Yöntem makalesi

Laboratuvar Farelerinden Süt Örneklemesi için Verimli Bir Tek Kişilik Teknik

DOI:

10.3791/67669

⸱

28 Mart 2025

 , 
1Department of Nutritional Sciences, Rutgers -The State University of New Jersey, 2Rutgers Center for Lipid Research, Rutgers -The State University of New Jersey

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu makale, laboratuvar farelerinden süt toplamak için kullanılabilecek bir cihazın nasıl monte edileceğini açıklamaktadır. Bu cihaz uygun fiyatlıdır, taşınabilirdir ve eğitimli bir kişi tarafından 0,1-0,5 mL süt toplanmasına izin verir. Ayrıntılı bir sağım protokolü de dahildir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kemirgen modelleri, temel fizyoloji ve biyokimyasal mekanizmaları incelemek için 20. yüzyılın başlarından beri biyolojide yaygın olarak kullanılmaktadır. Emzirme ve yenidoğan gelişimi araştırmalarında, bileşimi ve sütün deneysel manipülasyonlardan nasıl etkilenebileceğini ve böylece yenidoğan gelişimini nasıl etkileyebileceğini belirlemek için sütten numune alınmasına ihtiyaç vardır. Küçük kemirgenlerden yeterli miktarda biyosıvı toplamak zor olabilir. Birkaç çalışma, farelerden süt elde etmek için farklı teknikler göstermiştir. Bununla birlikte, bu teknikler genellikle en az iki eğitimli personel gerektirir ve bu da bazı durumlarda zorlayıcı olabilir.

Burada, 2009 yılında yayınlanan bir yönteme dayalı olarak değiştirilmiş bir süt numune alma tekniği gösterilmektedir. Bu uygun fiyatlı ve montajı kolay yöntemle, eğitimli bir kişi anestezi altında bir barajdan 10 dakikadan daha kısa sürede rutin olarak 0,1-0,5 mL süt elde edebilir. Bu yöntemi kullanarak, teslimat sonrası 2. gün (PD2) ve teslimat sonrası 10. gün (PD10) yeterli süt topladık. Toplama yöntemimizi doğrulamak için süt makro besin bileşenlerini ölçtük ve bunları mevcut literatürle karşılaştırdık.

PD2'de süt proteininin ortalama 70.1 ± 5.2 g/L, süt yağının 174.4 ± 7.1 g/L ve süt laktozunun 12.3 ± 0.6 g/L olduğunu kaydettik. PD10'da, süt laktozu ve proteini PD2 ile benzer konsantrasyonlarda kalırken, süt yağı önemli ölçüde daha yüksekti (224.4 ± 17.1 g / L). Ayrıca, bireysel süt proteinlerinin nispi bolluğunun PD2 ve PD10 arasında değiştiğini gözlemledik. Daha spesifik olarak, αS1-kazein ve peynir altı suyu asidik proteini daha yüksekken, β-kazein PD10'da PD2'ye kıyasla daha düşüktü. Genel olarak, yaygın olarak kullanılan laboratuvar ekipmanlarıyla kolayca monte edilebilen bir cihaz kullanarak farelerden süt numunesi almak için verimli bir tek kişilik teknik gösteriyoruz.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Karşılaştırmalı tıp, insanların ve diğer hayvanların anatomi ve fizyoloji açısından benzerlikleri paylaştığı fikrini ifade eder; Bu nedenle, bir türden öğrenilen bilgiler diğer 1,2'deki benzer yolları incelemek için kullanılabilir. 20.yüzyılın başlarından bu yana, kemirgenler, özellikle fareler ve sıçanlar, hastalık modellerinin geliştirilmesi için nispeten kolay genetik manipülasyon nedeniyle biyomedikal araştırmalarda yaygın olarak kullanılmaktadır 1,2. Ek olarak, nispeten küçüktürler; bu nedenle, diğer kemirgen olmayan memeli modellerine kıyasla kolonileri korumak için daha az kaynak gerekir2. Bununla birlikte, küçük vücut boyutları da zorluklarla birlikte gelir. Bazı işlemler fareler üzerinde kolayca yapılamaz. Örneğin, arteriyovenöz fark tekniği sıçanlarda 3,4,5 uygulanabilir, ancak farelerde küçük kan damarları kolayca yırtılabileceğinden 6,7 zor olabilir. Bir fareden örneklenebilecek doku miktarı da sınırlıdır. Örneğin, emziren farelerde, viseral yağ dokusu 8,9 boyutunda önemli ölçüde azalır ve bazı durumlarda neredeyse tespit edilemeyen miktarlara düşer. Ek olarak, farelerden biyosıvı örneklemesi de miktar olarak sınırlıdır; Tekniğe bağlı olarak, örneklenen kan hacmi değişebilir, ancak her zaman biraz sınırlıdır7, bu da yapılabilecek analiz sayısını kısıtlar.

