Yöntem makalesi

Farelerde Polikistik Over Sendromunu İndüklemek İçin Modifiye Edilmiş Bir Teknik

2.2K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/66637

⸱

5 Temmuz 2024

 ,  ,  ,  ,  , 
1Obstetrics and Gynecology Hospital, Institute of Reproduction and Development, Fudan University, 2Women's Hospital, Key Laboratory of Reproductive Genetics (Ministry of Education), Zhejiang University School of Medicine, 3International Institutes of Medicine, the Fourth Affiliated Hospital, Zhejiang University School of Medicine, 4Research Units of Embryo Original Diseases, Chinese Academy of Medical Sciences (No. 2019RU056), 5State Key Laboratory of Cardiology

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Bu protokol, mini pompalar kullanılarak kontrollü letrozol salınımı yoluyla farelerde polikistik over sendromu (PCOS) modellerini indüklemek için bir teknik sunar. Yeterli anestezi altında, mini pompa deri altına implante edildi ve mini pompa salınımından belirli bir süre sonra farelerde PCOS başarılı bir şekilde indüklendi.

Özet

Polikistik over sendromu (PCOS), kadınlarda kısırlığın önde gelen nedenlerinden biridir. Hayvan modelleri, PKOS'un etiyolojik mekanizmalarını incelemek ve ilgili ilaç geliştirmek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Letrozolün neden olduğu fare modelleri, PKOS'lu hastaların metabolik ve üreme fenotiplerini çoğaltır. PCOS farelerinde geleneksel letrozol tedavisi yöntemi, belirli bir süre boyunca günlük dozlama gerektirir, bu da emek yoğun olabilir ve farelerde önemli strese neden olabilir. Bu çalışma, kontrollü bir letrozol salgılayan mini pompa implante ederek farelerde PCOS'u indüklemek için basit ve etkili bir yöntemi açıklamaktadır. Kantitatif miktarda letrozolün stabil, sürekli salınmasını sağlayabilen bir mini pompa üretildi ve anestezi altındaki farelerde deri altına implante edildi. Bu çalışma, fare modelinin letrozol mini pompa implantasyonundan sonra PKOS özelliklerini başarılı bir şekilde taklit ettiğini göstermiştir. Bu çalışmada kullanılan malzeme ve ekipman, özel bir özelleştirme gerektirmeden çoğu laboratuvar tarafından kolayca temin edilebilir. Toplu olarak, bu makale farelerde PCOS'u indüklemek için benzersiz, gerçekleştirmesi kolay bir yöntem sağlar.

Giriş

Polikistik over sendromu (PCOS), üreme çağındaki kadınlar arasında en sık görülen durumlardan biridir1. Küresel olarak kadınların %18'ini etkiler ve dünya çapında kadın kısırlığının önde gelen nedenidir 2,3. PKOS, bozulmuş gonadotropin sekresyonu, kronik anovülasyon, artmış androjen üretimi ve polikistik over morfolojisi4 dahil olmak üzere bir dizi birbiriyle ilişkili üreme anormalliği ile karakterizedir. Jinekolojik rahatsızlıklara ek olarak, PKOS ayrıca kardiyovasküler hastalık riskini de artırır 5,6. Onlarca yıllık araştırmalara rağmen, PKOS'un etiyolojisi belirsizliğini korumaktadır 7,8.

PKOS'un patogenezi hakkında daha iyi bilgi edinmek ve yeni tedaviler geliştirmek için, insan fizyolojisini yakından taklit eden hayvan modellerinin oluşturulması büyük önem taşımaktadır9. Şu anda bildirilen kemirgen PKOS modelleri, diğerleri arasında testosteron, letrozol ve estradiol valerat ile yapılan tedavilerin neden olduğu modelleri içerir. Testosteron hiperandrojenemiyi indükler ve sıçanlarda daha yaygın olarak bir PCOS indükleyicisi olarak kullanılır10. DHEA, kemirgenlerde PCOS'u indüklemek, testosteron seviyelerini, LH / FSH (luteinize edici hormon / folikül uyarıcı hormon) oranlarını artırmak ve düzensiz östrus döngülerine neden olmak için kullanılmıştır11. Estradiol valerat (EV) uzun etkili bir östrojendir ve bu yöntemi kullanan çalışmalar, seks steroid hormonları ve gonadotropin seviyelerinin uygulanan EV dozuna bağlı olarak değiştiğini göstermektedir 12,13,14. Letrozol, steroidal olmayan bir aromataz inhibitörüdür15. Letrozol tedavisi, döngüsel olmayan östrusu indükler, yumurtalık ağırlığını, vücut ağırlığını arttırır, adipositleri büyütür, folikül gelişimini en üst düzeye çıkarır ve sıçanlarda testosteron seviyelerini yükseltir 16,17. Letrozol ile tedavi edilen fareler, artan sayıda sinüs folikülü ve hemorajik kistin yanı sıra yüksek LH, FSH, estradiol ve progesteron konsantrasyonları sergiler18,19.

