Yöntem makalesi

Yumuşak doku kesitinde ilaç dağılımını görselleştirmek için korjunik optik spektroskopi ve kütle spektrometresi görüntüleme metodolojisi

DOI:

10.3791/67383

⸱

20 Haziran 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Chemical & Biological Sciences Department, National Physical Laboratory, 2Department of Life Sciences, University of Bath, 3Haleon CH SARL, 4School of Chemistry & Chemical Engineering, University of Surrey

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, doğrusal olmayan optik spektroskopi ve kütle spektrometresi görüntüleme kullanılarak yumuşak dokulardaki ilaçların korelasyon görüntülemesi için bir yöntem sunmaktadır. Yüksek çözünürlüklü cilt görüntülemeyi hassas ilaç tespiti ile birleştirmek, üstün topikal ürünlerin geliştirilmesi için kritik olan ciltteki ilaç dağılımını incelemek için değerli bir yaklaşım sunar.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yumuşak dokuda ilaç uygulaması üzerine kimyasal dağılımı görselleştirmek için mikron altı uzamsal çözünürlüğü optik spektroskopi ve kütle spektrometresi görüntüleme ile hassas ilaç tespiti ile birleştiren yeni bir korelasyon görüntüleme metodolojisi geliştirilmiştir. Bu örnekte, yöntem, ticari bir steroid olmayan anti-enflamatuar ilaç ürününün 16 saat boyunca in vitro topikal uygulamasından sonra eksize edilen cilt dokusu üzerinde test edilmiştir. Uyarılmış Raman saçılımı, ikinci harmonik üretim ve iki fotonlu floresan mikroskopları dahil olmak üzere tahribatsız optik spektroskopik yöntemler ilk olarak cilt yapısını ve morfolojisini haritalamak için kullanıldı. Daha sonra, aynı cilt dokusu örnekleri, en dış cilt katmanları - epidermis ve dermis boyunca diklofenak tespiti için gelişmiş hassasiyet sağlayan uçuş süresi ikincil iyon kütle spektrometresi (ToF-SIMS) yoluyla analiz edildi. Optik ve kütle spektrometrik verileri entegre etmek için görüntü kayıt yöntemleri geliştirilmiştir. Bu yaklaşım, doku yapısının etiketsiz, yüksek çözünürlüklü görselleştirmesini hassas kimyasal algılama ile birleştirir ve deride ve potansiyel olarak diğer yumuşak biyolojik dokularda ilaç dağılımını araştırmak için değerli bir araçtır.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Topikal veya sistemik uygulamalarını takiben aktif farmasötik bileşenlerin yumuşak biyolojik dokular içindeki dağılımının oranını, kapsamını ve itici güçlerini anlamak, dokuya özgü ilaç alımı, metabolizması ve klerensinin altında yatan mekanizmaları aydınlatmak için çok önemlidir (yani, ilaç farmakokinetiğinin daha derin bir şekilde anlaşılması). Burada, doku yapısının ve topikal ilaçların aynı doku örneği içindeki dağılımının etiketsiz görselleştirilmesi için doğrusal olmayan optik spektroskopileri ve kütle spektroskopisi görüntülemeyi entegre eden yeni bir korelasyon görüntüleme yöntemi sunuyoruz1.

Raman spektroskopisi (RS), yüksek uzamsal çözünürlük ve moleküler özgüllüğe sahip hücreler ve dokular içindeki ilaç dağılımını haritalamak için değerli bir araç olarak ortaya çıkmıştır2. RS, dış etiketlere ihtiyaç duymadan, buradaki moleküllerin karakteristik titreşim modları aracılığıyla ayrıntılı bir kimyasal karakterizasyona izin veren bir ilgi örneği tarafından ışığın3 esnek olmayan saçılmasına dayanır. Bununla birlikte, yüksek çözünürlüklü görüntüler üretmek için uzun elde etme süreleri, hassas biyolojik numunelerin bütünlüğünü potansiyel olarak tehlikeye atabilir. Ek olarak, daha derin doku katmanlarını incelerken, ışığın doku tarafından saçılması ve emilmesi, Raman sinyalini zayıflatarak hassasiyetini daha da sınırlayabilir. Uyarılmış Raman Saçılması (SRS) mikroskobu, darbeli lazer uyarımından ve uyarılmış Raman sinyalinin4 algılanmasından yararlanarak geleneksel RS'ye göre önemli bir ilerlemeyi temsil eder. SRS mikroskobu, yüksek uzamsal çözünürlükle 2 boyutlu ve 3 boyutlu hızlı görüntü elde edilmesine olanak tanır ve - ikinci harmonik nesil (SHG) ve iki foton uyarılmış floresan (TPEF) mikroskobu ile birlikte gerçekleştirildiğinde - bağ dokuları, kollajen ve elastin 1,5,6,7,8,9 . SHG mikroskobu, ışığın bir numunedeki sentrosimetrik olmayan yapılarla etkileşimine dayanan ve gelen ışığın dalga boyunun yarısında bir sinyal üreten doğrusal olmayan bir optik tekniktir. Özellikle biyolojik dokularda kollajen gibi sıralı yapıların görüntülenmesi için faydalıdır. TPEF, iki düşük enerjili fotonun aynı anda bir floroforu uyararak floresan yaymasına neden olduğu başka bir doğrusal olmayan mikroskopi tekniğidir. TPEF, uyarma ışığı biyolojik numunelere daha derine nüfuz eden yakın kızılötesi aralıkta olduğundan, azaltılmış fotohasar ile derin doku görüntülemeye izin verir.

