemesini daha iyi anlamak ve etkili tedaviler geliştirmek için araştırmacılar, TME'yi doğada yakından özetlemeyi amaçlayan yenilikçi modellere yönelmişlerdir. Sonuç olarak, bu modellerde doğal tümörlere sadakati korumak çok önemlidir. Kanserin karmaşık doğası göz önüne alındığında, orijinal tümörden herhangi bir önemli sapma, tümör davranışı hakkında anlamlı sonuçları karıştırabilecek öngörülemeyen değişkenlere neden olabilir.

Hasta kaynaklı ksenogreftler (PDX), tümör ilerlemesinin in vivo olarak izlenmesine izin veren bir model sistem olarak ortaya çıkmış olsa da, bazı sınırlamalar, geliştirilen tümörün insan kanser biyolojisini ne kadar iyi özetlediğini sorgulamaktadır4. Örneğin, melanom TME, tümöre sızan bağışıklık hücreleri ve stromal hücreler içerir. Bir ksenogreft olarak geçtiğinde, hastadan alınan kanser olmayan hücreler yavaş yavaş kaybolacak ve bu da hasta tümörlerindekinden farklı adaptasyonları seçebilecektir. Bu sınırlamalar, PDX'in in vivo olarak sınırlı geçişleri gerçekleştirilerek hafifletilebilirken, türler arasındaki farklılıklar, PDX'te doğal tümörünkinden sapan genetik değişiklikler riski oluşturabilir5. Ayrıca, PDX modelleri tipik olarak insan dokularının reddedilmesini önlemek için bağışıklığı baskılanmış farelerde kurulur. Bu, özellikle immünoterapötik çalışmalarda, konakçı bağışıklık sisteminin kanserdeki rolünü inceleme yeteneğini sınırlar6. Biz ve diğerleri, PDX'leri "insanlaştırılmış" farelerdeaşıladık 7,8. Bununla birlikte, insanlaştırılmış farelerde PDX modelleri oluşturmak zaman alıcı ve pahalıdır. Bir hastanın tümör örneğinden tek bir PDX modeli geliştirmek birkaç aydan yıla kadar sürebilir, bu nedenle araştırmanın hızını ve ölçeğini sınırlar. Bu sınırlamalara rağmen, PDX modellerinin TME'nin biyolojisini doğru bir şekilde temsil ettiği gösterilmiştir, bu nedenle diğerlerinin yanı sıra kanser terapötikleri, kişiselleştirilmiş tıp ve immünoterapinin geliştirilmesi için yaygın olarak kullanılmaktadır9.

Ortaya çıkan alternatif bir 3D kültür tekniği, fenotipik heterojenliği, histomimariyi ve hücreler arası iletişimi koruyan modeller oluşturmak için yeni rezeke edilmiş bir hasta tümörünün kültürlendiği hasta kaynaklı organoiddir (PDO)10. Doğal tümörlere çok benzeme yeteneği, kas invaziv olmayan (NMIBC) ve kas invaziv mesane kanserinden (MIBC) kültürlenmiş organoidlerin ebeveyn tümörlerinin temel yönlerini başarılı bir şekilde özetlediği daha önce gösterilmiştir11. Diğer modellere göre potansiyelleri ve avantajları nedeniyle, PDO'lar, hücresel ve hedefe yönelik tedavilerin yanı sıra bağışıklık kontrol noktası inhibitörlerinin incelenmesi ve geliştirilmesi dahil ancak bunlarla sınırlı olmamak üzere, diğer modellerde bulunmayan çok çeşitli özel uygulamalar sunar. Örneğin, daha önce tümör infiltre eden lenfositlerin (TIL'ler) IL-2 ve anti-PD1 antikorları (αPD-1) tarafından genişletilme yeteneğini incelemek için melanom hastadan türetilmiş organoidleri (MPDO'lar) kullandık. Sonuçlar, IL-2 ve αPD-1 tarafından genişletilen TIL'lerin sadece daha yüksek bir sayıya sahip olmadığını, aynı zamanda MPDO'lara başarılı bir şekilde sızabildiğini ve diğer yöntemler kullanılarak genişletilen TIL'lerden daha yüksek verimlilikle melanom hücrelerini öldürebildiğini gösterdi12. Anti-PD-1 ve/veya anti-PD-L1 kullanımının PDO'larda TIL'lerin işlevsel kalmasına yol açtığı ve bunun sonucunda tümörün ölmesine yol açtığı diğer gruplar da benzer sonuçlar göstermiştir13. Ek olarak, grubumuz γδ T hücresi infiltrasyonunu ve öldürme yeteneğini değerlendirmek için MPDO'ları da kullanmıştır14. PDO'ların uygulanabilirliği, TIL genişlemesi, sitotoksisite çalışmaları ve küçük molekül taraması dahil olmak üzere çok çeşitli alanları kapsar. Tüm bu uygulamalar, bu modelin sağladığı potansiyeli ve kullanılabilirliği vurgulamaktadır. Bu nedenle, MPDO'ların kültürü için ayrıntılı protokolü açıklıyoruz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