Şu anda, letrozol kaynaklı PKOS modellemesi için ana yöntemler, her ikisi de tekrarlanan günlük dozlama gerektiren oral uygulama ve deri altı enjeksiyonu içerir20,21,22. Bu yöntemler zaman alıcı ve emek yoğundur ve tekrarlayan uygulama muhtemelen hayvanlar üzerinde önemli strese neden olur23. Bazı çalışmalarda letrozol peletleri24,25 kullanılsa da, bu ürünlerin özelleştirilmesi gerekir ve pahalıdır. Bu rapor, mini pompalar kullanan farelerde PCOS'u indüklemek için bir tekniği açıklamaktadır. Bu yöntem basittir, zaman kazandırır ve çoğu laboratuvarda kolayca bulunabilen cerrahi alet ve ekipmanları kullanır.

Protokol

Bu çalışmadaki tüm hayvan deney protokolleri Fudan Üniversitesi Hayvan Etik Kurulu tarafından onaylanmıştır. Burada 4 haftalık dişi C57BL/6J fareler kullanıldı. Bu çalışmada kullanılan hayvanların, reaktiflerin ve ekipmanların detayları Malzeme Tablosunda listelenmiştir.

1. Mini pompanın hazırlanması

  1. Orijinal ambalaj şişesinde saklanan letrozol tozunu (50 mg) alın, şişedeki letrozol tozunu 5 saniye boyunca (oda sıcaklığında) 300 x g'da santrifüjleyin, ardından kapağı açın.
  2. Letrozol tozuna bir pipet ile yavaşça 625 μL DMSO ekleyin ve 8 mg / 100 μL, toplam 625 μL konsantrasyonda bir stok çözeltisi elde etmek için iyice karıştırın.
    NOT: Farklı bir paket boyutunda letrozol tozu kullanıyorsanız, stok çözeltisini yapılandırmak için lütfen gerekli DMSO hacmini önceden hesaplayın. Letrozol tozu, DMSO ve diğer ilgili bileşikler steril kalitede olmalıdır. Pipet uçları, tüpler ve diğer ilgili öğeler kullanımdan önce steril veya sterilize edilmelidir.
  3. Deney tasarımına göre gerekli fare sayısını sayın.
  4. Gerekli fare sayısına bağlı olarak bir pipet ile gereken toplam letrozol stok çözeltisi miktarını çizin ve yavaşça santrifüj tüpüne enjekte edin.
    NOT: PCOS fare modelini indüklemek için 8 haftalık maruziyet için 4 haftalık fareler seçildi. Toplam letrozol dozu, her fare için 8 mg'dır, bu da iki ardışık pompanın implante edilmesini gerektirir (bir pompa 4 hafta boyunca serbest bırakılır), D.H., pompa başına 4 mg / 4 hafta. Adım 1.2'de belirtildiği gibi, letrozol stok çözeltisinin konsantrasyonu 8 mg / 100 μL'dir. Pompaları hazırlamak için, aşağıda hesaplandığı gibi her pompa için 50 μL stok çözeltisi gereklidir: toplam 4 mg letrozol bölü 8 mg / 100 μL.
  5. Eşit miktarda PEG300 hazırlayın, letrozol çözeltisine ekleyin ve iyice karıştırın (uygun şekilde girdaplanabilir).
  6. Kontrol grubu için kontrol aracı çözümünü hazırlayın (letrozol içermeyen her pompa için 50 μL DMSO + 50 μL PEG300).
  7. Gerekli pompa sayısına göre yeterli sayıda steril santrifüj tüpü hazırlayın; Her pompa için bir adet 15 mL'lik santrifüj tüpü hazırlanmalıdır.
  8. Bir şırınga ile salin çekin ve her santrifüj tüpüne 5 mL salin ekleyin. Ardından, santrifüj tüplerini kapatın ve daha fazla kullanım için bir tüp rafına yerleştirin.
  9. Yeni bir çift steril eldiven giyin, mini pompaları istediğiniz miktarda çıkarın ve temiz, steril bir tezgah veya kabın üzerine yerleştirin.
  10. Pompa gövdesiyle eşleşen kapağı başparmağınız ve işaret parmağınızla hafifçe sıkıştırın ve diğer elinizle pompa gövdesini tutun.
  11. Kapağa takılı ince tüp ile pompanın doldurma ağzını birkaç kez yavaşça dürtün (Şekil 1B).
    NOT: Tıkanmamışsa, doldurduktan sonra sıvı tüp içinde serbestçe akmayabilir.
  12. Pompaya uygun iğneyi ve 1 mL steril şırıngayı alın. İğneyi şırıngaya takın ve sıkı hale getirin (Şekil 1C).
  13. Yeni monte edilmiş şırınga ile yukarıda yapılandırılan nihai letrozol çözeltisini dikkatlice ve yavaşça hazırlayın (Şekil 1D).
    NOT: Letrozol çözeltisinin aspirasyonu yavaş ve eşit bir şekilde yapılmalıdır. Hızlı aspirasyon, sonraki ilaç çözeltisi enjeksiyonunu etkileyebilecek hava kabarcıkları oluşturabilir.
  14. Letrozol çözeltisini mini pompaya enjekte edin.
    1. Bir mini pompayı bir elinizle dik duracak şekilde dikkatlice sıkıştırın ve diğer elinizle yukarıda belirtilen 1 mL şırıngayı tutun ve yavaşça pompanın en altına yerleştirin (Şekil 1E).
      NOT: İğne pompanın altına sokulmazsa, pompadaki sıvı enjeksiyon sırasında kolayca köpürebilir ve bu da pompanın ilacı daha sonra serbest bırakmasını etkiler.
    2. Ardından yapılandırılan çözeltiyi yavaşça enjekte edin; Enjeksiyon, pompanın açılması hafifçe kabardığında fark edilebilir.
    3. Enjeksiyon hacmi 90 μL'ye yaklaştığında daha yavaş enjekte edin. Pompa tamamen dolduğunda (yaklaşık 100 μL), şırıngayı geri çekin.
    4. Kapağı dikkatlice pompa gövdesine yerleştirin ve sıkı hale getirin; Bu noktada, az miktarda çözelti dökülecektir. Dikkatlice silin.
  15. İlacın yüklü olduğu pompayı, çıkışı yukarı bakacak şekilde (kapaklı uç) alın, önceden hazırlanmış santrifüj tüpünü alın ve pompayı steril tuzlu suya tamamen daldırın (Şekil 1F). Ardından, santrifüj tüpünü kapatın ve tüp rafına yerleştirin.
    NOT: İşlem boyunca pompayı kirletmemeye dikkat edin.
  16. Tüm mini pompalar yapıldıktan sonra, tüm santrifüj tüplerini 48 saat boyunca 37 °C'lik bir termostata yerleştirin.