Kütle spektrometresi görüntüleme (MSI), kütle spektrometrisinin yeteneklerini uzamsal bilgilerle birleştiren ve çok çeşitli moleküllerinetiketsiz tanımlanmasına olanak tanıyan güçlü bir analitik tekniktir 10,11,12. Uçuş süresi ikincil iyon kütle spektrometresi (ToF-SIMS), numune yüzeyini yüksek enerjili birincil iyonlarla bombardıman ederek çalışır ve ikincil iyonların yüzeyden fırlatılmasına neden olur. Bu ikincil iyonlar daha sonra kütle-yük oranlarının belirlendiği bir uçuş süresi analizörüne doğru hızlandırılır. Bu analiz, moleküler fragmanların ve izotopik varyasyonların yüksek hassasiyet ve çözünürlükle tanımlanmasına izin verir. ToF-SIMS'in değerli uygulamaları, hücrelerde13, dokularda 14,15 ve organlarda15 kimyasalların ve biyomoleküllerin incelenmesi için biyolojik ve farmasötik araştırmalarda gösterilmiştir.

Hem SRS hem de ToF-SIMS, ilaçların farklı cilt modellerinde dağılımını incelemek için bağımsız olarak kullanılmıştır. Bununla birlikte, tamamlayıcılıklarından yararlanmak için bu teknikleri kombinasyon halinde kullanmak en değerlidir. Bu çalışmada, optik mikroskopilerin (SRS, TPEF ve SHG) ToF-SIMS ile birleştirilmesi ve mikron altı uzamsal çözünürlüğe sahip (optik yöntemlerle sağlanan) cilt morfolojisinin görüntülerini elde etmek için bir iş akışını tanımladık. Bu yaklaşım, ticari bir topikal formülasyon (Voltaren jeli) ile tedavi edilen eksize edilmiş cilt dokularında diklofenak dağılımının görselleştirilmesinin zorlu örneğini ele almak için kullanılmıştır. Başarı kriterleri, diklofenakı terapötik konsantrasyonunda tespit etmek için yüksek kimyasal duyarlılık ve cilt yapısını çözmek için yeterli uzamsal çözünürlüğü içeriyordu. Farklı cilt katmanlarındaki diklofenak içeriği, topikal tedaviden sonra bant sıyırma ve ardından miktar tayini16 veya açık akışlı mikroperfüzyon17 gibi zahmetli ve teknik olarak zorlu yöntemlerle ölçülebilse de, bu yaklaşımlar, ürün geliştirme aşamasına yardımcı olan temel faktörler olan tek tek cilt katmanlarında eksipiyana bağlı diklofenak bölümleme, penetrasyon, tutma ve derinlik dağılımını açıklayamaz.

Aşağıda açıklanan ölçüm metodolojisinden önce, Voltaren Forte jeli (% 2.32 diklofenak dietilamonyum içeren) veya karşılık gelen bir plasebo jel (Haleon CH SARL tarafından sağlanır) cilt yüzeyine farklı süreler boyunca (4, 12, 16 veya 24 saat) uygulanmıştır. Herhangi bir kalıntı formülasyonun çıkarılmasından sonra, aynı deri numuneleri üzerinde SRS ve ToF-SIMS ölçümleri yapıldı; Metodolojinin tüm detayları orijinal el yazması1'de açıklanmıştır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Etik beyan: İnsan derisi örnekleri, Edinburgh, İngiltere'deki Charles River Laboratories (CRL) tarafından Glasgow, İngiltere'deki Tissue Solutions Ltd'den elde edildi. Tüm anonim örnekler, bağışçıların veya en yakın akrabalarının etik onayı ve bilgilendirilmiş onamları ile, toplama ülkesinin yasal ve etik standartlarına uygun olarak elde edilmiştir.