İnsan melanom dokuları, Pennsylvania Üniversitesi Kurumsal İnceleme Kurulu tarafından onaylanan doku toplama protokolü (UPCC08607) kullanılarak Pennsylvania Üniversitesi'nde tedavi gören hastalardan elde edildi. Tüm hastalar bilgilendirilmiş onam imzalamıştır. İnsan melanom dokularının rezeksiyonunu takiben, tümör dokusu Dulbecco'nun Modifiye Kartal Ortamına (DMEM) yerleştirilir ve işlenene kadar (6 saat içinde) 4 ° C'de tutulur. Melanom hasta kaynaklı organoidler (MPDO'lar), Şekil 1'de gösterildiği gibi taze bir tümörden türetilmiştir.

1. İnsan melanom dokusundan hücrelerin izolasyonu

  1. Prosedür başlamadan önce hazırlıklar
    NOT: Ayrışmış melanom dokusunu kültürlemek için iki kültür yöntemi (Matrigel ve kollajen jel) kullanılabilir:
    1. Matrigel yöntemi için: GFR Bazal Membran Matrisini organoid kültür ortamı ile seyrelterek Büyüme Faktörü Azaltılmış (GFR) Bazal Membran Matrisinin bir kaplama çözeltisini hazırlayın (bkz. Tablo 1) 1: 2 oranında. 48 oyuklu bir plakanın birkaç oyuğunun her birine yaklaşık 115 μL çözülmüş çözelti ekleyin ve nemlendirilmiş bir inkübatörde 37 ° C'de 30 dakika katılaşmaya bırakın.
    2. Kolajen jel yöntemi için: 30 mm'lik bir iç zar ekine 1 mL Kollajen jeli ( Tablo 1'e bakınız) ekleyin. Jelin nemlendirilmiş bir inkübatörde 37 ° C'de 30 dakika katılaşmasına izin verin.
  2. L-WRN şartlandırılmış ortamı15 hazırlayın. L-WRN şartlandırılmış ortam, Wnt3a, R-spondin 3 ve Noggin'i hücre kültürü için yaygın olarak kullanılan tek bir şartlandırılmış ortama salgılamak için tasarlanmış bir L-WRN hücre hattından üretilir.
    1. 37 ° C su banyosunda bir L-WRN hücresi kriyotüpünü çözün. 15 mL'lik konik bir tüpe 5 mL L hücreli ortam (bakınız Tablo 1) ve L-WRN hücre süspansiyonu ekleyin ve 4 ° C'de 5 dakika boyunca 120 × g'da santrifüjleyin. Süpernatanı aspire edin, hücre peletini yeniden süspanse etmek için altta ~ 500 μL kaldığından emin olun.
    2. Süpernatanttaki hücre peletini buz üzerinde 30 mL L hücreli ortama aktarın ve 150 μL higromisin (500 μg/mL) ve 300 μL G418 (500 μg/mL) ekleyin. Hücreleri bir T-150 şişesi üzerinde 3 × 10:6 yoğunlukta tohumlayın ve 37 ° C'de% 5 CO2 ile ~% 90 birleşene kadar nemlendirilmiş bir inkübatörde inkübe edin.
    3. Hücreler ~% 90 birleştiğinde, 20 mL fosfat tamponlu salin (PBS) ile yıkayarak, aspire ederek ve 3 mL tripsin ikamesi ile sindirerek hücreleri beş T-150 şişesine bölün. 5 dakika sonra, 9 mL L hücreli ortam ile nötralize edin ve ardından 4 ° C'de 120 × g'da 5 dakika santrifüjleyin. ~%100 birleştiğinde, beş T-150 şişesini 10 T-175 3 katmanlı şişeye bölün.
    4. Bir kez birleştikten sonra, hücreleri 2 x 50 mL PBS ve ardından 25 mL yıkama ortamı ile yıkayın (bkz. Tablo 1).
    5. Her bir T-175 3 katmanlı şişeye 75 mL birincil kültür ortamı ekleyin ve %5 CO2 içeren nemlendirilmiş bir inkübatörde 37 ° C'de 3 gün inkübe edin (bakınız Tablo 1).
    6. 3 gün sonra, şartlandırılmış ortamı 50 mL'lik bir konik haline getirin ve 4 ° C'de 5 dakika boyunca 1.100 × g'da döndürün. Süpernatanı (şartlandırılmış ortam) toplayın ve 5 mL'nin geride kalmasını sağlayın.
    7. Her bir T-175 3 katmanlı şişeye taze 75 mL birincil hücre kültürü ortamı ekleyin ve ek şartlandırılmış ortam toplamak için 3 gün daha inkübe edin.
    8. Toplanan şartlandırılmış ortama, eşit hacimde birincil hücre kültürü ortamı (% 50 hacim) ekleyin ve içeriği 0.22 μm'lik bir filtre kullanarak vakumla filtreleyin. Alikotları 50 mL'lik tüplerde saklayın ve uzun süreli kullanım için -20 °C'de veya 2-3 haftaya kadar 4 °C'de saklayın. Organoid kültür ortamını desteklemek için bu ortamı kullanın (bakınız Tablo 1).
      NOT: Kullanmadan önce alikotları gece boyunca 4 °C'de çözdürün.
  3. Hücresel karışımın taze melanom dokusundan toplanması
