Yöntem makalesi

IDH1-mutant Diffüz Düşük Dereceli Gliomların Eksplant Kültürleri için Bir Protokol

DOI:

10.3791/67260

⸱

9 Mayıs 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institut de Génomique Fonctionnelle, Université de Montpellier, CNRS, INSERM, 2Department of Neurosurgery, Xinqiao Hospital, Third Military Medical University of Chongqing, 3Department of Neurosurgery, Gui de Chauliac Hospital, Montpellier University Medical Center, 4Jingfeng laboratories of Chongqing

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

IDH1-mutant diffüz düşük dereceli gliomlar kültüre edilmesi zor olan nadir tümörlerdir. IDH1 mutant protein ekspresyonunu koruyan ve kültürleri aylarca sürdüren basit, enzimatik olmayan bir eksplant yöntemi sunuyoruz. Daha da önemlisi, bu teknik dondurularak saklanmış tümörlerle çalışır ve glioma araştırmaları için değerli bir kaynak sunar.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

En sık görülen primer beyin tümörleri olan diffüz gliomlar, histopatolojik kriterlere ve genetik mutasyonlara göre düşük ve yüksek dereceli olarak kategorize edilir. Diffüz düşük dereceli gliomlar, ağırlıklı olarak genç erişkinleri etkileyen ve yüksek dereceli gliomlara yatkınlık yaratan bir alt küme oluşturur. İki ana diffüz düşük dereceli gliom türü vardır: astrositomlar ve oligodendrogliomlar, her biri farklı genetik ve histolojik özelliklerle tanımlanır. Bu tümörler karakteristik olarak metabolik enzim IDH1'in mutasyona uğramış bir varyantını sergiler ve hücresel farklılaşmayı bozar. Heterojendirler, hem proliferatif kök hücreleri hem de daha farklılaşmış, hareketsiz glial hücreleri içerirler.

Hastaya özgü, in vitro tümör modelleri, onkojenik mekanizmaların çözülmesi ve kişiselleştirilmiş tedavi için ilaç seçiminin uyarlanması için önemli bir potansiyele sahiptir. Bununla birlikte, özellikle IDH1 mutant düşük dereceli gliomlar için güvenilir in vitro modellerin olmaması, temel ve translasyonel araştırmaları engellemiştir. Burada, IDH1-mutant tümörleri enzimatik ayrışmaya ihtiyaç duymadan tanımlanmış ortamlarda eksplantlar olarak kültürlemek için basit bir yöntem sunuyoruz. Bu eksplantlar, IDH1-mutant protein ekspresyonunun yanı sıra ASCL1 (MASH1), OLIG1 ve OLIG2 gibi oligodendrosit progenitör hücreleri ve astrositler (GFAP, SOX9) için belirteçleri koruyarak uzun süre sürdürülebilir. DMSO'daki donmuş tümörlerden de kurulabilirler. Bu kültürler, ilaç taraması, videomikroskopi ve gen çalışmaları için değerli bir platform görevi görebilir ve böylece bu zorlu tümörlerin anlaşılması ve tedavisinde ilerlemeleri kolaylaştırabilir. Ayrıca IDH1-mutant hücre hatlarını türetme potansiyeli de sunarlar.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Diffüz gliomlar en sık görülen primer beyin tümörleridir. Bu tümörler şu anda çok yoğun tedaviye (cerrahi, radyo ve kemoterapi) rağmen tedavi edilememektedir1. Artan kanıtlar, gliomagenezin beyinde bulunan yetişkin kök veya glial progenitör hücrelerden kaynaklandığı hipotezini desteklemektedir2. Glioblastomlar en agresif tipi temsil etse de, diffüz düşük dereceli gliomlar (DLGG, grade 2 tümörler) de yaygındır (diffüz gliomların %15'i)1,3. DLGG'ler yavaş büyür ve bu 'dağınık' neoplazm4'ün ayırt edici özelliği olan beyaz cevher yolları boyunca göç eder. Bu DLGG'ler tedaviye rağmen sıklıkla tekrarlar ve sonuçta yüksek dereceli malignitelere (derece 3 ve 4)5) ilerler.

