Burada, bir ADCC biyo-tahlil kiti kullanarak antikora bağımlı, hücre aracılı sitotoksisite (ADCC) testi için bir protokol sunuyoruz. Bu yöntem, ADCC mekanizmasını aydınlatmak ve kanser immünoterapisinde antikorların terapötik potansiyelini değerlendirmek için değerli bir araç sunmaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Antikora Bağımlı Hücre Aracılı Sitotoksisite Raportörü Biyotahlil Kullanılarak Kanser Hücrelerinde Antikora Bağımlı, Hücre Aracılı Sitotoksisitenin Değerlendirilmesi
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Antikora bağımlı, hücre aracılı sitotoksisite (ADCC) yöntemi, kanser immünoterapisinde terapötik antikorların etkinliğini değerlendirmek için önemli bir araçtır. Kanser hücrelerinde ADCC aktivitesinin değerlendirilmesi, antikor bazlı tedavilerin geliştirilmesi ve optimizasyonu için gereklidir. Burada, efektör hücreler olarak tiroid kanseri hücrelerini kullanarak ADCC reaksiyonunun kantitatif değerlendirmesi için bir ADCC biyo-tahlil kitinin kullanılması için metodolojik bir yaklaşım öneriyoruz. Protokol, terapötik bir antikor varlığında efektör hücrelerin hedef kanser hücreleri ile farklı oranlarda ko-kültürünü içerir. Bu deneyde kullanılan ADCC biyotahlil kiti, Aktive Edilmiş T hücresi (NFAT) yanıt elemanlarının Nükleer Faktörünün kontrolü altında bir lusiferaz raportör genini eksprese eden genetik olarak tasarlanmış efektör hücreleri içerir. Yüzey antijeninin hedef hücreler üzerindeki antikorlar ve efektör hücreler ile bağlanması üzerine, efektör hücreler lusiferaz salgılar ve lüminesans sinyalinin ölçümü yoluyla sitotoksisitenin ölçülmesini sağlar. Konvansiyonel ADCC testlerinin aksine, bu yöntem hedef antijenin antikorlar ve efektör hücrelerle bağlandığını kanıtladı ve bu da kısa sürede güvenilir sonuçlar üretebildi.
Giriş
Antikora bağımlı, hücre aracılı sitotoksisite (ADCC), antikorların bağışıklık aracılı hücre öldürme etkileri gösterdiği önemli bir mekanizmadır 1,2,3. Bağışıklık hücreleri, hedef hücrelerin yüzey antijenleri ile etkileşime girerek granzimleri, perforini serbest bırakan ve hedef hücre ölümüne yol açan terapötik antikora bağlanarak aktive edilir. Bu bağışıklık hücreleri, doğal öldürücü (NK) hücreleri ve nötrofilleri 2,3,4,5,6,7 içerir. ADCC testi, terapötik antikorun 8,9 etkinliğini değerlendirmek için önemli bir araç haline gelmiştir.
Konvansiyonel ADCC tahlilinde, periferik kan mononükleer hücreleri (PBMC'ler) veya doğal öldürücü hücreler, hedefin hücre ölüm oranını ölçerek terapötik bir antikorun etkinliğini izlemek için efektör hücreler olarak kullanılır. Yöntemimiz, Aktive Edilmiş T hücresi (NFAT) yanıt elemanlarının Nükleer Faktörünün kontrolü altında bir lusiferaz raportör geni eksprese eden genetik olarak tasarlanmış efektör hücreleri içeren bir ADCC biyo-tahlil kiti kullanır. Daha sonra yüzey antijeninin hedef hücreler üzerindeki bağlanmasını antikor ve efektör hücrelerle ölçeriz. Bu yöntem, insan PBMC hücrelerine ihtiyaç duymadan kısa bir süre içinde meydana gelen ADCC reaksiyonuna dayanmaktadır. Deneysel adımlar, terapötik antikorların varlığında efektör hücrelerin hedef hücrelerle ko-kültürünü içerir.
İnkübasyon sırasında, terapötik antikor, hedef hücrelerin yüzeyindeki hedef antijene bağlanır, bu da efektör hücrelerin ve bir antikorun Fc fragmanının bağlanmasına yol açar. Bu, NFAT yanıt elemanını aktive eder ve ADCC reaksiyonunun kantitatif değerlendirmesi için lüminesans sinyallerini serbest bırakır.