Emzirme ve yenidoğan gelişimi araştırmalarında, bileşimi ve süt verimini değerlendirmek için sütten numune alınmasına ihtiyaç vardır. Farelerde yapılan çalışmalarda, sınırlı süt hacmi nedeniyle, yeterli miktarda elde etmek için numuneler genellikle birkaç barajdan toplanır10. Bir dizi çalışma, tek bir fareden yeterli miktarda analitik süt toplanması için teknikler göstermektedir 11,12,13. Bununla birlikte, bu yöntemler genellikle iki eğitimli personel gerektirir 11,12: biri sütü manuel olarak sağarken hayvanı tutmak ve diğeri sütü bir pipetle toplamak için; veya bir laboratuvarda kolayca bulunamayan ekipman ve araçlara ihtiyaç duyarlar. Burada, DePeters ve Hovey14 tarafından tasarlanan bir tekniğin modifikasyonunu gösteriyoruz. Bu prosedürde kullanılan cihaz, laboratuvarda bulunan ekipmanlarla kolayca monte edilebilir veya yaygın satıcılardan kolayca satın alınabilir. Bu cihazı kullanarak, bir kişi çoğu analiz için kullanmak üzere 10 dakikadan daha kısa bir sürede rutin olarak 0,1-0,5 mL fare sütü elde edebilir. Doğum sonrası 2. günde (PD2, erken emzirme) ve doğum sonrası 10. günde (PD10, pik laktasyon) süt topladık ve yöntemi doğrulamak için süt makro besinlerini ölçtük.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm hayvan bakımı ve deneysel prosedürler federal yönergeleri takip etti ve Rutgers Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi'nden onay aldı. Dişi fareler (C57BL / 6 arka plan) 8 haftalıkken çiftleştirildi. Standart bir damızlık chow ad libitum ile beslendiler ve düzenli bir 12:12 h aydınlık:karanlık döngüsü altında tutuldular. Teslimat günü, teslimat sonrası 1. gün (PD1) olarak sayıldı. PD2 (erken laktasyon) ve PD10'da (pik laktasyon), süt aşağıda tarif edildiği gibi örneklendi.

1. Bir sağım cihazının montajı

  1. 5/32" iç çaplı (ID) polivinil klorür (PVC) borunun bir ucunu vakum pompasına takın ve eki sabitlemek için bant kullanın (Şekil 1A'da a olarak etiketlenmiştir).
    NOT: Vakum pompası, laboratuvarda bulunan herhangi bir uygun pompa veya merkezi bir vakumla (bazen "ev vakumu" olarak da adlandırılır) değiştirilebilir.
  2. 5/32" ID PVC borunun diğer ucunu dikenli düz bir konektör aracılığıyla 1/8" ID PVC boruya takın.
  3. 1/8" ID PVC borunun diğer ucunu bir konektör aracılığıyla 18G hipodermik iğneye takın (Şekil 1A'da b olarak etiketlenmiştir).
  4. Daha büyük bir açıklık oluşturmak için P200 pipet ucunun ucunu ~0,2 cm kesin. P200 pipet ucunu, uç yukarı bakacak şekilde septum durdurucunun açıklığından geçirin (Şekil 1B).
    NOT: Pipet uçlarını hayvanlar arasında değiştirin.
  5. Septum durdurucuyu steril bir toplama tüpüne takın. 18 G hipodermik iğne ile septum durdurucudan bir delik açın.
  6. Vakum pompasını açarak ve bir parmağınızı (laboratuvar eldiveni ile kaplı) pipet ucu açıklığına dayayarak emme basıncını kontrol edin.
    NOT: Doğru şekilde monte edilmişse hafif bir emiş hissetmelisiniz. Toplama tüpü, 18 G hipodermik iğne ve P200 pipet uçları steril olmalıdır.

