Yöntem makalesi

Translasyonel Fare İnme Çalışmaları için Standartlaştırılmış Nörolojik Skorlama ile Fare Vuruşu Birimi Protokolü

DOI:

10.3791/66847

⸱

7 Şubat 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pharmacology Medical School of Athens, National and Kapodistrian University of Athens, 2Institute for Stroke and Dementia Research (ISD), University of Munich Medical Center, 3Department of Neurointensive Care, Schoen Clinic Bad Aibling

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu makale, büyük stroklu farelerde yüksek oranda ötelemeye dayalı ve bağımsız olarak kanıtlanmış fare Vuruş Birimi (mSU) kavramını yürütmek için bir protokol sunar. Ayrıca, farelerde fokal deneysel inme ölçeğinin yürütülmesi için standart bir protokol sağlar, bu da uzun vadede bile tespit edilen inme fokal eksikliklerini değerlendirir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Orta arter oklüzyonunun filament modeli (fMCAo), intravasküler reperfüzyon/rekanalizasyon ile kontrollü iskemiye izin veren belki de en translasyonel fare vuruş modelidir. Bununla birlikte, inme bakımı için mevcut klinik gelişmelerle (örneğin, İnme Birimleri) uyumdan yoksundur, genellikle laboratuvarlar arasında subjektif veya belirsiz nörolojik skorlama kullanır ve yüksek akut faz mortalitesi sergiler. Burada, doğrulanmış video kılavuzlu protokollerle bu sınırlamaları ele alıyoruz. Fare Vuruş Birimi (mSU) protokolünü, klinik ve fare vuruşu modellemesi arasındaki boşluğu dolduran eğitici videolar ve bir karar algoritması (Risk Sınıflandırma Skoru) ile sunuyoruz. İnme nörolojik skorlamasının doğruluğunu ve duyarlılığını artırmak için, ilk kez fokal Deneysel İnme Ölçeği'nin (fESS) video standardize edilmiş bir formatını sunuyoruz ve değerini inme sonrası 6 aya kadar kanıtlıyoruz. Ek olarak, uzuvların motor fonksiyonunun tarafsız, kantitatif değerlendirmesi için fareler için Merdiven basamağı testi ve bilinen Silindir testi için protokoller sunulmaktadır. Sonuçlar mSU'nun translasyonel etkinliğini vurgulamaktadır. Fokal ESS (fESS), fokal inme açıklarını tespit etmede, iyileşmeyi yakalamada ve inme sonrası 6 aya kadar hassasiyeti korumada bilinen diğer ölçeklere göre üstündür. Merdiven basamağı ve Silindir testleri, ön ve arka bacak motor açıklarını uzun vadede objektif olarak ölçer ve izler. Özetle, mSU, fESS ve motor fonksiyon testlerini entegre etmek, klinik olarak ilgili inme araştırmaları için sağlam bir çerçeve sağlar. Protokollerimiz, fare darbesi araştırmalarında çeviri değerini artırır.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Büyük iskemik inme, tüm dünyada morbidite ve özürlülüğün en önemli nedenlerinden biridir1. Yine de, fare inme araştırması, şimdiye kadar klinik olarak test edilmiş hemen hemen tüm tedavilerde translasyonel bir blokla karşı karşıyadır2. Bu sorunun birden fazla nedeni ve üstesinden gelme çabaları önceki yayın2'de ayrıntılı olarak gözden geçirilmiştir. Bu zorluklar, klinik ilerlemelerin ilgili hayvan modellerine sınırlı entegrasyonundan2 ve inme sonrası eksiklikleri doğru ve hassas bir şekilde tespit etmedeki davranışsal ve nörolojik skorlama sistemlerinin zayıflıklarındankaynaklanmaktadır 2.

Son keşifler3, farelerde orta arter tıkanıklığının (fMCAo) filament modelinin, açık kafatası yaralanması ve travması olan diğer modellere göre önemli translasyonel avantajlara sahip olduğunu desteklemektedir 2,4. Bunun da ötesinde, klinik inme ortamlarının reperfüzyonunu ve mekanik trombektomisini modelleyen tek şey budur 5,6,7. Bununla birlikte, model, inme sonrası 3-7 gün arasında yüksek subakut mortalite ile karşı karşıyadır, bu da büyük felçlerin uzun süreli çalışmalarını yasaklar ve yakın zamana kadar modelin doğal ve aşılmaz eseri olarak kabul edilir. Ek olarak, inme sonrası nörolojik defisitlerin tespiti, özellikle klinisyen olmayanlar veya deneyimsiz araştırmacılar arasında, küçük boyutları nedeniyle farelerde nispeten zor ve önyargılıdır 8,9. Bunu ele almak için, farklı gruplar açıkları tespit etmek için çeşitli ölçekler geliştirmiştir. En çok kullanılan ve bilinen ölçekler arasında 3 noktalı Bederson ölçeği (BS)10, 5 noktalı modifiye Bederson ölçeği (mBS)11, 5 puanlık Longa skoru (LS) (mBS'ye benzer)6, modifiye Nörolojik İnme Ölçeği (mNSS)12,13, 18 puanlık Garcia ölçeği (GS)9 ve daha ayrıntılı DeSimoni14 veya farklı olarak "Neuroscore" (NS) olarak bilinir9, 15 ölçek. Ne yazık ki, bu ölçeklerin bazıları ya çok kabadır ve sadece inmeyi takip eden birkaç akut faz günüyle sınırlıdır (BS, mBS ve LS)8,9 ya da yorumları genel eksiklikler (NS) tarafından bulanıktır.

Bu arka planla, daha önce fareler13 için deneysel vuruş ölçeği (ESS) ile birlikte fare Vuruş Birimi (mSU) destek protokolünü geliştirdik ve doğruladık. mSU'nun mantığı, klinik rutinden (yani insan inme birimleri) elde edilen bilgiyi klinik öncesi inme araştırmalarına uyarlamaktı, ESS ise daha önce var olan ancak "duyarsız" veya gereksiz inme ölçeklerini pratik, rafine edilmiş, hassas ve zaman açısından verimli bir ölçekte kritik bir şekilde konsolide etti. mSU, sağkalımı artırmak için hayvan desteğinin uyarlanmış uygulamasıyla farenin temel klinik parametrelerinin sık ve uyarlanmış olarak izlenmesinden oluşur13.

Gerçekten de, laboratuvarımızdan ve diğerlerinden elde edilen veriler her iki yöntemin de değerini doğrulamaktadır. mSU, klinik temel destekleyici önlemleriçevirir ve insanlardan farelere 7 ilerletir, farelerde fMCAo'nun mortalitesini %60-70'ten %10-15'e önemli ölçüde azaltır13, böylece daha büyük felçlerin çalışmasına izin verir ve o zamandan beri bağımsız laboratuvarlarda etkili bir şekilde uygulanabilir 16,17,18,19. Ek olarak, ESS, fokal (ESS'nin odak bileşeni, fESS) ve genel (ESS'nin genel bileşeni, gESS) inme sonrası eksiklikler ve semptomlar arasında ayrım yapabilir, insan klinik skorlamasını modeller (insanlarda fokal ve genel belirti ve semptomlar arasındaki ayrım), inme lezyonunun boyutuyla doğrusal olarak ilişkilidir ve açıklara uzun vadeli duyarlıdır13,20. Yine de, hem mSU hem de ESS'nin kanıtlanmış değerine ve etkinliğine rağmen, deneyimsiz araştırmacılar için bile net, görselleştirilmiş, standartlaştırılmış talimatların olmaması, mSU uygulaması hakkında birkaç açık soru ve fESS'de fokal eksikliklerin puanlanması konusunda önemli bir öznellik bırakmaktadır.