2. Ameliyat ve anestezi için hazırlık

  1. Forseps, kanama durdurucular, cerrahi makaslar, iğne tutucular ve 4-0 emilebilir cerrahi dikişler dahil olmak üzere ameliyat gününde gerekli tüm aletleri hazırlayın ve sterilize edin.
  2. İzofluran anestezi makinesini kullanmadan önce (Şekil 2B), boru hattı bağlantısının doğru olup olmadığını dikkatlice kontrol edin ve boru hattının sağlam olduğundan ve sızıntı yapmadığından emin olun.
  3. Anestezi makinesinin buharlaştırıcısındaki doldurma sızdırmazlık kapağını sökün, ardından anesteziyi yavaşça ekleyin.
  4. Anestezi seviyesini anestezi makinesinde etiketlenmiş üst ve alt sınırlar arasında tutun.
  5. Anestezi makinesi evaporatöründen gelen hava akışının anestezi indüksiyon kutusuna bağlı olduğundan emin olmak için üç valf anahtarını dönüştürün.
  6. Hava pompasını ve evaporatörü açın, ardından anestezi indüksiyonu için izofluran konsantrasyonunu ayarlayın (genellikle% 3 -% 4).
  7. Anestezik indüksiyon kutusunu doldurana kadar yaklaşık 1 dakika bekleyin, ardından fareyi indüksiyon kutusuna koyun ve tam anestezi olana kadar bekleyin (bu işlem yaklaşık 2-3 dakika sürer).
  8. Kutuyu hafifçe eğerek farelerin yeterince uyuşturulup uyuşturulmadığını kontrol edin. Fareler ters çevrilirse ve yaslanmış pozisyona geri dönme belirtisi göstermezse, anestezi indüklenir.