Deneyi gerçekleştirmeden önce, hedef hücrelerdeki hedef antijenin ekspresyonu, akış sitometrisi veya western blotlama ile doğrulanmalıdır. Hedef hücreler kültürlenir ve deneyden önce 24 saat boyunca 96 oyuklu plakalara geçirilir. Terapötik bir antikorun farklı konsantrasyonları, hesaplanan efektör-hedef hücre oranını elde etmek için efektör hücrelerin farklı hücre sayıları ile birlikte eklenir.
Bu yöntemdeki anahtar adımlar arasında (1) hedef hücrelerin ve efektör hücrelerin hazırlanması, (2) efektör-hedef hücre oranları, (3) farklı antikor konsantrasyonlarının hazırlanması ve (4) değişen inkübasyon süresi yer alır. İnkübasyondan sonra, lüminesans sinyalleri bir luminometre kullanılarak ölçülür ve ADCC aktivitesinin kantitatif bir okumasını sağlar. ADCC'yi ölçmek için diğer yöntemlerle karşılaştırıldığında, bu yöntemin çalıştırılması nispeten basittir ve sonuçlar doğrudur.
ADCC raportör biyo-tahlili, ADCC yolu aktivasyonunda hedef antijenin, terapötik antikorun ve bağışıklık hücrelerinin bağlanmasını gösterir. Bu bağlanma, V158 (yüksek afiniteli) varyantı olan FcyRIIIa reseptörü ile stabil bir şekilde eksprese eden FcγRIIIa hücreleri ile efektör hücreler tarafından tasarlanmış Jurkat hücrelerindeki NFAT yolu yoluyla gen transkripsiyonunu aktive eder. NFAT yanıt elemanı, efektör hücrelerde(10,11) lusiferaz ekspresyonuna aracılık eder. ADCC'nin Etki Mekanizmasındaki (MOA) antikorun biyolojik aktivitesi, NFAT yolundan üretilen lusiferaz sinyali ile ölçülür. Efektör hücrelerdeki lusiferaz sinyali - FcγRIIIa reseptörü eksprese eden Jurket hücreleri - bir lüminesans okuyucusu kullanılarak ölçülür (Şekil 1). Testin sinyal-gürültü oranı yüksektir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. Hedef hücrelerde EGFR ve VEGFR ekspresyonunun tespiti
NOT: Hedef hücrelerde hedef antijenin ekspresyonunu tespit etmek için western blotlama kullanın.
- Numune hazırlama
- %10 fetal sığır serumu (FBS), %1 L-glutamin ve %1 antibiyotik (Penisilin-Streptomisin) ile desteklenmiş Roswell Park Memorial Institute (RPMI) ortamını kullanarak T75 şişelerindeki hücreleri (BHT-101 ve SW-1736 insan tiroid kanseri hücre hatları) kültürleyin.
- Kültür ortamını çıkararak ve hücreleri PBS ile yıkayarak hücreleri% 80 birleştiğinde hasat edin. 5 mL PBS ekleyin ve hücreleri kültür şişesinden çıkarmak için bir hücre kazıyıcı kullanarak hücreleri kazıyın. Hücreleri 15 mL'lik konik bir tüpe aktarın.
- Hücreleri bir hücre sayacı ile sayın.
- BHT-101 × SW-1736 hücrelerinin 56'sını 15 mL konik tüplere koyun.
- Hücreleri oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 135 × g'da döndürün. Süpernatan PBS'yi çıkarın.
- Buz üzerinde 5 dakika boyunca proteaz-fosfataz inhibitörleri içeren 100 μL RIPA lizis tamponu ekleyerek hücre peletini parçalayın. Lizatı 2 mL'lik bir tüpe aktarın, 15.000 × g'da 15 dakika santrifüjleyin ve süpernatanı yeni 2 mL'lik tüpe aktarın.
- Bir bikinkoninik asit (BCA) tahlil kiti kullanarak hücre lizatının protein konsantrasyonunu ölçün.
- Her numuneden hücre lizatından 70 μg protein alın, %10 2-merkaptoetanol ile takviye edilmiş 2x Laemmli numune tamponu ekleyin ve numunelerin denatürasyonu için numuneleri 100 °C'de 5 dakika kaynatın.
- Jel elektroforezi ve membran transferi
- Damıtılmış su (4,7 mL), %30 akrilamid (2,7 mL), 1,5 M Tris Tamponu, pH 8,8 (2,5 mL), %10 sodyum dodesil sülfat (0,1 mL), %10 amonyum persülfat (100 μL) ve TEMED (10 μL) kullanarak %8 sodyum dodesil sülfat (SDS) poliakrilamid jeli hazırlayın.
