Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Dişi C57BL/6J Farelerde Psikiyatrik Bozukluklar için Çoklu Entegre Sosyal Stres Modeli

1.7K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/67117

⸱

15 Temmuz 2025

 ,  ,  ,  , 
1Jiangsu Province Key Laboratory of Anesthesiology, Xuzhou Medical University, 2Jiangsu Province Key Laboratory of Anesthesia and Analgesia Application Technology, Xuzhou Medical University, 3NMPA Key Laboratory for Research and Evaluation of Narcotic and Psychotropic Drugs, Xuzhou Medical University

Bu makalede

Özet

Bu çalışma, dört günlük sosyal stresörleri entegre ederek, dişi C57BL / 6J farelerinde psikiyatrik bozukluklar için çoklu entegre bir sosyal stres (MISS) modelini tanımlamaktadır. On günlük tekrarlanan MISS maruziyetinden sonra, fareler depresif ve anksiyete benzeri fenotipler geliştirdi, böylece kadın deneklerde psikiyatrik bozuklukları incelemek için doğal, etiyolojiye dayalı bir hayvan modeli sağladı.

Özet

Psikiyatrik bozukluklardan muzdarip bireylerin çoğunluğunu dişiler oluşturmasına rağmen, klinik öncesi çalışmalar, kısmen ideal dişi hayvan paradigmalarının olmaması nedeniyle, neredeyse yalnızca erkek deneklere odaklanmıştır. Dişi hayvanlarda psikiyatrik bozuklukları incelemek için etkili modeller geliştirmek, yaşam bilimlerinde uzun süredir devam eden bir bilimsel zorluk olmaya devam etmektedir. C57BL / 6J dişi farelerde bir "Çoklu Entegre Sosyal Stres (MISS) modeli", psikiyatrik bozuklukların gelişimine katkıda bulunan sosyal risk faktörlerini simüle ederek ve entegre ederek yakın zamanda oluşturulmuştur. Bu MISS paradigmasını oluşturmak için, dişi C57BL / 6J fareleri, art arda on gün boyunca her gün rastgele bir dizi stresöre maruz bırakıldı: tüp testinde sosyal rekabet başarısızlığı, modifiye edilmiş dolaylı sosyal yenilgi stresi, kaçınılmaz aşırı kalabalık stresi ve müteakip sosyal izolasyon. Saf farelerle karşılaştırıldığında, MISS'e maruz kalan fareler, sakaroz tercihi, kuyruk süspansiyonu, açık alan ve yükseltilmiş artı labirent testleri ile ölçüldüğü gibi depresif ve endişeli benzeri fenotipler sergiledi. Bu paradigma, kadınlarda, özellikle belirsiz etiyolojisi ve karmaşık semptomatolojisi olanlarda depresyon ve anksiyetenin altında yatan nörobiyolojik mekanizmaları araştırmak için değerli bir araç sunmaktadır.

Giriş

Yüz milyonlarca insan psikiyatrik bozukluklarla yaşıyor, en yaygın olanları anksiyete ve depresif bozukluklar. Dünya Sağlık Örgütü'ne göre, 2019 yılında dünya çapında sırasıyla 280 milyondan fazla ve 301 milyondan fazla insan depresyon ve anksiyete ile yaşıyordu1. COVID-19 salgını nedeniyle, anksiyete ve depresif bozukluklardan etkilenen insan sayısı sadece bir yıl içinde sırasıyla %26 ve %28 oranında önemli ölçüde arttı. Etkilenenler arasında, kadınlarda psikiyatrik bozuklukların yaşam boyu prevalansı erkeklere göre neredeyse iki kat daha yüksektir2, kadınlar daha şiddetli semptomlar, daha fazla fonksiyonel bozukluk, atipik depresif fenotipler, daha sık nüksler ve ilaçlara daha düşük yanıt 3,4,5.

Psikiyatrik bozuklukların birçok yönündeki cinsiyet farklılıkları iyi belgelenmiş olmasına rağmen 6,7,8, klinik öncesi araştırmaların çoğu, öncelikle uygun dişi hayvan modellerinin olmaması nedeniyle ağırlıklı olarak erkek deneklere odaklanmıştır 9,10. Sonuç olarak, kadınlarda bu bozuklukların patogenezi tam olarak anlaşılamamıştır. Bu, kadınlarda psikiyatrik bozuklukların altında yatan nörobiyolojik mekanizmaların araştırılmasını kolaylaştıracak kadın denekleri içeren hayvan modellerinin geliştirilmesine acil ihtiyacı vurgulamaktadır.

Tekrarlanan sosyal yenilgi stresi (RSDS) paradigmasına dayalı olarak dişi fareler için artan sayıda sosyal stres modeli geliştirilmiştir 11,12,13,14. Örneğin, dişi farelerde yakın zamanda kurulan iki RSDS modeli, dişi farelere erkek idrarının uygulanması ve erkek saldırganlarda ventromedial hipotalamusun ventrolateral alt bölümünün kemogenetik aktivasyonu yoluyla erkek saldırganlığının yapay olarak arttırılmasını içeriyordu 11,12,13. Bununla birlikte, bu indüklenmiş agresif davranışların doğal olarak meydana gelmediği ve dişi fareler için ilgili stres faktörlerini temsil etmeyebileceği iddia edilmiştir10. Ek olarak, montaj davranışından kaynaklanan gebelik, sonraki mekanik çalışmaları zorlaştırır.

