Yöntem makalesi

HeLa Hücreleri Kullanılarak Anti-MDA5 Otoantikorlarının Tespiti ve Işık Mikroskobu ile İmmünositokimya

DOI:

10.3791/67575

⸱

31 Ekim 2025

 ,  ,  ,  , 
1Graduate Institute of Biomedical Sciences, China Medical University, 2College of Medicine, China Medical University, 3Rheumatology and Immunology Center, China Medical University Hospital, 4Rheumatic Diseases Research Center, China Medical University Hospital, 5Drug Development Center, China Medical University

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Anti-MDA'yı tespit etmek için adım adım bir immünositokimya (ICC) metodolojisi sunuyoruz5. Bu yaklaşım, anti-MDA5 otoantikorlarının doğru bir şekilde saptanmasına olanak tanıyan ve miyozit hastalarında hızla ilerleyen interstisyel akciğer hastalığının teşhisine yardımcı olan hücre fiksasyonu, geçirgenleştirme, antikor inkübasyonu ve görüntüleme tekniklerini içerir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Anti-MDA5 otoantikorları, dermatomiyozit (DM), amyopatik dermatomiyozit (CADM) ve polimiyozit (PM) için, özellikle hızlı ilerleyen interstisyel akciğer hastalığı (RP-ILD) riski taşıyan hastaların belirlenmesinde kritik biyobelirteçlerdir. Bu otoantikorların erken teşhisi, hasta sonuçlarını iyileştirmek için çok önemlidir, çünkü gecikmiş tanı genellikle kötü prognozlara yol açar. Şu anda, radyoimmünolojik test, anti-MDA5'i tespit etmek için altın standarttır, ancak kullanımı yüksek maliyetler, uzun prosedürler ve özel uzmanlık ihtiyacı nedeniyle sınırlıdır. Ek olarak, yaygın olarak kullanılan bir klinik araç olan leke testi, MDA5 otoantikorları için yüksek bir yanlış pozitif oranı sergileyerek potansiyel olarak tanısal doğruluktan ödün verir. Bu sınırlamaları ele almak için, İmmünositokimya (ICC) kullanarak radyoaktif olmayan, oldukça hassas ve standartlaştırılmış bir doğrulayıcı test yöntemi öneriyoruz. Bu protokol, HeLa hücrelerinin bir MDA5 yapısıyla tedavi edilmesini, birincil anti-MDA5 otoantikorlarının bağlanmasını kolaylaştırmak için hücrelerin Triton X-100 ile geçirgenleştirilmesini ve mikroskopi görüntüleme için DAB kromojeni ile enzim konjuge ikincil antikorlar (örneğin, yaban turpu peroksidaz) kullanılarak bağlı antikorların tespit edilmesini içerir. ICC, hücresel yapılar içindeki anti-MDA5 otoantikorlarını görselleştirmek için pratik, uygun maliyetli ve yüksek hassasiyetli bir yaklaşım sunar. Bu çalışma, ICC'yi tamamlayıcı bir doğrulayıcı prosedür olarak entegre ederek, anti-MDA5 tespitinin güvenilirliğini artırmayı ve böylece DM, CADM ve PM hastalarında RP-ILD için tanısal ve prognostik stratejileri geliştirmeyi amaçlamaktadır.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yaygın olarak miyozit olarak adlandırılan idiyopatik inflamatuar miyopatiler (IIM), kronik kas inflamasyonu, değişken klinik belirtiler ve çeşitli terapötik sonuçlarla karakterize heterojen bir otoimmün bozukluk grubudur. Yaygın semptomlar arasında kas güçsüzlüğü, dayanıklılığın azalması ve miyaljibulunur 1. IIM'nin birincil alt tipleri polimiyozit (PM) ve dermatomiyozit (DM) içerirken, klinik olarak amyopatik dermatomiyozit (KADM), DM'de görülenlere benzer, ancak minimal kas tutulumu olan veya hiç olmayan karakteristik deri döküntüleri ile ayırt edilir. PM, DM ve CADM'de önemli bir komplikasyon, hastaların yaklaşık %40'ını etkileyen ve artmış mortalite ile ilişkili olan interstisyel akciğer hastalığıdır (İAH)2.