- %8 SDS-poliakrilamid jel içinde 70 μg denatüre edilmiş numuneyi 80 V'ta 20 dakika ve 120 V'ta 100 dakika çalıştırın.
- Jel üzerindeki proteini 90 dakika boyunca 100 V'ta bir poliviniliden florür (PVDF) membranına aktarın.
- Transferden sonra, membranı 1 saat boyunca TBS-T tamponunda (20 mM Tris pH 7.6, 140 mM NaCl,% 0.2 Tween-20) seyreltilmiş %7 yağsız sütle bloke edin.
- Antikor inkübasyonu
- Tıkalı zarı fare anti-Epidermal Büyüme Faktörü Reseptörü (EGFR) ve tavşan anti-Vasküler Endotelyal Büyüme Faktörü Reseptörü (VEGFR) monoklonal antikorları (% 7 yağsız sütte 1: 1.000'de seyreltilmiş) ile gece boyunca 4 ° C'de inkübe edin.
- İnkübasyondan sonra, zarı Tris tamponlu tuzlu su-Tween (TBS-T) tamponu (20 mM Tris pH 7.6, 140 mM NaCl,% 0.2 Tween-20) ile 7 dakika boyunca iyice yıkayın ve 4x tekrarlayın.
- Membranı HRP ile konjuge ikincil antikor (% 7 yağsız sütte (TBS-T) 1: 4.000'de seyreltilmiş) 1 saat inkübe edin.
- İnkübasyondan sonra, zarı TBS-T tamponu ile 7 dakika boyunca iyice yıkayın ve 4 kez tekrarlayın.
- Protein tespiti
- 1 mL HRP substrat peroksit çözeltisinin 1 mL HRP substrat Luminol Reaktifi (her iki reaktif de kemilüminesan substrat kitinden alınmıştır) ile karıştırılmasıyla hazırlanan kemilüminesan HRP substratında membranı 2 dakika inkübe edin.
- Bir görüntüleme sistemi kullanarak zarı görselleştirin.
2. Hedef hücrelerin hazırlanması
- Hedef T hücrelerini, BHT-101 ve SW-1736 hücrelerini, T-75 şişelerinde %10 FBS, %1 L-glutamin ve %1 antibiyotik (Penisilin-Streptomisin) ile desteklenmiş RPMI ortamında %80 birleşene kadar katlanarak kültürleyin.
- Ortamı çıkardıktan sonra, hücreleri PBS ile bir kez yıkayın. Yapışık hücreleri çıkarmak için hücreleri 1 ml enzimatik olmayan hücre ayrışma tamponu ile 5 dakika inkübe edin. Enzimatik olmayan hücre ayrışma tamponunun reaksiyonunu durdurmak için PBS ekleyin. Hücreleri 5 dakika boyunca 135 × g'da döndürün ve 5 mL PBS ekleyin.
NOT: Burada, zar yüzey proteininin bütünlüğünü korumak için enzimatik olmayan bir hücre ayrışma tamponu kullanıyoruz. - Hücreleri sayın ve bunları 15.000 hücre / kuyuda 96 oyuklu, berrak, düz bir tabana sahip beyaz polistiren mikroplakalarda tohumlayın.
3. Terapötik antikorun değişen konsantrasyonlarının hazırlanması
- Bu protokolü takip etmek için, EGFR'yi bağlamak için Cetuximab (kimerik anti-EGFR antikoru) kullanın ve negatif kontrol olarak Bevacizumab (insanlaştırılmış anti VEGF-A antikoru) kullanın.
- 33.6 mL RPMI-1640'a (kitte verilir) 1.4 mL düşük IgG serumu ekleyerek ADCC Bioassay tamponunu hazırlayın.
- Antikorların seyreltilmesi için ADCC Bioassay tamponu kullanın. Her antikorun 400 μL'sini üç farklı konsantrasyonda hazırlayın: 30 μg/mL, 3 μg/mL ve 0.3 μg/mL (3x konsantrasyon) 10 μg/mL, 1 μg/mL nihai konsantrasyonu elde etmek için ve 0.1 μg/mL optimal dozu tespit etmek için geniş spektrumlu kapsama alanı için.
NOT: Nihai antikor konsantrasyonları, 96 oyuklu bir plakanın her bir oyuğunda 25 μL kültürlenmiş hedef hücre, 25 μL efektör hücre ve 25 μL antikora dayanmaktadır.