RSDS tabanlı bir başka değiştirilmiş model, dişi farelerin erkekler arası sosyal yenilgiye görsel olarak tanık olduğu dolaylı sosyal yenilgi stresi paradigmasıdır12. Çeşitli kemirgen suşlarında dişi-dişi sosyal yenilgi protokolleri de geliştirilmiştir 14,15,16. Bazı endişelere rağmen, bu son iki modelde kullanılan sosyal stresörlerin etiyolojik olarak insan psikiyatrik bozukluklarıyla daha ilgili olduğu görülmektedir14. İdeal bir depresyon modeli, yapı (etiyolojik) geçerliliği gerektirir, yani modelde kullanılan strese neden olan yöntemlerin, bozukluğun gerçek yaşam nedenlerini yakından yansıtması gerektiği anlamına gelir.

Psikiyatrik bozuklukların etiyolojisinin biyolojik, genetik, çevresel ve psikososyal faktörleri içeren multifaktöriyel olduğuna inanılmaktadır. Laboratuvar hayvanlarında bu risk faktörlerini manipüle etmek, mekanik araştırma ve ilaç taraması için ilgili modellerin geliştirilmesi için çok önemlidir. Bir veya daha fazla stres etkenini simüle eden hem sosyal hem de sosyal olmayan hayvan modelleri, insan psikiyatrik bozukluklarıyla ilişkili temel semptomları ve nörobiyolojik değişiklikleri çoğaltabilir. Örneğin, kronik hafif stres (CMS) modeli, birden fazla fiziksel stres faktörünün rastgele değişen kombinasyonlarını (örneğin, ıslak yataklama, kuyruk süspansiyonu, kuyruk kenetleme, oruç) stabil ve etkili nöropatolojik ve depresif benzeri davranışsal fenotiplere neden olur17,18,19,20,21,22,23. Bu bulgular, çoklu risk faktörlerinin tekrarlanan modellenmesinin, psikiyatrik bozuklukları incelemek için paradigmalar oluşturmak için uygun bir strateji olduğunu göstermektedir. Kronik sosyal yenilgi stresi (CSDS) modeli, sosyal stresörleri simüle eden depresyon için en yaygın kullanılan paradigmalardan biridir 24,25,26. Bu model tek bir stres etkeni türünü taklit etmekle sınırlı olsa da, etiyolojik önemi translasyonel araştırmalarda önemli ilerlemelere yol açmıştır. Örneğin, CSDS tabanlı çalışmalar, ventral tegmental alandaki dopaminerjik nöronlar üzerindeki potasyum (K+) kanallarını depresyona karşı dayanıklılığa aracılık eden anahtar hedefler olarak tanımlamış ve hem depresif benzeri farelerde hem de depresyonu olan hastalarda umut verici antidepresan adaylar olarak retigabin (ezogabin) gibi KCNQ tipi K+ kanal açıcılarını vurgulamıştır 27,28,29,30,31. Sonuç olarak, birkaç ufuk açıcı çalışma, kadına yönelik saldırganlığı indükleyerek kadın depresyonunu modellemek için CSDS paradigmasını değiştirmeye çalışmıştır11,12. Yukarıdaki kanıtlar, çoklu sosyal stres faktörlerinin tekrarlanan maruziyetle entegre edilmesinin, dişi hayvanlarda psikiyatrik modellerin geliştirilmesi için önemli bir yönü temsil ettiği fikrini desteklemektedir.

Dişi C57BL / 6J farelerinde, psikiyatrik bozuklukları modellemek için yakın zamanda 10 günlük çoklu entegre sosyal stres (MISS) paradigması geliştirildi ve güvenilir etiyolojik, yüz, yapı ve öngörücü geçerlilikler gösterdi32. MISS modelini oluşturmak için, dişi C57BL / 6J fareleri, art arda 10 gün boyunca her gün rastgele olarak dört ardışık stresöre maruz bırakıldı: sosyal rekabette başarısızlık (tüp testi), modifiye edilmiş dolaylı sosyal yenilgi stresi, kaçınılmaz aşırı kalabalık stresi ve müteakip sosyal izolasyon32. Bu çalışma, MISS paradigmasını modellemek için ayrıntılı bir protokol sunmaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm deneysel prosedürler, Xuzhou Tıp Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (Onay No. 202207S127) tarafından onaylandı ve laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı için Ulusal Sağlık Enstitüleri yönergelerine uygun olarak yürütüldü. Bu deneylerde kullanılan C57BL / 6J dişi fareler (denek fareler için 7-8 haftalık; kazanan adaylar için 10-14 haftalık), C57BL / 6J erkek fareler (agresif CD1 taraması için 7-8 haftalık) ve CD1 emekli damızlık fareler ticari bir kaynaktan elde edilmiştir. Tüm fareler, ad libitum33 sağlanan yiyecek ve su ile 12 saatlik bir aydınlık / karanlık döngüsü altında barındırıldı. MISS paradigmasının başlatılmasından önce, her kohort için zorunlu olmasa da, sonraki davranışsal sonuçların bireysel değişkenlikten ziyade strese maruz kalmaya atfedilebildiğinden emin olmak için temel davranışsal ölçümler alındı. Tam protokole genel bir bakış Şekil 1'de sunulmuştur ve tamamlanan deney kurulumları Şekil 2'de gösterilmiştir. Bu çalışmada kullanılan reaktiflerin ve ekipmanın ayrıntıları Malzeme Tablosunda verilmiştir.