3. Letrozol mini pompasının implantasyonu

  1. Cerrahi maske ve steril eldiven giyin.
  2. Önceden anestezi uygulanmış fareleri indüksiyon kutusundan çıkarın ve tüy dökücü kremi farelerin arkasına uygulayın, ardından 1 dakika bekleyin. Tüy dökücü kremi ve saçı ıslak gazlı bezle nazikçe silin.
  3. Aynı zamanda, anestezi makinesi buharlaştırıcısından gelen hava akışının anestezi maskesine bağlı olduğundan emin olmak için üç valf anahtarını değiştirin ve bakım konsantrasyonunu ayarlayın (genellikle %2).
  4. Tüyleri alındıktan sonra, fareyi baskın elinizle tutun ve başını/burnunu anestezi maskesine yerleştirin.
  5. Pedal çekme refleksini test ederek anestezi derinliğini kontrol edin.
    NOT: Anestezi içeren tüm işlemler, aktif karbon tabletleri ile donatılmış gaz filtreleri kullanılarak yapılmalı ve işlem çeker ocakta yapılmalıdır.
  6. Fareyi çalışma plakasına yüzüstü pozisyonda sabitleyin ve her iki göze de göz kayganlaştırıcı uygulayın.
  7. Povidon-iyot çubuklarını açıkta kalan cilde üç kez uygulayın (Şekil 2C). Daha sonra, 2 mg / kg'lık bir dozda deri altına meloksikam enjekte edin.
  8. Anestezik derinliği tekrar bir ayak parmağı kıstırma ile onaylayın. Daha sonra boynun arka kısmının orta hattında, tüysüz taraftaki deri lehine olacak şekilde forseps ile deri alınır ve neşter veya cerrahi makas ile yanal olarak yaklaşık 0,5 cm'lik bir kesi yapılır (Şekil 2D).
  9. Daha sonra insizyonun altındaki epidermisi açın ve cildi serbest bırakmak için bir hemostat veya iğne tutucu ile erişin, bir mini pompa için yer açın (insizyondan yaklaşık 2 cm uzakta) (Şekil 2E).
  10. Pompayı, steril forsepsli santrifüj tüpündeki tuzlu sudan pompanın açık ucu aşağı bakacak şekilde çıkarın ve pompayı farelere deri altından yerleştirmeye hazır olun (Şekil 2F).
  11. Deri kesisinin bir tarafını forseps ile sıkıştırın ve pompayı deri altı boşluğuna itin. Pompaya girerken herhangi bir direnç olmamalıdır. İçeri girdikten sonra, pompayı mümkün olduğunca içeri doğru hafifçe ve nazikçe sıkmak için parmaklarınızı kullanın (Şekil 1G).
  12. Kesi bölgesini 4-0 cerrahi sütürler kullanarak dikkatlice dikin (Şekil 2H).
    NOT: Dikiş atarken deri altı pompa gövdesine zarar vermemeye dikkat edin.
  13. Dikiş atıldıktan sonra, ameliyat bölgesindeki cildi iyodofor çubuklarıyla iki kez dezenfekte edin.

4. Hayvanların geri kazanılması

  1. Ameliyattan sonra, fareleri anestezi sırasında kullanılan yataktan kuru, temiz bir yatağa nazikçe aktarın. Farelerin sıcak ve sessiz bir ortamda olduğundan emin olun.
  2. Farelerin nefeslerinin derinliği ve sıklığı gibi koşullarını yakından izleyin.
  3. Hareketlilikleri geri dönmeye başladığında farelerin davranışlarını gözlemleyin. Son olarak, baş dönmesi veya koordinasyonsuz hareketler gibi belirgin anormal davranışlar olmadan ayakta durabildiklerinden ve yürüyebildiklerinden emin olun.
  4. Fareler iyileştikten sonra, onları nazikçe önceden hazırlanmış kafeslere aktarın. Farelerin beslenmesi için kafesin dibine steril jöle ve yiyecek koyun.
    NOT: Ameliyat bölgesinin gerilmesi, ameliyat sonrası erken dönemde farelerin kolayca içmesini ve yemesini engelleyebilir, bu nedenle jöle ve yiyecekleri kafesin altına yerleştirin.
  5. Meloksikamı deri altına 2 mg / kg'lık bir dozda enjekte edin (ameliyattan sonraki ilk 3 gün boyunca her 24 saatte bir). 8 haftalık letrozol tedavisinden sonra (ör., iki ardışık mini pompa implantasyonu), fare modellerini test edin.