4. Efektör hücrelerin hazırlanması
- Efektör hücrelerini kullanmadan önce -80 °C'de saklayın.
- ADCC Biyotahlil Tamponunu kullanmadan önce en az 37 dakika boyunca 30 ° C'lik bir su banyosunda önceden ısıtın.
- ADCC Biyotahlil Efektör hücrelerini -80 °C soğuk hava deposundan 37 °C su banyosuna (yaklaşık 2-3 dakika) yerleştirerek çözdürün. Şişeyi nazikçe sallayın ve görsel olarak inceleyin, ancak çözdürme işlemi sırasında ters çevirmeyin.
- 630ul Efektör hücrelerini, 3.6 mL ADCC Test Tamponu içeren 15 mL'lik bir tüpe aktarın. Tüpü 2x hafifçe ters çevirerek iyice karıştırın.
5. Efektör hücrelerin antikor ve hedef hücrelerle inkübasyonu
- Gece boyunca inkübasyondan sonra, ortamı hedef hücrelerden çıkarın (oyuk başına 15.000 kanser hücresi) ve 25 μL ADCC Biyotahlil tamponu ve 25 μL Cetuximab (EGFR antagonisti) ve Bevacizumab (VEGF antagonisti) Şekil 2'ye göre her bir kuyucukta 0.1 μg / mL, 1 μg / mL veya 10 μg / mL hedef hücrelerin nihai konsantrasyonunu elde etmek için.
- Hedef hücreleri içeren 96 oyuklu mikroplakaya oyuk başına 25 μL ADCC biyotahlil tamponunda 75.000 efektör hücre ekleyin. No mAb olarak etiketlenen kuyucuklar antikor kontrolü yapmaz (Şekil 2).
- Boş kontrol için AB (ADCC Bioassay tamponu) olarak etiketlenmiş kuyulara ADCC Bioassay tamponu ekleyin.
- Plakayı 6 saat inkübe edin.
6. ADCC aktivitesinin kantitatif okuması
- Luciferaz Test Substratına (liyofilize) Luciferase Test tamponu ekleyerek ölçümden 4 saat önce lusiferaz tahlil reaktifini hazırlayın.
- Hedef hücrelerin, antikorun ve efektör hücrelerin 6 saatlik inkübasyonundan sonra, her bir oyuğa 75 μL lusiferaz tahlil reaktifi ekleyin ve 30 dakika inkübe edin.
- Kuluçka süresinin ardından, ADCC aktivitesinin kantitatif bir okumasını sağlayan bir luminometre kullanarak her bir oyuktaki lüminesans sinyalini ölçün.
- Veri analizi için, katlama İndüksiyonunu aşağıdaki gibi hesaplayın:
Katlama indüksiyonu = RLU (antikor kaynaklı - arka plan) / RLU (antikor kontrolü yok - arka plan).
RLU'nun bağıl lüminesans birimleri olduğu yerde; İndüklenen antikor, B3 ila B8 ve C3 ila C8 kuyularıdır; Antikor kontrolü yok = B2 ve C2; Arka plan = A2 kuyusundan A5'e kadar olan ortalama RLU (Şekil 2).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Hedef BHT-101 ve SW-1736 hücrelerinde EGFR ve VEGFR ekspresyonu western blot kullanılarak tespit edildi. EGFR ekspresyonu hem BHT-101 hem de SW-1736 hücrelerinde tespit edildi, ancak VEGFR ekspresyonu tespit edilmedi (Şekil 3).
ADCC biyotahlil kitini kullanarak, hedef hücreler olarak EGFR pozitif hücre hatları, BHT-101 ve SW-1736 kullanarak anti-EGFR antikoru setuksimabın ADCC reaksiyonunu tespit ettik. Bir VEGF inaktivatörü olan bevacizumab, negatif kontrol antik...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Burada, terapötik bir antikorun ADCC reaksiyonunu değerlendirmek için ADCC Biyoassay yöntemini sunduk. Yöntem basittir ve ölçüm için basit bir "ekle-karıştır-oku" formatı kullanır.
Deneyi yapmadan önce, hedef hücrelerdeki hedef antijenin ekspresyonu, akış sitometrisi veya western blotlama ile doğrulanmalıdır. Akış sitometrisi, yüzey antijenini tespit etmek için daha iyi bir araç olacaktır. Bununla birlikte, akış sitometrisinin kullanılması hücreleri strese so...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Tüm yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmez.