Bu nedenle, bu makalemiz mSU ve fESS protokolleri için video destekli ve net talimatlar sağlamayı amaçlamaktadır. İnme araştırmacılarının inme çalışmalarının translasyonel verimliliğini artırmalarını, inmeden sonraki ilk 3-10 gün boyunca hayvan kaybını önemli ölçüde azaltmalarını, deney maliyetlerini azaltmalarını ve nihayetinde inmeden sonraki aylar boyunca nörolojik eksiklikleri tekrarlanabilir bir şekilde değerlendirmelerini destekleyeceğine inanıyoruz13. Ek olarak, Merdiven basamağı testi ve Silindir testinin ek kombinasyonu, fMCAo'ya bağlı fokal ekstremite parezisini (ön ve arka ayaklar) kolayca ölçebilir.

mSU ve fESS verimliliğini göstermek için, fMCAo'dan sonra fareler hakkında orta (14 günlük) ve uzun vadeli (6 aylık) veriler sağlıyoruz. On iki haftalık erkek C57Bl / 6J fareleri (n = 31), 12 saatlik bir aydınlık-karanlık döngü periyodu ve peletlenmiş gıda ve suya erişim ile kontrollü sıcaklıkta (22 ± 2 ° C) kullanıldı ve barındırıldı. Fareler sırasıyla 14 gün (n = 10, kohort 1) ve 6 ay (n = 15, kohort 2) boyunca takip edilen iki kohorta ayrıldı. Bu fareler, izofluran anestezisi altında iyi tanımlanmış fMCAo 13,20,21 modeli kullanılarak 60 dakikalık bir serebral iskemiye tabi tutuldu. 6 ay boyunca takip edilen sahte ameliyatlı hayvanlar (n = 6, yukarıdaki iki kohort olarak çalıştırıldı, ancak iskemi indüklenmedi) kontrol olarak görev yaptı. Buprenorfin ameliyat öncesi ve sonrası 3 gün analjezik olarak kullanıldı. Nörolojik skorlamanın bir parçası olarak 6 aylık kohort için Merdiven basamağı ve silindir testleri de yapıldı.

Tüm hayvanlar, stoktan sonraki ilk 14 gün boyunca insancıl uç noktalar için günlük olarak kontrol edildi, şu şekilde tanımlandı: 1) şiddetli hipotermi (<33 ° C) ve / veya hareketsizlik (ör., fESS Test 6'da skor 4 veya gESS'nin "spontan aktivite" testi) "fare İnme Ünitesi" tedavisi ile iyileştirilmedi (yani, pasif ısıtma ve aktif besleme, bkz. 1.4, 1.6, 1.8) bir saat içinde, 2) protokole göre postoperatif analjeziden sonra bile ağrı veya anksiyete davranışı belirtileri (ör. gESS'nin "anksiyete / otomatik davranış" testinde >2 puan).

Bu protokolde, farelerin mSU şeklinde inme sonrası desteği, fMCAo işleminden fare kurtarmadan hemen sonra başlar. Bunun 3 aşaması vardır: faz A (reperfüzyon sonrası 0-48 saat), faz B (>48 saat ve "gerekli aktif desteğin sonuna" kadar, genellikle 10-14. günde, bireysel hayvanın B fazına bağlı olarak) ve faz C (14. günden itibaren). Her bir faza (A, B veya C) ve Risk Sınıflandırma Skoru (RSS) ile değerlendirilen günlük gerçek klinik durumuna göre, her bir hayvana göre uyarlanmış beş önemli müdahalesi (ziyaretler / Risk Sınıflandırma Skoru, besleme, sıvılar, sıcaklık ve yerel dezenfeksiyonlar; aşağıda bkz. 1.1. ila 1.8.) vardır, üç tipik örnekle Ek Şekil 1 ve Tablo 1'e bakınız. mSU için gerekli malzemeler ve araçlar Şekil 1a'da gösterilmiştir ve Malzeme Tablosunda açıklanmıştır. Ayrıca mSU sırasında hayvanların izlenmesi için bir şablon da sağlıyoruz (Ek Dosya 1'e bakınız).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu makalede bildirilen deneyler, deney hayvanlarının kullanımına ilişkin Ulusal ve Avrupa yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiş ve Yunan hükümet komiteleri tarafından onaylanmıştır (Atina, Lisans No "843895_06-09-2022").

1. "Fare Vuruş Birimi" (mSU)