Sonuçlar

Deneysel protokol ve bazı kritik adımlar Şekil 1 ve Şekil 2'de gösterilmiştir. Serum testosteron seviyeleri Şekil 3A'da gösterilmektedir. Letrozol mini pompa ile tedavi edilen fareler (bundan böyle LTZ fareleri olarak anılacaktır), dişi kontrol farelerine kıyasla önemli ölçüde yüksek serum testosteron seviyeleri sergilemiştir. Bu arada, yumurtalıkların histolojik analizi, LTZ farelerinin korpora lutea sayısında önemli bir azalma ile polikistik overler gösterdiğini gösterdi (Şekil 3B, C), bu da anovulasyonu gösterir. Ayrıca, LTZ fareleri, dişi kontrol farelerine kıyasla önemli östrus asikliksitesi sergilemiştir (Şekil 3D). Vücut ağırlığının değerlendirilmesi, LTZ farelerinin kontrol farelerinden daha ağır olduğunu ortaya koydu (Şekil 3E). Glukoz tolerans test sonuçları ve EAA hesaplamaları, LTZ farelerinin kontrol farelerine kıyasla glukoz intoleransı geliştirdiğini göstermiştir (Şekil 3F,G). Serum lipid analizi, LTZ farelerinin kontrol farelerine kıyasla serum lipid profilinde bir değişiklik gösterdiğini göstermiştir (Şekil 3H).

figure-results-1
Şekil 1: Mini pompayı hazırlamak için malzemeler ve kritik adımlar. (A) Letrozol mini pompalarının hazırlanışını gösteren şematik çizim. (B) Mini pompa, kapağa takılan ince bir tüp ile tıkanıklığı kaldırıldı. (C) Pompaya uygun bir iğne, 1 mL'lik bir şırınganın iğne ucuna bağlandı. (D) Letrozol çözeltisi köpürmeden yavaşça aspire edildi. (E) Letrozol çözeltisi pompanın en altından yavaşça enjekte edildi. (F) Doldurulmuş pompalar kapatıldı ve kapak ucu yukarı bakacak şekilde tuzlu su içinde depolandı. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-results-2
Şekil 2: PKOS indüksiyonu için farelere pompaların implante edilmesinin malzemeleri ve kritik adımları. (A) Letrozol mini pompalarının implantasyonunu gösteren şematik çizim. (B) Anestezi ekipmanı: hava pompası, anestezi makinesi, indüksiyon kutusu ve gaz filtreleri. (C) Anestezi uygulanmış fareler sabitlendi ve sterilize edildi. (D) Dorsal orta çizginin yakınında 0,5 cm'lik bir kesik. (E) Mini pompanın yerleştirilmesi için yer açmak üzere cilt serbest bırakıldı. (F) Temiz ve steril forsepslerle salinden bir mini pompa çıkarıldı. (G) Mini pompa daha önce serbest bırakılan cildin altına implante edildi. (H) Cilt 4-0 dikişle kapatıldı. (I) İmplante edilen farenin iyileşmesine izin verildi. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-results-3
Şekil 3: Letrozol mini pompa implante edilmiş fare modellerinde üreme ve metabolik fenotiplerin karakterizasyonu. (A) LTZ ile tedavi edilen farelerde plazma testosteron seviyeleri, kontrol farelerindekinden önemli ölçüde daha yüksekti (grup başına n = 9 hayvan). (B) Yumurtalıkların histolojik analizi. Ok, corpora lutea'yı gösterir. Ölçek çubuğu: 1 mm. (C) Belirtilen gruplardaki corpora lutea sayısı (n = grup başına 9 hayvan). (D) LTZ fareleri, kontrol dişi farelerine kıyasla döngüsellik göstermedi. (E) Belirtilen gruplardaki vücut ağırlığı (n = grup başına 10 hayvan). (F,G) Belirtilen gruplarda glukoz tolerans testi sonuçları (grup başına n = 8 hayvan). (H) Belirtilen gruplarda serum lipid seviyeleri (grup başına n = 8 hayvan). Veriler ortalama ± SEM olarak ifade edilir. AUC, eğrinin altındaki alanı gösterir; E, kızgınlık aşaması; LDL-C, düşük yoğunluklu lipoprotein kolesterol; HDL-C, yüksek yoğunluklu lipoprotein kolesterol; P, proöstrus aşaması; M/D, metestrus/diestrus aşaması; TC, toplam kolesterol; ve TG, trigliseritler. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Tartışma