1. Alışkanlık

  1. Çevreye alışma
    1. 12 saatlik aydınlık-karanlık döngüsünde sabit bir sıcaklık (23 °C ± 2 °C), nem (%50-%60) ve ışık yoğunluğunu (15-20 lüks) koruyarak MISS protokolü için özel olarak ayrı bir oda belirleyin.
      NOT: Aksi belirtilmedikçe, tüm modelleme süresi boyunca bu odada ev fareleri bulundurun.
    2. Çelik tel kapaklı ve mısır koçanı yataklı standart fare kafesleri (U × G × Y: 37 cm × 16 cm × 12 cm) hazırlayın.
    3. 7-8 haftalık C57BL / 6J dişi fareleri denek faresi olarak kullanın. Fareleri rastgele naif ve MISS gruplarına atayın ve onları kafes başına beş fareye yerleştirin.
      NOT: Deney için karşılaştırılabilir yaş ve vücut ağırlığına sahip dişi fareleri seçin.
    4. 10-14 haftalık C57BL / 6J dişi fareleri kazanan taraması30 için aday olarak kullanın. İstikrarlı sosyal rütbeler oluşturmak için bu fareleri kafes başına dört kişilik gruplar halinde barındırın.
    5. Erkek CD1 emekli damızlık fareleri saldırgan adaylar olarak kullanın. Ev CD1 fareleri, bölgesellik oluşturmak ve kavgayı önlemek için ayrı ayrı. Agresif CD1 taraması için davetsiz misafir olarak kohort tarafından yetiştirilen C57BL / 6J erkek fareleri (kafes başına 5 fare, 7-8 haftalık yaş) kullanın.
    6. Tüm farelerin satın alındıktan sonra 7 gün boyunca alışmasına ve nakliye stresinden kurtulmasına izin verin (Şekil 1A1).
    7. Tüm fareleri ad libitum yiyecek ve su ile barındırın.
  2. Tüplere alışma ve kullanım
    1. Dişi denek farelerin ve kazanan adayların her kafesine kısa bir akrilik tüp (Şekil 2A; 10 cm uzunluğunda, 26 mm iç çap) yerleştirin. Farelerin tüplere alışmasına ve 3 gün boyunca içlerinden geçmeyi öğrenmesine izin verin.
      NOT: Tüpün çapı, bir yetişkin farenin dönmeden sorunsuz bir şekilde geçmesine izin vermek için yeterli olmalıdır.
    2. Tanıdık olmayan deneycilerle ilgili stresi azaltmak için dişi denek farelerini ve kazanan adayları 3 gün boyunca 1-2 dakika / gün boyunca ele alın (Şekil 1A2).
    3. Alışma süresinin sonunda, her farenin kuyruğunu kırmızı veya siyah yağ bazlı bir işaretleyici ile işaretleyin.
      NOT: İşaretleri düzenli olarak kontrol edin ve gerekirse yeniden uygulayın.

2. Tüp yarışması, kazanan taraması ve CD1 saldırgan taraması için eğitim

  1. Tüp yarışması için eğitim
    NOT: Bu prosedürle ilgili ayrıntılar için önceki raporlarabakın 32,34.
    1. Dişi denek fareleri, dişi kazanan adayları, şeffaf akrilik tüpler (Şekil 2B; 30 cm uzunluğunda, 26 mm iç çap), plastik çubuklar, %75 etanol ve kağıt havlular hazırlayın. Koku ipuçlarını ortadan kaldırmak için masayı, tüpleri ve plastik çubukları %75 etanol ile temizleyin.
    2. Her bir kadın denek faresinin veya kazanan adayın kuyruğunu nazikçe kavrayın ve fareyi masanın üzerine yerleştirin. Çevresel iklimlendirme için yaklaşık 1 dakika boyunca serbestçe keşfetmesine izin verin.
    3. Fareyi kuyruğundan tutun ve tüpün bir ucuna yerleştirin.
      NOT: Stresi en aza indirmek ve girişi kolaylaştırmak için farenin kafasının tüpün ucuna baktığından ve ön pençeleri masaya değecek şekilde emin olun.
    4. Fare tüpe girdiğinde kuyruğu serbest bırakın ve gönüllü olarak geçmesine izin verin.
      NOT: Fare durursa veya geri gitmeye çalışırsa kuyruğa hafifçe dokunmak için plastik bir çubuk kullanın.
    5. Fareyi tüpün diğer ucuna yerleştirin ve 2.1.4 adımını tekrarlayın. 2.1.3 - 2.1.5 arasındaki adımları bir döngü olarak sayın.
    6. İki döngü için 2.1.3 ve 2.1.5 adımlarını tekrarlayın (Şekil 1B1).
    7. Fareyi ev kafesine geri koyun. Kokuları, idrarı ve dışkıyı gidermek için tüpü %75 etanol ile temizleyin.
      NOT: Bir sonraki fare ile kullanmadan önce tüpün temiz, kuru ve artık alkol kokusundan arınmış olduğundan emin olun.
    8. Tüm dişi fareler için 2.1.2-2.1.7 adımlarını art arda 3 gün boyunca tekrarlayın ve her farenin tüpten geçmeye alıştığından emin olun.
  2. Kazanan gösterimi
    NOT: Bu prosedürle ilgili ayrıntılar için önceki raporlarabakın 32,34.
    1. Kazanan kadın adaylar, tüpler (30 cm uzunluğunda, 26 mm iç çap), plastik çubuklar, %75 etanol, kağıt havlu ve zamanlayıcı hazırlayın. Koku ipuçlarını en aza indirmek için ekipmanı temizleyin ve kurulayın.
    2. Taramadan önce, her fareyi bir döngü boyunca tüpten geçecek şekilde yeniden eğitin. Tüpün üzerine görünür bir orta çizgi çizin.
    3. Her iki fareyi de kuyruklarından tutun ve tüpün zıt uçlarına yerleştirin. Orta noktaya girmelerine ve buluşmalarına izin verin, ardından aynı anda serbest bırakın ve zamanlayıcıyı başlatın.
      NOT: Her yarışma için aynı kafesten fareler kullanın.
    4. "Kazananı", diğerini tüpten dışarı iten fare olarak tanımlayın; 1 puan verin. "Kaybeden" 0 puan alır.
      NOT: Kazananın geri çekilmesini önlemek için plastik bir çubuk kullanın. Her iki fare de donar ve 1 dakika içinde geri çekilmezse, hemen harekete geçmek için her farenin kuyruğuna plastik çubuklarla hafifçe dokunun.
    5. Farelerin başlangıç pozisyonlarını tersine çevirin ve 2.2.3-2.2.4 adımlarını tekrarlayın, sonucu tekrar puanlayın (Şekil 1B2).
    6. Her iki fareyi de ev kafeslerine geri koyun ve tüpü %75 etanol ile iyice temizleyin.
    7. Her fareyi diğer tüm kafes arkadaşlarıyla eşleştirmek için hepsini bir kez deneme formatı kullanın ve her çift için 2.2.3-2.2.5 adımlarını tekrarlayın.
      NOT: Bu yaklaşım, kapsamlı ve adil bir sıralama sağlar.
    8. Fareleri toplam puanlara göre sıralayın. Sonraki deneyler için her kafesteki en yüksek puanlı fareyi "kazanan" olarak seçin.
  3. CD1 saldırgan taraması
    NOT: Bu prosedürle ilgili ayrıntılar için, önceki raporabakın 35.
    1. CD1 emekli damızlık fareler, C57BL / 6J erkek fareler (davetsiz misafirler) ve bir zamanlayıcı hazırlayın.
    2. Bir C57BL/6J erkek fareyi 3 dakika boyunca doğrudan bir CD1 erkeğinin (yerleşik saldırgan) ev kafesine yerleştirin.
      NOT: Davetsiz misafir oturum sırasında kaçamaz.
    3. İlk saldırının gecikme süresini, saldırı sayısını ve 3 dakikalık süre içinde saldırgan davranışların süresini saldırganlık göstergeleri olarak kaydedin.
    4. Her gün farklı davetsiz misafir fareler kullanarak art arda 3 gün boyunca 2.3.2-2.3.3 adımlarını günde bir kez tekrarlayın (Şekil 1B3).
    5. İki kritere dayalı daha fazla deney için CD1 farelerini saldırgan olarak seçin: (1) üç oturumdan en az ikisinde saldırmış olmaları gerekir ve (2) saldırı gecikmeleri her oturumda 1 dakikadan az olmalıdır.