  1. Hayvanın klinik durumunu günlük olarak değerlendirin ("ziyaretler") ve RSS skorunu hesaplayın
    1. Verileri kaydetmek ve izlemek için Ek Dosya 1'i, tercihen hayvanın ameliyatından önce yazdırın.
    2. Her hayvanı standart zaman noktalarında (ziyaretler) klinik olarak değerlendirin: sabahın erken saatlerinde (yaklaşık 08:00'de), öğlen (14:00 ile 16:00 arasında) ve gece geç saatlerde (22:00 - 23:00 civarında).
      NOT: Bu standart ziyaretleri hayvanın takip aşamasına göre uyarlayın: Faz A için günde 2 kez (sabah-gece), Faz B için günde 3 kez ve Faz C için günde bir kez hayvanın durumunu kontrol edin. RSS puanına göre ziyaret sıklığını daha da artırın (bkz. 1.1.6). İş yükünü azaltmak için tercihen >2 kişilik bir ekipte çalışın. Sabah ve gece ziyaretleri başarılı destek, izleme ve mortalitenin azaltılması için çok önemlidir, çünkü farelerin gece (aktif) fazı metabolik ve enerji talepleriniartırır 13,22,23 ve inme sonrası gece mortalitesinin artmasıyla bağlantılıdır.
    3. Sabah ziyareti sırasında fareyi hassas bir standart ölçek kullanarak tartın.
    4. Sabah ziyareti sırasında ventral vücut merkezinin üzerine yerleştirilen temassız bir termometre ile sıcaklığı ölçün. Fareyi sırtıyla tutun ve hareketsiz hale getirin. Okumayı immobilizasyondan sonraki ilk birkaç saniye içinde yapın (bkz. Şekil 1f).
      NOT: Eşlik eden peritonit ile tekrarlanan ölçümlerden sonra potansiyel bağırsak yırtılması nedeniyle rektal termometre kullanmayın.
    5. Farenin genel klinik durumunu (hareketlilik, yaralar, üretra başlığı, reaktivite, kürk, hidrasyon durumu vb.) sabah ziyaretinde her gün 14. güne kadar değerlendirin ve kaydedin.
    6. Ek Şekil 1'de açıklandığı gibi hayvanın ağırlığına, sıcaklığına ve fESS puanına göre puanları toplayarak sabah ziyaretinde RSS puanını hesaplayın. Bir elektronik tablo tablosundaki RSS'nin otomatik olarak hesaplanması için, Tablo 1'de bulunan formülü kullanın ve uyarlayın. İnsancıl uç noktalar varsa, hayvanı kurumsal olarak onaylanmış bir yöntemle ötenazi yapın (yukarıya bakın).
    7. Hem ziyaret sıklığını hem de destek yoğunluğunu günlük olarak RSS skoruna ve hayvanın inme sonrası fazına göre uyarlayın.
      NOT: Faz B, mortalite için en kritik olanıdır. RSS ≥3 için ziyaret sıklığını ve destek yoğunluğunu artırın (tanım ve talimatlar için Tablo 1'e bakın). Hayvan, Faz C'de bir RSS >3 göstermeye devam ederse, Faz B'de olduğu gibi ziyaret edin ve destekleyin. Destek ekibi arasında klinik durumunu tanımlamak için RSS'yi ve genel tanımlayıcıları (iyileşen, stabil, düşük / orta hasta ve kritik hasta gibi) kullanın. 14. günden sonra, hayvan ziyaretlerini yalnızca deneysel protokolün gerektirdiği ziyaretlere düşürün (ör. davranışsal / nörolojik değerlendirmeler için).
  2. Beslenme desteği için jel mamanın hazırlanması
    1. Yaygın gıda peletlerini bir blender kullanarak toz haline getirin (Şekil 1a).
    2. Yiyeceklerin kalori içeriğini artırmak için% 5-10 oranında ticari şeker ekleyin.
    3. Jel benzeri bir sıvı doku oluşturmak için su ekleyin (Şekil 1b).
    4. Bu jel mamayı hem pasif hem de aktif beslenme desteği için kullanın.
      NOT: İsteğe bağlı olarak kullanıma hazır ticari jel mama kullanın. Hazırlanan yiyecekler buzdolabında 2-3 gün kalabilir.
  3. Farelerin pasif beslenme desteği
    1. Bir Petri kabını jel gıda ile doldurun ve kafes zeminine yerleştirin (fareye kolay erişim için jel yem sağlayarak pasif beslenme desteği). Petri kabının yanına 2-3 yiyecek peleti bırakın.
    2. Petri kabını her gün jel yiyeceklerle yenileyin. İlk birkaç gün boyunca, fareler Petri kabını kafes yataklarıyla doldurabilir veya kaplayabilir. Bazıları ondan yemeye başlayacaktır (Şekil 1c).
  4. Aktif beslenme desteği (aktif beslenme)
    NOT: Aktif besleme, Faz B sırasında gerçekleşir. Standart besleme sıklığı günde 3 kezdir ve RSS puanına göre daha fazla zamana uyarlanır (örneğin, günde 4-5 kez). Bazen, sürekli olarak RSS skoru 0-1 olan (yani küçük vuruş) ve kendi başlarına aktif olarak yemek yiyen fareler için frekansı günde 1-2'ye düşürün.
    1. 1 mL şırıngaları jel gıda ile önceden doldurun.
    2. Fareyi, Şekil 1d'de (kırmızı ok ucu) gösterildiği gibi, boynundaki kürkünden nazikçe ama sıkıca kavrayın ve tutun.
    3. Şekil 1d'de kırmızı oklarla gösterildiği gibi farenin yanağını orta parmakla sabitleyin: fareyi sıkıca tutarken, parmağınızı farenin burnuna doğru yanlamasına yanlarına doğru kaydırın. Pozisyonu tut.
    4. Şırınganın ucunu farenin ağzına dişlerinin arasına yerleştirin ve ucunu yanağının iç tarafına doğru yönlendirin (kırmızı ok, Şekil 1e).
    5. Her seferinde yaklaşık 40-50 μL jel gıda verin (bir ağız dolusu).
    6. Fareyi yavaşça kafes ızgarasına geri koyun. Çiğneme için zaman tanıyın.
    7. Her fare 1-1.5 mL jel yiyecek yiyene kadar 1-2 dakika sonra beslemeyi tekrarlayın.
      NOT: Çalışma başına 5-10 fare besleyin (1-2 kafes); Diğerleri, her fareye bir ağız dolusu verilirken jel yiyecekleri yer ve yutarlar. Bu işlem fareler üzerinde herhangi bir stres oluşturmaz. Bazı hayvanların sonunda kendilerini kavramak ve beslenmek için konumlandırdıkları da gözlemlenmiştir.
  5. Normal tuzlu su takviyesi
    1. Sabah ziyareti sırasında fareyi tartın (bkz. 1.1.2 ve 1.1.3).
    2. Değerleri çıkararak önceki ölçüme kıyasla kilo kaybını/kazancını hesaplayın.
    3. Kilo açığını (gram cinsinden) mL normal salin (deri altı) ile tamamlayın.
      NOT: Her ne pahasına olursa olsun aşırı sıvı yüklenmesinden ve ödemden kaçının. Doz başına 1-2 mL'yi ve günde 3-4 mL sıvıyı aşmayın. fMCAo'dan 36 saat sonra başlayın.
  6. Glikoz takviyesi
    1. Farenin hesaplanan RSS puanını ve genel hareketini kontrol edin.
    2. RSS >3 ise ve fare beraberinde hipotermi (<34 ° C) veya immobilizasyon / bradikinezi belirtileri gösteriyorsa deri altına 0,5 - 1 mL% 5 glikoz enjekte edin. Tercihen sadece gece ziyareti sırasında enjekte edin.
      NOT: Her ne pahasına olursa olsun inme sonrası hiperglisemiden kaçının. İnme sonrası hiperglisemi toksiktir7. Bu nedenle, sadece aktif beslenmeden sonra ve ciddi klinik durum durumlarında veya gece aktivitesi sırasında hipoglisemiyi önlemek için glikoz takviyesi yapın. Aktif beslenme (bkz. 1.4), daha düzgün ve daha uzun süreli enerji desteği sağladığı ve klinik kılavuzları tercüme ettiği için ana destek ölçümü olmalıdır 7. 3. Günden önce glikoz takviyesi yapmayın.
  7. Sıcaklık yönetimi (pasif)
    1. Hayvanın yüzey vücut sıcaklığını başlangıçta ameliyat öncesi ve ameliyat sonrası her ziyarette ölçün (Şekil 1a). Şekil 1f'de gösterildiği ve 1.1.4'te açıklandığı gibi ölçün. Değerleri not edin.
      NOT: Farelerde hipotermi, vücut sıcaklığının <35 °C 24,25 olarak tanımlanır. Önceki veriler13, 34 °C'nin altındaki herhangi bir sıcaklığın inme sonrası destek için bir uyarı işareti olduğunu göstermektedir (aşağıya bakınız).
    2. 33 ila 34 °C arasında hipotermi gözlendiğinde, fareyi vücut sıcaklığına >34 °C) ulaşana kadar bir ısıtma plakası (veya başka bir pasif ısıtma cihazı) üzerindeki bir kafeste pasif olarak ısıtın. Hayvanın aktif ısı üretimi için enerji sağlamak üzere fareyi aktif olarak besleyin (daha uzun süreli enerji kaynağı).
      NOT: Hayvanı 1 ila birkaç saat pasif ısıtmada tutun. Her ne pahasına olursa olsun pasif hipertermiden kaçının.
    3. Hipotermi gözlendiğinde, <33 °C, deri altına ek glikoz uygulaması ile desteği artırın (hızlı ancak kısa süreli enerji kaynağı; yukarıdaki 1.6'ya bakın).
  8. Genital organların ve/veya boyun yarasının temizlenmesi (lokal "dezenfeksiyonlar")
    NOT: Bazen, bir yara ayrışması veya üretral tıkaç gözlenebilir. Yara ayrışması nadirdir. Üretra tıkacı, fare genital organlarının ucunda bulunan sert bir tıkaçtır (Şekil 1g) ve özellikle inme şiddeti daha yüksek olan hayvanlarda daha sık görülür. Tıkaç üretrayı tıkadığında, üriner obstrüktif sendrom ortaya çıkabilir ve morbidite ve ölüme yol açabilir26. Bu nedenle iyi bir şekilde temizlenmelidir.
    1. Varsa, çıkarılmasını kolaylaştırmak için üretral tıkacı normal tuzlu su ile ıslatın.
    2. Her hayvan kontrolünde/ziyaretinde üretral tıkacı küçük bir çubukla veya basit bir cımbızla nazikçe çıkarın. Üretrayı antiseptik bir solüsyonla ıslatılmış bir gauge veya çubuk kullanarak dezenfekte edin.
    3. Bir yara ayrışması varsa, herhangi bir yaygın cerrahi antiseptik solüsyonla (örneğin, Octanisept) lokal olarak dezenfekte edin ve tercihen 5/0 ipek sütür kullanarak yarayı rutin olarak dikin.

