Farelerde deneysel bir otoimmün ensefalomiyelit (EAE) modeli, CD4 T hücrelerinin EAE'nin başlangıç ve nüksetmesindeki rolünü aktivasyon fazı ve immün etki fonksiyonu perspektifinden araştırmak için kullanıldı.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
* These authors contributed equally
Farelerde deneysel bir otoimmün ensefalomiyelit (EAE) modeli, CD4 T hücrelerinin EAE'nin başlangıç ve nüksetmesindeki rolünü aktivasyon fazı ve immün etki fonksiyonu perspektifinden araştırmak için kullanıldı.
Multipl skleroz (MS), immün hücrelerin infiltrasyonu ve merkezi sinir sisteminde (MSS) demiyelinizasyon ile karakterize otoimmün bir hastalıktır. Deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE), MS'i incelemek için prototipik bir hayvan modeli olarak hizmet eder. Bu çalışmada, EAE'nin başlaması ve nüksetmesinde CD4 T hücrelerinin rolünü, aktivasyon fazı ve immün yanıta odaklanarak araştırmayı amaçladık. EAE fare modelini oluşturmak için dişi fareler, tam Freund adjuvanı (CFA) ile emülsifiye edilmiş miyelin oligodendrosit glikoproteini (MOG)35-55 ile aşılandı. Klinik skorlar günlük olarak değerlendirildi ve sonuçlar, EAE grubundaki farelerin klasik bir nükseden-düzelme paterni sergilediğini gösterdi. Hematoksilen-eozin (H&E) ve luxol hızlı mavi (LFB) boyama analizi, EAE farelerinde CNS'de inflamatuar hücrelerin önemli ölçüde infiltrasyonunu ve demiyelinizasyonu ortaya çıkardı. Aktivasyon fazı ile ilgili olarak, hem CD4 + CD69 + efektör T (Teff) hücreleri hem de CD4 + CD44 + CD62L- efektör bellek T (Tem) hücreleri EAE'nin başlamasına katkıda bulunabilir, ancak nüks aşamasına muhtemelen CD4 + CD44 + CD62L-Tem hücreleri hakimdir. Ek olarak, bağışıklık fonksiyonu açısından, yardımcı T (Th)1 hücreleri öncelikle EAE'nin başlatılmasında rol oynar. Bununla birlikte, hem Th1 hem de Th17 hücreleri nüks aşamasına katkıda bulunur ve düzenleyici T (Treg) hücrelerinin immünosüpresif fonksiyonu EAE patolojik süreci sırasında inhibe edilmiştir.
Multipl skleroz (MS), merkezi sinir sisteminin (MSS) immün hücrelerle infiltrasyonu ve demiyelinizasyon ile karakterize otoimmün bir hastalıktır 1,2. Yakın zamanda yapılan bir çalışma, gençleri etkileyen en yaygın sakatlayıcı hastalık olduğunu ve insidansının dünya çapında sürekli arttığını göstermiştir3. Deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE), insan MS4'ün enflamatuar fazının birçok yönünü simüle eden MS için prototipik bir hayvan modelidir. İmmün fonksiyonlar açısından bakıldığında, henüz antijenlerle karşılaşmamış olan başlan....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu çalışma için altı ila sekiz haftalık toplam 18 dişi C57BL / 6J faresi rastgele bir kontrol grubuna (n = 6) ve bir EAE grubuna (n = 12) ayrıldı. Fareler, Ningxia Tıp Üniversitesi'nin deney hayvanı merkezinden satın alındı. Fareler, 12 saatlik aydınlık / karanlık döngüsüne ve tatlı su ve yiyeceğe ücretsiz erişime sahip, sıcaklık ve nem kontrollü bir odaya yerleştirildi. Çalışma başlamadan önce Ningxia Tıp Üniversitesi Deney Hayvanları Etik Kurulu'ndan etik onay alındı.
1. C57BL / 6 farelerde tekrarlayan remitting EAE'nin geliştirilmesi
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Klinik puanların değerlendirilmesi
Şekil 1'de gösterildiği gibi, kontrol grubundaki fareler herhangi bir klinik semptom göstermedi. MOG35-55 ile aşılanan EAE grubundaki fareler, aşılamadan yaklaşık 12 gün sonra kuyruk felci gösterdi. 16. günde, semptomlar tam arka bacak felcine ulaştı (tepe evresi, Tepe olarak tanımlanır). Bundan sonra, semptomlar yavaş yavaş havale edildi. Farelerin klinik semptomları yaklaşık 25. günde şiddetlendi ve yaklaşık 30. günde tam arka bacak fe.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
MS, dünya çapında milyonlarca insanı etkileyen CNS'nin en yaygın otoimmün demiyelinizan hastalığıdır17. EAE, MS18'in klinik patolojik özelliklerini simüle etmek için tipik bir hayvan modelidir. Çalışmalar, MS'li bireylerin CNS'deki akson ve nöronların dejenerasyonu nedeniyle bilişsel bozukluk ve diğer sakatlıklar yaşadığını göstermiştir 19,20,21. E.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.