    1. Taze rezeke edilmiş melanom dokusunu, yıkama ortamı içeren 10 mL'lik bir Petri kabında yıkayın. İlk durulamadan sonra, tümörü daha fazla yıkama için ikinci bir Petri kabına aktarmak için steril cımbız kullanın ve tümör bütünlüğünü ve canlılığını korumak için bu işlemi buz üzerinde 3 kez tekrarlayın. Bu durulama döngüleri boyunca, fazla bağ dokusunu, yağı ve kalan kanı çıkarmak için steril makas ve bir bıçak kullanın. Üç yıkamadan sonra, tümörü boş bir Petri kabına koyun ve ince kıymak için steril bıçaklar kullanın.
      NOT: Kıyma işleminden sonra tümör jel benzeri bir kıvam göstermelidir. Tümörün kıyılması ne kadar ince olursa, hücre verimi o kadar yüksek olacaktır. Bunun nedeni, tümörün daha büyük kümelerinin sindiriminin daha zor olması ve sonraki adımda 70 μm Naylon hücre süzgecinden geçememesidir.
    2. Tümör dokusu iyice yıkandıktan ve kıyıldıktan sonra, 10 mL hazırlanan sindirim ortamı içeren 50 mL'lik konik bir tüpe aktarın (bakınız Tablo 1). Koniği 37 °C'de bir su banyosuna yerleştirin ve içeriğin her 5 dakikada bir girdaplanmasını sağlayın.
    3. 25 dakika sonra, sindirimi durdurmak için% 10 FBS içeren ADMEM / F12 ortamından 30 mL ekleyin.
      NOT: Bu belirtilen miktarlar, 0,2 g'dan daha ağır olmayan tümörler için tasarlanmıştır.
    4. Sindirilmiş hücre süspansiyonunu 70 μm'lik bir Naylon hücre süzgecinden süzün, ardından süzgeci %10 FBS içeren ADMEM/F12 (1x) Azaltılmış Serum Ortamı (1:1) ile durulayın. Yıkama adımını takiben, mümkün olan en yüksek sayıda hücrenin alındığından emin olmak için filtrenin altında kalan ortamı almak için bir pipet kullanın. Daha sonra 300 × g'da 4 °C'de 7 dakika santrifüjleyin. Süpernatanı atın ve peleti organoid kültür ortamında yeniden süspanse edin (bakınız Tablo 1).
    5. Melanom tek hücreli süspansiyonunu Matrigel veya kollajen kültür sistemlerinde kültürleyin:
      1. Matrigel: 200 μL organoid kültür ortamı ile desteklenmiş önceden ısıtılmış Matrigel kaplı kuyucuklarda yaklaşık 2 × 105 hücrenin tohumlandığından emin olmak için tek hücreli süspansiyonu sayın.
        NOT: Matrigel bazlı organoidler, patofizyolojiyi incelemek, ilaç etkinliğini taramak ve ilaç toksisitesini test etmek için kullanılır16.
      2. Kollajen jeli: Yaklaşık 106 hücrenin 1 mL kollajen jeli ile karıştırıldığından emin olmak için tek hücreli süspansiyonu sayın. Karışımı önceden katılaşmış kollajen jel membran eklerine ekleyin ve bunları 6 oyuklu bir plakaya yerleştirin. Hücreleri ve kollajen jeli içeren ekleri batırmak için yeterli organoid kültür ortamı ekleyin.
        NOT: Kollajen jel organoidleri, T hücresi göçünü ölçmek ve doku gelişimini incelemekiçin kullanılır 16.
    6. Her 3 günde bir taze ortamın eklenmesini sağlarken organoidlerin büyümesine izin verin.
    7. Organoidleri 150-200 μm boyuta ulaştıklarında geçirin veya daha fazla kullanıma kadar dondurarak saklayın.
      1. Organoidlerin geçişi için, organoidleri 15 mL'lik bir konik içine aktarın ve 1x DPSB ile yıkayın. Karışımı 300 × g'da 4 °C'de 7 dakika santrifüjleyin. Süpernatanı çıkarın ve 37 ° C'lik bir su banyosunda 10 dakika boyunca tripsin ikamesi (organoid başına 50-100 μL) ekleyin ve içeriğin her 3 dakikada bir girdaplanmasını sağlayın.
      2. % 10 FBS içeren ADMEM / F12 (1x) Azaltılmış Serum Ortamı (1: 1) ortamı kullanarak sindirimi durdurun. Karışımı 300 × g'da 7 dakika santrifüjleyin ve organoid kültür ortamında yeniden süspanse edin.
      3. Tek hücreli süspansiyonu, aynı başlangıç tohumlama yoğunluğunda yeni bir Matrigel / Kollajen kaplı kuyucuğa tohumlayın (48 oyuklu bir plakada Matrigel kaplı oyuklar için 200 μL organoid kültür ortamında 2 ×10 5 hücre veya kollajen kaplı 30 mm iç zar eki için 1 mL organoid kültür ortamında 106 hücre).
      4. Kriyoprezervasyon için, tripsin ikamesini kullanarak MPDO'ları tek hücreli süspansiyonlara sindirin, ardından 106 hücrenin 1 mL dondurma ortamına yeniden süspansiyonu yapın (bkz. Tablo 1).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