2. Deneysel İnme Ölçeğinin (fESS) odak bileşeni

  1. Test alanını hazırlayın
    1. Dış uyaranları (optik veya kokular) gidermek için bir tezgahı %70 alkolle temizleyin ve Şekil 2a'da gösterildiği gibi test malzemelerini hazırlayın.
    2. Ek dosya 2 olarak verilen ESS puanlama sayfasını yazdırın ve testleri tek tek takip edin.
  2. Ön bacak parezi (Test 1)
    1. Fareyi kuyruk tabanından nazikçe kaldırın ve tutun.
    2. Fare hareket ettikçe ön ayakların simetrik öne uzamasını ve simetrik hareketliliğini görsel olarak kontrol edin ve değerlendirin (Şekil 2c).
    3. Görsel bulgulara bağlı olarak skor şu şekildedir: Ön ayakların normal, simetrik ekstansiyonu ve hareketi için 0; 1 hafif fleksiyon ve / veya kontralezyonel ekstremitenin hareketinin azalması veya ekstremite sertliği olarak tanımlanan "hafif asimetri" için; 2 kontralezyonel ekstremitenin "belirgin fleksiyonu" için; 3 kontralezyonel uzuvun gövdeye yapışması için; Vücut veya uzuv hareketi olmaması için 4 puan.
      NOT: Test, kontralezyonel ön ayağın parezisini tespit eder. Aynı zamanda BS, LS, mNSS ve NS ölçeklerinin bir parçasıdır. Hayvanın kaçış manevraları nedeniyle skor 1'i tanımlamak zor olabilir.
  3. Arka bacak parezi (Test 2)
    1. Test 1'de anlatıldığı gibi fareyi kuyruk tabanından tutmaya devam edin.
    2. Arka ayakların ve ayak parmaklarının simetrik uzamasını ve hareketini görsel olarak kontrol edin (Şekil 2c).
    3. Bulgulara bağlı olarak aşağıdaki gibi skor: Normal, simetrik pozisyon/ekstansiyon ve arka bacakların ve ayak parmaklarının hareketi için 0; 1 belirgin asimetri için, kontralateral (sağ) arka bacağın hareketi ve asimetrik pozisyonu/ekstansiyonu önemli ölçüde azaldığında (Şekil 2d).
      NOT: Test, kontralezyonel arka bacağın parezisini tespit eder. Aynı zamanda mNSS ölçeğinin bir parçasıdır. Bu testin doğru bir şekilde puan alması zor olabilir.
  4. Gövde simetrisi (Test 3)
    1. Fareyi kuyruk tabanından tutmaya devam edin (2.3'ü takip edin.) ve gövde hareketlerini değerlendirin.
    2. Bulgulara bağlı olarak aşağıdaki gibi skor: normal, gövde fleksiyonu yok veya her iki tarafa simetrik hafif gövde fleksiyonu/hareketi ("kaçış" manevrası olarak) için 0; İşaretli (>30°) baş/gövde fleksiyonu için 1, ağırlıklı olarak kontralezyonel (sağa), tutulduktan sonraki ilk 10 saniye içinde.
      NOT: Test, tek taraflı motor lezyonlarında asimetriyi tespit eder. Aynı zamanda mNSS puanlamasının bir parçasıdır.
  5. Daire çizme davranışı (Test 4)
    1. Fareyi nazikçe düz bir yüzeye yerleştirin ve en az 1 dakika serbestçe hareket etmesine izin verin. Hareket modelini gözlemleyin.
    2. Bulgulara bağlı olarak aşağıdaki gibi puan: Daire davranışı olmadan keşifçi, canlı, doğrusal hareket için 0; 1 kapalı çevrelerde değil, bir tarafa dönme eğilimi için; 2 kapalı dairelerde bir tarafa tutarsız hareket için; 3 kapalı dairelerde bir tarafa sürekli hareket için; 4 Dönmek, sallanmak veya hiç hareket etmemek için.
      NOT: Test, sensorimotor ve uzamsal navigasyon eksikliklerini tespit eder. Aynı zamanda NS'nin bir parçasıdır.
  6. Vücut simetrisi (Test 5)
    1. Test 4'ten devam edin ve farenin düz yüzey üzerinde serbestçe hareket etmesine izin verin. Burundan kuyruğa eksenini gözlemleyin.
    2. Bulgulara bağlı olarak aşağıdaki gibi skor: Benchten yükseltilmiş gövde ve düz kuyruk ile normal duruş için 0; 1 "hafif asimetri" için, hafif gövde bir tarafa eğilirse ve distal olarak bükülmüş kuyruk ise; 2 "orta derecede asimetri" için: eğer barizse, vücut bükülmesi veya proksimal bükülmüş kuyruk ve/veya uzuvlar vücuttan dışarı doğru uzanarak kontralezyonel tarafa eğilme; 3 "belirgin asimetri" için, belirgin vücut bükülmesi varsa, bir taraf sürekli olarak bankta uzanır ve kuyruk açıkça proksimal olarak bükülür (skor 2'den fazla); 4 "Aşırı asimetri" için Vücut bükülmüşse, bir taraf sürekli olarak bankta yatar ve kuyruk oldukça bükülür.
      NOT: Sensorimotor tek taraflı trunkal ve tail defisitlerini tespit eder. Aynı zamanda NS ölçeğinin bir parçasıdır.
  7. Yürüyüş değerlendirmesi (Test 6)
    1. Test 5'ten devam edin ve farenin düz yüzey üzerinde serbestçe hareket etmesine izin verin. Şimdi yürüyüşünü gözlemleyin ve parezi, uzuv sertliği, spastik yürüyüş, uzuv gibi yürüme motor eksikliklerini kontrol edin.
    2. Bulgulara bağlı olarak aşağıdaki gibi puanlayın: Vücut altında "gizli" hareket eden esnek uzuvlarla keşifçi, simetrik ve hızlı ise normal yürüyüş için 0; 1 serbestçe hareket eden bir farenin topallamadan sert, esnek olmayan ve daha yavaş yürüyüşü için; 2 asimetrik (sol-sağ) hareketlerle net topallama için; 3 hafifçe ittikten sonra titreme, sürüklenme veya düşme için; 4 Spontan yürüyüş yapmamak için (hafif itme ile uyarıldığında 3 adımdan fazla yürümez).
      NOT: Kombine yürüyüş açıklarını tespit eder. Aynı zamanda NS'nin bir parçasıdır.
  8. Zorunlu daire içi dolaşım (Test 7)
    1. Fareyi yüzeyden kaldırmak için kuyruk tabanından tutun ve sadece ön ayakları üzerinde yürümesine izin verin. Hareketini gözlemleyin.
    2. Bulgulara bağlı olarak aşağıdaki gibi puan: Normal doğrusal hareket için 0; 1 bir tarafa dönme eğilimi için; 2 kapalı dairelerde bir tarafa dönmek için; 3 beceriksiz hareketlerle bir tarafa dönüyorsa veya yavaş yavaş bir şekilde bir daireyi tamamlayamıyorsa; 4 İlerleme yoksa ve bagajın ön kısmı bankta bulunursa.
      NOT: Test, daire çizme davranışı testini tamamlar (test 4, bkz. 2.5). Muhtemelen sensorimotor ve mekansal eksiklikleri tespit eder. Aynı zamanda NS puanlama sisteminin bir parçasıdır.
  9. Yanal kuvvetlere karşı duruş (Test 8)
    1. Fareyi, kuyruk burun ekseni (uzunlamasına) sagital avuç içi eksenine paralel olacak şekilde avuç içine yerleştirin.