DLGG, izositrat dehidrojenaz 1 veya 2 geninde (IDH1 veya IDH2) bir yanlış anlamlı mutasyon ile karakterize edilir ve bu da onkometabolit 2-hidroksilütaratın (2HG) anormal üretimine neden olur. Bu, epigenetik disregülasyonlar6 yoluyla hücre farklılaşmasını bozar. IDH1-mutant gliomlar ayrıca alt tiplere ayrılır: astrositomlar tipik olarak ATRX ve P53'te mutasyonlara sahipken, oligodendrogliomlar 1p19q delesyonları7 ile karakterize edilir. Bu tümörler tümöral hücrelerin heterojenliğini sergiler. Tek hücreli RNA dizilimi ve immünokarakterizasyonu, bu tümörler içinde kök hücre benzeri, astrosit benzeri ve oligodendrosit benzeri fenotipler sergileyen çeşitli tümör hücresi popülasyonunu ortaya çıkarmıştır8,9.

Kolayca bulunabilen, uzun süreli kültürlerden ve hücre hatlarından yararlanan glioblastomun aksine, IDH1 mutant tümörlerini araştırmak için özel olarak tasarlanmış hücresel araçların kayda değer bir kıtlığı vardır1. Bu, terapötik gelişimi ilerletmek ve IDH1-mutant gliomagenez ve hastalık ilerlemesi hakkındaki anlayışımızı derinleştirmek için önemli bir engel teşkil etmektedir. Geleneksel serumla yetiştirilen hücre hatları, uzun süre kullanılırken, orijinal tümörleri yetersiz bir şekilde çoğaltır ve değiştirilmiş transkripsiyonel profiller gösterir. Alternatif olarak, ister 2D ister 3D tümöroid modellerde olsun, serumsuz kültür koşulları, tümör hücrelerinin transkripsiyonel profillerini ve normal beyin dokusuna invazyon gibi in vivo fenotiplerini daha etkili bir şekilde korur10,11.

Ek olarak, bir hastanın cerrahi örneğinden türetilen kısa süreli hücre kültürleri, tümörün moleküler profilini ve hücresel çeşitliliğini korur, böylece hücre hatlarına kıyasla tümörlerin biyolojik özelliklerini daha iyi temsil eder12. Burada, glioma araştırması ve terapötik geliştirme için geliştirilmiş in vitro modellere olan ihtiyacı ele almayı amaçlayan, taze veya donmuş hasta rezeksiyonlarından türetilen eksplantlar olarak IDH1 mutant diffüz düşük dereceli gliom kültürünü kültürlemek için basit, enzimatik olmayan bir yöntem sunuyoruz. Ayrıca IDH1-mutant hücre hatlarını türetme potansiyeli de sunarlar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokolde kullanılan tümör fragmanları, hasta onayı ile iyi karakterize edilmiş ve etik olarak onaylanmış bir koleksiyondan elde edildi. Bu araştırma Gliomacult: Characterization and Primary Cultures of Low-Grade Gliomas (Proje No. RECH/P722/1-5) ve 28 Ağustos 2023'te tümör biyobankasının bilimsel konseyi tarafından onaylandı.

1. Kültür plakalarının hazırlanması

NOT: Bu adımları steril doku kültürü laminer akış başlığı altında gerçekleştirin.

  1. Kültürden en az 1 saat önce, poli-D-lizin (PDL) ve laminin kaplı 24 oyuklu plakalar hazırlayın.
    1. 100 μg / mL'lik bir nihai konsantrasyon için 10 mg PDL tozunu 100 mL borat tamponunda (pH 8.4) seyreltin. Çözündükten sonra, sterilite için çözeltiyi (0.22 μm) filtreleyin. PDL kullanıma hazırdır; 3 mL alikot hazırlayın ve -20 °C'de saklayın.
    2. Jel oluşumunu önlemek için 1-2 mg / mL laminin tüpünü 4 ° C'de çözdürün. 50 μL'lik alikotlar hazırlayın ve bunları -20 °C'de saklayın.
      NOT: Tekrarlanan çözdürme ve dondurmadan kaçınılmalıdır.
    3. Plaka kaplama
      1. İsteğe bağlı adım: Hücre kültürü yemekleri için uygun olan steril lamelleri Ø, 13 mm, 24 oyuklu bir plakaya, kuyucuk başına bir lamel olacak şekilde yerleştirin.
        NOT: Bu adım, glioma eksplantlarının daha fazla immün boyanması içindir.
      2. Kuyucukların kaplanması için, 3 mL PDL çözeltisini 9 mL 1x PBS içinde karıştırın ve 50 μL laminin ekleyin. 1-2 μg/cm² kaplama konsantrasyonu için her bir oyuğa bu çözeltiden 500 μL ekleyin. Kaplanmış plakaları oda sıcaklığında, tercihen yavaş sallanarak (15 RPM) en az 1 saat inkübe edin.
      3. Kültürden hemen önce, PDL-laminin solüsyonunu çıkarın ve steril 1x PBS.
        ile iki kez durulayın NOT: Kuyuların kurumasına izin vermeyin.