3. Modelleme

NOT: Bu adım, tüp testinde sosyal rekabet başarısızlığına rastgele maruz kalmayı, modifiye edilmiş dolaylı sosyal yenilgi stresini ve kaçınılmaz aşırı kalabalık stresini ve ardından art arda 10 gün boyunca sosyal izolasyonu içerir.

  1. Sosyal rekabet başarısızlığı
    NOT: Ayrıntılar için önceki raporlarabakın 32,34.
    1. Dişi denek fareleri, ekranlanmış "kazanan" fareler, tüpler (30 cm uzunluğunda, 26 mm iç çap), plastik çubuklar, %75 etanol, kağıt havlu ve bir zamanlayıcı hazırlayın.
    2. Dişi denek farelerini tek tek (kafes başına 1 fare) ve saf fareleri gruplar halinde (kafes başına 5 fare) yeniden barındırın.
      NOT: Modellemenin başlangıcında saf fareleri yeni grup kafeslerine taşıyın. Modelleme süresi boyunca yeni bir kafese geçmek gerekli değildir.
    3. Koku ipuçlarını ortadan kaldırmak için masayı, tüpleri ve plastik çubukları %75 etanol ile temizleyin.
    4. Fareleri ev kafeslerinden dikkatlice çıkarın. Tüpün zıt uçlarına bir MISS fare ve bir "kazanan" fare yerleştirin, böylece ileri doğru yürürler ve orta noktada buluşurlar. MISS fare, "kazanan" tarafından tüpün dışına itilecektir.
      NOT: "Kazananın" daha büyük boyutu, daha yüksek vücut ağırlığı ve baskın sosyal rütbesi, deneysel MISS faresinin neredeyse her zaman tüp yarışmasını kaybetmesini sağlar. Fareler 30 saniyeden fazla hareketsiz kalırsa, itmeyi teşvik etmek için kazananın kuyruğuna plastik bir çubukla hafifçe dokunun.
    5. İki farenin konumlarını değiştirin ve 3.1.4 adımını tekrarlayın. 3.1.4 ve 3.1.5 adımlarını bir döngü olarak sayın.
    6. MISS ve "kazanan" fareleri ev kafeslerine geri koyun. Kokuları gidermek için masayı, tüpü ve plastik çubuğu temizleyin.
    7. Yeni bir kazanan fareyi tanıtın ve aynı MISS fare ile 3.1.4-3.1.5 adımlarını tekrarlayın. Böylece her MISS faresi, art arda iki başarısız tüp yarışması döngüsüne tabi tutulur (Şekil 1C1, Şekil 2E).
    8. Arka arkaya 10 gün boyunca tüm MISS fareleri için 3.1.4-3.1.7 adımlarını tekrarlayın.
  2. Değiştirilmiş dolaylı sosyal yenilgi stresi
    1. Elenmiş agresif CD1 emekli damızlık fareler (tek başına barındırılan), erkek C57BL / 6J fareler, dişi MISS fareler ve delikli akrilik örtüler hazırlayın (Şekil 2C; L × G × Y: 8 cm × 8 cm × 5,5 cm) delikli (üst panelde 5 × 5, yan duvarlarda 3 × 5; her delik 0,5 cm çapında).
    2. Agresif etkileşimlerin dolaylı olarak gözlemlenmesine izin vermek için bir CD1 saldırganının kafesine, delikli bir akrilik örtünün altına yerleştirilmiş bir dişi MISS faresi yerleştirin.
      NOT: Akrilik kapağın CD1 veya MISS fare ile olası devrilme olasılığını izleyin. CD1 kafeslerindeki mısır koçanı yataklarının azaltılması, devrilmeyi önlemeye yardımcı olur.
    3. CD1 faresi tarafından 10 dakika boyunca fiziksel saldırıya uğramak üzere bir erkek C57BL/6J davetsiz misafir fareyi kafese sokun. Dişi MISS fare, delikli kapaktan etkileşimi gözlemler (Şekil 1C2, Şekil 2F).
      NOT: Davetsiz misafir fare ciddi şekilde yaralanırsa, seansı hemen sonlandırın ve hayvanı tedavi edin. Küçük mısır koçanı peletlerinin kullanılması, dövüşler sırasında yatak takımlarının yer değiştirmesini artırarak MISS fare için sürükleyici deneyimi geliştirir.
    4. 10 dakika sonra, erkek davetsiz misafiri çıkarın ve dişi MISS farenin CD1 faresine 5 dakika daha duyusal maruz kalmasına izin verin.
    5. 3.2.3-3.2.4 adımlarını farklı erkek davetsiz misafirlerle iki kez daha tekrarlayın.
    6. MISS fareyi ev kafesine geri koyun. Erkek davetsiz misafirlerdeki herhangi bir yaralanmayı izleyin ve tedavi edin.
    7. Delikli akrilik kapakları temizleyin ve dökülen yatak takımlarını süpürün.
    8. Art arda 10 gün boyunca yeni bir CD1 emekli yetiştirici kullanarak 3.2.2-3.2.5 adımlarını tekrarlayın.
  3. Kaçınılmaz aşırı kalabalık stresi
    1. Beyaz opak bir kılıf olan dişi MISS fareleri hazırlayın (Şekil 2D; L × G × Y: 14 cm × 10 cm × 20 cm), mısır koçanı yataklı standart fare kafesleri, %75 etanol, kağıt havlu ve zamanlayıcı.
    2. Opak manşonu yataklı standart bir kafesin içine yerleştirin.
    3. 12-15 dişi fareyi (tüm MISS fareleri veya diğer dişilerle karışık) günde 30 dakika boyunca manşonun içine sokun (Şekil 1C3, Şekil 2G).
      NOT: Çiğneme olmadan kalabalığı sağlamak için fare sayısını boyutlarına göre ayarlayın. Gerekirse manşonu şeffaf delikli bir kapakla kaplayarak kaçışı önleyin.
    4. Fareleri ev kafeslerine geri koyun ve kılıfı% 75 etanol ile temizleyin.
    5. 3.3.3 adımını art arda 10 gün boyunca tekrarlayın.
  4. Sosyal izolasyon
    1. Dişi MISS fareleri ve mısır koçanı yataklı standart fare kafeslerini hazırlayın.
    2. Ev MISS fareleri, 10 günlük modelleme süresinin geri kalanında sosyal rekabet başarısızlığı, dolaylı yenilgi stresi veya aşırı kalabalık stresi yaşamadıklarında bireysel olarak (Şekil 1C4, Şekil 2H).
      NOT: Saf fareler kuyruk tarafından nazikçe geçici bir kafese aktarılır, daha sonra herhangi bir strese maruz kalmadan ev kafeslerine geri gönderilir. MISS farelerinde olduğu gibi yiyecek ve su ad libitum sağlayın.