MPDO'ların şekli ve boyutu, büyüme dinamiklerini incelemek için zaman içinde izlendi. Şekil 2'de görüldüğü gibi, ilk büyüme periyodu sırasında, organoid boyutu gösterilen 7 gün boyunca önemli ölçüde artmıştır. MPDO büyüme dinamiklerinin gözlemlenmesinin ardından, dikkat, organoidlerin orijinal tümörlere sadık bir şekilde özetlenmesini doğrulamak için bağışıklık hücresi bileşiminin değerlendirilmesine çevrildi. Öncelikle αβ T hücresi bolluğuna odaklanan bu değerlendirme, organoidler ve ebevey...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

PDO'ların ortaya çıkışı, daha önce kurulmuş diğer kanser araştırma yöntemlerinin ortaya çıkardığı çoklu sınırlamaları ele alırken, bu alanda dönüştürücü potansiyel uygulamaları tanıtmıştır. Bu organoid teknolojisi ilk olarak 2009 yılında, farelerin bağırsağından türetilen Lgr5 + kök hücrelerini, R-sponsin, EGF ve Noggin faktörleri20 içeren bir 3D matris jelinde kültürleyerek başarılı bir şekilde bir bağırsak organoid kültür sistemi kurabilen Hans Clever...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların beyan edebilecekleri herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

