Bu çalışma, floresan A549-iRFP hücrelerinin çok hücreli sferoidlerinin intrapulmoner inokülasyonuna dayanan ortotopik küçük hücreli dışı akciğer kanseri (KHDAK) modelini sunmaktadır. Model, klinik NSCLC aşamalarını özetler ve uzun dalga boylu floresanın dinamik in vivo izlemesine göre sisplatine yanıt verir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Küçük Hücreli Dışı Akciğer Kanserinde Hastalık Progresyonunu Taklit Eden ve İlaç Aktivitelerini Tahmin Eden Ortotopik Ksenogreft Modelinin Oluşturulması
Bu makalede
Özet
Özet
Küçük hücreli dışı akciğer kanseri (KHDAK), karmaşık ve heterojen bir tümör mikroçevresi ile oldukça ölümcül bir hastalıktır. Şu anda, kanser hücresi süspansiyonlarının deri altı inokülasyonuna dayanan yaygın hayvan modelleri, NSCLC'deki tümör mikroçevresini özetlememektedir. Burada, üç boyutlu çok hücreli sferoidlerin (MCS) intrapulmoner inokülasyonunu kullanan bir murin ortotopik akciğer kanseri ksenogreft modelini tanımladık. Spesifik olarak, floresan insan NSCLC hücreleri (A549-iRFP), MCS oluşturmak için 3 hafta boyunca kollajen ile düşük bağlantılı 96 oyuklu mikroplakalarda kültürlendi, bunlar daha sonra ortotopik akciğer kanseri modelini oluşturmak için atimik çıplak farelerin sol akciğerine interkostal olarak aşılandı.
Orijinal A549 hücre hattı ile karşılaştırıldığında, A549-iRFP hücre hattının MCS'si, antikanser ilaçlarına benzer şekilde yanıt verdi. A549-iRFP hücrelerinin uzun dalga boylu floresan sinyali, sferoid hacmi, hücre canlılığı ve hücresel protein seviyesi dahil olmak üzere kanser hücresi büyümesinin ortak belirteçleri ile güçlü bir şekilde korelasyon gösterdi ve böylece floresan görüntüleme ile in vivo kanser büyümesinin dinamik olarak izlenmesine izin verdi. Farelere aşılandıktan sonra, A549-iRFP MCS ksenogrefti, primer tümörün genişlemesi, komşu sekonder tümörlerin ortaya çıkması ve kanser hücrelerinin kontralateral sağ akciğer ve uzak organlara metastazı dahil olmak üzere NSCLC'nin klinik aşamalarına çok benzeyen fazlar boyunca güvenilir bir şekilde ilerledi. Ayrıca model, antiakciğer kanseri ilacı olan sisplatine beklenen toksisite ve daha yavaş kanser ilerlemesi ile yanıt verdi. Bu nedenle, NSCLC'nin bu murin ortotopik ksenogreft modeli, hastalığın ilerlemesini özetlemek ve potansiyel antikanser ilaçların geliştirilmesini kolaylaştırmak için bir platform görevi görecektir.
Giriş
Tüm onkolojik bozukluklar arasında, akciğer kanseri sadece en yüksek yaşam kaybına neden olmakla kalmaz, aynı zamanda ABD'de her yıl ikinci en yüksek yeni hasta sayısını talep etmektedir1. Bu yıkıcı malignite, modern sağlık hizmetlerinde büyük bir engel olarak durmakta ve karmaşık biyolojisinin ve daha etkili terapötik modalitelerinin daha derin bir şekilde anlaşılmasını gerektirmektedir2. Küçük hücreli dışı akciğer kanseri (KHDAK), akciğer kanserinin %85'ini oluşturur ve solid tümörlere dönüşme eğilimindedir3. Akciğer kanserindeki en önemli zorluklardan biri, kanserin ilerlemesini ve terapötik mü....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Hayvan çalışması, Pasifik Üniversitesi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi'nin (IACUC) onayı ile gerçekleştirildi (Hayvan Protokolleri 19R10 ve 22R10). Bu çalışma için 5-6 haftalık yaşlarında, 20-25 g ağırlığında, referans verilen Kemirgen Diyeti ile yetiştirilmiş ve patojen içermeyen (SPF) koşullar altında barındırılan sekiz erkek atimik çıplak fare kullanıldı. Kafesler, yatak takımları ve içme suyu otoklavlandı ve düzenli olarak değiştirildi. Farelerde tümör aşılamasının bir şeması Şekil 1'de gösterilmiştir. Bu protokolde kullanılan tüm malzeme ve aletlerle ilgili ayrıntılar için Malzeme Tablosuna bakın.<....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