4. Davranış testleri

NOT: Farelerde depresif benzeri ve anksiyete benzeri davranışları değerlendirmek için modellemeyi takip eden bir hafta içinde davranışsal deneyler yapılır. Her testten önce, dişi fareler 1 saatlik alışkanlık için davranışsal test odasına (15-20 lüks aydınlatma) taşınır. Her testten sonra, fareler orijinal barınma tesislerine geri gönderilir.

  1. Sakkaroz tercih testi
    NOT: Ayrıntılar için öncekiraporlara bakın 36,37,38.
    1. Dişi denek fareleri, bilyeli tüplü içme şişeleri (50 mL), çelik tel üstleri olan standart fare kafesleri, sakaroz, elektronik terazi, dereceli silindir, karıştırma çubuğu, tartı kağıdı, su, defter ve kalem hazırlayın.
    2. Tüm dişi denek farelerini (saf ve MISS fareler) ayrı ayrı barındırın.
    3. Şişeleri içme suyuyla doldurun (hacmin ~ 2 / 3'ü).
      NOT: Deneye başlamadan önce şişelerde sızıntı olmadığından emin olun.
    4. Her fareye 2 günlük alışkanlık için yan yana yerleştirilmiş iki su dolu şişe sağlayın.
    5. % 1 sükroz suyu hazırlayın (99 mL su için 1 g sükroz).
    6. Testin başında, bir şişedeki suyu% 1 sükroz çözeltisi ile değiştirin. Her iki şişenin ilk ağırlıklarını kaydedin.
    7. 12 saat sonra, şişe ağırlıklarını tekrar kaydedin ve konumsal sapmayı önlemek için şişelerin konumlarını değiştirin.
    8. 24 saat sonra, son ağırlıkları kaydedin ve sükroz tercihini şu şekilde hesaplayın: Sükroz tercihi (%) = (Sükroz alımı / Toplam sıvı alımı) × 100
    9. Testin sonunda, fareleri normal su şişeleriyle ev kafeslerine geri koyun.
    10. Tüm şişeleri ve tükenmez tüpleri suyla iyice temizleyin.
  2. Kuyruk süspansiyon testi
    NOT: Bu test32 , deney tasarımına bağlı olarak aynı veya ayrı bir fare kohortu üzerinde gerçekleştirilebilir. Bu çalışmada sakkaroz tercih testinden 3 gün sonra gerçekleştirilmiştir.
    1. Dişi denek fareleri, bir kuyruk süspansiyonu test kutusu (55 cm yüksekliğinde × 60 cm genişliğinde × 12 cm derinliğinde), yapışkan bant, kronometre, %75 alkol ve kağıt havlu hazırlayın.
    2. Video izleme sisteminin kurulması39. Aktif bir bölge tanımlayın ve kaydı başlatın.
    3. Test kutusunu %75 etanol ile temizleyin.
    4. Fareyi kuyruğun ucundan ~2 cm uzağa nazikçe bantlayın ve başının kutunun altından ~25 cm uzakta olduğundan emin olarak baş aşağı asın.
      NOT: Sallanmayı en aza indirin ve gereksiz stresten kaçının.
    5. İzleme yazılımını kullanarak davranışı kaydedin35 6 dk. Analiz için son 4 dakikadan itibaren hareketsizlik süresini kullanın.
      NOT: Hareketsizlik, vücudun pasif olarak asılı kalmasıyla hareketin olmaması olarak tanımlanır. Fare düşerse veya yukarı çıkarsa verileri hariç tutun.
    6. Bandı dikkatlice çıkarın ve fareyi ev kafesine geri koyun.
  3. Açık alan testi
    NOT: Ayrıntılar için öncekiraporlara bakın 40,41.
    1. Dişi denek fareleri, açık alan test kutusu (40 cm × 40 cm × 40 cm),% 75 etanol ve kağıt havlu hazırlayın.
    2. Video izleme sistemini kurun. Arenayı sanal olarak 4 × 4 alt alana bölün; Merkezi 4 birimi merkezi bölge ve geri kalanını çevresel bölge olarak tanımlayın.
    3. Test kutusunu %75 etanol ile temizleyin.
    4. Nesne faresini, başı aynı yöne bakacak şekilde nazikçe kutunun ortasına yerleştirin. 5 dakika boyunca keşfetmesine izin verin.
      NOT: Taşıma stresini azaltmak için transfer için bir palet kullanın.
    5. Video izleme sistemini kullanarak merkezi bölgede kat edilen toplam mesafeyi ve geçirilen süreyi kaydedin.
    6. Testin sonunda fareyi ev kafesine geri koyun ve cihazı temizleyin.
  4. Yükseltilmiş artı labirent testi
    NOT: Ayrıntılar için önceki raporabakın 32.
    1. Dişi denek fareleri, yükseltilmiş bir artı labirent,% 75 etanol ve kağıt havlu hazırlayın.
      NOT: Labirent, her biri iki kollu (30 cm uzunluğunda × 5 cm genişliğinde) iki dikey pistten (yerden 50 cm yukarıda) oluşur. Bir set 15 cm yüksekliğinde duvarlara (kapalı kollar) sahipken, diğer set açıktır. Orta alan 5 cm × 5 cm'dir.
    2. Video izleme sistemini kurun ve açık kolları, kapalı kolları ve merkezi alanı tanımlayın.
    3. Labirenti% 75 etanol ile temizleyin.
    4. Fareyi nazikçe labirentin ortasına, açık bir kola bakacak şekilde yerleştirin. 5 dakika boyunca ücretsiz keşfe izin verin.
      NOT: Yerleştirme sırasında stresi en aza indirmek için bir palet kullanın.
    5. Takip sistemini kullanarak her bir kolda geçirilen süreyi kaydedin.
      NOT: Bir fare labirentten düşerse, verilerini hariç tutun.
    6. Fareyi ev kafesine geri koyun ve labirenti iyice temizleyin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

MISS maruziyetinin depresif benzeri davranış değişikliklerine neden olup olmadığını araştırmak için, MISS paradigmasına tabi tutulan dişi C57BL / 6J fareleri (grup başına n = 16; güç analizi ile belirlenen örneklem büyüklüğü, Ek Dosya 1 ve Ek Dosya 2'ye bakınız) sırasıyla depresyon-anhedoni ve davranışsal umutsuzluğun temel semptomlarını değerlendiren sükroz tercihi ve kuyruk süspansiyon testleri kullanılarak değerlendirildi (Şekil 3A-F

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Giderek artan sayıda çalışma, kronik sosyal yenilgi stresi (CSDS) paradigmalarını kullanarak psikiyatrik bozukluklar için kadına özgü modeller geliştirmeye odaklanmıştır 11,13,14. Örneğin, yakın zamanda kurulan iki dişi CSDS modelinde, dişi farelere yönelik erkek saldırganlığı, dişi farelerin erkek idrarı ile kaplanması veya erkek saldırganlarda ventromedial hipotalamusun ventrolateral alt bölüm...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar hiçbir rekabet çıkarı beyan etmezler.