IIM'de İAH'nin klinik seyri ve prognozu büyük farklılıklar gösterir. DM ve CADM (DM-/CADM-ILD) ile ilişkili İAH, PM ile ilişkili İAH'ye kıyasla tedaviye daha dirençli olma eğilimindedir ve daha kötü bir prognoz taşır. Bunlar arasında, üç ay içinde hızla ilerleyen akut veya subakut İAH3, yavaş ilerleyen veya stabil kalan kronik İAH için %87'ye kıyasla, bildirilen beş yıllık sağkalım oranı sadece %52 ile özellikle şiddetlidir. Akut/subakut İAH'nın bir alt tipi olan hızlı progresif İAH (RP-ILD), hızlı başlayan nefes darlığı ve göğüs görüntülemesinde görülebilen yaygın alveoler hasar ile karakterizedir. RP-İAH, kötü prognoza sahip, hayatı tehdit eden bir durumdur ve hasta sonuçlarını iyileştirmek için erken tanı ve hızlı müdahaleye acil ihtiyaç duyulduğunun altını çizmektedir 4,5,6.

Miyozite özgü otoantikorlar (MSA'lar), miyozit ile ilişkili İAH'de kritik biyobelirteçler olarak ortaya çıkmıştır ve anti-MDA5 otoantikorları özellikle önemli bir rol oynamaktadır. Bu otoantikorlar PM-/DM-/CADM-ILD'li hastalarda sıklıkla saptanır ve RP-ILD 7,8,9 için önemli prognostik göstergeler olarak hizmet eder. MDA5 (melanom farklılaşmasıyla ilişkili gen 5), viral ve mitokondriyal çift sarmallı RNA'yı saptayan ve interferon aracılı bağışıklık tepkilerini başlatan interferon ile indüklenebilir bir gen tarafından kodlanan bir sitozolik model tanıma reseptörüdür10. Kesin patojenik mekanizmalar belirsizliğini korusa da, anti-MDA5 otoantikorlarının MDA5 fonksiyonunu bozduğuna ve dolayısıyla otoimmün patogeneze katkıda bulunduğuna inanılmaktadır.

Anti-MDA5 otoantikorlarının zamanında tespiti, RP-ILD'nin erken tanımlanması ve yönetimi için esastır. Geleneksel olarak, 35S-metiyonin etiketli K562 hücre özütü kullanılarak radyoetiketli immünopresipitasyon (IP), anti-MDA5 otoantikorlarını saptamak için altın standart olarak kabul edilmiştir11. Ancak bu yöntem, yüksek maliyeti, özel ekipmana ve eğitimli personele bağımlılığı, katı radyoaktif atık imha düzenlemeleri ve radyoaktif etiketli reaktiflerin sınırlı raf ömrü nedeniyle rutin klinik kullanım için pratik değildir. Klinik uygulamada, leke tahlilleri genellikle alternatif olarak kullanılır; bununla birlikte, anti-MDA5 otoantikorları 12,13 için yüksek bir yanlış pozitif oranı ile ilişkilidirlerve bu da tanısal doğruluk konusunda endişeleri artırmaktadır. Sonuç olarak, pozitif sonuçları doğrulamak ve tanısal güveni artırmak için güvenilir, radyoaktif olmayan doğrulayıcı bir teste acil ihtiyaç vardır.

