İn vitro tromboliz deneyleri, ister model trombüsün sindirildiği ortamda ister trombolizin meydana geldiği ortamda olsun, in vivo koşulları tekrarlamak için sıklıkla mücadele etmiştir. Burada, Chandler döngüsü ve Gerçek Zamanlı Florometrik Akan Fibrinoliz Testinin (RT-FluFF) birleştirilmesinin yüksek kaliteli, ex-vivo, pıhtı lizisi izleme için nasıl kullanıldığını keşfediyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Bir İn Vitro Tromboliz Modelinde Kesme Akışı Altında Chandler Döngü Şeklinde Tam Kan Pıhtılarının Fibrinolizinin İzlenmesi
Bu makalede
Özet
Özet
Tromboembolizm ve ilişkili komplikasyonlar dünya çapında morbidite ve mortalitenin önde gelen bir nedenidir ve trombolitik ilaç etkinliğini hem in vitro hem de in vivo olarak test etmek için çeşitli testler geliştirilmiştir. Hayvan modelleriyle ilişkili karmaşıklık ve maliyetin yanı sıra genellikle insan fizyolojisine çevrilebilirlik eksikliği nedeniyle, ilaç geliştirme için fizyolojik olarak daha ilgili in vitro pıhtı modellerine yönelik artan bir talep vardır. Akış, basınç ve kayma hızı dolaşım sisteminin önemli özellikleridir ve akış altında oluşan pıhtılar, statik olarak oluşan pıhtılardan farklı morfoloji ve sindirim özellikleri gösterir. Bu faktörler genellikle geleneksel in vitro pıhtı sindirim testlerinde temsil edilmez ve bu da ilaç translasyonel başarı oranlarını etkileyen farmakolojik etkilere sahip olabilir.
Real-T ime Griporometrik Fdüşük Fibrinoliz (RT-FluFF) testi, kesme akışı altında oluşan floresan etiketli pıhtıları kullanan ve daha sonra fibrinolitik farmasötik ajanların varlığında veya yokluğunda dolaşımdaki plazma kullanılarak sindirilen yüksek kaliteli bir tromboliz test platformu olarak geliştirilmiştir. Hem pıhtı oluşumunun hem de pıhtı sindirim adımlarının akış hızlarını değiştirmek, sistemin çok çeşitli deney düzeneklerinde arteriyel, pulmoner ve venöz koşulları taklit etmesine olanak tanır. Ölçümler, bir in-line florometre kullanılarak veya ayrı zaman noktaları alınarak ve ayrıca geleneksel bir son nokta pıhtı kütlesi ölçümü kullanılarak sürekli olarak alınabilir. RT-FluFF testi, bir in vitro test sisteminin kontrolünü ve tekrarlanabilirliğini korurken, in vivo fizyolojik koşulları daha doğru bir şekilde temsil eden akış koşulları altında pıhtı sindiriminin gerçek zamanlı olarak izlenmesine izin veren esnek bir sistemdir.
Giriş
Temelde tromboembolik etiyolojilerden kaynaklanan hastalıklar günümüz toplumunda önemli bir morbidite ve mortalite kaynağı oluşturmaktadır. Tromboembolik patogenezin belirtileri arasında, bunlarla sınırlı olmamak üzere, miyokard enfarktüsü, iskemik inmeler, derin ven trombozları ve pulmoner emboli1 bulunur. Birden fazla disiplini kapsayan muazzam miktarda devam eden araştırma, patojenik trombozla başa çıkmak için güvenli ve etkili yöntemlerin geliştirilmesi etrafında dönmektedir. Trombozun arteriyel ve venöz bulgularındaki farklılıklar ve değişen anatomik lokalizasyonlar farklı tedavi yaklaşımlarının geliştirilmesine neden olmuştur. Bununla bir....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Aşağıda belirtilen tüm yöntemler kurumsal inceleme kurulu (IRB) protokollerine ve kurumsal insan araştırmaları etik kuruluna uygundur. Tüm sağlıklı gönüllüler kan bağışından önce yazılı ve bilgilendirilmiş onam verdiler. Protokolde atıfta bulunulan tüm materyallerin Malzeme Tablosunda bulunabileceğini unutmayın. Bu protokol boyunca insan WB ve plazma tartışılırken, araştırma hayvanı kanı ve faktör tükenmiş kan ürünlerinin kullanımı satın alınabilir ve ikame edilebilir.
1. Tam kan alma
- Standart flebotomi tekniklerini kullanarak rıza gösteren sağlıklı gönüllülerden venöz tam kan (WB) toplayın.
