Yöntem makalesi

Fibrinojen-Poliakrilamid Jel Elektroforezi ile Sipunculus nudus'ta Aktif Fibrinojenolitik Ajanların Hızlı Ayrılması ve Görüntülenmesi

DOI:

10.3791/66536

⸱

19 Nisan 2024

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Laboratory Medicine, Quanzhou First Hospital Affiliated to Fujian Medical University, 2Medicine School, Huaqiao University, 3Department of Laboratory Medicine, Hospital of Huaqiao University

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, Sipunculus nudus'un fibrinojenolitik ajanlarını hızlı bir şekilde ayırmak ve görüntülemek için bir fibrinojen-poliakrilamid jel elektroforezi (PAGE) protokolü sunuyoruz.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fibrinojeni doğrudan çözebilen fibrinojenolitik ajanlar, anti-koagülasyon tedavisinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Genel olarak, yeni fibrinogenolitik ajanların tanımlanması, önce her bir bileşenin ayrılmasını ve ardından fibrinogenolitik aktivitelerinin kontrol edilmesini gerektirir. Şu anda, ayırma aşamasında çoğunlukla poliakrilamid jel elektroforezi (PAGE) ve kromatografi kullanılmaktadır. Bu arada, fibrinojen plaka tahlili ve PAGE bazlı reaksiyon ürünleri genellikle fibrinojenolitik aktivitelerini göstermek için benimsenir. Bununla birlikte, bu iki aşamanın uzay-zamansal ayrımı nedeniyle, aktif fibrinojenolitik ajanları aynı jel ile ayırmak ve görüntülemek mümkün değildir. Fibrinojenolitik ajan tanımlamasının ayırma ve görüntüleme süreçlerini basitleştirmek için, bu çalışmada yer fıstığı kurtlarının (Sipunculus nudus) fibrinojenolitik ajanlarını hızlı bir şekilde ayırmak ve görüntülemek için yeni bir fibrinojen-PAGE yöntemi oluşturduk. Bu yöntem, fibrinojen-PAGE hazırlama, elektroforez, renatürasyon, inkübasyon, boyama ve renk gidermeyi içerir. Proteinin fibrinojenolitik aktivitesi ve moleküler ağırlığı aynı anda tespit edilebilir. Bu yönteme göre, fıstık kurduhomojenatın birden fazla aktif fibrinojenolitik ajanını 6 saat içinde başarıyla tespit ettik. Ayrıca, bu fibrinojen-PAGE yöntemi zaman ve maliyet dostudur. Ayrıca, bu yöntem diğer organizmaların fibrinojenolitik ajanlarını incelemek için kullanılabilir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Son yıllarda, trombotik hastalıkların devam eden artışı nedeniyle, trombotik hastalıklar yeni ve önemli bir küresel sağlık sorunu haline gelmiştir1. Şu anda, antitrombotik ilaçlar üç gruba ayrılır: anti-trombosit agregasyon ilaçları, antikoagülanlar ve trombolitik ilaçlar. Bunlar arasında, ürokinaz (İngiltere), doku plazminojen aktivatörü (tPA), vb. gibi trombolitik ilaçlar, trombüs2'yi hidrolize edebilen klinik olarak kullanılan tek ilaçlardır. Bu arada, yeni trombolitik ajanların tanımlanması ile daha güvenli ve etkili trombolitik ilaçlar geliştirilmektedir3.