Bu boşluğu gidermek için, anti-MDA5 otoantikorları için tamamlayıcı bir doğrulayıcı test olarak immünositokimyanın (ICC) kullanılmasını öneriyoruz. Bu yaklaşım, HeLa hücrelerinin bir MDA5 yapısıyla transfekte edilmesini, hücrelerin hasta plazması ile inkübe edilmesini ve ışık mikroskobu altında görselleştirme için bir kromojenik substrat ile birleştirilmiş enzim konjuge ikincil antikorlar (örneğin, yaban turpu peroksidaz) kullanılarak bağlı anti-MDA5 otoantikorlarının saptanmasını içerir. ICC, hücresel bölmeler içindeki anti-MDA5 otoantikorlarını görselleştirmek için radyoaktif olmayan, oldukça hassas ve standartlaştırılmış bir platform sağlar. ICC'yi leke testi ile entegre ederek, bu yöntem yanlış pozitif oranlarını azaltmayı, tanısal doğruluğu artırmayı ve nihayetinde hastalar için klinik yönetimi ve sonuçları iyileştirmeyi amaçlar.

Bu çalışmanın amacı, anti-MDA5 otoantikorlarının tespiti için sağlam, radyoaktif olmayan bir protokol oluşturmak, mevcut tespit yöntemlerinin sınırlamalarını ele almak ve klinisyenlere PM, DM ve KADM hastalarında RP-ILD'nin erken tanısı için pratik ve güvenilir bir araç sunmaktır. Ekteki video anlatımında, yaşamı tehdit eden bu seyir halk arasında 'hızlı ölüm' olarak tanımlanıyor; bilimsel olarak hızlı ilerleyen İAH'ye (RP-İAH) karşılık gelir. Bu çalışma, mevcut kanıtlara dayanmaktadır ve klinik uygulamada prognostik değerlendirmeyi ve terapötik karar vermeyi önemli ölçüde iyileştirme potansiyeline sahiptir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Hücre kültürü ve transfeksiyon

  1. HeLa hücrelerini, nemlendirilmiş% 5 CO2 atmosferinde 37 ° C'de % 10 fetal sığır serumu (FBS) ve% 1 antibiyotik-antikotik içeren Dulbecco'nun Modifiye Eagle Ortamı ile koruyun.
  2. Hücreleri 2-3 günde bir veya hücreler %90-%100 birleşmeye ulaştığında geçirin.
  3. Hücrelerin yaklaşık %90 birleşmeye ulaşmasını sağlamak için transfeksiyondan 24 saat önce 24 oyuklu bir plakanın (1.9 cm2/kuyu) her bir oyuğuna 7 ×10 4 HeLa hücresi tohumlayın.
  4. 500 ng plazmit (pENTER-MDA5) ve 1.5 μL transfeksiyon reaktifinin her biri 25 μL indirgenmiş serum ortamında seyreltin.
  5. Seyreltilmiş transfeksiyon reaktifine (1:1 oranında) seyreltilmiş DNA ekleyin. İyice karıştırın ve 5 dakika inkübe edin.
  6. Karışımı bir gün önce tohumlanan hücrelere ekleyin ve DNA-lipid kompleksini hemen karıştırmak için çalkalayın. Hücrelerin %80-%90 oranında birleştiğini doğrulayın.
  7. Hücreleri 37 °C'de nemlendirilmiş% 5 CO2 atmosferinde 24 saat inkübe edin ve ICC yapmaya devam edin.
    NOT: Ticari olarak temin edilebilen bir vektör (pEnter-MDA5) kullandık; daha fazla bilgi Malzeme Tablosunda bulunabilir. Transfeksiyon etkinliği ~% 50'dir.
    Hedef proteinin transfeksiyonunun ve ekspresyonunun başarısı, hücrelerin floresan protein eksprese eden bir plazmit ile transfekte edilmesi ve hedef proteinin ekspresyonunu görselleştirmek için bir Western blot yapılmasıyla belirlenebilir.

2. Hücre fiksasyonu

  1. İnkübasyondan sonra, kalan ortamı çıkarmak için hücreleri 2x PBS ile yıkayın.
    NOT: Yıkama, plakayı bir orbital çalkalayıcı üzerinde çalkalanarak gerçekleştirilebilir.
  2. Hücreleri PBS'de% 4 paraformaldehit içinde sabitleyin. Hücreleri oda sıcaklığında 15 dakika bekletin.
    DİKKAT: Paraformaldehit zehirlidir. Uygun kullanım yönergelerini kullanın.
  3. Fiksatif reaktifi aspire edin ve hücreleri 2 kez yıkamak için PBS kullanın.