Bu çalışma kısmen R01 (CA258113), SPORE (CA261608) ve P01 (CA114046) tarafından sağlanan hibelerle finanse edilmiştir. Şekil 1 BioRender.com yılında hazırlanmıştır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
2 mL Kırmızı Kapaklı İçten Dişli Polipropilen Kriyojenik FlakonCorning431420
50 mL Polipropilen Konik BoruCorning352070
100 mm TC ile İşlem Görmüş Hücre Kültürü KabıCorning353003
105 mm Polistiren Forseps SterilKataplar Yaprak dökmeyen 222-1121-B1I
150 cm2 Hücre Kültürü ŞişesiCorningCLS430825
A83-01Tocris2939
Gelişmiş DMEM/F12 (1x) Azaltılmış Serum Ortamı (1:1)Gibco12634-010
B-27 Takviyesi (50x)Gibco17504-044
Brilliant Violet 510 anti-insan Perforin AntikoruBioLegend308120
Brilliant Violet 605 anti-insan Ki-67 AntikoruBioLegend350522
Brilliant Violet 650 anti-insan CD366 (Tim-3) AntikorBioLegend345028
Brilliant Violet 711 anti-insan CD45 AntikoruBioLegend304050
Hücre Kültürü Ekleri 0.4 ve mikro; m, 30 mm ÇaplıMillipore SigmaPIHP03050
Hücre Boyama TamponuBioLegend420201
Hücre Süzgeci 40 & m NaylonCorning 352340
Hücre Süzgeci 70 & m NaylonCorning 352350
Kollajenaz, Tip IV, tozGibco17104019
Cultrex Sıçan Kollajen ITrevigen3440-100-01
Kültür Plakası, PS, 48 kuyu, TC kapakla işlenmiş, sterilMax Scientific 07-6048
Dimetil Sülfoksit (DMSO) Hybri-MaxSigma-AldrichD2650
DMEM - yüksek glikoz 4.5 mg / mLCorningMT10-0130CV
Dnase I - Derece IIMillipore Sigma10104159001
DPBS,% 1 & nbsp;Corning21-031-CV
Fetal Sığır Serumu, FBSCorningMT35-010-CV
FITC Annexin V Apoptoz Tespit Kiti IBD Biosciences 
ForskolinTocris1099
Geneticin Seçici Antibiyotik (G418 Sülfat) (50 mg / mL)ThermoFisher10131035
GlutaMAX TakviyesiThermoFisher35050061
Jambonun F12 Besin KarışımıThermoFisher11765054
HEPES (1 M)Gibco15630-080
Higromisin B (50 mg / mL)ThermoFisher10687010
L-Glutamin 200 mM (100x)Gibco25030-081
L-WRN hücresiATCCCRL-3276
Matrigel Fenol İçermez & Büyüme Gerçeği. AzaltılmışCorning356231
Millex PVDF şırınga filtresi, 0.22 & mu; MMillipore SigmaSLGVR33RB
N-AsetilsisteinSigma-AldrichA9165-5G
NikotinamidSigma-AldrichN0636-100G
Nunc TripleFlask İşlenmiş Hücre Kültürü ŞişesiThermoFisher132867
PE / Cyanine5 anti-insan CD8a AntikoruBioLegend301010
PE-Cy 7 Fare anti-İnsan CD279 (PD-1)BD Biosciences 
Kalem StrepGibco15140-122
Rekombinant İnsan EGFPeprotechAF-100-15-1MG
Rekombinant İnsan FGF-asidikPeprotech100-17A
Sodyum Bikarbonat Çözeltisi (NaHCO3) (%7,5)Kalite Biyolojik 118-085-721
Paslanmaz Çelik Cerrahi Bıçaklar no. 22Integra4-322
TrypLE Express Gibco12604-021
556547561272