figure-protocol-1
Resim 1: Süt sağım cihazı. (A) PVC boru ile 18 G hipodermik iğneye bağlı bir vakum pompalı sağım cihazı. İğne, bir mikrosantrifüj toplama tüpüne bağlı bir septum durdurucudan geçer. Bir emzirden süt çekmek için kullanılan ters çevrilmiş bir P-200 pipet ucu, septum durdurucunun bir açıklığından sokulur. (B) Sağım cihazının kesit diyagramı. (C) Tarif edilen yöntem kullanılarak sağılan bir baraj. (D) En yüksek laktasyonda bir barajdan toplanan sütün temsili bir alikotu (0.3 mL). Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

2. Barajın yavrulardan ayrılması

  1. Sağım gününde, bezlerde süt birikmesine izin vermek için barajı yavrularından ayırın.
  2. Yavruları bir yuvada sıcak tutun.
  3. Erken laktasyon sırasında süt toplanırsa 2 saat ayrılmaya izin verin (ör., bu çalışmada PD2).
  4. En yüksek laktasyon sırasında süt toplanırsa 30-45 dakika ayırmaya izin verin (ör., bu çalışmada PD10).

3. Barajın anestezisi

  1. Baraj sağılmaya hazır olduğunda, 4. ve 5. meme başları arasındaki periton boşluğunun bir tarafına bir ketamin / ksilazin çözeltisi (intraperitoneal, ip) enjeksiyonu uygulayın.
    NOT: Uygulanacak anestezik solüsyon miktarı barajın ağırlığına göre hesaplanır (Rutgers Üniversitesi IACUC protokolüne göre 80-100 mg / kg ketamin, 5-12 mg / kg ksilazin). Bu doz, bir fareyi 45-60 dakika boyunca sakinleştirir ve süt toplama için yeterli zaman sağlar.
  2. Hayvanın his ve ağrı algısını test etmek için bir ayağı sıkıca sıkarak, ancak yaralamadan anesteziyi onaylayın. Yeterli anestezi, herhangi bir hareket olmaması ile gösterilir.
  3. Anestezi altındayken kuruluğu önlemek için barajın gözlerine veteriner oftalmik merhem sürün.

4. Süt toplama

  1. Anestezi uygulanmış barajı sırtına sağlam bir çalışma yüzeyine yerleştirin. Sağımdan önce alanı temizlemek için meme bölgesini steril bir alkol hazırlık mendili ile nazikçe silin.
  2. Periton boşluğunun herhangi bir enjeksiyon yapılmamış tarafındaki 4. ve 5. meme başları çifti arasına 1-2 ünite oksitosin (i.p.) uygulayın.
    NOT: Oksitosin, hızlı bir şekilde emilemeyen ve kısa bir yarı ömre sahip küçük bir moleküldür 14,15. Sağım, enjeksiyondan bir dakika sonra başlamalıdır.
  3. Baskın olmayan elinizle boyun bölgesini nazikçe sıkarak barajı tutun.
  4. Bir meme ucundan elde edilen sütü, meme dokusunu tabandan meme ucuna kadar bir boncuk süt görünene kadar sıkarak manuel olarak ifade edin.
  5. Güç düğmesini açarak vakum cihazını açın.
  6. Ters çevrilmiş P200 pipet ucunu bir emziğe nazikçe uygulayarak sağıma başlayın. Sütün çekilmesine yardımcı olmak için hafif bir çekme hareketi kullanın (Şekil 1C).
  7. Yeterli hacimde süt toplanana kadar tüm meme başlarında 4.4–4.6 adımlarını tekrarlayın.
    NOT: Sağım sırasında süt yanlışlıkla vakum hattının 18 G hipodermik iğnesine veya PVC borusuna çekilebilir. Bu, bir sonraki hayvanı sağmadan önce iğneyi veya PVC boruyu değiştirerek kolayca giderilebilir.

5. Süt toplandıktan sonra barajın geri kazanılması

  1. Anestezi uygulanmış barajı yavrularıyla birlikte kafese geri koyun ve sıcak tutun. Bilinci yerine gelene kadar hayvanı izleyin.
    NOT: Yavrularına dönmeden önce ayrı bir kafeste kendi başına uyanmasına izin verilirse, baraj tekrar emzirmeyi reddedebilir. Bu, süt toplama erken laktasyon (PD2) sırasında gerçekleştiğinde daha yaygındır.
  2. Uyanmaya başladığında tamamen iyileşmek için barajların yavrularından uzaklaşmasına izin verin; Bu normal bir davranıştır.
    NOT: Barajların periyodik olarak yavrularına döndüklerini ve birkaç saat sonra tamamen emzirmeye döndüklerini gözlemliyoruz.