3. Hücre geçirgenliği

  1. Triton X-100 reaktifi (PBS'de %0,3) ekleyin ve hücreleri oda sıcaklığında 10 dakika bekletin.
  2. 10 dakika sonra temizleme maddesini atın.
  3. Hücreleri bir kez yıkamak için PBS ekleyin.

4. Hücre engelleme

  1. PBS'de (1x) %10 fetal sığır serumu ile blokaj yapın ve hücreleri oda sıcaklığında 1 saat inkübe edin.
  2. Bloke edici reaktifi çıkarın, ardından hücreleri bir kez yıkamak için PBS ekleyin.

5. Hastanın antikorunun hibridizasyonu

  1. Seyreltilmiş hasta plazmasını hücrelere ekleyin. Kullanmadan önce hasta örneğini (PBS'de 1:5.000 seyreltme) PBS'de seyrelttiğinizden emin olun.
    NOT: Sinyali geliştirmek veya arka planı gerektiği gibi azaltmak için seyreltmeyi ayarlayın. Tarafsız sonuçlar elde etmek için, testleri yapan personelin hangi örneklerin hastalara, hangilerinin sağlıklı bireylere ait olduğu konusunda hiçbir bilgisi yoktu.
  2. Numuneyi 4 °C'de 12-16 saat (gece boyunca) inkübe edin.
  3. İnkübasyon süresinin ardından hasta örneğini çıkarın ve hücreleri PBS ile 3 kez yıkayın.

6. İkincil antikorun hibridizasyonu

  1. Hücreleri seyreltilmiş Yaban Turpu Peroksidaz konjuge Keçi Anti-İnsan IgG (PBS'de 1:250 seyreltme) ile muamele edin ve hücreleri oda sıcaklığında 1 saat bekletin.
  2. Bir saat sonra ikincil antikorları atın.
  3. PBS 3x ile durulayın.

7. Hücre boyama

  1. Hücreleri yıkadıktan sonra, hücreleri 300 μL DAB çalışma solüsyonu/kuyusu ile boyayın.
    NOT: Bu çözelti, DAB kromojen konsantresi ve DAB seyrelticinin üreticinin talimatlarına göre karıştırılmasıyla hazırlanmıştır.
  2. Hücreleri 5 dakika boyadıktan sonra boyayı çıkarın, deiyonize damıtılmış su ile durulayın ve 5 dakika çalkalayın.

8. Hücre karşı boyama

  1. Hücre çekirdeğini seyreltilmiş hematoksilin ile boyayın.
    NOT: Hematoksilen Solungaç II'yi 10 kat seyreltmede kullanıyoruz ve boyama işlemi için 5 dakika bekliyoruz.
  2. 5 dakika sonra hematoksilini atın, ardından 2 x 5 dakika deiyonize damıtılmış su ile yıkayın.

9. Gözlem

  1. Optik mikroskop kullanarak boyama sonuçlarını gözlemleyin.
    NOT: Gerçek bir pozitif, MDA5'i eksprese eden HeLa hücrelerinin içinde güçlü kahverengi lekelenme gösterir; bu, hastanın örneğindeki anti-MDA5 otoantikorlarını doğrular. Negatif bir sonuç, kahverengi lekelenme olmayan HeLa hücrelerini gösterir, bu da anti-MDA5 otoantikorlarının olmadığını gösterir. Yanlış pozitif bir sonuç, MDA5 ekspresyonundan bağımsız olarak tüm hücrelerde geniş kahverengi boyama gösterir. Diğer otoimmün durumlarda görülen bu spesifik olmayan boyama, yanlış tanıyı önlemek için gerçek bir pozitiften ayırt edilmelidir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Testleri yürüten personel, değerlendirme sürecindeki olası yanlılığı en aza indirmek için, numunelerin alındığı belirli hastalar da dahil olmak üzere numunelerin kimliklerine kör edildi. Bununla birlikte, sağlıklı kontrol numuneleri körlemeye tabi tutulmazken, sürekli olarak açık ve kesin sonuçlar verdiler.