    2. Uzunlamasına eksenine dik kuvvetler oluşturmak için fareyi sabit bir hızda ileri ve geri doğru sallayın.
      NOT: Bu, fareyi dik konumunu korumaya ve salınım sırasında yanal kuvvetlere karşı dengede kalmaya zorlar. Vücudu normalde avuç içi veya parmaklarla temas etmez.
    3. Görseli gözlemleyin ve farenin sol-sağ taraflarının avuç içi temaslarını, salınıma karşı dengede dururken hissedin. Herhangi bir asimetrik düşme olup olmadığını kontrol edin, avuç içine dokunun veya yanal zayıflık belirtisi olup olmadığını kontrol edin.
    4. Bulgulara bağlı olarak aşağıdaki gibi puanlayın: Fare, sırtı avuç içine paralel olacak şekilde normal dik pozisyonda duruyorsa ve avuç içine yoğun bir şekilde dokunmadan sallanmaya karşı denge sağlayabiliyorsa 0; 1 fare, stabilite kazanmak için salınım sırasında vücudunu düzleştirirse; 2 Farenin bir kısmı sallanma sırasında avuç içine kısa bir süre uzanır veya dokunursa; 3 fare bir tarafta yatarsa, dik pozisyonu zar zor geri kazanabilir; 4 Fare yüzüstü pozisyonda yatarsa, dik pozisyonu geri kazanamaz.
      NOT: Test, yanal ivmelenmeye karşı postüral eksiklikleri tespit eder, ancak puanlaması subjektif olabilir. Aynı zamanda mNSS, NS'nin bir parçasıdır.
  10. Ön uzuv hedefli yerleştirme (Test 9)
    1. Fareyi sırtından veya kuyruk tabanından tutun. "Ulaşılacak hedef" olarak işlev gören ışına dik olarak yönlendirin. Simetrik "uzanma" ve kavrama için gözlemleyin.
    2. Işını sabit bir şekilde kavradıktan sonra, yavaşça çekin ve ön ayakların simetrik "serbest kalmasını" gözlemleyin.
    3. Bulgulara bağlı olarak aşağıdaki gibi puanlayın: simetrik "uzanma", kavrama ve "bırakma" için 0; 1 "Uzanma" ve/veya "serbest bırakma" asimetrisindeki herhangi bir asimetri için, kontralezyonel ön ayak zayıflığının göstergesidir.
  11. Ön ayakların sensorimotor açığı (Test 10)
    1. Fareyi sırtından sıkıca tutun ve ventral olarak yüzünüzü çevirin (videoya veya Şekil 1e'ye bakın).
    2. Ön ayakları kör bir açıdan ince bir uçla (örneğin tahta kürdan) art arda uyarın. Ön pençenin tepkisini gözlemleyin.
    3. Bulgulara bağlı olarak aşağıdaki gibi puanlayın: Her iki taraftaki normal, hızlı kavrama hareketi için 0; 1 eksik veya açıkça gecikmiş kontralezyonel kavrama için.
      NOT: Hem 2.10 hem de 2.11, ön ayak ince sensorimotor eksiklikleri için test eder. Bunlar aynı zamanda mNSS'nin bir parçasıdır.
  12. Kiriş yürüyüşü (Test 11)
    1. Yerden 1-1,5 m yükseklikte iki yükseltilmiş yüzeyi (örn. banklar, masalar) birbirine bağlamak için 1 m uzunluğunda bir ahşap kiriş (Malzeme Tablosu) yerleştirin. Titreşimleri veya dengesizliği önlemek için kirişin kenarlarını sabitleyin.
    2. Fareyi, burun-kuyruk ekseni kirişe paralel olacak şekilde kirişin ortasına yerleştirin (Şekil 2e). Kiriş üzerinde dengeye veya serbest yürüyüşe izin verin. Dengesini veya uzuv parezisini ve düşmelerini gözlemleyin.
      NOT: Fare, puanlamadan önce ışın üzerinde denge kazanmalıdır. Düşerse korumak için hayvanın altında (yaklaşık 15-20 cm mesafede) kalın bir eldiven tutun.
    3. Bulgulara bağlı olarak aşağıdaki gibi puanlayın: Fare dengede kalır ve ışının bir tarafına doğru sabit bir duruşla yürürse 0; 1 kirişin kenarını kavrar ve üzerinde yürümezse; 2 bir uzuv kirişten düşerse; 3 kirişten iki uzuv düşerse; 4 fare ışın üzerinde dengede durmaya çalışır ancak düşerse (40 saniye sonra); 5 20-40 saniye arasında düşerse; Kirişi dengelemeye veya asmaya teşebbüs etmeden düşerse 6 puan (<20s).
      NOT: Test, ön ayakların, arka ayakların ve gövdenin birleşik motor eksikliklerini tespit eder. Aynı zamanda mNSS ölçeğinin bir parçasıdır.
  13. Bıyık hissi (Test 12)
    1. Fareyi açık bir tezgah üstüne yerleştirin (test 4 ve 5'te olduğu gibi). Konaklama için biraz zaman tanıyın.
    2. Sol ve sağ bıyıklarını ince, uzun uçlu bir pamuklu çubukla "kör açıdan" art arda uyarın. Başın stimülasyona doğru hızlı bir dönüş tepkisi olup olmadığını gözlemleyin.
    3. Bulgulara bağlı olarak skor aşağıdaki gibidir: stimülasyon üzerine normal, hızlı baş dönüşü için 0, iki taraflı; 1 stimülasyon üzerine daha yavaş kontralezyonel yanıt için; 2 kontralezyonel yanıt yok (dönüş yok); 3 eksik kontralezyonel ve daha yavaş ipsilezyonel yanıt için; İki taraflı eksik yanıt için 4.
      NOT: Pamuğun görsel olarak algılanmasından kaçının çünkü bu, yanlış bir şekilde ipsilateral bir kafa dönüşüne neden olur. Test, yalnızca fare bıyık stimülasyonuna "şaşırdığında" teknik olarak doğrudur. Test aynı zamanda NS'nin bir parçasıdır ve bıyıkların (varil korteksi) sensorimotor eksikliklerini tespit eder.
  14. Tırmanma (Test 13)
    1. Kauçuk kaplı, 45° açılı, eğimli bir yüzey kullanın (Şekil 2a) ve fareyi ortasına yerleştirin. Farenin tırmanma çabasını gözlemleyin.
    2. Bulgulara bağlı olarak aşağıdaki gibi puanlayın: Fare hızlı ve zahmetsizce yüzeyin üstüne tırmanırsa 0 (normal); 1 zorlanma ile tırmanırsa, uzuv zayıflığı ile; 2 kaymadan veya tırmanmadan eğime tutunuyorsa; 3 düşmeyi önleme çabasına rağmen eğimden aşağı kayarsa; 4 Düşmeyi önlemek için çaba sarf etmeden kayarsa.
      NOT: Test aynı zamanda NS'nin bir parçasıdır ve genel motor gücünü tespit eder.
  15. 1'den 13'e kadar olan tüm testlerden alınan puanları toplayarak fESS puanını hesaplayın
    NOT: 0 fESS puanı normal bir fareyi gösterir, maksimum puan 42'dir. Striatal ve kortikal lezyonları olan büyük enfarktlar genellikle >7-9 skorlara neden olur. Normal davranış varyasyonlarına uyum sağlamak ve yanlış pozitif fESS skorlamasını azaltmak için felç geçirmiş fareleri değerlendirmeye başlamadan önce birkaç normal fareyi inceleyin ve puanlayın. Tüm deney boyunca puanlamanın standardizasyonu için sağlanan video protokolünü sürekli olarak kullanın.