Bu rapor, kolay erişilebilir materyaller kullanarak farelerde PCOS'u indüklemek için basit bir protokol göstermektedir. Fare PKOS modeli, PKOS mekanizmalarını keşfetmek ve ilaçları taramak için gereklidir26. Farelerde PKOS modellerini indüklemek için mevcut yöntemlerden letrozol indüksiyonu en yaygın kullanılanlardan biridir. Letrozol kullanımı, testosteronun östradiol'e dönüşümünü inhibe ederek veya testosteron sentezini artırarak hiperandrojenik bir durum geliştirebilir ve sürdürebilir27. Letrozol kaynaklı fare modeli, PCOS28'li hastalara metabolik ve üreme benzerlikleri göstermektedir. Bununla birlikte, fare PCOS modelinde geleneksel letrozol tedavisi teknikleri, farelere 21 gün veya daha uzun süre günlük ağızdan beslenme veya letrozol ilacı enjeksiyonu gerektirir29,30. Zamanlanmış besleme veya enjeksiyon dozu ile uzun süreli sürekli ilaç tahsisi zaman alıcı ve emek yoğundur ve ilaçların tekrarlanan uygulaması fareler için herkesin bildiği gibi stresli olabilir ve model sonuçlarını etkileyen deneysel olmayan faktörleri ortaya çıkarır23,31. Bazı sıçan ve fare PCOS çalışmaları implante edilebilir letrozol peletleri 28,32 kullansa da, kullanılan ürünlerin özelleştirilmesi gerekir ve zamanında mevcut olmayabilir. Bu çalışma, farelerde PCOS'u indüklemek için letrozol mini pompalarının implante edilmesi için bir teknik önermektedir. Yöntem basittir, zaman kazandırır ve çoğu laboratuvarda kolayca bulunan cerrahi alet ve ekipmanları kullanır.

Kritik adımlar ve sorun giderme
Bu yöntemi uygularken en iyi sonuçları elde etmek için birkaç önemli adıma dikkat etmek önemlidir. İlk olarak, kullanmadan önce eşleşen kapağa takılı ince boruyu kullanarak pompanın tıkanıklığını açın. Önceki deneyimler, tıkalı bir pompanın ilaç yüklemesini ve salınımını bozabileceğini göstermektedir. Ek olarak, letrozol çözeltisinin yapılandırılmasındaki her adım, nihai çözeltinin tam olarak istenen konsantrasyonda olmasını sağlamak için dikkatli bir şekilde yürütülmelidir. Pompanın montaj işlemi boyunca kontaminasyonu önlemek için dikkat edilmelidir. Ayrıca, deney fareleri için yeterli anesteziyi sağlamak ve anestezinin ameliyat edilen fareler üzerindeki olumsuz etkilerini en aza indirmek için anestezi öncesinde ve sırasında dikkatli ayarlamalar gereklidir.

Avantajlar ve sınırlamalar
Bu çalışmada açıklanan yöntem çeşitli avantajlar sunar: (1) zamandan tasarruf sağlar ve pompa implantasyonu sonrası sürekli letrozol salınımına izin verir; (2) deney hayvanları üzerinde tekrarlanan ilaç uygulamasının stresini önler ve deneysel olmayan faktörlerin modelleme sonuçları üzerindeki etkisini en aza indirir; (3) gerekli malzemeler, cerrahi aletler ve ekipmanlar çoğu laboratuvarda yaygın olarak bulunur; (4) yöntem, farelerde PKOS fenotiplerini etkili bir şekilde indükler. Bununla birlikte, bu yöntemin de sınırlamaları vardır: (1) mini pompa implantasyonu için gerekli anestezi ve cerrahi prosedür farelerde tahrişe neden olabilir ve mini pompanın deri altında varlığı aktivitelerini bozabilir; (2) Bu modelleme yönteminin etkinliği, proses sırasında pompa gövdesinde meydana gelen kirlenme veya hasardan etkilenebilir. Yazarların deneyimlerine dayanarak, protokol adımlarının titiz bir şekilde yürütülmesi, PCOS fare modelini indüklemede yüksek bir başarı oranına yol açabilir.

Açıklamalar

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

Çalışma, Çin Ulusal Anahtar Araştırma ve Geliştirme Programı (hibe 2021YFC2700701), Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (hibe 82088102, 82071731, 82171613, 8227034, 81601238), Çin Tıp Bilimleri Akademisi Tıp Bilimleri İnovasyon Fonu (hibe 2019-I2M-5-064), Şanghay Belediyesi Bilim ve Teknoloji Komisyonu (hibe 21Y11907600), Şanghay Belediye Sağlık ve Aile Planlaması Komisyonu (hibe 20215Y0216), Şanghay Belediye Sağlık Komisyonu İşbirlikçi İnovasyon Programı (hibe 2020CXJQ01), Şanghay Hastane Geliştirme Merkezi Klinik Araştırma Planı (hibe SHDC2020CR1008A), Şanghay Jinekolojik Hastalıklar Klinik Araştırma Merkezi (hibe 22MC1940200), Şanghay Ürogenital Sistem Hastalıkları Araştırma Merkezi (hibe 2022ZZ01012), Şanghay Sınırları Bilim Üreme ve Geliştirme Araştırma Üssü, Quzhou Belediyesi Bilim ve Teknoloji Komisyonu (hibe 2022K54), Üreme Genetiği Anahtar Laboratuvarı, Eğitim Bakanlığı, Zhejiang Üniversitesi Açık Fon Projesi (hibe KY2022035) ve Guangdong Tıp Bilimleri Akademisi Açık Fon Projesi (hibe YKY-KF202202).