Teşekkürler

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (31970937 ve 82271255), Jiangsu Eyaleti Yenilikçi ve Girişimci Ekip Programı, Jiangsu Eyaleti Anahtar Ar-Ge Programı Sosyal Kalkınma Projesi (BE2023690) ve Jiangsu Eyaleti Lisansüstü Araştırma ve Uygulama İnovasyon Programı (KYCX22_2932, KYCX23_2952) tarafından desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
%75 alkolAladdinA171299-500 mLLaboratuvar ekipmanlarını ve aletlerini sterilize etmek ve temizlemek için kullanılır
Rollerball ağızlı şişeÖzel hazırlanmış-İçmesuyu şişesi (50 ml), sakaroz tercih testi için bilyalı ağızlı kauçuk tıpalı
C57BL/6J dişi fareler  Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd219C57BL / 6J 7-8 haftalık dişi fareler denek fareleri olarak kullanılır ve 10-14 haftalık fareler kazanan adaylar olarak kullanılır
C57BL / 6J erkek fareler 7-8 haftalık C57BL / 6J dişi fareler denek fareler olarak kullanılır ve 10-14 haftalık fareler kazanan adaylar olarak,219C57BL / 6J erkek fareler agresif CD1 taraması için davetsiz misafir olarak kullanılır.
Yükseltilmiş artı labirentÖzel hazırlanmış-Yükseltilmişartı labirent, kesişen yükseltilmiş pistlerden (yerden 50 cm yukarıda) oluşur. Her pistin iki karşıt kolu vardır (30 cm uzunluğunda ve 5 cm genişliğinde). Pistlerden birinin yüksek duvarları (15 cm yüksekliğinde, kapalı kollar) ve diğerinin yüksek duvarları yoktur (açık kollar). Kesişen alan merkezi alan olarak adlandırılır (5 cm ve kez; 5 cm)
Erkek CD-1 emekli damızlık fareler  Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd201Erkek CD-1 saldırgan adayı olarak 4-6 aylık emekli damızlık fareler
Açık alan test kutusuÖzel hazırlanmış-Beyazakrilik açık kutu (L & times; W ve zamanlar; H: 40 cm ve kez; 40 cm ve kez; Açık alan testi için 40 cm)
Delikli kapakÖzel işçilik-Şeffafdelikli kapak (L & kez; W ve zamanlar; H: 8 cm ve kez; 8 cm ve kez; Dişilerin CD1 farelerle doğrudan fiziksel temastan korunması için 5,5 cm (üst tavanda 5 ve 5 kez ve yan duvarlarda 3 kez 5 delik, her deliğin çapı 0,5 cm'dir)
KılıfÖzel hazırlanmış-Şeffafolmayan plastik kılıf (L ve kez; W ve zamanlar; H: 14 cm ve kez; 10 cm ve kez; 20 cm) fareleri kalabalığa maruz kalmak için
Çelik tel üstlü standart fare kafesiSuzhou Fengshi Laboratuvar Equipment Co., Ltd.FS-SAGIVC-X30Standart fare kafesi (L & zaman; W ve zamanlar; Y: 37 cm ve kez; 16 cm ve kez; 12 cm) çelik telli üst 
SükrozSigmaV900116Sükroz tercih testinde %1 sükroz çözeltisi hazırlamak için kullanılır
Kuyruk süspansiyon kutusuÖzel hazırlanmış-Beyazakrilik kutu (H & times; W ve zamanlar; D: 55 cm ve kez; 60cm ve kez; 12cm) kuyruk süspansiyon testi için   
Şeffaf akrilik tüpler26 mm iç çapa sahip özel hazırlanmış-Şeffaf akrilik tüpler: tüp rekabeti için 30 mm uzunluğunda, tüp adaptasyonu için 10 mm uzunluğunda.
Video izleme sistemi (SMART V3.0)Panlab76-0695Farelerin hareketlerinin aktivite yörüngelerini ve sürelerini izlemek, kaydetmek ve analiz etmek için kullanılır
8-16 haftalık

