Biz yeni bir agaroz jel tabanlı mikroakışkan cihaz kullanarak nöral kök hücreler (NSC'lerde) motilite epidermal büyüme faktörü reseptörleri (EGFR) aşırı ifade artırdığını göstermektedir. Bu teknoloji, insan sinir kök hücreleri gibi hücre kaynakları kıt olan diğer memeli hücre sistemleri, kolayca adapte olabilir ve zaman etrafında dönüş kritik öneme sahiptir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Nöral Kök Hücre Motilite değerlendirilmesi Agaroz Jel tabanlı mikroakışkan Cihaz Kullanımı
Bu makalede
Özet
Özet
Mikroakışkan teknolojisi makromoleküler deneyleri için yeni bir olgunluk seviyesine ulaşırken, hücre tabanlı deneyleri, hala bir bebek evre 1 . Bu bir hücre uyumlu ve istikrarlı bir mikroçevresinin geleneksel imalat teknikleri ve malzemeleri kullanarak oluşturabilirsiniz zorluk büyük ölçüde. Mikroakışkan cihaz için temel malzemesi olarak, bir roman mikroimalat malzeme, agaroz jel giriş ile bu sorunu çözmek. Agaroz jel, hücre tabanlı deneyleri için ideal bir malzemedir bu nedenle son derece uysal ve gaz geçirgen ve hücrenin hayatta kalabilmesi için gerekli besin ve. Agaroz jel tabanlı cihazlar bakteriyel ve nötrofil hücre göçü 2 okuyan başarılı olduğunu daha önce göstermiştir. Bu raporda, üç paralel mikroakışkan kanalları hakkında 1mm kalınlığında bir agaroz jel membran desenli. Medya / tampon Sabit akımları peristaltik bir pompa kullanarak her iki yan kanallar tutulur. Hücreler için gözlem merkezi kanal tutulur. Yan kanallar besin ve kimyasal madde yandan merkezi kanal, merkezi kanal kimyasal ortamı sürekli difüzyon olduğundan, yan kanallar boyunca akışını kolayca üzerinden kontrol edilir. Bu cihazı kullanırken, biz nöral kök hücre hareketi ile optik çeşitli kimyasal şartlar altında kolay takip edilebilir göstermek ve deney sonuçları, epidermal büyüme faktörü reseptörleri (EGFR) aşırı ifade, sinir kök hücrelerin motilite artırdığını göstermektedir. Nöral kök hücrelerin Motilite, böylece tümörojenik faktörü 3 hücreleri saldırganlık değerlendirmek için önemli bir biyomarker. MGK motilite altında yatan mekanizma Deşifre her iki nöral gelişim bozuklukları ve beyin kanseri kök hücre invazyonu içine içine fikir verecektir.
Protokol
Prosedür
Fibronektin ile slaytları Kaplama
Mikroakışkan cihaz montajı için, önce cam slaytlar fibronektin ile sterilize edin. Coat bir biohood slaytlar kısırlık korumak için. Steril bir PDMS ayırıcı slayt kenarları boyunca hizalayın ve kalıcı bir belirteç ile karşı karşıya yan işareti. Pipet cam slayt bütünlüğü üzerinde PDMS ayırıcı içinde fibronektin bir 5 mg / ml solüsyon (Sigma) 1 ml. Bir saat boyunca rahatsız slaytlar bırakın, daha sonra tamamen bir N 2 tabancası kullanarak kurutun. Slaytlar, daha sonraki deneyler için 4 o C'de saklanabilir.
Cihazın montajı
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Şekil 1 üç MGK suşları, ebeveyn hücreler, wtEGFR ve ΔEGFR (kontrol) yörüngeleri gösterir. Yörüngeleri Her set 5 saat uzunluğunda bir film elde edildi. EGF konsantrasyonu ~ 10 ng ebeveyn hücreler için, hücre motilitesi doruğa ulaştı; wtEGFR hücrelerin, hücre motilite zirve 100ng/ml veya üzeri kaymıştır; beklendiği gibi ΔEGFR hücrelerin, hücre motilite EGF konsantrasyon bağımsız oldu.
100ng/ml wtEGF hücreleri en hareketli hücreler, yaklaşık 1,5 kat, 10 ng ile ebeveyn hücrelerden daha hızlı taşındı. (1) EGFR ekspresyonu üzerinde hücre .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Teşekkürler
Bu çalışma, New York Eyaleti Office Bilim, Teknoloji ve Akademik Araştırma (NYSTAR) (form, İleri Teknoloji hibe Merkezi), ve Nanobiyoteknoloji Merkezi (NBTC) Ulusal bir STC Programı hibeleri ile desteklenen Anlaşması No ECS-9876771 altında Bilim Vakfı ve Amerikan Beyin Tümörü Derneği ve New York Tıp Akademisi (JAB).
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar | |
|---|---|---|---|---|
| Dulbecco’s Modifiye Eagle Besiyeri (DMEM) (1X) | Reaktif | Invitrogen | 11971-025 | |
| CO2-bağımsız besiyeri | Reaktif | Invitrogen | 18045-088 | Atmosferik koşullarda çeşitli epitel, fibroblast ve lenfoid hücre hatlarının büyümesini desteklemek için uygun, HEPES içermeyen tescilli bir besiyeri, L-glutamin içermez |
| Trypsin-EDTA | Reaktif | Invitrogen | 25200-072 | |
| PBS | Reaktif | Invitrogen | 14190-144 | Fosfat tamponlu salin, kalsiyum veya magnezyum içermez |
| Pen/Strep | Reaktif | Invitrogen | 15140-122 | %0,85'lik salin içinde penisilin G (sodyum tuzu) ve streptomisin sülfat kullanılarak hazırlanan, ml başına 10.000 ünite penisilin (baz) ve 10.000 g streptomisin (baz) içerir |
| FBS | Reaktif | Invitrogen | 10437-028 | Fetal Bovine Serum (FBS), Kalifiye |
| At Serumu | Reaktif | Invitrogen | 16050-130 | At Serumu, EIA testli (negatif) serum |
| Fibronektin | Reaktif | Sigma-Aldrich | F0895 | İnsan plazmasından elde edilen fibronektin, soğuk çözünmez globulin olarak da adlandırılır |
| EGF | Reaktif | Sigma-Aldrich | E4127 | Fare submaxiller bezinden elde edilmiş Epidermal Büyüme Faktörü, liyofilize |
| Agaroz | Reaktif | Fisher Scientific | BP1356-500 |
Kaynaklar
- Blow, N. Microfluidics: in search of a killer application. Nature Methods. 4, 665-670 (2007).
- Shing-Yi Cheng, S. H., Wassweman, M. ax, Archer, S. hivaun, Shuler, M. ichael L., Wu, M. ingming A hydrogel-based microfluidic device for the studies of directed cell migration. Lab-o....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