Bununla birlikte, yeni trombolitik ajanların tanımlanması zaman alıcı ve emek yoğundur, bu da esas olarak ayırma/saflaştırma ve karakterizasyon/kontrol aşamalarını içerir. Birincisi, her bir bileşeni ayırmak ve ikincisi, fibrino (geno) litik aktivitelerini göstermektir 4,5. Önceki çalışmalarda, fıstık kurdundan (Sipunculus nudus) afinite kromatografisi ve fibrin (ojen) plaka testi 6,7,8 ile yeni bir fibrino (geno) litik enzimi (sFE) başarılı bir şekilde izole etmiş olmamıza rağmen, bu işlemler çok zaman ve emek alıcıdır. İlk olarak, fıstık kurdu homojenatlarının fibrino(geno)litik aktiviteye sahip olup olmadığının fibrin(ojen) plaka yöntemi ve SAYFA9'a dayalı reaksiyon ürünleri ile belirlenmesi gerekmektedir. Daha sonra, ayırma ve saflaştırma için iyon değişim kromatografisi, jel filtrasyon kromatografisi, afinite kromatografisi ve diğer yöntemler gibi bir dizi kromatografi gerçekleştirilmelidir10,11. Daha sonra, ayrılan her bir bileşenin fibrinojenolitik aktivitesini kontrol etmek için fibrin plaka testi tekrar gerçekleştirilir. Son olarak, aktif fibrinojenolitik ajanların12 moleküler ağırlığını belirlemek için doğal PAGE ve sodyum dodesil sülfat (SDS)-PAGE gerçekleştirilir. Bu nedenle, aktif fibrinojenolitik ajanların hızlı bir şekilde ayrılması ve görüntülenmesi kritik öneme sahiptir.

Yer fıstığı kurdu homojenatlarındaki aktif fibrinojenolitik ajanları hızlı bir şekilde ayırmak ve görüntülemek için, PAGE ve fibrinojen plaka yöntemlerinin birleştirilmesiyle yeni bir fibrinojen-PAGE yöntemi geliştirilmiştir, yani fibrinojen ajanlarının substratları fibrinojen doğal PAGE jeline eklenmiştir. Native-PAGE'den sonra, bileşenler moleküler ağırlıklarına göre ayrıldı. Bu arada, her aktif fibrinojenolitik bileşen boyama ile görüntülenebilir. Bu yöntemle, fıstık kurdu homojenatının birden fazla aktif fibrinojenolitik ajanını 6 saat içinde başarıyla tespit ettik. Ayrıca, bu fibrinojen-PAGE yöntemi zaman ve maliyet dostudur. Ayrıca, bu yöntem diğer organizmaların fibrinojenolitik ajanlarını incelemek için kullanılabilir.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Fıstık kurdu homojenat hazırlama

  1. Homojenizatöre 50 g fıstık kurdu ve 150 mL tuzlu su çözeltisi ekleyin.
  2. 24000 rpm'de 60 sn boyunca homojenize edin.
    NOT: 3 kez tekrarlayın.
  3. Homojenatı 9710 x g'da 4 °C'de 30 dakika santrifüjleyin.
  4. Daha fazla çalışma için süpernatanı fıstık kurdu homojenatı olarak toplayın.

2. Fibrinojen-PAGE jel hazırlama

  1. 0.01 g fibrinojeni 50 mL'lik bir cam behere tartın.
  2. Behere 1.9 mL DDH2O, 1.3 mL Tris-HCl (1.5 M, pH 8.8) ve 0.05 mL SDS (% 10, a / h) ekleyin; Pipetleme ile iyice karıştırın.
  3. Beheri 37 °C'de 30 dakika bekletin.
    NOT: Bu adım fibrinojeni çözmek içindir.
  4. 1.7 mL akrilamid (% 30, a / h), 0.05 mL amonyum persülfat (APS;% 10, a / h), 0.002 mL TEMED ekleyin; Pipetleme ile iyice karıştırın.
    NOT: Bu ayırma jelidir.
  5. Ayırma jelini 10 oyuklu bir jel kalıba dökün.
  6. Jel kalıba 2 mL DDH2O ekleyin; 30 dakika bekleyin.
  7. Kalıbı ters çevirerek suyu iyice çıkarın.
  8. 1.4 mL DDH2O, 0.25 mL Tris-HCl (1.0 M, pH 6.8), 0.02 mL SDS (% 10, w / v), 0.33 mL akrilamid (% 30, w / v), 0.02 mL APS (% 10, w / v), 0.002 mL tetrametiletilendiamin (TEMED) behere ekleyin; Pipetleme ile iyice karıştırın.
    NOT: Bu jel yükleniyor.
  9. Yükleme jelini adım 2.5 ile aynı jel kalıba dökün; Tarağı hemen yerleştirin.
    NOT: Burada kullanılan fibrinojen-PAGE jeli, ayırıcı jel ve yükleme jeli içeren fibrinojen (%0.2) den oluşmuştur. Fibrinojen konsantrasyonu gerektiği gibi ayarlanabilir.