A549-iRFP MCS'nin Karakterizasyonu
A549-iRFP MCS, kollajen ve santrifüj yardımı ile sferoid mikroplakalarda başarılı bir şekilde kültürlendi. MCS 1 hafta sonra yaklaşık 500 μm çapa ulaştığında, hem A549 hem de A549-iRFP MCS, 3 gün boyunca çeşitli antikanser ilaçlarına ve formülasyonlarına maruz bırakıldı ve daha sonra 4 gün daha ilaçsız büyüme ortamında tutuldu. A549-iRFP MCS, ana A549 hücrelerininkini yakından yansıtan bir yanıt modeli sergiledi. A549 ve A549-iRFP MCS, akciğer kanserine karşı birinci.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
A549-iRFP MCS'nin yapısı, basit ve yüksek oranda tekrarlanabilir bir laboratuvar prosedürüdür ve birden fazla hücre hattı için MCS oluşumuna çevrilebilir. Santrifüj ve kollajen yardımıyla üretilen MCS, 3-4 gün içinde daha bütünsel ve katı tümör benzeri bir yapı sergiler. Bu yöntem, tipik olarak 2-3 hafta veya küçük tomurcuklanmalar ortaya çıkmaya başlayana kadar daha uzun süreler boyunca ayrılmaz yapılarını koruyan sağlam sferoidlerin oluşumunu sağlar. Santrifüjleme ve kollajen kullanarak, MCS oluşumunu standartlaştırdık.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların beyan edebilecekleri herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Teşekkürler
Bu çalışma, Pasifik Üniversitesi'nden SAAG ve SEED hibeleri ile desteklenmiştir. Odyssey Kızılötesi Görüntüleme 205 Sistemine erişim sağladığı için Dr. William Chan'a ve SpectraMax iD3 plaka okuyucusuna erişim sağladığı için Dr. John Livesey'e teşekkür ederiz. Hayvan protokolleri hakkındaki teknik tavsiyeleri için Dr. Melanie Felmlee'ye teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 100 ve mikro; L Cam Şırınga | Hamilton | Parçası/REF #80601 | |
| 20 G İğne | Termo Fisher Scientific Inc. | 14 826D | |
| 96 oyuklu Ultra Düşük Bağlantılı Küresel Mikroplaka | Corning | 15-100-173 | |
| A549-iRFP | Imanis Yaşam Bilimleri | CL082-STAN | |
| AIN-93M Olgun Kemirgen Diyeti | Araştırma Diyetleri, Inc. | ||
| Atimik Çıplak Fare | Charles River Laboratories, Inc. | Suş Kodu: 490; homozigot | |
| BCA | Pierce | 23227 | |
| Buprenorfin Hidroklorür | Patterson Veteriner | NDC Numarası: 42023-179-05 | |
| CellTiter-Glo 3D Hücre Canlılık Testi | Promega | G9683 | |
| Kollajen | Gibco | A1064401 | |
| DMEM | Corning | MT10013CV | |
| Fetal Sığır Serumu (FBS) | Cytiva HyClone | SH3039603 | |
| ImageJ | Açık kaynak aracı (https://imagej.net/ij/) | N/A | |
| Image Studio | LI-COR | Sürüm 5.2 | |
| Isofluran | Patterson Veteriner | NDC Numarası: 17033-0091-25 | |
| Ketamin | Patterson Veteriner | NDC Numarası: 50989-0161-06 | |
| Mikroskop ve nbsp; | Keyence | Model numarası: BZ-X710 | |
| Matrigel | Corning | CB-40234 | |
| Odyssey Kızılötesi Görüntüleme 205 Sistemi | LI-COR | Model numarası: 9140 | |
| PBS | Corning | MT21040CV | |
| Pearl Trilogy küçük hayvan görüntüleme sistemi | LI-COR | Model numarası: 9430 | |
| Penisilin-Streptomisin ve nbsp; | Corning | MT30002CI | |
| Puromycin | Thermo Fisher Scientific Inc. | ||
| MATLAB'dan ReViSP yazılımı | Sourceforge'da açık kaynak aracı (https://sourceforge.net/projects/revisp/) | Yok | |
| Cerrahi Klipler - AutoClip Sistemi | Güzel Bilim Araçları | 12020-00 | |
| Ksilazin | Patterson Veteriner | NDC Numarası: 61133-6017-01 |
Kaynaklar
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics. CA Cancer J Clin. 70 (1), 7-30 (2020).
- Bray, F., et al. Global cancer statistics 2018: Globocan estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J Clin
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