1. Cilt bölümleme

Cilt dokularının kesitlerini üretmek için bir kriyostat kullanıldı.

  1. İşlem görmüş cilt disklerini -20 °C dondurucudan çıkarın ve diskin merkezinden küçük bir parça (~ 1.0 cm x 1.0 cm) kesin.
  2. Numuneyi donmuş bir su damlası üzerine kriyostattaki aynaya monte edin. Optimum kesme sıcaklığı (OCT) bileşiği veya diğer gömme ortamları kullanmayın.
  3. Bıçağı ve numune sıcaklığını sırasıyla - 20 °C ve - 16 °C'ye ayarlayın.
  4. 30 μm kalınlığındaki bölümü bir cam lamel üzerine yerleştirin (#1.5, Fisher Scientific).
  5. SRS ve ToF-SIMS'i hemen gerçekleştirin veya alternatif olarak, numune -80 °C'de saklanmak üzere vakumla paketlenebilir.
  6. Kullanmadan önce 20 dakika kurutun.

2. SRS görüntüleme

SRS, SHG ve TPEF mikroskopileri uyumlu bir Raman mikroskobu kullanılarak gerçekleştirildi. İki pikosaniye lazer darbesi, ayarlanabilir bir pompa ışını ile uzamsal ve zamansal olarak üst üste binen 1031.2 nm Stokes ışını tarafından üretildi. 20 MHz'de modüle edilen Stokes ışını, uyarılmış Raman kaybı sinyallerinin iletim yoluyla tespit edilmesini kolaylaştırdı. Sinyal algılama için kilitli bir amplifikatör ile birleştirilmiş silikon bazlı bir dedektör kullanıldı. İkinci harmonik ve yayılan floresan sinyallerini toplamak için başka bir kanal kullanıldı ve algılama için bir fotoçoğaltıcı tüp kullanıldı.

  1. Çoklu foton doku görüntüleme için uygun objektif ve kondansatör lensleri takın, bu durumda kısa çalışma mesafeli bir hava kondansatör lensi (0,9 NA) ile birlikte suya daldırmalı 40x büyütmeli bir lens (1,1 NA).
  2. Monte edilmiş doku bölümünü, doku, kondansatör merceği ile mikroskop lamının aynı yüzünde olacak şekilde SRS mikroskop numune aşamasına yerleştirin. Objektif lensi doku bölümüne odaklayın ve ardından kondansatör yüksekliğini optimize edin.
  3. Dokuya zarar vermeden iyi bir sinyal-gürültü oranı elde etmek için lazer gücünü uygun değerlere ayarlayın. Bu örnekte, numuneye pompa kirişi için yaklaşık 10 mW ve Stokes kirişi için 30 mW uygulanmıştır. SRS ölçümleri için pratik hususlar için Tsikritsis ve diğerlerine bakın4.
  4. 400 Hz görüntüleme hızı ve CH2 gerilmeye karşılık gelen 2850 cm-1'de 1 çizgi ortalaması ile X1 yakınlaştırmada 290 μm x 290 μm'ye karşılık gelen 512 x 512 piksel çözünürlüğe sahip tüm bölümün mozaik görüntüsünü elde edin.
  5. Tüm bölümün mozaik görüntüsü içinde, aşağıdaki hususlarla bir ilgi alanı (ROI) seçin: (i) Franz hücre aparatına kenetlenmiş dozlanmamış cildin olabileceği numune çevresinin en dıştaki %20'sinden kaçınarak merkeze yerleştirilir; (ii) aynı optik derinlik seviyesi içinde incelenmek için yeterince düz olması; (iii) numune ToF-SIMS'e aktarıldığında görsel olarak tanımlanmasına yardımcı olacak farklı yapısal özelliklere sahiptir.
  6. SRS ve SHG/floresan dedektörleri için çalışma boyunca tutarlı kazanç ayarları uygulayın ve (i) CH gerilme bölgesinde görüntüler elde edin (sırasıyla CH3, CH2 ve rezonans dışı kontrole karşılık gelen 2945 cm-1, 2850 cm-1 ve 2650 cm-1'de); (ii) parmak izi bölgesi (sırasıyla 1666 cm-1 ve 1723 cm-1'de Amid I ve rezonans dışı kontrole karşılık gelir); (iii) Uygulanan ilaçla ilgili açık ve kapalı rezonansa karşılık gelen dalga numarası; bu örnekte, 1586 cm'de-1 ve 1530 cm-1 sırasıyla C=C ve kapalı rezonansa karşılık gelir.