Kaynaklar

  1. Mental disorders. , WHO. https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/mental-disorders (2025).
  2. Huang, Y., et al. Prevalence of mental disorders in China: A cross-sectional epidemiological study. Lancet Psychiatry. 6 (3), 211-224 (2019).
  3. Kulkarni, J. Why depression in women is so misunderstood. Nature. 608 (7924), S54(2022).
  4. Labonté, B., et al. Sex-specific transcriptional signatures in human depression. Nat Med. 23 (9), 1102-1111 (2017).
  5. Bangasser, D. A., Cuarenta, A. Sex differences in anxiety and depression: Circuits and mechanisms. Nat rev neurosci. 22 (11), 674-684 (2021).
  6. Najt, P., Fusar-Poli, P., Brambilla, P. Co-occurring mental and substance abuse disorders: A review on the potential predictors and clinical outcomes. Psychiatry Res. 186 (2-3), 159-164 (2011).
  7. Marcus, S. M., et al. Sex differences in depression symptoms in treatment-seeking adults: Confirmatory analyses from the sequenced treatment alternatives to relieve depression study. Compr Psychiatry. 49 (3), 238-246 (2008).
  8. Khan, A., Brodhead, A. E., Schwartz, K. A., Kolts, R. L., Brown, W. A. Sex differences in antidepressant response in recent antidepressant clinical trials. J Clin Psychopharmacol. 25 (4), 318-324 (2005).
  9. Beery, A. K., Zucker, I. Sex bias in neuroscience and biomedical research. Neurosci Biobehav Rev. 35 (3), 565-572 (2011).
  10. Lopez, J., Bagot, R. C. Defining valid chronic stress models for depression with female rodents. Biol Psychiatry. 90 (4), 226-235 (2021).
  11. Harris, A. Z., et al. A novel method for chronic social defeat stress in female mice. Neuropsychopharmacology. 43 (6), 1276-1283 (2018).
  12. Iniguez, S. D., et al. Vicarious social defeat stress induces depression-related outcomes in female mice. Biol Psychiatry. 83 (1), 9-17 (2018).
  13. Takahashi, A., et al. Establishment of a repeated social defeat stress model in female mice. Sci Rep. 7 (1), 12838(2017).
  14. Newman, E. L., et al. Fighting females: Neural and behavioral consequences of social defeat stress in female mice. Biol Psychiatry. 86 (9), 657-668 (2019).
  15. Trainor, B. C., et al. Sex differences in social interaction behavior following social defeat stress in the monogamous California mouse (Peromyscus californicus). PLoS One. 6 (2), 17405(2011).
  16. Logan, R. W. Adapting social defeat stress for female mice using species-typical interfemale aggression. Biol Psychiatry. 86 (9), e31-e32 (2019).
  17. Chai, H., et al. Antidepressant effects of rhodomyrtone in mice with chronic unpredictable mild stress-induced depression. Int J Neuropsychopharmacol. 22 (2), 157-164 (2019).
  18. Baker, S., Bielajew, C. Influence of housing on the consequences of chronic mild stress in female rats. Stress. 10 (3), 283-293 (2007).
  19. Ayuob, N. N., Firgany, A. E. L., El-Mansy, A. A., Ali, S. Can ocimum basilicum relieve chronic unpredictable mild stress-induced depression in mice. Exp Mol Pathol. 103, 153-161 (2017).
  20. Cavigelli, S. A., et al. Timing matters: The interval between acute stressors within chronic mild stress modifies behavioral and physiologic stress responses in male rats. Stress. 21 (5), 453-463 (2018).
  21. D'aquila, P. S., Brain, P., Willner, P. Effects of chronic mild stress on performance in behavioural tests relevant to anxiety and depression. Physiol Behav. 56 (5), 861-867 (1994).
  22. Erburu, M., et al. Chronic mild stress and imipramine treatment elicit opposite changes in behavior and in gene expression in the mouse prefrontal cortex. Pharmacol Biochem Behav. 135, 227-236 (2015).
  23. Grippo, A. J., Moffitt, J. A., Johnson, A. K. Evaluation of baroreceptor reflex function in the chronic mild stress rodent model of depression. Psychosom Med. 70 (4), 435-443 (2008).
  24. Becker, C., et al. Repeated social defeat-induced depression-like behavioral and biological alterations in rats: Involvement of cholecystokinin. Mol Psychiatry. 13 (12), 1079-1092 (2008).
  25. Bondar, N., et al. Molecular adaptations to social defeat stress and induced depression in mice. Mol Neurobiol. 55 (4), 3394-3407 (2018).