6. Süt analizi

  1. Süt laktozunu ölçmek için ticari bir laktoz test kiti ( Malzeme Tablosuna bakınız) kullanın. Sütü 75x steril su ile seyreltin ve testi kit protokolüne göre gerçekleştirin.
  2. Diğer yayınlarda gösterilen kremaokrit yöntemini kullanarak süt yağını ölçün16,17.
  3. Bradford protein testini18 standart19 olarak sığır serum albümini ile gerçekleştirerek süt proteinini tahmin edin. Testi gerçekleştirmeden önce sütü 4.000 × g'da 4 °C'de 15 dakika santrifüjleyin. Ekstrakte ederek ekstrakte edin ve tahlilden önce steril su ile 1:10 oranında seyreltin.
  4. Poliakrilamid jel elektroforezi gerçekleştirin (PAGE); 10 μg proteini, üretici tarafından talimat verildiği şekilde prekast %4-12 Bis-Tris jeli üzerinde ayırın. Proteinleri poliviniliden florür (PVDF) membranlarına aktarın ve bunları Coomassie Blue R-250 ile boyayın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu tekniği kullanarak, 21 günlük bir laktasyon döneminde farklı zamanlarda yeterli sütü başarıyla örnekledik. Teslimat gününü teslimat sonrası gün 1 (PD1) olarak kabul ediyoruz ve bu çalışmada sütü PD2 (erken laktasyon) ve PD10 (pik laktasyon), her biri n = 4 olarak örnekledik. Her barajdan rahatça 0,1-0,5 mL süt elde ettik (Şekil 1D). Bu yöntemi doğrulamak için, bu süt örneklerinin brüt makro besin bileşimini ölçtük ve Student'ın t-testini kullanarak erken ve en yüksek laktasyonda toplanan süt arasındaki farkları karşılaştırdık.

Süt laktoz konsantrasyonunun PD2'de ortalama 12.3 ± 0.6 g/L ve PD10'± 12.0 0.9 g/L olduğunu bulduk (Tablo 1). Süt yağı yüzdesi PD2 ± PD10'da sırasıyla &.0 3.4 ± %1.5 idi. Yağ konsantrasyonu PD2'de 174.4 ± 7.1 g / L ve PD10'da 224.4 ± 17.1 g / L ile anlamlı derecede yüksekti (Tablo 1). Ortalama protein içeriği PD2'de 70.1 ± 5.2 g / L ve PD10'da 75.1 ± 2.6 g / L idi (Tablo 1). Toplam süt proteini içeriği PD2 ve PD10 arasında farklı olmasa da, bireysel süt proteininin nispi bolluğu farklıydı. Spesifik olarak, αS1-kazein ve peynir altı suyu asidik proteini PD10 sütünde PD2 sütünden daha yüksekti (p < 0.05), β-kazein (p < 0.05) PD2'de PD10'dan daha yüksek bolluk gösterdi (Şekil 2).

figure-results-1
Şekil 2: Süt proteini analizi. (A) PD2 ve PD10'da toplanan sütün Coomassie Mavi lekeli PAGE analizi. Protein tanımlaması daha önce tarif edildiği gibi yapıldı14. (B) Bireysel protein sinyalleri ImageJ'de analiz edildi ve boyanmış toplam proteine normalize edildi. Sonuçlar, standart hata çubukları ve tek tek veri noktaları nokta olarak ortalama olarak ifade edildi. PD2 ve PD10'daki her proteinin ortalama bolluğu, iki kuyruklu bir Student t-testi kullanılarak karşılaştırıldı. *p < 0.05, n = 4 olur. Kısaltmalar: PAGE = poliakrilamid jel elektroforezi; PDn = teslimat sonrası gün n. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

OrtalamaSEMp-değeri
Laktoz
(g/L)		PD2 (PD2)12.30.60.75
PD10 Serisi12.00.9
Yağ
(g/L)		PD2 (PD2)174.47.10.04
PD10 Serisi224.417.1
Protein
(g/L)		PD2 (PD2)70.15.20.42
PD10 Serisi75.12.6