SRS görüntülemeden sonra, numuneyi analiz için hemen ToF-SIMS kurulumuna aktarın.

3. ToF-SIMS görüntüleme

Uçuş süresi ikincil iyon kütle spektrometresi görüntülemesi, 0.2 pA akıma sahip 30 keV Bi3+ birincil iyon demeti kullanılarak gerçekleştirildi.

  1. Uygun edinme ayarlarını seçin; Bu örnekte, 100 ms görev döngüsü süresi, m/z 0-900 kütle aralığı ve 5 μm ışın çapı ile negatif iyon polaritesi kullanılmıştır. Şarj kompanzasyonu için 5 μA'da 20 eV'lik bir elektron sel tabancası kullanıldı.
  2. Doku boyutlarına bağlı olarak tüm doku bölümünü bir görüş alanıyla haritalamak için sahne alanı makro raster moduyla genel bir görüntü elde edin (bizim durumumuzda 2,5 ila 3,0 mm x 8,5 ila 9,0 mm kullandık). Bu genel görüntü, daha küçük görüntülerden oluşan bir mozaikten oluşur. Bu örnekte, her biri 0,5 mm x 0,5 mm (256 x 256 piksel) görüş alanına sahipti ve piksel başına 1 iyon huzmesi atışı vardı, bu da 8,18 x 108 iyon/cm2'lik bir iyon dozu ile sonuçlandı.
  3. Uygun bir görüş alanı seçerek yatırım getirisinin görüntülerini yakalamak için aynı yöntemi kullanın; Bu örnekte, 1.0 mm x 0.5 mm idi, kare başına piksel başına 4 atış ve yama başına 10 kare ile, 1.31 x 1011 iyon/cm2'lik bir iyon dozuna karşılık geliyordu.
  4. Kalite kontrolünü sağlamak için, her bir cilt bölümünü incelemeden hemen önce ve sonra doku homojenat örneklerini analiz edin. Piksel başına 1 çekim ve tarama başına 1 kare ile 0,5 mm x 0,5 mm (256 x 256 piksel) görüş alanı kullanın ve toplam 15 tarama gerçekleştirin. Bu kurulum, 3.27 x 1010 iyon/cm2'lik bir iyon doz yoğunluğuna karşılık gelir.
  5. Elde edildikten sonra, elde edilen kütle spektrumları H-, C-,C2− veC3− iyonları kullanılarak kalibre edilebilir.
  6. Verilerin toplanması ve çıkarılması Surface Lab 7.1 yazılımı kullanılarak gerçekleştirildi.