3. Elektroforez

  1. Hazırlanan fibrinojen-PAGE jelini tutkal kalıbı ile birlikte elektroforez tankına yerleştirin; tanka 1300 mL elektroforez çözeltisi (1.963 g Tris, 12.22 g glisin, 0.65 g SDS ve 1300 mL DDH2O) dökün; tarağı çıkarın.
  2. 20 μL sFE ve 20 μL fıstık kurdu homojenatına 5 μL 5x denatüre olmayan yükleme tamponu ekleyin; pipetleyerek iyice karıştırın; bunları hazırlanan fibrinojen-PAGE jeli içine yükleyin.
    NOT: Karışımı kaynatmayın. sFE, daha önce 6,7,8 olarak tanımlanan bir fibrino(geno)litik enzimdir ve bu çalışmada pozitif kontrol olarak kullanılmıştır. Fıstık kurdu homojenatı tespit edilecek numunedir. SDS-PAGE yükleme tamponu ile karşılaştırıldığında bromofenol mavisi, β-merkaptoetanol ve SDS içermeyen denatüre olmayan yükleme tamponu. Her numune şeridi, proteinin hareketini net bir şekilde tespit etmek için 1x SDS-PAGE yükleme tamponu ile ayrılır.
  3. 30 dakika boyunca 80 V'ta veya 20 dakika boyunca 120 V'ta elektroforez gerçekleştirin.
  4. Fibrinojen-PAGE jeli tutkal kalıbından çıkarın.

4. Yeniden doğuş

  1. Fibrinojen-PAGE jeli plastik bir kutuya aktarın.
  2. Kutuya 100 mL Tris-HCl (0.05 M, pH 7.4) ve 2 mL Triton X-100 ekleyin. 10 dakika boyunca 60-70 rpm'de bir çalkalayıcıya yerleştirin.
  3. Pipetleme ile yıkama tamponunu çıkarın.
    NOT: Üç kez tekrarlayın.

5. Kuluçka

  1. Plastik kutuya 50 mL Tris-HCl (0.05 M, pH 7.4) ekleyin.
  2. 37 °C'de 4 saat inkübe edin.
    NOT: Kuluçka süresi fibrinojenolitik aktivitenin gücüne göre ayarlanabilir.

6. Boyama

  1. Pipetleme ile inkübasyon tamponunu çıkarın.
  2. Kutuya 50 mL Coomassie Brillant Blue Staining solüsyonu ekleyin ve kutuyu 30 dakika boyunca 60-70 rpm'de bir çalkalayıcı üzerine yerleştirin.

7. Renk giderme

  1. Pipetleme solüsyonunu pipetleyerek çıkarın.
  2. Kutuya 50 mL DDH2O ekleyin.
  3. Kutuyu 30 dakika boyunca 60-70 rpm'de bir çalkalayıcı üzerine yerleştirin.
    NOT: Burada leke giderme solüsyonu olarak DD H2O kullanılmıştır. Çalkalama süresi, fibrinojenolitik aktivitenin gücüne göre ayarlanabilir.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Elektroforezden sonra, işaretleyicinin tüm bantları net bir şekilde gösterildi. 1x SDS-PAGE yükleme şeritleri yalnızca 10 kDa bantları (bromofenol mavisi) gösterdi. SFE ve fıstık kurdu örnekleri herhangi bir gözlemlenebilir bant göstermedi (Şekil 1). Numunelerin bantları görünmese de, markör ve bromofenol mavisinin performansı elektroforezin başarılı olduğunu gösterdi ve numuneler moleküler ağırlıklarına göre ayrıldı.