  26. Golden, S. A., Covington, H. E., Berton, O., Russo, S. J. A standardized protocol for repeated social defeat stress in mice. Nat Protoc. 6 (8), 1183-1191 (2011).
  27. Costi, S., Han, M. H., Murrough, J. W. The potential of KCNQ potassium channel openers as novel antidepressants. CNS Drugs. 36 (3), 207-216 (2022).
  28. Costi, S., et al. Impact of the KCNQ2/3 channel opener ezogabine on reward circuit activity and clinical symptoms in depression: Results from a randomized controlled trial. Am J Psychiatry. 178 (5), 437-446 (2021).
  29. Friedman, A. K., et al. KCNQ channel openers reverse depressive symptoms via an active resilience mechanism. Nat Commun. 7, 11671(2016).
  30. Tan, A., et al. Effects of the KCNQ channel opener ezogabine on functional connectivity of the ventral striatum and clinical symptoms in patients with major depressive disorder. Mol Psychiatry. 25 (6), 1323-1333 (2020).
  31. Wang, H. R., et al. Kcnq channels in the mesolimbic reward circuit regulate nociception in chronic pain in mice. Neurosci Bull. 37 (5), 597-610 (2021).
  32. Zhai, X., et al. Multiple integrated social stressnduces depressive-like behavioral and neural adaptations in female C57bl/6j mice. Neurobiol Dis. 190, 106374(2024).
  33. Zhang, G., et al. Neural and molecular investigation into the paraventricular thalamic-nucleus accumbens circuit for pain sensation and non-opioid analgesia. Pharmacol Res. 191, 106776(2023).
  34. Fan, Z., et al. Using the tube test to measure social hierarchy in mice. Nat Protoc. 14 (3), 819-831 (2019).
  35. Zhang, H., et al. Alpha1- and beta3-adrenergic receptor-mediated mesolimbic homeostatic plasticity confers resilience to social stress in susceptible mice. Biol Psychiatry. 85 (3), 226-236 (2019).
  36. Krishnan, V., et al. Molecular adaptations underlying susceptibility and resistance to social defeat in brain reward regions. Cell. 131 (2), 391-404 (2007).
  37. Vialou, V., et al. Serum response factor promotes resilience to chronic social stress through the induction of deltafosb. J Neurosci. 30 (43), 14585-14592 (2010).
  38. Yohn, C. N., et al. Chronic non-discriminatory social defeat is an effective chronic stress paradigm for both male and female mice. Neuropsychopharmacol. 44 (13), 2220-2229 (2019).
  39. SMART VIDEO TRACKING Software. , https://www.Panlab.Com/en/products/smart-video-tracking-software-panlab (2025).
  40. Cho, J. R., et al. Dorsal raphe dopamine neurons modulate arousal and promote wakefulness by salient stimuli. Neuron. 94 (6), 1205-1219.e8 (2017).
  41. Liu, Y., et al. Protective effects of luteolin on cognitive impairments induced by psychological stress in mice. Exp Biol Med (Maywood). 238 (4), 418-425 (2013).
  42. Senst, L., Baimoukhametova, D., Sterley, T. L., Bains, J. S. Sexually dimorphic neuronal responses to social isolation. Elife. 5, e18726(2016).
  43. Gh, W. Comparative psychology monographs. Hunter, W. S. 2, 1-27 (1923).
  44. Burke, A. W., Broadhurst, P. L. Behavioural correlates of the oestrous cycle in the rat. Nature. 209 (5019), 223-224 (1966).
  45. Van Doeselaar, L., et al. Chronic social defeat stress in female mice leads to sex-specific behavioral and neuroendocrine effects. Stress. 24 (2), 168-180 (2021).
  46. Zhao, W., et al. Behaviors related to psychiatric disorders and pain perception in c57bl/6j mice during different phases of estrous cycle. Front Neurosci. 15, 650793(2021).
  47. Becker, J. B., Prendergast, B. J., Liang, J. W. Female rats are not more variable than male rats: A meta-analysis of neuroscience studies. Biol Sex Differ. 7, 34(2016).
  48. Prendergast, B. J., Onishi, K. G., Zucker, I. Female mice liberated for inclusion in neuroscience and biomedical research. Neurosci Biobehav Rev. 40, 1-5 (2014).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Sosyal RekabetDolayl Sosyal YenilgiA r Kalabal k StresiSosyal zolasyonS kroz Tercih TestiKuyruktan Asma TestiY kseltilmi Art Labirent
Dişi C57BL/6J Farelerde Psikiyatrik Bozukluklar için Çoklu Entegre Sosyal Stres Modeli
Bize ulaşın
Kütüphaneye tavsiye et

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.