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
ŞırıngaBofeng BiotechBD3008411ML (steril)
Santrifüj tüpüBiyolojik Umut1850-K15ML (steril)
PipetEppendorf3123000268-A100μ L-1000 ve mu; L (steril)
PipetTopPette701010100810μ L-100 ve mu; L (steril)
Letrozol tozuSigmaL6545-50MGBirincil etkili ilaçlar (steril)
PEG (Poli (etilen glikol))SolarbioP8250Çözünme için kullanılır (steril)
Steril Fizyolojik Tuzlu Su ÇözeltisiBiosharpBL158AMini pompa depolama
Ozmotik PompalarALZET1004Letrozol depolama ve sürekli salım (steril)
Dimetil sülfoksitBiosharpBS087Çözünme için kullanılır (steril)
Küçük Hayvan Anestezi MakinesiRWD & nbsp;R500IPAnestezi için kullanılır
İzofluran RWD20071302Anestezi için kullanılır
Kanama durdurucularBiosharpBS-HF-S-125Cerrahi alet
MakasBiosharpBS-SOR-S-100PCerrahi alet
İğne tutucuShangHaiJZJ32010Cerrahi alet
ForsepsRWD F12028Cerrahi alet
İğne ve 4-0 emilebilir sütürJINGHUANCR413Cerrahi alet
Povidon-iyot swablarıSingleLadyGB26368-2010Cilt dezenfeksiyonu
Tüy dökücü kremZIKER BİYOTEKNOLOJİZK-L2701 Laboratuvar hayvanları için tüy dökücü madde
Nitril EldivenBiosharpBC040-LAseptik çalışma için kullanılır
Steril gazlı bezZHENDEBA69087Sıvıları silmek için kullanılır
C57BL/6J FarelerŞangay Model Organizmalar MerkeziN/AYaş: 4 hafta
Pet Göz KayganlaştırıcıBAITESHF021153Fare gözü kayganlaştırıcı
Meloksikam Enjeksiyonuiçin kullanılır MEIDAJIAR21064-21Fare analjezisi için kullanılır (steril)