Lekelenme nedeniyle jelin tamamı maviye dönmesine rağmen, renk bozulması fibrinojenin fibrinojenitik ajanlar tarafından parçalandığı alanı şeffaf hale getirdi. İşaretleyici ile karşılaştırıldığında, sFE, 25 kDa'ya yakın aktif bir fibrinojenolitik bant gösterdi. Yer fıstığı kurdu homojenatı 25 kDa, 33 kDa, 43 kDa ve 70 kDa'dan büyük bir dizi bant gösterdi (Şekil 2). Sonuçlar, sFE'nin sadece 25 kDa'lık bir fibrinojenolitik bileşen içerdiğini, ancak fıstık kurdu homojenatının sFE bileşenleri ve diğer fibrinojenolitik ajanlar içerdiğini gösterdi. Ek Şekil 1 , işaretleyiciyi koyu mavi renkte ve hedef numuneleri parlak bantlar olarak gösteren bir jel görüntüsü örneğidir.

figure-results-1
Şekil 1: Elektroforez sonrası jel. M: İşaretleyici; Şerit 1: 1x SDS-PAGE yükleme arabelleği; Şerit 2: sFE; Şerit 3: 1x SDS-PAGE yükleme arabelleği; Şerit 4: fıstık kurdu homojenat; Şerit 5: 1x SDS-PAGE yükleme arabelleği. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-results-2
Şekil 2: Renk gidermeden sonra jel. M: İşaretleyici; Şerit 1: 1x SDS-PAGE yükleme arabelleği; Şerit 2: sFE; Şerit 3: 1x SDS-PAGE yükleme arabelleği; Şerit 4: fıstık kurdu homojenat; Şerit 5: 1x SDS-PAGE yükleme arabelleği. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Ek Şekil 1: İşaretçiyi koyu mavi ve hedef numuneleri parlak bantlar olarak gösteren jel görüntüsü. M: İşaretleyici; Şerit 1: 1x SDS-PAGE yükleme arabelleği; Şerit 2: sFE; Şerit 3: 1x SDS-PAGE yükleme arabelleği; Şerit 4: fıstık kurdu homojenat; Şerit 5: 1x SDS-PAGE yükleme arabelleği. Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

sFE, ekibimiz tarafından daha önce 3,6,8,13 yılında yer fıstığı kurtlarından izole edilen yeni bir fibrino (geno) litik enzimdir. Bununla birlikte, sFE'nin tanımlama süreçleri, fibrinojenolitik aktivite tespiti, protein bileşenlerinin ayrılması ve aktivite doğrulama aşamalarını içeren zaman ve emek alıcıydı. Basit bir yöntem olarak, fibrinojen plaka testi, numunelerin fibrinojenolitik aktivitesini kontrol etmek için çoğunlukla ön tarama aşamasında kullanılır. Bununla birlikte, fibrinojen plaka tahlili yöntemi, hangi bileşenin aktif olduğunu ayıramaz. Bu nedenle, aktivite tespitinden sonra bileşenlerini ayırmak için kromatografi ve doğal/SDS-PAGE kullanılmalıdır. Daha sonra, reaksiyon ürünleri, substrat fibrinojeninin bozunmasını doğrulamak için SDS-PAGE tarafından tekrar çözülür. Bu çalışmada, fibrinojenitik ajanı tespit etmek için substrat fibrinojeni PAGE jeline eklenmiştir. Elektroforez, renatürasyon, inkübasyon, boyama ve renk gidermeden sonra, aktif fibrinojenolitik ajanların moleküler ağırlığı ve fibrinojenolitik aktivitesi aynı jel ile açıkça gösterildi. Bu yöntemle, fıstık kurdu homojenatından 6 saat içinde birden fazla aktif fibrinojenolitik ajanı başarıyla tespit ettik.