2. Medya

  1. Kültür IDH1-mutant eksplantlar, L-glutamin ile takviye edilmiş DMEM / F12 içeren tanımlanmış bir ortamda ve A Vitamini içermeyen N2 ve B27'den oluşan bir serum replasman karışımı ile birlikte bakteri ve mantar kontaminasyonunu önlemek için siprofloksasin, gentamisin ve mantar dahil olmak üzere antibiyotikler kullanın. Ek olarak, büyüme faktörleri heparin, EGF ve FGF2'yi ortama dahil edin, filtreleyin (0.2 μm) ve 4 ° C'de 2 haftaya kadar saklayın.
    NOT: Ortam bileşenleri ve hazırlanması ile ilgili ayrıntılar için Tablo 1'e ve Malzeme Tablosuna bakın.

3. Eksplant hazırlama

  1. Numune işlemeden önce, çalışma alanını ve steril aletleri Şekil 1A'da gösterildiği gibi hazırlayın. Soğuk bir paketi% 70 etanol püskürterek sterilize edin. Makas ve forsepsleri p etanole batırarak ve PBS ile durulayarak sterilize edin.
  2. Tümör rezeksiyonunu kültür için derhal, ideal olarak cerrahi ekstraksiyondan sonraki 2 saat içinde buz üzerine aktarın (Şekil 1B).
    NOT: Daha iyi sonuçlar elde etmek için tümör numunesi minimum 9-10 mm çapında olmalıdır. Bu yöntem histolojik amaçlar için tercih edildiği için doku kültür ortamı olmadan taşınır. Sıvının olmaması, hızlı dondurma sırasında buz kristali oluşumunu önler, böylece gerekirse sonraki histolojik inceleme için doku bütünlüğünü korur.
  3. Tümör numunesi ile birlikte kültür kabını soğuk paketin üzerine yerleştirin ve fazla kanı çıkarmak için 1X PBS ile nazikçe durulayın.
  4. Rezeke edilen tümör sıklıkla tümör kitlesi, infiltre doku ve tümöral olmayan bileşenlerden oluşan önemli boyut ve heterojenlik sergiler (Şekil 1C). Daha fazla tümör hücresi içerme eğiliminde olduklarından, tümör hücresi izolasyonu için yumuşak veya jöle benzeri bir dokuya sahip gri bir renk gösteren kısımları seçin. Tersine, kültür için uygun daha az tümör hücresi içerebilecekleri için sert ve beyaz bölgelerden (Şekil 1D) ve ayrıca kararmış alanlardan kaçının, çünkü bunlar muhtemelen elektrokoterin bir sonucudur ve analiz için güvenilir sonuçlar sağlayamayabilir.
  5. Seçilen numuneleri kıyma için 1,5 mL'lik bir mikrotüpe veya kriyoviyal içine aktarın. 1.5 mL mikrotüp veya kriyoviyal için 1 mL steril ortam ekleyin ve numuneyi steril makasla küçük parçalar (1-2 mm3) elde edene kadar doğrayın.
    NOT: Tipik olarak 1-2 mm3 boyutunda küçük parçalar elde etmek için yaklaşık 1-2 dakika doğrama gereklidir (Şekil 1E).
  6. Steril makasla, kabaca 3-4 mm çapında geniş bir açıklık oluşturmak için 1.000 μL'lik mavi bir pipet ucunun ucunu dikkatlice kesin. Bu modifiye edilmiş ucu kullanarak, kıyılmış doku parçalarından 50-200 μL'yi pipetleyin ve bunları her bir oyuğa eşit olarak dağıtın. Daha küçük parçalar hızlı bir şekilde çökelme eğiliminde olduğundan, homojen dağılımı sağlamak için her bir kuyucuktaki süspansiyonu nazikçe yeniden homojenize edin.
    NOT: Aşırı kalabalıktan kaçının ve her bir kuyucuğa aşırı sayıda parça sokmayarak dengeyi koruyun (Şekil 1F).
  7. Tümör parçalarını 37°C'de 0 nem oranına sahip %5 CO2 inkübatörde inkübe edin. Tümörün metabolik aktivitesi (ortamın hızlı sararması ile gösterilir) ve her bir oyuktaki parça sayısı gerektiriyorsa, ortamı her gün değiştirin. Besiyeri değişiklikleri sırasında, 200 μL'lik bir uçla donatılmış bir pipet kullanarak besiyerini hassas bir şekilde aspire ederek dikkatli olun ve yapışan tümör parçalarını rahatsız etmekten kaçının.