3. ESS'nin (gESS) genel bileşeni

NOT: Genellikle fMCAo'dan sonraki ilk 1-2 hafta boyunca mevcut olan iltihaplanma veya enfeksiyon gibi "genel fare hastalığı" belirtilerini tespit etmek için gESS'yi değerlendirin. Ek dosya 2'deki puanlama sayfasını kullanın. gESS'yi tercihen fESS'yi tamamladıktan sonra değerlendirin.

  1. Fareyi düz bir yüzeye (bank) yerleştirin ve 2.5'teki gibi serbestçe hareket etmesini sağlayın. Aşağıdaki puanları sırayla değerlendirin.
  2. Kürkünü gözlemleyin. gESS puanlama sayfasına göre puan verin (0-2 puanlar, Ek dosya 2'ye bakınız).
  3. Farenin irkilme tepkisini kontrol edin: Rahatladığında kör bir açıdan ani bir alkışlama ile fareyi şaşırtın. Farenin kulaklarının reaksiyonunu gESS puanlama sayfasına göre kontrol edin ve puanlayın (0-2 puanları, bkz. Ek dosya 2).
  4. Rahatlamış farenin gözlerini görsel olarak değerlendirin: açık/kapalı gözler veya mukus varlığını kontrol edin. gESS puanlama sayfasına göre puan verin (0-4 puanlar, Ek dosya 2'ye bakınız).
  5. Farenin genel spontan aktivitesini ve uyanıklığını gözlemleyin. gESS puanlama sayfasına göre puan verin (0-4 puanlar, Ek dosya 2'ye bakınız).
  6. Herhangi bir işlem sırasında herhangi bir kaygı, aşırı uyarılabilirlik, saldırganlık veya ekseni boyunca dönme varlığı için farenin genel spontan davranışını gözlemleyin. gESS puanlama sayfasına göre puan verin (0-4 puanlar, Ek dosya 2'ye bakınız).
  7. Yukarıdaki tüm adımların puanlarını toplayarak gESS puanını hesaplayın (gözlemsel puanlama, 3.2. ila 3.6. adımlar).
    NOT: gESS skoru, inme lezyonlarının neden olduğu fokal eksiklikleri tespit etmez ve daha önce gösterildiği gibi mSU'dan etkilenmez 13. Tüm testler NS ölçeği 9,15'ten uyarlanmıştır.

4. Silindir Testi ile ön ayak eksikliklerinin ölçülmesi

NOT: Silindir testi daha önce 9,15,27 numaralı maddelerde açıklanmıştır ve burada ayrıntılı olarak açıklanmayacaktır. Silindir testi, ön ayakların eksikliklerini tarafsız bir şekilde ölçen bağımsız bir davranış testidir (bkz. 4.2).

  1. Burada verilen talimatları izleyerek testi çalıştırın15. Videoları çekin ve 15'teki gibi analiz edin. Duvarlara sağ ve sol ilk uzuv temasını ölçün. Şekil 3a,b, kurulumun resimlerini göstermektedir.
  2. Kontralezyonel (sağ) parezi nedeniyle uzuv kullanımının lateralizasyonunu % yüzde olarak hesaplayın. Şu formülü kullanın: Sol adımlar için % tercih = [(sol - sağ) ilk kişiler / (sağ + sol) kişiler] x 100.
    NOT: Bir vuruş oluşturmadan önce her fare için bir temel silindir testi çalıştırın. Her deney planına göre zaman noktalarında testler yapın.

5. Merdiven basamağı Testi ile ön ve arka bacak eksikliklerinin ölçülmesi

NOT: Fareler için aparatı Pleksiglastan yapın ( Şekil 3c'de gösterilmiştir): 20 cm yüksekliğinde duvarları olan 1 m uzunluğunda bir koridor, 15 mm'lik düzenli aralıklarla yerleştirilmiş plastik basamaklar (3 mm çapında) (Şekil 3c1) ve distal uçta bir "sığınak" kutusu. Tanıdık olması için hayvan yataklarını sığınma kutusuna koyun ve ödül olarak biraz yiyecek peletleri veya fıstık ezmesi koyun. Koridorun genişliği 10 cm olmalı ve yerden yaklaşık 30 cm yükseltilmelidir.