Şekil 1A , pENTER-MDA5 yapısı ile transfekte edilmiş HeLa hücrelerinde MDA5'in başarılı ekspr...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Anti-MDA5 otoantikorlarını tanımlamaya yönelik ICC tabanlı tekniğimiz, çizgi leke analizi ve radyoimmünolojik test gibi geleneksel yöntemlere göre önemli avantajlar sunar. Daha önce, Nombel ve ark. 23 anti-MDA5-pozitif dermatomiyozit hastası ve 22 anti-MDA5-negatif kontrolden oluşan bir kohortta MDA5 ile transfekte edilmiş hücreler üzerindeki dolaylı immünofloresansı (IIF) ELISA ile karşılaştırarak sırasıyla %96 ve %100 duyarlılık ve özgüllük değerleri bildirmiştir14

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların beyan edecek hiçbir çıkarları yoktur.

Bu makalenin bazı bölümleri OpenAI'nin GPT-4'ünün yardımıyla oluşturulmuştur. Yazarlar, doğruluk ve özgünlüğü sağlamak için içeriği gözden geçirmiş ve düzenlemiştir.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Tayvan Ulusal Bilim ve Teknoloji Konseyi'nden Jye-Lin Hsu'ya (NSTC 114-2320-B-039-038 ve NSTC 113-2320-B-039-032) verilen hibelerle desteklenmiştir. Bu çalışma aynı zamanda kısmen Jye-Lin Hsu'ya (CMU113-MF-89 ve C1110812016-12) verilen Çin Tıp Üniversitesi ve Hastanesi hibeleri tarafından da desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
24 kuyuyla levhalar (1.9 cm²/kuyruk)Corning354541
Antibiyotik-antimikotikGibco15240062
BeakersBORCAM1000-600
Konik tüpler (15 mL)Corning430052
Konik tüpler (50 mL)Corning430290
Deionize edilmiş damıtılmış suDeionize edilmiş damıtılmış suyumuz, Milli-Q sistemi kullanılarak (Sütun 1: Kuantum TEX, SN: F4EB53476; Sütun 2: Prepak, SN: F1CB11442)
Fetal Sığır Serumu Karakterize EdildiCytivaSH30396.03
dereceli silindirler (50 mL)VITLAB64804
Hematoksilin Gill IILeica3801522
Hyclone Dulbecco' s Yüksek glikozlu Modifiye Kartal OrtamıCytivaSH30243.02
Lipofectamin 2000 transfeksiyon reaktifiInvitrogen11668019Transfeksiyon reaktifi
MDA-5 (D74E4) Tavşan mAbHücre Sinyal Teknolojisi5321
Mikrosantrifüj tüpleri (1.5 mL Eppendorf tüpleri)AXYGEN142503
Opti-MEM I indirgenmiş serum ortamıGibco31985070
Yörünge sallayıcısı (isteğe bağlı)FIRSTEKS300R
ParaformaldehitSigma-Aldrich1x PBS'de %4
PBSPROFESYONEL TECHME222605
pENTER-MDA5Vigene Biosciences Inc.CH863586
Peroksidaz AfiniSaf Keçi İnsan Karşıtı IgG (H+L)Jackson ImmunoResearch109-035-003
Pipet kontrolcüsüTermo Bilimsel130165
Pipetler GILSON
Pipetler ve pipet uçları (10 & mikro; L)QSP104-Q
Pipetler ve pipet uçları (200 µ L)QSPT090-Q
Pipetler ve pipet uçları (1000 µ L)QSP111-Q
Serolojik pipetler (5 mL)SPL91005
Serolojik pipetler (10 mL)SPL91010
Serolojik pipetler (25 mL)SPL91025
SignalStain DAB substrat kitiHücre sinyalizasyonu8059PBS'de %0,3