figure-protocol-1
Şekil 1: Tümör eksplant kültürü prosedürü. DSÖ 2021 sınıflamasına göre grade II astrositom tanısı alan 44 yaşındaki bir hastadan diffüz düşük dereceli glioma rezeksiyonu elde edildi. Tümör, ATRX boyaması olmaması ile birlikte bir IDH1 mutasyonu (Ekzon 4 c.395 G>A, p.Arg132His) ve bir TP53 mutasyonu (Ekzon 8 c.843_844delinsGT, p.Asp281_Arg282delinsGluHis) sergiledi. TERT geninin Ets/TCF bağlanma bölgelerinde (C250T ve C228T) mutasyon tespit edilmedi. (A) Çalışma yüzeyi, numune bozulmasını en aza indiren ve biyolojik bileşenlerin canlılığını koruyan bir ortam sağlayan soğuk bir paket içerir. Bu önlemler dokunun kalitesini ve bütünlüğünü korumak için önemlidir. (B) Numunenin hastaneden laboratuvara taşınması buz üzerinde yapılmalıdır. (C) Tümör rezeksiyon fragmanı. Oklar kültür için en uygun parçaları gösterir. (D) Tümörün diseksiyonu, kıyılacak en uygun parçayı seçmek için yapılır. Deneyimlerimize göre, beyaz cevherin başarılı eksplantlar üretme olasılığı genellikle daha düşüktür. (E) Makasla mekanik olarak kıyıldıktan sonra 15 mL'lik bir tüpte yaklaşık 1-2 mm³ çapında tümör parçaları. (F) Uygun tohumlama için gerekli olan tümör parçalarının sayısı, 24 oyuklu bir plaka üzerindeki kuyucuklar için gösterilmiştir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

4. Kıyılmış tümör kriyoprezervasyonu ve çözülmesi

NOT: Kriyoprezervasyon, kontaminasyon ve eksplant kültürlerinin kaybı durumunda veya tümör örneklerini daha sonra işlemek için yedeklemeyi sağlar.

  1. Kriyoprezervasyon: 8 mL hücre kültürü ortamına 2 mL DMSO ekleyerek dondurma ortamını (% 20 v / v DMSO çözeltisi) hazırlayın.
  2. % 10'luk bir nihai konsantrasyon elde etmek için kıyılmış tümör süspansiyonunun 1 hacmini% 20 DMSO dondurma ortamının eşit hacmi ile birleştirin. Kapsamlı bir karıştırma sağlamak için karışımı dikkatlice yukarı ve aşağı pipetleyin, ardından yaklaşık 1 mL'yi kriyoviyallere dağıtın.
  3. Kademeli sıcaklık düşüşü için kriyoviyalleri hızla kriyojenik bir kaba aktarın, ardından sıvı nitrojen içinde son depolamadan önce -80 °C'de gece boyunca inkübe edin.
    NOT: Bu adım, hücreler dondurucu ortama yerleştirildikten hemen sonra gerçekleştirilmelidir, çünkü DMSO gibi bazı kriyoprotektanlar, hücreler oda sıcaklığında gerekenden daha uzun süre maruz kalırsa zararlı olabilir.
  4. Çözülme:


Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Birkaç gün sonra, bazı tümör parçaları kuyu yüzeylerine yapışacak ve eksplantlardan hücrelerin büyümesini başlatacaktır. İlk kaplama ile tümöral büyüyen hücrelerin ortaya çıkması arasındaki süre numuneden numuneye farklılık gösterir. İlk kültürler genellikle önemli hücresel kalıntılar içerir ve bu da canlı hücrelerin varlığını değerlendirmeyi zorlaştırır. Sonuç olarak, kültür en az 4 hafta boyunca korunmalıdır. Hücreler büyümeye başladığında, bipolar veya multipolar görünüme sahip uzun hücreler gözlenir (

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

IDH1 mutant düşük dereceli gliomalar için in vitro ve klinik öncesi modeller geliştirmek, bu tümörlerin yavaş büyümesi ve IDH mutasyonunun neden olduğu kapsamlı genomik ve epigenomik değişikliklerin kopyalanmasının karmaşıklığı nedeniyle özellikle zordur. Ayrıca, bu infiltratif tümör hücreleri, bağışıklık, endotelyal, glial ve nöronal hücreler dahil olmak üzere çevredeki hücrelerle aktif olarak etkileşime girer ve potansiyel olarak hayatta kalmak için onlara güvenir. Bu karmaşık etkileşimin laboratuvar ortamında kopyalan...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların beyan edecekleri herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada kullanılan tümör parçaları, Montpellier Üniversitesi Hastanesi'ndeki (CRB@chu-montpellier.fr) Biyolojik Kaynak Merkezi tarafından tutulan taze doku örneklerinin NEUROLOGY koleksiyonunun bir parçasıdır. Bu araştırma, Prof. J. P. Hugnot'un yürütücüsü olduğu "Gliomacult: Characterization and Primary Cultures of Low-Grade Gliomas" başlıklı proje kapsamında gerçekleştirilmiştir (Proje No. RECH/P722/1-5). Bu çalışma La ligue contre le cancer, ARC (Kanser Araştırmaları Derneği), ARTC, ARTC SUD, Les Etoiles dans la mer, EMBALL'ISO, Région Occitanie, INCA tarafından desteklenmiştir. K.A.C, Meksika'daki Ulusal Beşeri Bilimler Bilim ve Teknoloji Konseyi (CONAHCYT) ve Fransa'daki Beyin Tümörü Araştırmaları Derneği (ARTC) tarafından desteklenmektedir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Anti-ASCL1BD Pharmingen ve ticaret;556604Seyreltme 1:500
Anti-ATRXSigma-AldrichHPA001906Seyreltme 1:100
Anti-CD68AgilentM081401-2Seyreltme 1:500
Anti-GFAPAves LabsAB_2313547Seyreltme 1:500
Anti-IBA1Fujifilm Wako Antikorları019-19741Dilituion 1:1000
Anti-IDH1 (R132H) fare Monoklonal AntikoruDianovaDIA-H09
Anti-Ki67BD Pharmingen ve ticaret;556003Dilituion 1:1000
Anti-OLIG1R& D Sistemleri®AF2417Dulituion 1:300
Anti-OLIG2Sigma-AldrichMABN50Seyreltme 1:250
Anti-SOX9Abcam®EPR14335-78Seyreltme 1:100
B-27 Takviyesi (50x), eksi A vitaminiThermo Fisher Scientific12587010
Sığır Serum Albümini (BSA)CiteAbA-421-100
Siprofloksasin HClSigma-AldrichPHR1044-1G
CoolCellCorning®432000Hücre Dondurma Kabı, 12 x 1 mL veya 2 mL Kriyojenik Şişeler için
Kapak kayma ve oslash;, 13 mmKarl Hecht™ Asistan ve ticaret;
Dimetil Sülfoksit (DMSO)Sigma-AldrichD8418
DMEM/F-12, glutamin içermezThermo Fisher Scientific21331020
DNAse ISigma-Aldrich10104159001
Dulbecco′ s Fosfat Tamponlu Tuzlu Su (PBS) 1xSigma-AldrichD8537
Falcon 100 mm TC ile işlenmiş Hücre Kültürü KabıCorning®
Falcon 24 kuyulu Temizle Düz TabanlıCorning®353047TC ile muamele edilmiş Çok Kuyulu Hücre Kültürü Plakası, Kapaklı, Steril ve nbsp;
FunginInvivoGenant-fn-1
GentamisinThermo Fisher Scientific15750-037
HeparinSigma-AldrichH3149-100KU
HEPESSigma-AldrichH-3375
İnsan EGFPeproTechAF-100-15-1MG
İnsan FGF-temelPeproTech100-18B-1MG
LamininSigma-AldrichL2020
L-GlutaminThermo Fisher Scientific25030-024
N-2 Takviyesi (100x)Thermo Fisher Scientific17502-048
PDLSigma-AldrichP7886
GF / 0.2 ve mikro ile serum akrodiski 37 mm şırınga filtresi; m SuporPALL Corporation4525
Tripsin İnhibitörüThermo Fisher Scientific17075-029
Tripsin-EDTA (% 0.05), fenol kırmızısıThermo Fisher Scientific25300054
Zeiss Z1 Apotome 3 mikroskopZeissdüz geniş alan epifloresan mikroskobu
328017353003