Teşekkürler
Bu çalışmayı desteklediği için Prof. Zeng'e (IMCB, A*STAR) minnettarız. Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (NSFC) Gençlik Vakfı (82202231) ve Çin'in Zhejiang Eyaleti Tıp ve Sağlık Bilimi ve Teknolojisi Projesi (2021KY110,2024KY824) tarafından desteklenmiştir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| % 0.5 Tripsin-EDTA | Gibco | 15400-054 | % 0.05 Tripsin |
| 1x Tris Tampon Salin (TBS) | 1. BASE | BUF-3030-1X1L | Batı lekelemede membran yıkama için |
| 1.5 M Tris Tamponu, pH 8.8 | SDS jel hazırlama için | 1. BASE | BUF-1419-1L-pH8.8 |
| 2-Merkaptoetanol | Sigma Aldrich | M7522-100ML | Numune hazırlama için batı lekeleme |
| % 30 Akrilamid / Bis çözeltisi | Bio-Rad | # 1610158 | SDS jel hazırlama için |
| 4x Laemmli Tampon | Bio-Rad | # 1610747 | Batı lekeleme numune hazırlanması için |
| Şeffaf düz tabanlı 96 kuyulu beyaz polistiren mikroplaka | Corning Incorporated | 3610 | ADCC tahlili için |
| ADCC Biyotahlil Efektör hücreleri (0.65 mL) | Promega | G7011 | ADCC muhabiri biyotahlil çekirdek kitine (Promega G7010), 1 x 1 flakon |
| ADCC muhabiri biyotahlil çekirdek kiti | Promega | G7010 | Bu deneyde ADCC tahlili için ADCC biyotahlil kiti olarak belirtilmiştir |
| SDS jel hazırlama için | Amonyum Persülfat | Sigma Aldrich | A3678-25G |
| Bevacizumab (İnsanlaştırılmış Anti VEGF-antikor) | MVASI-ADCC | tahlilinde | |
| negatif kontrol antikoru olarak kullanınBHT-101 | Leibniz Enstitüsü DSMZ | ACC279 | İnsan anaplastik papiller tiroid kanseri hücre hattı |
| Bio-Glo Luciferase Test Tamponu | Promega | G7941 | ADCC muhabiri biyo-tahlil çekirdek kitinde (Promega G7010), 1 x 10 mL |
| Bio-Glo Luciferase Test Substratı (Liyofilize) | Promega | G7941 | ADCC muhabiri biyo-tahlil çekirdek kitine (Promega G7010), 1 x 1 flakon |
| Hücre kazıyıcı | GenFollower | GD00235 | Kültür şişesinden hücreyi çıkarmak için |
| Cetuximab (Kimerik anti-EGFR antikoru) | ERBITUX-ADCC | tahlilinde terapötik antikor olarak kullanım | |
| Kemilüminesan HRP substratı | Merck Millipore | WBKLS0500 | Batı blotlamada protein tespiti için |
| Damıtılmış su | Gibco | 15230-162 | SDS jel hazırlama için |
| Fetal Sığır Serumu (FBS) | Gibco | 10270-106 | Kültür ortamı takviyesi |
| iBright CL1500 görüntüleme sistemi | Thermo Scientific | 2462621100038 | Western blotting'de protein tespiti için |
| L-glutamin, 200 mM | Gibco | 25030-081 | Kültür ortamı takviyesi |
| Düşük IgG Serumu | Promega | G7110 | ADCC muhabiri biyotahlil çekirdek kitine (Promega G7010) dahildir, 1 x 4 mL |
| Megafuge 8R | Thermo Scientific | 42876589 | Santrifüj |
| Fare anti-EGFR monoklonal antikorları içerir | BD Biosciences | 610016 | Western blotting'de birincil antikor |
| Fare anti-VEGFR monoklonal antikorları | BD Biosciences | 571194 | tamponunda birincil antikor |
| Sigma Aldrich | C5789-100ML | T75 şişesinden hücre toplama için | |
| Penisilin-Streptomisin | PAN Biotech | P06-07100 | Antibakteriyel kültür ortamı |
| Fosfat Tamponlu Salin (PBS), pH 7.2, Steril filtreli | 1. BASE | CUS-2048-1x1L | Hücreler için yıkama solüsyonu olarak kullanın |
| Pierce BCA test kiti | Thermo Scientific | 23225 | Protein konsantrasyonunu ölçmek için |
| Proteaz ve fosfataz inhibitörü | Thermo Scientific | A32959 | Western blotting PVDF için numune hazırlamada protein sindirimi için |
| membran (Immobilin-P) | Merck Millipore | IPVH00010 | Batı böceklenme |
| Tavşan anti-fare IgG, Fc & gama protein transferi için; HRP konjuge ikincil antikor | Jackson ImmunoResearch | 315-035-046 | Batı blot |