4. MATLAB kullanarak görüntü kaydı ve veri analizi

  1. Kırmızı, yeşil ve mavi renk kanalları olarak görselleştirilmek üzere negatif olmayan matris çarpanlarına ayırma kullanarak SIMS ve SRS görüntülerini her biri 3 boyuta düşürün.
  2. Matlab kontrol noktası seçim aracı "cpselect"i (Matlab, Mathworks, 2019b ve Görüntü İşleme Araç Kutusu) seçerek bu iki matris olmayan çarpanlara ayırma görüntüsü arasındaki eşleşen özellikleri seçin.
  3. Kayıt işlemini gerçekleştirmek için "cp2tform" ve "imtransform" fonksiyonlarını kullanın, sabit görüntüler olarak SIMS verileriyle ve hareketli görüntüler olarak optik spektroskopi verileriyle bir afin dönüşüm uygulayın.
  4. İlgilenilen ilaç için ToF-SIMS verilerinde birden fazla tepe noktası tespit edildiğinde, birleşik bir ilaç iyon yoğunluğu oluşturmak için bu tepe noktalarının yoğunluklarını toplayın.
  5. Karşılık gelen her bir cilt dokusu örneği için iki homojen veri setinin (öncesi ve sonrası) ortalama toplam iyon sayısını çıkarın. Bu karşılık gelen değeri kullanarak, her cilt görüntüsündeki ilaç iyonunun ToF-SIMS verilerindeki yoğunlukları normalleştirin.
  6. Kayıttan sonra, ilgili görüntüleri RGB kanallarına atayarak optik spektroskopi ve SIMS verilerinin bir katmanını oluşturun: kırmızı (CH2 için SRS görüntüsü), yeşil (kollajen için SHG görüntüsü) ve mavi (diklofenak için SIMS görüntüsü, m/z 214.04, 216.04, 250.02, 252.02, 294.01 ve 296.01'deki çeşitli iyonlardan gelen sinyaller dahil).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Şekil 1, biri plasebo ile tedavi edilen (Şekil 1a) ve diğerleri 4 saat boyunca Voltaren jeli ile tedavi edilen (Şekil 1b) ve 16 saat (Şekil 1c) olmak üzere iki deri örneği için SRS, SHG ve SIMS'in kayıtlı bindirme görüntülerini görüntüleyen özellik tabanlı görüntü kaydının sonuçlarını sunmaktadır. Bu görüntüde, toplanan ilaç yoğunluğu sinyali (ToF-SIMS ölçümlerinden) mav...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu yöntem, mikron altı uzamsal çözünürlük ve yüksek hassasiyet ile yumuşak dokudaki ilaç dağılımını tespit etmek için doğrusal olmayan optik spektroskopi ve kütle spektrometresi görüntüleme ile korelasyon görüntülemeye izin verir. Daha da önemlisi, görüntüleme, floresan bazlı mikroskoplar için gerekli olacak potansiyel olarak enterferans yapan etiketler kullanılmadan elde edilir. İş akışının daha fazla doğrulanması, cilt yapısını aydınlatmak için bir doku bölümünün geleneksel hematoksile...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

MBB, çalışmanın finansman kurumu olan Haleon CH SARL'ın bir çalışanıdır.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma Haleon CH SARL tarafından finanse edilmiştir. NAB ve RHG'nin katkıları, ABD Sağlık ve İnsan Hizmetleri Bakanlığı'nın (HHS) Gıda ve İlaç Dairesi (FDA) tarafından bir mali yardım ödülü (1-U01-FD006533) aracılığıyla kısmen desteklenmiştir. Bu çalışma, Birleşik Krallık Ulusal Ölçüm Sisteminin NMS/ID74 ve NMS/ST18 projeleri aracılığıyla Birleşik Krallık İşletme, Enerji ve Endüstriyel Strateji Bakanlığı tarafından finanse edilmiştir. Bu makalenin içeriği yazarlara aittir ve FDA/HHS veya ABD Hükümeti'nin resmi görüşlerini veya onayını temsil etmeyebilir. NAB, Analitik Kimya Güven Fonu tarafından finanse edilen 2020 CAMS Burs Ödülü için Analitik Ölçüm Bilimi Topluluğu'nun desteği için minnettardır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Tutarlı Raman mikroskobu Leica Microsystemshttps://www.leica-microsystems.com/products/confocal-microscopes/p/leica-tcs-sp8-cars/
İnsan derisi örnekleri Doku Çözümleri Ltd, Glasgow
Leica CM 1850 Kriyostat ve nbsp;Leica Biosystemshttps://www.leicabiosystems.com/en-fr/histology-equipment/cryostats/leica-cm1850/Üretimi durdurulan
PicoEmerald-S lazer sistemiAPE Berlinhttps://www.ape-berlin.de/en/cars-srs/
ToF SIMS 5IONToF GmbHhttps://spectral.se/products/tof-sims-5