Tablo 1: PD2 ve PD10'da toplanan sütün makro besin bileşimi. Ortalamanın (SEM) ortalama ve standart hatası olarak ifade edilen sonuçlar, laktasyon gününün süt bileşimi üzerindeki etkilerini incelemek için iki kuyruklu Student t-testi, n = 4 kullanılarak analiz edildi.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kolayca monte edilebilen ve taşınabilir bir cihaz kullanılarak bir kişi tarafından gerçekleştirilebilecek modifiye edilmiş bir sağım tekniği gösterdik. Geleneksel olarak kemirgen sütü, kılcal tüpler10,17, cam Pasteur pipetleri12 veya mikropipetler11 kullanılarak toplanır. Bu yöntemler, bir kişinin barajı dizginlemesini ve sütü manuel olarak ifade etmesini ve diğerinin sütü toplamasını gerektirir. Bu, özellikle hafta sonları veya tatil günlerinde süt örneklemesi yapıldığında bazen zor olabilir. Bu yöntemlerle toplanan sütün steril saklama tüplerine aktarılması gerekir. Kemirgen sütü yağ bakımından nispeten yüksek olduğundan (burada ve diğer çalışmalarda gösterildiği gibi20,21) ve bu nedenle viskoz olduğundan, sütün aktarılması işlemi muhtemelen süt hacmi kaybına neden olur ve bu da analizler için miktarları sınırlar. Burada açıklanan cihaz, laboratuvarda bulunan aletlerle 5 dakikadan daha kısa bir sürede monte edilebilir. 10 dakika içinde yeterli süt hacmini örneklemek için bir kişi tarafından kolayca kullanılabilir. Bu yöntemle ilişkili sürekli nazik emme yaklaşımı, sütün sürekli olarak doğrudan bir toplama tüpüne çekilmesi nedeniyle transferden kaynaklanan numune kaybı sorununu hafifletir. Numune kaybının en aza indirilmesi, PD2 gibi erken bir dönemde süt toplanırken özellikle önemlidir, çünkü bu aşamada süt veriminin nispeten düşük olduğu bilinmektedir10. Ayrıca, aynı cihaz ve protokol, başka bir fare suşundan (FVB / N arka planı) başarılı bir şekilde süt toplamak için kullanıldı, bu da bu yöntemin fare suşları arasında eşit derecede iyi çalıştığını düşündürdü.

Bu çalışmada ayrıca laktasyonun evresine bağlı olarak ayrılma zamanının farklılık gösterebileceğini de gözlemledik. Önceki çalışmalar, yeterli süt hacmi elde etmek için barajların süt toplamadan önce en az 2 saat ve 16 saate kadar yavrularından ayrılması gerektiğini bildirmektedir11,13. Bu yöntemi uygularken, erken laktasyonda (PD2) 2 saat ve pik laktasyonda (PD10) sadece 30-45 dakika boyunca barajları yavrularından ayırmanın yeterli miktarda süt elde etmek için yeterli olduğunu bulduk. Barajın anesteziden kurtulması için ek zaman aldığından, ayrılma süresini en aza indirmek sadece örnekleme süresini azaltmakla kalmaz, aynı zamanda baraj ve yavruları üzerinde yaratabileceği potansiyel etkiyi de azaltır.

Ek olarak, PD2 kadar erken süt toplamanın, barajın uzun ayrılma ve toparlanma süresi nedeniyle yavruların sonraki büyümesini olumsuz etkileyebileceğini ve yetersiz besleme dönemine yol açabileceğini bulduk. Bu, en yüksek laktasyonda (PD10) süt örneklendiğinde gözlenmedi. Bu nedenle, bir araştırmacı 21 günlük laktasyon döneminde farklı zaman noktalarında süt numunesi almakla ilgileniyorsa, erken laktasyon sütünden ayrı bir baraj setinden numune alınması tavsiye edilir. Bununla birlikte, süt toplama, uzunlamasına çalışmalar için pik ve geç laktasyon sırasında aynı barajda birden çok kez gerçekleştirilebilir.

Alternatif olarak, araştırmacılar barajın iyileşme süresini en aza indirmek için diğer anestezik ajanları tercih edebilirler. Örneğin, izofluran inhalasyonu, hayvanlar tipik olarak izofluran22'nin kesilmesi üzerine hızlı bir şekilde iyileştiğinden, iyileşme süresini azaltmaya yardımcı olabilir. Bu anestezi seçimi birçok kişi tarafından yapılmasına rağmen13,23, izofluran inhalasyonunun toplanan süt hacmini olumsuz etkileyebileceği bildirilmektedir13. Ek olarak, izofluran inhalasyonu, dozajın hassas kontrolünü sağlamak için uygun aparat gerektirir. Ketamin/ksilazin ve izofluran gibi anestezik ajanların laktasyon ve süt kompozisyonu üzerine etkileri ve anne sütüne geçiş potansiyelleri ile ilgili araştırmalar sınırlıdır 24,25,26. Bu nedenle, farklı anestezi seçenekleri kullanılarak yapılan çalışmaları karşılaştırırken veri yorumlamasının dikkatli bir şekilde yapılması tavsiye edilir. Diğer bir alternatif, diğer araştırmacılar tarafından tanımlandığı gibi anestezi olmadan süt örneklemesidir 14,27,28,29. Bununla birlikte, bu prosedür potansiyel olarak barajda aşırı strese neden olabilir ve hayvanı dizginlemek için ek bir kişi gerektirebilir.