| Roswell Park Memorial Institute (RPMI) ortamında | Oğlak Bilimsel | RPMI-XA | Hücre kültürü ortamı |
| RPMI-1640 | Promega | G7080 | ADCC muhabiri biyotahlil çekirdek kitine (Promega G7010) dahildir, 1 x 36 mL |
| Yağsız süt tozu | Merck Millipore | 70166-500G | Batı lekelemede membran blokajı için |
| Sodyum Dodesil Sülfat | 1. BASE | BIO-2050-500g | SDS jel hazırlama için |
| SW-1736 | Cytion | 300453 | İnsan tiroid skuamöz hücreli kanser hücre hattı |
| T75 kültür şişeleri | SPL Yaşam Bilimleri | 70075 | Hücre kültürü şişesi |
| Tecan Çok Modlu Okuyucu modeli Spark 10M | Tecan | 1607000294 | için parlaklık ölçümü |
| SDS jel hazırlama için | TEMED | Bio-Rad | #1610801 |
| Tween-20 | Promega | H5151 | Batı lekelemede membran yıkama için |
| Vi-cell XR hücre canlılık analizörü | Beckman Coulter | AL15072 | Hücre sayacı |
Kaynaklar
- Zahavi, D., AlDeghaither, D., O'Connell, Enhancing antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity: a strategy for improving antibody-based immunotherapy. Antib Ther. 1 (1), 7-12 (2018).
- Fenis, A., Demaria, O., Gauthier, L., Vivier, E. New immune cell engagers for cancer immunotherapy. Nat Rev Immunol. 24 (7), 471-486 (2024).
- Pinto, S., Pahl, J., Schottelius, A., Carter, P. J. Reimagining antibody-dependent cellular cytotoxicity in cancer: the potential of natural killer cell engagers. Trends Immunol. 43 (11), 932-946 (2022).
- Ochoa, M. C., et al. Antibody-dependent cell cytotoxicity: immunotherapy strategies enhancing effector NK cells. Immunol Cell Biol. 95 (4), 347-355 (2017).
- Wang, W., Erbe, A. K., Hank, J. A., Morris, Z. S. NK cell-mediated antibody-dependent cellular cytotoxicity in cancer immunotherapy. Front Immunol. 6, 368(2015).
- Chung, S., et al. Characterization of in vitro antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity activity of therapeutic antibodies - impact of effector cells. J Immunol Methods. 407, 63-75 (2014).
- Shimasaki, N., Jain, A., Campana, D. NK cells for cancer immunotherapy. Nat Rev Drug Discov. 19 (3), 200-218 (2020).
- Cheng, Z. J., et al. Development of a robust reporter-based ADCC assay with frozen, thaw-and-use cells to measure Fc effector function of therapeutic antibodies. J Immunol Methods. 414, 69-81 (2014).
- Parekh, B. S., et al. Development and validation of an antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity-reporter gene assay. MAbs. 4 (3), 310-318 (2012).
- Hogarth, P. M., Pietersz, G. A. Fc receptor-targeted therapies for the treatment of inflammation, cancer and beyond. Nat Rev Drug Discov. 11 (4), 311-331 (2012).
- Chung, S., et al. Quantitative evaluation of fucose reducing effects in a humanized antibody on Fcgamma receptor binding and antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity activities. MAbs. 4 (3), 326-340 (2012).
- Promega. ADCC Reporter Bioassay Core Kit Technical Manual. , https://www.promega.sg/-/media/files/resources/protocols/technical-manuals/101/adcc-reporter-bioassay-core-kit-protocol.pdf?rev=bec36264c0b6470591ded081377d207d&sc_lang=en (2023).
- Miller, A. S., Tejada, M. L., Gazzano-Santoro, H. Methods for measuring antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity in vitro. Methods Mol Biol. 1134, 59-65 (2014).
- Lo Nigro, C., et al. NK-mediated antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity in solid tumors: biological evidence and clinical perspectives. Ann Transl Med. 7 (5), 105(2019).
- Gómez Román, V. R., Murray, J. C., Weiner, L. M. Antibody Fc. Ackerman, M. E., Nimmerjahn, F. , Academic Press. 1-27 (2014).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