Optimum sonuçları elde etmek için, fibrinojen-PAGE jel hazırlama, renatürasyon ve inkübasyona daha fazla dikkat edilmelidir. Genel olarak konuşursak, fibrinojen konsantrasyonu ne kadar düşükse, fibrinojenolitik bölge o kadar renksiz olur, bu da ajanların fibrinogenolitik aktivitesini gösterir. Bununla birlikte, fibrinojen konsantrasyonu ne kadar düşükse, arka plan o kadar renksiz olur ve fibrinogenolitik bölgeyi arka plandan ayırt etmek o kadar zor olur. Renatürasyon süresi, bileşenlerin fibrinojenolitik aktivitesini önemli ölçüde etkileyecektir. Bu süre PAGE jelindeki SDS'yi yıkamak için çok kısaysa, bileşenlerin fibrinojenolitik aktivitesi kalan SDS tarafından inhibe edilecektir. Benzer şekilde, kuluçka süresi çok kısaysa, fibrinojenolitik reaksiyon tam değildir. Kuluçka süresi çok uzun olduğunda, moleküler ağırlığı belirtmek için kullanılan işaretleyici yıkanacaktır. Bu çalışmada, bu koşullar optimize edilmiş olsa da, bu koşullar fibrinojenolitik ajanları yer fıstığı kurtlarından ayırmak ve göstermek için ayarlanmıştır. Bu nedenle, bu kritik adımların kişiselleştirilmiş koşulları, spesifik fibrinojenolitik ajanlara göre ayarlanmalıdır.

Bu fibrinojen-PAGE'nin sadece fibrinojen litik aktiviteye sahip fibrinojenojen litik aktiviteye sahip ajanların taranması için uygun olduğunu, ancak fibrinojen litik aktivitesi veya plazminojen aktivasyon aktivitesi olan ajanlar için uygun olmadığını belirtmek önemlidir. Bu aktiviteleri göstermek istiyorsak, fibrinojeni fibrin veya plazminojen ile değiştirerek yöntem optimize edilebilir. Dikkat edilmesi gereken bir diğer nokta, bu çalışmada test edilen aktif fibrinojenolitik ajanların, SDS elektroforezi koşulu altında etkilenmeyen monomerler olmasıdır. Bu nedenle, test edilen ajanlar polimer ise, bu yöntem moleküler ağırlığı gösteremeyen bir yerel PAGE durumuna ayarlanmalıdır. Bu nedenle, burada tanıtılan fibrinojen-PAGE yöntemi, diğer fibrinojenolitik ajanları hızlı bir şekilde taramak için optimize edilebilen yalnızca genel bir temel versiyondu.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklanacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu araştırma, Xiamen Şehri Bilim ve Teknoloji Bürosu (No. 3502Z20227197), Fujian Eyaleti Bilim ve Teknoloji Bürosu (No. 2019J01070; No. 2022J01311) ve Quanzhou Bilim ve Teknoloji Planının Üst Düzey Yetenekler İnovasyon ve Girişimcilik Projesi (No. 2022C015R). Fucai Wang (Huaqiao Üniversitesi) ve Lei Tong'a (Huaqiao Üniversitesi) teknik yardımları için teşekkür ederiz.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
1  M Tris-HCl (pH 6.8)SolarbioT1020
1.5 M Tris-HCl (pH 8.8)SolarbioT1010
%30 Akrilamid/Bis-akrilamidBiosharpBL513B
Amonyum persülfatXiLONG SCIENTIFIC7727-54-0
BeherPYREX2-9425-02
Santrifüj Tüpü (1.5 mL)BiosharpBS-15-M
Sabit Sıcaklık İnkübatörüJINGHONGJHS-400
Coomas Brillant Mavi Lekelenme solüsyonuBeyotimeP0017F
Elektronik Analitik TeraziDENVERTP-213
FibrinojenSolarbioF8051
Jel yüklemeli pipet uçları, Toplu BiosharpBS-200-GTB
HomojenizatörAHSATS-1500
Yatay rotasyonlu osilatörNuoMiNMSP-600
Mili-Q ReferansKırlangıç Z00QSV0CN
Mini-PROTEAN Tetra HücresiBIO-RAD165-8000~165-8007
N, N, N', N'-TetrametiletilendiaminSigmaT9281
Pipet Ucu (1 mL)AxygeneT-1000XT-C
Pipet Ucu (10 & mikro; L)AxygeneT-10XT-C
Pipet Ucu (200 & mikro; L)AxygeneT-200XT-C
Pipetleyici (1 mL)Thermo Fisher ScientificZY18723
Pipetleyici (10 & mikro; L)Thermo Fisher ScientificZX98775
Pipetleyici (200 & mikro; L)Thermo Fisher ScientificZY20280
Pipetleyici (50 & mikro; L)Thermo Fisher ScientificZY15331
Soğutmalı SantrifüjCenceH1650R
Sodyum dodesil sülfatSigma-AldrichV900859
TrisSolarbioT8060
Tris-HClSolarbioT8230
Triton X-100SolarbioT8200