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Dasgupta, P., Balasubramanyian, V., De Groot, J. F., Majd, N. K. Preclinical models of low-grade gliomas. Cancers (Basel). 15 (3), 596(2023).
  2. Tirosh, I., et al. Single-cell RNA-seq supports a developmental hierarchy in human oligodendroglioma. Nature. 539 (7628), 309-313 (2016).
  3. Jooma, R., Waqas, M., Khan, I. Diffuse low-grade glioma - changing concepts in diagnosis and management: A review. Asian J Neurosurg. 14 (2), 356-363 (2019).
  4. Louis, D. N. Molecular pathology of malignant gliomas. Annu Rev Pathol. 1, 97-117 (2006).
  5. Adenis, L., Plaszczynski, S., Grammaticos, B., Pallud, J., Badoual, M. The effect of radiotherapy on diffuse low-grade gliomas evolution: Confronting theory with clinical data. J Pers Med. 11 (8), 818(2021).
  6. Pirozzi, C. J., Yan, H. The implications of idh mutations for cancer development and therapy. Nat Rev Clin Oncol. 18 (10), 645-661 (2021).
  7. Van Den Bent, M. J., Smits, M., Kros, J. M., Chang, S. M. Diffuse infiltrating oligodendroglioma and astrocytoma. J Clin Oncol. 35 (21), 2394-2401 (2017).
  8. Suva, M. L., Tirosh, I. The glioma stem cell model in the era of single-cell genomics. Cancer Cell. 37 (5), 630-636 (2020).
  9. Augustus, M., et al. Identification of CRYAB+ KCNN3+ SOX9+ astrocyte-like and EGFR+ PDGFRA+ OLIG1+ oligodendrocyte-like tumoral cells in diffuse idh1-mutant gliomas and implication of NOTCH1 signalling in their genesis. Cancers (Basel). 13 (9), 2107(2021).
  10. Hubert, C. G., Rich, J. N. Patient-derived explants as tumor models. Cancer Cell. 40 (4), 348-350 (2022).
  11. Abdullah, K. G., et al. Establishment of patient-derived organoid models of lower-grade glioma. Neuro Oncol. 24 (4), 612-623 (2022).
  12. Yuzhakova, D. V., et al. Development of a 3d tumor spheroid model from the patient's glioblastoma cells and its study by metabolic fluorescence lifetime imaging. Sovrem Tekhnologii Med. 15 (2), 28-38 (2023).
  13. Kloosterman, D., et al. Morphology of microglia across contexts of health and disease. Cell. 187, 5336-5356.e30 (2024).
  14. Thomas, D. L. 2021 updates to the World Health Organization classification of adult-type and pediatric-type diffuse gliomas: A clinical practice review. Chin Clin Oncol. 12 (1), 7(2023).
  15. Azar, S., et al. Cellular and molecular characterization of IDH1-mutated diffuse low grade gliomas reveals tumor heterogeneity and absence of EGFR/PDGFRalpha activation. Glia. 66 (2), 239-255 (2018).
  16. Bhaduri, A., et al. Outer radial glia-like cancer stem cells contribute to heterogeneity of glioblastoma. Cell Stem Cell. 26 (1), 48-63.e6 (2020).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

IDH1 Mutant GliomalarT m r Eksplant ProtokolOligodendrosit Projenit r H creleriAstrosit Mark rleriT m r Mikro evresiKriyoprezervasyon Protokol3B T m r ModelleriKi iselle tirilmi la Tarama

İlgili makaleler