Kaynaklar

  1. Mirabelli, P., Coppola, L., Salvatore, M. Cancer Cell Lines Are Useful Model Systems for Medical Research. Cancers (Basel). 11 (8), 1098(2019).
  2. Shannon, A. E., Boos, C. E., Hummon, A. B. Co-culturing multicellular tumor models: Modeling the tumor microenvironment and analysis techniques. Proteomics. 21 (9), e2000103(2021).
  3. Jubelin, C., Muñoz-Garcia, J., Griscom, L. Three-dimensional in vitro culture models in oncology research. Cell Biosci. 12, 155(2022).
  4. Jin, J., Yoshimura, K., Sewastjanow-Silva, M., Song, S., Ajani, J. A. Challenges and prospects of patient-derived xenografts for cancer research. Cancers (Basel). 15 (17), 4352(2023).
  5. Nabel, C. S., Heiden, M. G. V. Patient-derived xenografts to study cancer metabolism: when does X mark the spot). Cancer Res. 81 (17), 4399(2021).
  6. Choi, Y., et al. Studying cancer immunotherapy using patient-derived xenografts (PDXs) in humanized mice. Exp Mol Med. 50 (8), 99(2018).
  7. Woo, X. Y., et al. Conservation of copy number profiles during engraftment and passaging of patient-derived cancer xenografts. Nat Genet. 53 (1), 86(2021).
  8. Somasundaram, R. Tumor-infiltrating mast cells are associated with resistance to anti-PD-1 therapy. Nat Commun. 12 (1), 346(2021).
  9. Abdolahi, S. Patient-derived xenograft (PDX) models, applications and challenges in cancer research. J Transl Med. 20 (1), 206(2022).
  10. Yang, S., et al. Organoids: The current status and biomedical applications. Med Comm. 4 (3), e274(2023).
  11. Minoli, M. Bladder cancer organoids as a functional system to model different disease stages and therapy response. Nat Commun. 14, 2214(2023).
  12. Ou, L., et al. Patient-derived melanoma organoid models facilitate the assessment of immunotherapies. eBioMedicine. 92, 104614(2023).
  13. Grönholm, M., et al. Patient-derived organoids for precision cancer immunotherapy. Cancer Res. 81 (12), 3149-3155 (2021).
  14. Ou, L., et al. Preclinical platforms to study therapeutic efficacy of human γδ T cells. Clin Transl Med. 12 (6), e814(2022).
  15. Murine L-Wrn conditioned medium protocol. The University of Texas MD Anderson Cancer Center. , Available from: https://www.mdanderson.org/documents/Labs/Taniguchi%20Laboratory/Mouse%20CM.pdf (2024).
  16. Jee, J. H., et al. Development of collagen-based 3D matrix for gastrointestinal tract-derived organoid culture. Stem Cells Int. 13 (2019), 8472712(2019).
  17. Pipkin, M. E., Rao, A., Lichtenheld, M. G. The transcriptional control of the perforin locus. Immunol Rev. 235 (1), 55(2010).
  18. Li, X., et al. Tim-3 suppresses the killing effect of Vγ9Vδ2 cells on colon cancer cells by reducing perforin and granzyme B expression. Exp Cell Res. 386 (1), 111719(2020).
  19. Li, L. T., Jiang, G., Chen, Q., Zheng, J. N. Ki67 is a promising molecular target in the diagnosis of cancer (Review). Mol Med Rep. 11 (3), 1566-1572 (2015).
  20. Sato, T., et al. Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche. Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).
  21. Li, H. Y., Ren, K., Wang, C., Bu, W. B. Skin organoid research progress and potential applications. International Journal of Dermatology and Venereology. 5 (2), 101-106 (2022).
  22. Sun, L., et al. A human mucosal melanoma organoid platform for modeling tumor heterogeneity and exploring immunotherapy combination options. Sci Adv. 9 (43), eadg6686 (2023).
  23. Vlachogiannis, G., et al. Patient-derived organoids model treatment response of metastatic gastrointestinal cancers. Science. 359 (6378), 920-926 (2018).
  24. Ganesh, K., et al. A rectal cancer organoid platform to study individual responses to chemoradiation. Nat Med. 25 (10), 1607-1614 (2019).
  25. Vilgelm, A. E., et al. Fine-needle aspiration-based patient-derived cancer organoids. iScience. 23 (8), 101408(2020).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

Melanom Organoid ModelleriHasta Kaynaklı OrganoidlerTümör MikroçevresiOrganoid Kültürüİmmün Hücre KompozisyonuT-hücresi Aktivasyonuİlaç TaramasıKişiselleştirilmiş Kanser TedavisiKollajen Jel YöntemiMatrigel Kaplama
Melanom Hasta Kaynaklı Organoid Modellerle Terapötik Fırsatların Ortaya Çıkarılması
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.