Dİ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Chandler döngü pıhtı oluşumu
Pıhtı oluştururken, herhangi bir pıhtı aykırı değeri (brüt morfoloji ve kütleye dayalı) varsa, yine de üçlü tromboliz testleri yapma yeteneğimiz olduğundan emin olmak için genellikle dörtlüleri hedefledik. Optimum yükleme koşulları varsayarsak, pıhtıların tümü uzunluk (~ 3.3 cm), ağırlık (~ 100 mg) ve Şekil 3'te gösterildiği gibi görünüm açısından oldukça eşit olmalıdır. FITC-Fg'yi kullanırken, pıhtı içindeki düzensiz hiper floresan etiketleme.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Pıhtı oluşumu ve etiketleme
Chandler döngüsünün, in-vivo trombüsleritaklit eden pıhtıları tekrarlanabilir şekilde oluşturmak için kolay ve etkili bir yol sağladığı gösterilmiştir 16. Boru boyutu, dönme hızları, tambur çapı ve pıhtılaşma süresi gibi ince ayar parametreleri, hem arteriyel hem de venöz kaynakları taklit eden bir dizi trombusta takdir edilen mimari özellikleri yakalayabilen farklı kesme koşulları altında hızlı pıhtı oluşumuna izin verir. FITC-Fg gibi belir.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklanacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Teşekkürler
Bu yayında bildirilen araştırmalar, Ulusal Sağlık Enstitüleri Ulusal Kalp, Akciğer ve Kan Enstitüsü tarafından R01HL167877 Numaralı Ödül altında desteklenmiştir. İçerik yalnızca yazarların sorumluluğundadır ve Ulusal Sağlık Enstitüleri'nin resmi görüşlerini temsil etmek zorunda değildir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 30 G Tek Kullanımlık Hipodermik İğneler | Exel International | 26439 | Diğer Sarf Malzemeleri |
| 6 mm HSS Torna Çubuğu Stok Aleti 150 mm Uzun | uxcell | B07SXGSQ82 | Chandler döngüsü, |
| 96 Kuyulu Şeffaf Düz Tabanlı UV Şeffaf Mikroplaka | Corning | 3635 | Diğer Sarf Malzemeleri, İşlem görmemiş akrilik kopolimer, steril olmayan |
| Air-Tite Luer-lock Steril Olmayan 60 mL Şırıngalar | Air-Tite | MLB3 | RT-FluFF Aparatı, sönümleyiciler |
| Arium Mini Plus Ultra Saf Su Sistemi | Sartorius | NA | DI su kaynağı |
| Kalsiyum Klorür | Millipore Sigma | C5670 | Diğer Sarf Malzemeleri |
| Tek Kullanımlık BP | Dönüştürücüler AD Cihazları | MLT0670 | RT-FluFF Aparatı |
| Dräger Siemans HemoMed Pod | Dräger | 5588822 | RT-FluFF Aparatı |
| Dräger Siemans Hasta Monitörü | Dräger | SC 7000 | RT-FluFF Aparatı |
| Tambur (silindir, çap 120 mm, genişlik 85 mm) | Chandler halkası, | ||
| Yüz Siperi | Moxe | SHIELDS10 | Chandler döngüsü, |
| İnsan Plazmasından Fibrinojen, Alexa Fluor 488 Eşlenik | Thermo Scientific | F13191 | Diğer Sarf Malzemeleri |
| Bağlantı Elemanı, Polikarbonat, Dört Musluk, Erkek Luer Kilidi, Steril Olmayan Masterflex | 30600-04 | RT-FluFF Aparatı | |
| Floresein (FITC) | Thermo Scientific | 119245000 | Diğer Sarf Malzemeleri |
| Genel Amaçlı Su Banyosu | Thermo Scientific | 2839 | Chandler döngüsü, |
| Ocak gözü 4 & kez; 4 | Fisher Scientific | 1152016H | RT-FluFF Aparatı |
| İnsan Kaynaklı Plazma Taze Dondurulmuş | Zen-Bio | SER-SPL | Diğer Sarf Malzemeleri, CPDA-1 antikoagülan |
| İnsan Tam Kanı | Zen-Bio | SER-WB-SDS | Diğer Sarf Malzemeleri, CPDA-1 antikoagülan |
| Yüksek Performanslı Hassas Boru için L/S Kolay Yükleme II Pompa Kafası, PPS Muhafazası, SS Rotor | Masterflex | 77200-62 | RT-FluFF Aparatı, Pompa Kafası |
| L/S Uzak G/Ç'li Değişken Hızlı Dijital Tahrikli Pompa, 6 ila 600 rpm; 90 ila 260 VAC | Masterflex | 7528-10 | RT-FluFF Aparatı, Pompa |
| Motoru Hız Kontrol Cihazı | CoCocina | ZK-MG | Chandler döngüsü, |
| Nalgene Boru T-Tipi Konnektörler | Thermo Scientific | 6151-0312 | RT-FluFF Aparatı |
| Peristaltik pompa hortumu | Masterflex | 06424-15 | Diğer Sarf Malzemeleri |
| Fosfat tamponlu tuzlu su | Millipore Sigma | P3813 | Diğer Sarf Malzemeleri, Toz, pH 7.4, 1 L çözelti hazırlamak için |
| Anahtarlama Güç | Kaynağı SoulBay | UC03U | Chandler döngüsü, |
| Thermo Scientific Ulusal Hedef Tamamen Plastik Tek Kullanımlık Şırıngalar 10 mL | Thermo Scientific | S751010 | Diğer Sarf Malzemeleri |
| Doku plazminojen aktivatörü, insan | Millipore Sigma | T0831 | Diğer Sarf Malzemeleri |
| Boru Kimliği 1/4 '', OD 3/8 '' | Fisher Scientific | AGL00017 | Diğer Sarf Malzemeleri, 1,5 cm'lik bölümler halinde kesilmiş boruları T tipi konektörlere |
| bağlamak için kullanınBoru Kimliği 5/32 ", OD 7/32" | Tygon | ND-100-65, ADF 00009 & nbsp; | Diğer Sarf Malzemeleri |
| V3 365 nm Mini - Siyah Işık UV El Feneri | uvBeast uvB-V3-365-MINI | Chandler döngüsü, tamamlanan pıhtıları kontrol etmek için kullanılır | |
| ZGA37RG ZYTD520 DC Motor, 12 V, 100 rpm | Pangyoo | ZGA37RG | Chandler döngüsü, |
Kaynaklar
- Ali, M. R., et al. Aspect of thrombolytic therapy: a review. Scientific World Journal. 2014, 586510(2014).
- Bhogal, P., Andersson, T., Maus, V., Mpotsaris, A., Yeo, L. Mechanical thrombectomy-A brief review of a revolutionary new treatment for thromboemb....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