Bu çalışma, Ningxia Doğa Bilimleri Vakfı (2022AAC03601 ve 2023AAC02087) ve Ningxia Tıp Üniversitesi Araştırma Vakfı (XM2019052) tarafından desteklenmiştir. Ningxia Tıp Üniversitesi Tıp Bilimi ve Teknolojisi Araştırma Merkezi'nin desteği için teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Anestezi makinesi evaporatörü | Norvap | 20-17368 | |
| Isoflurane | Sigma-Aldrich (Şangay) Ticaret Co.Ltd. | ||
| 792632 70 μ m hücre süzgeci | XIYAN Co., Ltd. | 15-1070 | |
| Alexa Fluor 700 anti-fare CD45 Antikor | Biolegend | 103128 | |
| APC anti-fare CD4 Antikor | Biolegend | 100616 | |
| Otomatik hücre sayacı | Jiangsu JIMBIO technology Co., LTD | JIMBIO iCyta S2 | |
| BD * Sitometrik Boncuk Dizisi (CBA) Fare Th1 / Th2 / Th17 CBA Kiti | BD Biosciences | 560485 | |
| Biotin anti-fare CD16 / 32 Antikor | Biolegend | 101303 | |
| Brilliant Violet 510 anti-fare CD69 Antikor | Biolegend | 104532 | |
| BV786 Sıçan Anti-Fare CD62L (MEL-14) | BD Pharmingen | 563109 | |
| Sütun Dokusu ve Hücre Protein Ekstraksiyon Kiti | Şangay Epizyme Biyomedikal Technology Co, Ltd | PC201Plus | |
| Komple Freund'un Adjuvanı | Sigma-Aldrich (Şangay) Ticaret Co.Ltd. | ||
| Kurutucu | DIAPATH | Donatello | |
| Tek kullanımlık sterilize şırınga (1 mL) | Yikang Group | 210820 | |
| Tek kullanımlık sterilize şırınga (2,5 mL) | Yikang Group | 210820 | |
| Tek kullanımlık sterilize şırınga (5 mL) | Yikang Group | 210820 | |
| Boyama makinesi | DIAPATH | Giotto | |
| Gömme makinesi | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-P5 | |
| Etanol | SCRC | 100092683 | |
| Fetal Sığır Serumu | Procell Yaşam Bilimleri ve Teknoloji Co., Ltd. | FSP500 | |
| FITC Hamster Anti-Fare CD3e (145-2C11) | BD Pharmingen | 553062 | |
| Akış sitometresi | Becton, Dickinson ve Şirketi | FACSCelesta | |
| Akış sitometresi | Becton, Dickinson ve Şirket | Accuri C6 | |
| Flow Jo yazılımı | BD Biosciences | 10.8.1 | |
| Donmuş platform | Wuhan Junjie Electronics Co., ve Tic. Ltd. Şti. | JB-L5 | |
| Cam kaydırak | Servicebio | G6004 | |
| HE boya solüsyon seti | Servicebio | G1003 | |
| Hematoksilen-Eozin çözeltisi | Servicebio | G1002 | |
| Yüksek hızlı soğutmalı santrifüj | Thermo Fisher Scientific | Mogafugo8R | |
| Görüntüleme sistemi | Nikon | NIKON DS-U3 | |
| Luxol hızlı mavi boyama kiti | Servicebio | G1030 | |
| Ms CD44 BV421 IM7 | BD Pharmingen | 564970 | |
| Mycobacterium tuberculosis H37RA | BD Pharmingen | 231141 | |
| Miyelin oligodendrosit glikoprotein (MOG35-55) | AnaSpec | AS-60130-1 | |
| Nötr sakız | SCRC | 10004160 | |
| Düzenleyici | KEDEE | KD-P | |
| Fırın | Labotery | GFL-230 | |
| Patoloji dilimleyici | Leica | RM2016 | |
| Bordetella pertussis | Sigma-Aldrich (Şangay) Ticaret Co.Ltd | P7208 | |
| Fosfat tamponlu tuzlu su | Servicebio | G4202 | |
| Pipet 0.5-10 μ L | DLAB Bilimsel | 7010101004 | |
| Pipeti 100-1000 μ L | DLAB Bilimsel | 7010101014 | |
| Pipet 20-200 μ L | DLAB Bilimsel | 7010101009 | |
| RPMI-1640 | Procell Yaşam Bilimleri & Teknoloji Co., Ltd. | ||
| Tee valf | Guangdong Kanghua Medical Co., LTD | A06 | |
| Doku yayıcı | Zhejiang Kehua Instrument Co., Ltd | KD-P | |
| Dik optik mikroskop | Nikon | NIKON ECLIPSE E100 | |
| Ksilen | SCRC | 10023418 |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu makale yayımlandı
Video yakında