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Belsey, N. A., et al. Visualisation of drug distribution in skin using correlative optical spectroscopy and mass spectrometry imaging. J Control Release. 364, 79-89 (2023).
  2. Pudlas, M., et al. Raman spectroscopy: A noninvasive analysis tool for the discrimination of human skin cells. Tissue Eng Part C Methods. 17 (10), 1027-1040 (2011).
  3. Raman, C. V., Krishnan, K. S. A new type of secondary radiation. Nature. 121 (3048), 501-502 (1928).
  4. Tsikritsis, D., Legge, E. J., Belsey, N. A. Practical considerations for quantitative and reproducible measurements with stimulated Raman scattering microscopy. Analyst. 147 (21), 4642-4656 (2022).
  5. Sarri, B., et al. Stimulated Raman histology: One to one comparison with standard hematoxylin and eosin staining. Biomed Opt Express. 10 (10), 5378-5384 (2019).
  6. Lee, M., et al. Recent advances in the use of stimulated Raman scattering in histopathology. Analyst. 146 (3), 789-802 (2021).
  7. Mansfield, J., Moger, J., Green, E., Moger, C., Winlove, C. P. Chemically specific imaging and in-situ chemical analysis of articular cartilage with stimulated Raman scattering. J Biophotonics. 6 (10), 803-814 (2013).
  8. Shi, L., Fung, A. A., Zhou, A. Advances in stimulated Raman scattering imaging for tissues and animals. Quant Imaging Med Surg. 11 (3), 1078-1101 (2021).
  9. Brzozowski, K., et al. Stimulated Raman scattering microscopy in chemistry and life science - development, innovation, perspectives. Biotechnol Adv. 60, 108003(2022).
  10. Buchberger, A. R., Delaney, K., Johnson, J., Li, L. Mass spectrometry imaging: A review of emerging advancements and future insights. Anal Chem. 90 (1), 240-265 (2018).
  11. Seeley, E. H., Caprioli, R. M. Molecular imaging of proteins in tissues by mass spectrometry. Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (47), 18126-18131 (2008).
  12. Vanbellingen, Q. P., et al. Time-of-flight secondary ion mass spectrometry imaging of biological samples with delayed extraction for high mass and high spatial resolutions. Rapid Commun Mass Spectrom. 29 (13), 1187-1195 (2015).
  13. Singh, A. V., et al. ToF-SIMS 3D imaging unveils important insights on the cellular microenvironment during biomineralization of gold nanostructures. Sci Rep. 10 (1), 261(2020).
  14. Yoon, S., Lee, T. G. Biological tissue sample preparation for time-of-flight secondary ion mass spectrometry (ToF-SIMS) imaging. Nano Converg. 5 (1), 24(2018).
  15. Shi, X., et al. A ToF-SIMS methodology for analyzing inter-tissue lipid distribution variations and intra-tissue multilevel mass spectrometry imaging within a single rat. Microchem J. 200, 110235(2024).
  16. Louw, E. -V., et al. Comparative study on the topical and transdermal delivery of diclofenac incorporated in nano-emulsions, nano-emulgels, and a colloidal suspension. Drug Deliv Transl Res. 13 (5), 1372-1389 (2023).
  17. Hummer, J., et al. Optimization of topical formulations using a combination of in vitro methods to quantify the transdermal passive diffusion of drugs. Int J Pharm. 620, 121737(2022).
  18. Sjövall, P., et al. Imaging the distribution of skin lipids and topically applied compounds in human skin using mass spectrometry. Sci Rep. 8 (1), 16683(2018).
  19. Delvaux, X., Noël, C., Poumay, Y., Houssiau, L. Probing the human epidermis by combining tof-sims and multivariate analysis. Biointerphases. 18 (1), 011002(2023).
  20. Kolenc, O. I., Quinn, K. P. Evaluating cell metabolism through autofluorescence imaging of nad (p) h and fad. Antioxid Redox Signal. 30 (6), 875-889 (2019).
  21. Hanson, K. M., Clegg, R. M. Observation and quantification of ultraviolet-induced reactive oxygen species in ex vivo human skin. Photochem Photobiol. 76 (1), 57-63 (2002).
  22. Wang, J., et al. Non-invasive skin imaging assessment of human stress during head-down bed rest using a portable handheld two-photon microscope. Front Physiol. 13, 899830(2022).
  23. Brunetti, A., et al. Correlative morphologic and functional imaging for diagnosis, staging and follow up in aids: An overview. Q J Nucl Med. 39 (3), 201-211 (1995).
  24. Van Zyl, T., Van Rensburg, L. J., Naidoo, K., Merven, M., Opperman, J. F. Correlative imaging and histopathology of a complicated sinonasal teratocarcinosarcoma. SA J Radiol. 27 (1), 2548(2023).
  25. Huber, K., et al. Novel approach of MALDI drug imaging, immunohistochemistry, and digital image analysis for drug distribution studies in tissues. Anal Chem. 86 (21), 10568-10575 (2014).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Korelatif G r nt lemeCilt DokusuUyar lm Raman Sa lmaski Foton FloresansU u S resi SIMSG r nt Kaydla Penetrasyonu

İlgili makaleler