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Bikdeli, B., et al. COVID-19 and thrombotic or thromboembolic disease: Implications for prevention, antithrombotic therapy, and follow-up. J Am Coll Cardiol. 75 (23), 2950-2973 (2020).
  2. Tsivgoulis, G., et al. Thrombolysis for acute ischaemic stroke: current status and future perspectives. Lancet Neurol. 22 (5), 418-429 (2023).
  3. Tang, M., Hu, C., Lin, H., Yan, H. Fibrinolytic drugs induced hemorrhage: mechanisms and solutions. Blood Coagul Fibrinolysis. 34 (5), 263-271 (2023).
  4. Lu, M., et al. Purification, characterization, and chemical modification of Bacillus velezensis SN-14 fibrinolytic enzyme. Int J Biol Macromol. 177, 601-609 (2021).
  5. Abu-Tahon, M. A., Abdel-Majeed, A. M., Ghareib, M., Housseiny, M. M., Abdallah, W. E. Thrombolytic and anticoagulant efficiencies of purified fibrinolytic enzyme produced from Cochliobolus hawaiiensis under solid-state fermentation. Biotechnol Appl Biochem. 70 (6), 1954-1971 (2023).
  6. Lin, W., Lin, H., Xin, P., Yan, H., Kang, B., Tang, M. A Comprehensive approach to analyze the cell components of cerebral blood clots. J Vis Exp. (197), e65791(2023).
  7. Tang, M., Lin, H., Hu, C., Yan, H. Affinity purification of a fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus. J Vis Exp. (196), e65631(2023).
  8. Tang, M., Lin, H., Huang, Y., Xu, R., Cui, X., Yan, H. Plasmin affinity purification method based on agarose gel and plasmin and application thereof. , Available from: https://patents.google.com/patent/CN116103270A/en?oq=CN202310108470 (2023).
  9. Walton, P. L. An improved fibrin plate method for the assay of plasminogen activators. Clinica Chimica Acta. 13 (5), 680-684 (1966).
  10. Ngere, J. B., Ebrahimi, K. H., Williams, R., Pires, E., Walsby-Tickle, J., McCullagh, J. S. O. Ion-exchange chromatography coupled to mass spectrometry in life science, environmental, and medical research. Anal Chem. 95 (1), 152-166 (2023).
  11. Kato, S., Takeuchi, K., Iwaki, M., Miyazaki, K., Honda, K., Hayashi, T. Chitin- and streptavidin-mediated affinity purification systems: A screening platform for enzyme discovery. Angew Chem Int Ed Engl. 62 (31), e202303764(2023).
  12. Sharma, N., Sharma, R., Rajput, Y. S., Mann, B., Singh, R., Gandhi, K. Separation methods for milk proteins on polyacrylamide gel electrophoresis: Critical analysis and options for better resolution. International Dairy Journal. 114, 104920(2021).
  13. Xu, R., Ma, G., Chen, L., Cui, X. Preparation and application of natural fibrinolytic enzyme from peanut worm. , Available from: https://patents.google.com/patent/CN109295042A/en (2019).

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Fibrinojen PAGEYer F st SolucanlarFibrinojen Plak AnaliziTrombolitik AjanlarProtein Ayr mMolek ler A rl k TespitiKardiyovask ler Hastal k

İlgili makaleler