  1. Fareleri, deneyin taban çizgisinden 1-3 gün önce cihaz üzerinde eğitin. Eğitimi 5.1.1 ile 5.1.4 arasındaki adımlarda olduğu gibi çalıştırın.
    NOT: Hayvanları sabit hızda, basamaklı koridorda durmadan, dönmeden veya keşif davranışı olmadan normal bir yürüyüşe alıştırmak için eğitim gereklidir. Arka arkaya 2 gün (2 seans) egzersiz yapın. Her antrenman seansı 3 koşudan oluşur (koşu = tüm koridor boyunca sığınma kutusuna doğru tek bir yürüyüş). Takip için temel verilerin toplanması gereklidir.
    1. Kokuları ve farenin "keşfedici" dikkat dağıtıcı unsurlarını/duraklarını önlemek için her çalıştırmadan önce basamakları ve duvarları %70 alkolle temizleyin.
    2. Bir koşuya başlamak için fareyi merdiven basamağı koridorunun başına, sığınma kutusuna bakacak şekilde konumlandırın. Farenin koridorun sonundaki sığınma kutusuna doğru serbestçe yürümesine izin verin. Hayvanı yürümeye zorlamayın.
      NOT: Antrenman sırasındaki koşular normalde süre ve yürüyüş şekli açısından oldukça değişkendir. Eğitimin amacı, genellikle <10 s içinde, durmadan/dönüş yapmadan, sığınma kutusuna doğru istikrarlı bir yürüyüştür ve bu genellikle ikinci eğitim gününün sonunda elde edilir. Uygun eğitimin dikkatini dağıtacak stres indüksiyonunu önlemek için hayvanı her zaman nazikçe tutun. Hayvanları koridordan çıkarın ve koridorda kalırlarsa koşuyu yeniden yapın ve alışkanlıktan kaçınmak için >1 dakika boyunca yerel olarak keşfedin.
    3. 1. eğitim çalışmasını gerçekleştirin. 1. koşudan sonra hayvanı sığınma kutusunda 5 dakika dinlendirin.
      NOT: Bu uzun dinlenme süresi, farenin sığınma kutusunu tanımasına ve onu ulaşılması gereken bir "dinlenme/ödüllendirme" hedefi olarak algılamasına olanak tanır. Sığınma kutusunun "ödüllendirici bir algısını" elde etmek, başarılı koşular için çok önemlidir.
    4. Fareyi sığınma kutusundan çıkarın ve 5.1.2'deki gibi ikinci ve üçüncü eğitim çalıştırmalarını gerçekleştirin. Alışkanlığı önlemek için bu koşuların sonunda (30-60 s) sığınma kutusunda daha kısa dinlenme süresine izin verin.
      NOT: Eğitim 2. gün tamamlanmaktadır. 2. günde, hemen hemen tüm hayvanlar koridorda sabit bir hızda yürümeyi öğrenir. Öğrenmiyorlarsa hayvanları daha fazla deneyden dışlamayı düşünün.
  2. Deneyi eğitimli fareler üzerinde çalıştırın. Fareleri, deneyin ve taban çizgisinin tüm zaman noktaları boyunca her seferinde 2 çalıştırma için test edin.
    1. Çalıştırmaları adım 5.1.1 ve 5.1.2'de açıklandığı gibi gerçekleştirin. Sığınma kutusundaki 5 çalışma arasında en fazla 2 dakika dinlenme süresi tanıyın.
    2. Hayvanların videolarını (verileri) belirli bir mesafeden hafif ventral ve "kör" bir açıyla yakalamak için bir akıllı telefon (veya eşdeğer kamera) ve bir "selfie çubuğu" kullanın ( Şekil 3c2'de gösterildiği gibi). Hayvan koridorda yürürken uzuvları yakaladığınızdan emin olun. Koşu sırasında farenin dikkatini görsel olarak dağıtmayın ve koşusu sırasında uzuvlarını takip edin (Şekil 3c2).
    3. Her iki çalıştırmayı da kaydedin, ancak ikinci çalıştırmadaki verileri kullanın ve analiz edin.
    4. Her bir uzuv (sol/sağ, ön/arka bacak) için basamaklar arasındaki hata adımlarının (düşme) sayısını ölçün (Şekil 3c3), videoyu ağır çekim seçeneklerine sahip herhangi bir medya oynatıcı yazılımı kullanarak inceleyin. Ön ve arka ayaklar için ayrı ayrı sağ ve sol kol arıza adımları arasındaki mutlak veya % farkı hesaplayın.
      NOT: İkinci çalıştırma daha güvenilir sonuçlar verir. Sağlıklı bir fare, ikinci çalışması sırasında genellikle uzuv başına (sağ veya sol) 0-1 keyfi hata adımına sahiptir, bu da normalde 0 ±1'lik bir fark aralığı verir. İnme geçirmiş bir fare, sağ (kontralezyonel) paretik uzvu (ön veya arka bacak) ile hata adımları atacak ve bu da pozitif bir "sağa doğru" yanallaşma ile sonuçlanacaktır. Şiddetli şekilde inme geçirmiş bir hayvan, inmeden sonraki ilk 7-10 gün boyunca daha yavaş olabilir veya koşuyu tamamlayamayabilir, ancak daha sonra uygun koşular elde edecek ve ciddi eksiklikler gösterecektir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

mSU, yukarıda açıklandığı gibi, fMCAo işleminden sonra başlar. fMCAo stroke ve sham'ın iki bağımsız fare kohortundaki temsili sonuçlarımız (Şekil 4a), özellikle 3. ve 10. günler arasındaki kritik dönemde daha önce kanıtlanmış mSU'nun değerini doğrulamaktadır13. Kohortlarımızda, inme patofizyolojisinin bir parçası olarak Kohort 1'in 3/15'inde (inme, 6 aylık takip), Kohort 2'nin 2/10'unda (inme, 14 günlük takip) ve sahte ameliyatlı hayvanlarda (Şeki...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mevcut protokol, fMCAo model13 tarafından büyük bölgesel vuruşlara maruz kalan farelerde 3-10. günler arasındaki artefakt mortalitesini azaltmak için tasarlanmış mSU destek protokolü için kapsamlı bir kılavuzdur. Ek olarak, mevcut protokol, inme sonrası farelerde nörolojik fokal skorlamanın genişletilmiş öznelliğini ve yanlılığını azaltmak için ESS ölçeğinin (fESS) odak bileşeni için standartlaştırılmış bir video kılavuzu içerir. Bunun yanı sıra, uzun süreli (6 ay...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bildirilecek açıklama yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Çalışmanın bazı bölümlerinde değerli cerrahi destek için Nikolaos Plakopitis ve Ioannis Tatsidis'e teşekkür ederiz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Araçlar< / güçlü>
% 5 Dekstroz çözeltisi VIOSER S.Ana (geçerli değil)Herhangi bir genericon
Temassız Dijital TermometreAVRONYTC20095Any genericon
Dijital ağırlık ölçeğiKERN & Sohn GmbhFCB6K1Herhangi bir genericon
Gıda peletleriMucedola srlnaHerhangi bir cins, hayvan tesisinizin normal mamasını kullanın
Isıtma PlakasıPhotaxnaPhotax bulaşık ısıtıcısı 2
Sıvı antiseptikSchü lke & Mayr GmbHnaOctenisept®
Normal gıda blenderinaPelet toz haline getirme için. Herhangi bir genericon
Normal tuzlusu DEMO SAnaSodyum Klorür Enjeksiyonu %0,9
Pinsetter ve pamuk tomurcuklarınaHerhangi bir genericon
ŞekernaHerhangi bir genericon
Şırınga (1ml) 27 gauge iğneile naHerhangi bir jenerik. Gıda uygulaması (iğnesiz) ve deri altı sıvı uygulaması (iğne ile) için
< güçlü > ESS için aletler< / güçlü >
45 derece açılı yüzey  inşa etnaTırmanma testleri için kauçuk yüzeyli, pleksiglas veya başka bir malzemeden yapılmış,
pamuklu çubuk Herhangi bir genericonnaticari kulak pamuğu, pamuk ucunu uzun ve inceltilmiş
kenarları keskinleştirilmiş ahşap çubukyapın Herhangi bir genericonna., örneğin kürdan
Uzun kiriş inşa etnaBoyutlar: 1 x 1 x1cm, yaklaşık 100cm uzunluğunda, ahşap. Kiriş yürüme testi için iki masa kenarı arasına yerleştirin
Kalın eldiven Kirişten düşerken hayvan travmasını önlemek içinherhangi bir genericonna