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Mehta, P., Machado, P. M., Gupta, L. Understanding and managing anti-MDA5 dermatomyositis, including potential COVID-19 mimicry. Rheumatol Int. 41 (6), 1021-1036 (2021).
  2. Tansley, S. L., McHugh, N. J., Wedderburn, L. R. Adult and juvenile dermatomyositis: are the distinct clinical features explained by our current understanding of serological subgroups and pathogenic mechanisms. Arthritis Res Ther. 15 (2), 211(2013).
  3. Fujisawa, T. Management of myositis-associated interstitial lung disease. Medicina. 57 (4), 347(2021).
  4. Sasaki, N., et al. Early initiation of plasma exchange therapy for a patient with anti-MDA5 autoantibody-positive dermatomyositis developing rapidly progressive interstitial lung disease. Mod Rheumatol Case Rep. 5 (1), 87-92 (2021).
  5. Go, D. J., et al. Survival benefit associated with early cyclosporine treatment for dermatomyositis-associated interstitial lung disease. Rheumatol Int. 36 (2), 125-132 (2015).
  6. Tsuji, H., et al. Multicenter prospective study of the efficacy and safety of combined immunosuppressive therapy with high-dose glucocorticoid, tacrolimus, and cyclophosphamide in interstitial lung diseases accompanied by anti-melanoma differentiation-associated gene 5-positive dermatomyositis. Arthritis Rheumatol. 72 (3), 488-498 (2020).
  7. Hozumi, H., et al. Comprehensive assessment of myositis-specific autoantibodies in polymyositis/dermatomyositis-associated interstitial lung disease. Respir Med. 122, 1-8 (2016).
  8. Nakashima, R., Hosono, Y., Mimori, T. Clinical significance and new detection system of autoantibodies in myositis with interstitial lung disease. Lupus. 25 (8), 925-933 (2016).
  9. Koga, T., et al. The diagnostic utility of anti-melanoma differentiation-associated gene 5 antibody testing for predicting the prognosis of Japanese patients with DM. Rheumatology. 51 (7), 1278-1284 (2012).
  10. Fuzzi, E., et al. Anti-MDA5 dermatomyositis: an update from bench to bedside. Curr Opin Rheumatol. 34 (6), 365-373 (2022).
  11. Sato, S., et al. Autoantibodies to a 140-kd polypeptide, CADM-140, in Japanese patients with clinically amyopathic dermatomyositis. Arthritis Rheum. 52 (5), 1571-1576 (2005).
  12. Tansley, S. L., Diederichsen, L. P., Zampeli, V. A., McHugh, N. J. The reliability of immunoassays to detect autoantibodies in patients with myositis is dependent on autoantibody specificity. Rheumatology. 59 (5), 1029-1034 (2020).
  13. Chen, Y. L., Li, A. Positive predictive value of myositis antibody line blot testing in patients with suspected idiopathic inflammatory myopathy. Muscle Nerve. 69 (3), 345-350 (2024).
  14. Nombel, A., Pin, J. J., Fabien, N., Miossec, P., Coutant, F. Evaluation of the performance of an indirect immunofluorescence assay for the detection of anti-MDA5 antibodies. Biomedicines. 10 (12), 3125(2022).
  15. Nakashima, R., Hosono, Y., Mimori, T. Clinical significance and new detection system of autoantibodies in myositis with interstitial lung disease. Lupus. 25 (8), 925-933 (2016).
  16. Sato, S., et al. Autoantibodies to a 140-kd polypeptide, CADM-140, in Japanese patients with clinically amyopathic dermatomyositis. Arthritis Rheum. 52 (5), 1571-1576 (2005).
  17. Chang, Y. C., Yang, L., Budhram, A. Positive predictive value of myositis antibody line blot testing in patients with suspected idiopathic inflammatory myopathy. Muscle Nerve. 69 (5), 626-630 (2024).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

mm nositokimya Analizinterstisiyel Akci er HastalDermatomiyozit Biyobelirte leriTriton X 100 PermeabilizasyonuYaban Turpu Peroksidaz TespitiDAB Kromojen BoyamaSekonder Antikor aretlemesi

İlgili makaleler