Kaynaklar

  1. Dapas, M., Dunaif, A. Deconstructing a syndrome: Genomic insights into PCOS causal mechanisms and classification. Endocr Rev. 43 (6), 927-965 (2022).
  2. Teede, H., et al. Anti-müllerian hormone in PCOS: A review informing international guidelines. Trends Endocrinol Metab. 30 (7), 467-478 (2019).
  3. Joham, A. E., et al. Polycystic ovary syndrome. Lancet Diabetes Endocrinol. 10 (9), 668-680 (2022).
  4. Pan, J. X., et al. Aberrant expression and DNA methylation of lipid metabolism genes in PCOS: A new insight into its pathogenesis. Clin Epigenetics. 10, 6(2018).
  5. Gao, L., et al. Calcitriol attenuates cardiac remodeling and dysfunction in a murine model of polycystic ovary syndrome. Endocrine. 52 (2), 363-373 (2016).
  6. Gao, L., et al. Polycystic ovary syndrome fuels cardiovascular inflammation and aggravates ischemic cardiac injury. Circulation. 148 (24), 1958-1973 (2023).
  7. Rosenfield, R. L., Ehrmann, D. A. The pathogenesis of polycystic ovary syndrome (PCOS): The hypothesis of PCOS as functional ovarian hyperandrogenism revisited. Endocr Rev. 37 (5), 467-520 (2016).
  8. Wang, F., et al. Alternative splicing of the androgen receptor in polycystic ovary syndrome. Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (15), 4743-4748 (2015).
  9. Noroozzadeh, M., Behboudi-Gandevani, S., Zadeh-Vakili, A., Ramezani Tehrani, F. Hormone-induced rat model of polycystic ovary syndrome: A systematic review. Life Sci. 191, 259-272 (2017).
  10. Tyndall, V., et al. Effect of androgen treatment during foetal and/or neonatal life on ovarian function in prepubertal and adult rats. Reproduction. 143 (1), 21-33 (2012).
  11. Jang, M., et al. Oriental medicine Kyung-ok-ko prevents and alleviates dehydroepiandrosterone-induced polycystic ovarian syndrome in rats. PLoS One. 9 (2), e87623(2014).
  12. Brawer, J. R., Munoz, M., Farookhi, R. Development of the polycystic ovarian condition (PCO) in the estradiol valerate-treated rat. Biol Reprod. 35 (3), 647-655 (1986).
  13. Mirabolghasemi, G., Kamyab, Z. Changes of the uterine tissue in rats with polycystic ovary syndrome induced by estradiol valerate. Int J Fertil Steril. 11 (1), 47-55 (2017).
  14. Li, X., et al. Amitriptyline plays important roles in modifying the ovarian morphology and improving its functions in rats with estradiol valerate-induced polycystic ovary. Arch Pharm Res. 42 (4), 344-358 (2019).
  15. Mamounas, E. P., et al. Use of letrozole after aromatase inhibitor-based therapy in postmenopausal breast cancer (NRG oncology/NSABP B-42): A randomised, double-blind, placebo-controlled, phase 3 trial. Lancet Oncol. 20 (1), 88-99 (2019).
  16. Deveci, H. S., et al. Histological evaluation of rat larynx in experimental polycystic ovary syndrome model. Eur Arch Otorhinolaryngol. 269 (8), 1945-1950 (2012).
  17. Du, D. F., Li, X. L., Fang, F., Du, M. R. Expression of anti-müllerian hormone in letrozole rat model of polycystic ovary syndrome. Gynecol Endocrinol. 30 (12), 885-889 (2014).
  18. Kelley, S. T., Skarra, D. V., Rivera, A. J., Thackray, V. G. The gut microbiome is altered in a letrozole-induced mouse model of polycystic ovary syndrome. PLoS One. 11 (1), e0146509(2016).
  19. Arroyo, P., Ho, B. S., Sau, L., Kelley, S. T., Thackray, V. G. Letrozole treatment of pubertal female mice results in activational effects on reproduction, metabolism and the gut microbiome. PLoS One. 14 (9), e0223274(2019).
  20. Pyun, B. J., et al. Tetragonia tetragonioides (pall.) Kuntze regulates androgen production in a letrozole-induced polycystic ovary syndrome model. Molecules. 23 (5), 1173(2018).
  21. Patel, R., Shah, G. Insulin sensitizers modulate GNRH receptor expression in PCOS rats. Arch Med Res. 49 (3), 154-163 (2018).
  22. Chaudhari, N., Dawalbhakta, M., Nampoothiri, L. GNRH dysregulation in polycystic ovarian syndrome (PCOS) is a manifestation of an altered neurotransmitter profile. Reprod Biol Endocrinol. 16 (1), 37(2018).
  23. Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. Administration of substances to laboratory animals: Routes of administration and factors to consider. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (5), 600-613 (2011).
  24. Lee, Y. H., et al. Welsh onion root (Allium fistulosum) restores ovarian functions from letrozole induced-polycystic ovary syndrome. Nutrients. 10 (10), 1430(2018).
  25. Yang, H., et al. Traditional medicine (mahuang-tang) improves ovarian dysfunction and the regulation of steroidogenic genes in letrozole-induced PCOS rats. J Ethnopharmacol. 248, 112300(2020).
  26. Corrie, L., et al. Recent updates on animal models for understanding the etiopathogenesis of polycystic ovarian syndrome. Life Sci. 280, 119753(2021).
  27. Corbin, C. J., Trant, J. M., Walters, K. W., Conley, A. J. Changes in testosterone metabolism associated with the evolution of placental and gonadal isozymes of porcine aromatase cytochrome p450. Endocrinology. 140 (11), 5202-5210 (1999).
  28. Ryan, G. E., Malik, S., Mellon, P. L. Antiandrogen treatment ameliorates reproductive and metabolic phenotypes in the letrozole-induced mouse model of PCOS. Endocrinology. 159 (4), 1734-1747 (2018).
  29. Bhattarai, P., Rijal, S., Bhattarai, J. P., Cho, D. H., Han, S. K. Suppression of neurotransmission on gonadotropin-releasing hormone neurons in letrozole-induced polycystic ovary syndrome: A mouse model. Front Endocrinol (Lausanne). 13, 1059255(2022).
  30. Annie, L., Gurusubramanian, G., Roy, V. K. Inhibition of visfatin by fk866 mitigates pathogenesis of cystic ovary in letrozole-induced hyperandrogenised mice. Life Sci. 276, 119409(2021).
  31. Mcdonald, L. T., et al. Early blood profile of C57BL/6 mice exposed to chronic unpredictable stress. Front Psychiatry. 10, 230(2019).
  32. Torres, P. J., et al. Exposure to a healthy gut microbiome protects against reproductive and metabolic dysregulation in a PCOS mouse model. Endocrinology. 160 (5), 1193-1204 (2019).

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

PCOS Fare ModeliLetrozol Mini PompaKontrollü İlaç SalınımıSubkutan İmplantasyonSerum TestosteronGlukoz İntoleransıOver HistolojisiMetabolik BozukluklarKardiyovasküler Hastalık
Farelerde Polikistik Over Sendromunu İndüklemek İçin Modifiye Edilmiş Bir Teknik
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.