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Donnan, G. A., Fisher, M., Macleod, M., Davis, S. M. Stroke. Lancet. 371 (9624), 1612-1623 (2008).
  2. Lourbopoulos, A., et al. Translational block in stroke: A constructive and "out-of-the-box" reappraisal. Front Neurosci. 15, 652403(2021).
  3. Cai, R., et al. Panoptic imaging of transparent mice reveals whole-body neuronal projections and skull-meninges connections. Nat Neurosci. 22 (2), 317-327 (2019).
  4. Fluri, F., Schuhmann, M. K., Kleinschnitz, C. Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research. Drug Des Devel Ther. 9, 3445-3454 (2015).
  5. Clark, W. M., Lessov, N. S., Dixon, M. P., Eckenstein, F. Monofilament intraluminal middle cerebral artery occlusion in the mouse. Neurol Res. 19 (6), 641-648 (1997).
  6. Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).
  7. Powers, W. J., et al. Guidelines for the early management of patients with acute ischemic stroke: 2019 update to the 2018 guidelines for the early management of acute ischemic stroke: A guideline for healthcare professionals from the american heart association/american stroke association. Stroke. 50 (12), e344-e418 (2019).
  8. Schaar, K. L., Brenneman, M. M., Savitz, S. I. Functional assessments in the rodent stroke model. Exp Transl Stroke Med. 2 (1), 13(2010).
  9. Ruan, J., Yao, Y. Behavioral tests in rodent models of stroke. Brain Hemorrhages. 1 (4), 171-184 (2020).
  10. Bederson, J. B., et al. Rat middle cerebral artery occlusion: Evaluation of the model and development of a neurologic examination. Stroke. 17 (3), 472-476 (1986).
  11. Bieber, M., et al. Validity and reliability of neurological scores in mice exposed to middle cerebral artery occlusion. Stroke. 50 (10), 2875-2882 (2019).
  12. Lourbopoulos, A., Karacostas, D., Artemis, N., Milonas, I., Grigoriadis, N. Effectiveness of a new modified intraluminal suture for temporary middle cerebral artery occlusion in rats of various weight. J Neurosci Methods. 173 (2), 225-234 (2008).
  13. Lourbopoulos, A., et al. Inadequate food and water intake determine mortality following stroke in mice. J Cereb Blood Flow Metab. 37 (6), 2084-2097 (2017).
  14. De Simoni, M. G., et al. Neuroprotection by complement (c1) inhibitor in mouse transient brain ischemia. J Cereb Blood Flow Metab. 23 (2), 232-239 (2003).
  15. Llovera, G., Roth, S., Plesnila, N., Veltkamp, R., Liesz, A. Modeling stroke in mice: Permanent coagulation of the distal middle cerebral artery. J Vis Exp. (89), e51729(2014).
  16. Dzirkale, Z., et al. Long-term behavioural alterations in mice following transient cerebral ischemia. Behav Brain Res. 452, 114589(2023).
  17. Kolabas, Z. I., et al. Distinct molecular profiles of skull bone marrow in health and neurological disorders. Cell. 186 (17), 3706-3725.e29 (2023).
  18. Kestner, R. I., et al. Gene expression dynamics at the neurovascular unit during early regeneration after cerebral ischemia/reperfusion injury in mice. Front Neurosci. 14, 280(2020).
  19. Pinto, R., et al. Bridging the transient intraluminal stroke preclinical model to clinical practice: From improved surgical procedures to a workflow of functional tests. Front Neurol. 13, 846735(2022).
  20. Damigos, G., et al. Machine learning based analysis of stroke lesions on mouse tissue sections. J Cereb Blood Flow Metab. 42 (8), 1463-1477 (2022).
  21. Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model. J Vis Exp. (47), (2011).
  22. Bowman, T. A., et al. Acyl coa synthetase 5 (acsl5) ablation in mice increases energy expenditure and insulin sensitivity and delays fat absorption. Mol Metab. 5 (3), 210-220 (2016).
  23. John, L. M., et al. Housing-temperature reveals energy intake counter-balances energy expenditure in normal-weight, but not diet-induced obese, male mice. Commun Biol. 5 (1), 946(2022).
  24. Tashiro, M., Hosokawa, Y., Amao, H., Tohei, A. Duration of thermal support for preventing hypothermia induced by anesthesia with medetomidine-midazolam-butorphanol in mice. J Vet Med Sci. 82 (12), 1757-1762 (2020).
  25. Taylor, D. K. Study of two devices used to maintain normothermia in rats and mice during general anesthesia. J Am Assoc Lab Anim Sci. 46 (5), 37-41 (2007).
  26. Bendele, A. M. Urinary system. Jones, T. C., Hard, G. C., Mohr, U. , Springer Berlin Heidelberg. Berlin, Heidelberg. 456-462 (1998).
  27. Schallert, T., Fleming, S. M., Leasure, J. L., Tillerson, J. L., Bland, S. T. Cns plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury. Neuropharmacology. 39 (5), 777-787 (2000).
  28. Mathis, A., et al. Deeplabcut: Markerless pose estimation of user-defined body parts with deep learning. Nat Neurosci. 21 (9), 1281-1289 (2018).
  29. Fonarow, G. C., et al. Relationship of national institutes of health stroke scale to 30-day mortality in medicare beneficiaries with acute ischemic stroke. J Am Heart Assoc. 1 (1), 42-50 (2012).
  30. Allen reference atlas - adult mouse brain coronal. Available from atlas.Brain-map.Org. , Allen Institute for Brain Science. (2011).
  31. Groger, M., et al. Release of bradykinin and expression of kinin b2 receptors in the brain: Role for cell death and brain edema formation after focal cerebral ischemia in mice. J Cereb Blood Flow Metab. 25 (8), 978-989 (2005).
  32. Kolbinger, A., et al. Behind the wall-compartment-specific neovascularisation during post-stroke recovery in mice. Cells. 11 (10), (2022).
  33. Merino-Serrais, P., et al. Microanatomical study of pyramidal neurons in the contralesional somatosensory cortex after experimental ischemic stroke. Cereb Cortex. 33 (4), 1074-1089 (2023).
  34. Metz, G. A., Whishaw, I. Q. The ladder rung walking task: A scoring system and its practical application. J Vis Exp. (28), (2009).
  35. Metz, G. A., Whishaw, I. Q. Cortical and subcortical lesions impair skilled walking in the ladder rung walking test: A new task to evaluate fore- and hindlimb stepping, placing, and co-ordination. J Neurosci Methods. 115 (2), 169-179 (2002).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Orta Serebral Arter T kan klDeneysel nme l e iMerdiven Basama TestiSilindir TestiMotor Fonksiyon De erlendirmesiRisk Stratifikasyon SkoruFokal nme DefisitleriTranslasyonel nme Modeli

İlgili makaleler