Bu çalışma aynı zamanda makro besin tahlillerinin süt numuneleri kullanılarak yapılabileceğini ve omik analizler gibi daha fazla prosedür için fazla kaldığını gösterdi. Süt laktozu, protein ve yağ seviyeleri ölçüldü ve açıklanan yöntemi doğrulamak için yayınlanmış verilerle karşılaştırıldı. Süt laktoz konsantrasyonu, süt bileşeninin ~% 1.2'sini oluşturuyordu, bu da diğer çalışmalarda bildirilen bir kontrol diyetindeki farelerinkine benzer30,31,32. Fare sütünün, daha önce bildirildiği gibi, %26 ila %33 arasında değişen yüksek bir yağ yüzdesine sahip olduğu doğrulanmıştır 20,30. Burada bildirilen toplam protein konsantrasyonu, Chen ve ark.30 tarafından bildirilenlere benzerdi, ancak diğer çalışmalarda bildirilenden daha düşüktü31,32. Erken laktasyondan zirveye kadar olan değişiklikler açısından, laktoz ve protein seviyelerinin nispeten sabit kaldığını, ancak süt yağı yüzdesinin erken laktasyondan zirveye kadar arttığını bulduk. Bu, Ragueneau32 ile aynı fikirde değildir, ancak tutarsızlık örneklem büyüklüğündeki farklılıklardan kaynaklanıyor olabilir. Toplam protein konsantrasyonu erken ve pik laktasyon arasında benzer olmasına rağmen, bireysel protein bolluğunun (αS1-kazein, β-kazein ve peynir altı suyu asidik proteini) değiştiğini ve muhtemelen farklı gelişim aşamalarında yenidoğanların ihtiyaçlarındaki değişiklikleri yansıttığını bulduk.

Bu teknik süt üretiminin niceliklendirilmesine izin vermese de, bu, Falconer tarafından 1947'de önerilen performans indeksi (IOP) kullanılarak hesaplanabilir33. Süt üretimi büyük ölçüde altlık boyutuna ve numune alma gününe bağlıdır. Bu indeks, altlık boyutu farklılıklarını hesaba katarak süt üretiminin bir ölçümü olarak kullanılabilir. Örneğin, çöpün tamamı PD10'da tartılabilir (baraj süt örneklemesi için ayrıldığında). Bir barajın GİB'si daha sonra çöpünün ağırlığının PD10'daki aynı büyüklükteki yavruların ortalama ağırlığına bölünmesiyle hesaplanır. Sonuç olarak, nispeten ucuz ve kolayca bulunabilen ekipmanlarla kolayca monte edilebilen bir cihaz kullanarak laboratuvar farelerinden süt örneklemesi için verimli bir tek kişilik teknik gösteriyoruz. Bu teknik, çoğu analiz için yeterli miktarda sütün tutarlı bir şekilde toplanmasını sağlar.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklanacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma NJAES Hatch Project 14190 ve NIH R21HD 108496 tarafından desteklenmiştir.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
1 mL kriyojenik şişelerCorning430658Erken süt toplama için tercih edilir
1 mL şırıngaExel26048
2 mL mikrosantrifüj toplama tüpüFisher Scientific02-681-344Pik ve geç süt toplama için tercih edilir
18 G hipodermik iğneBD PrecisionGlide305195
27 G hipodermik iğneBD PrecisionGlide305109
Alkol hazırlama mendiliHoneywell154818
Bio-Rad Protein Testi Boya Reaktif KonsantresiBio-Rad5000006
Sığır Serumu AlbüminiSigma-AldrichA2153
İmmobilon -P PVDF MembranİmmobilonIPVH00010
KetaminDechra1000001250Veteriner Ofisi aracılığıyla satın alındı 
Laboratuvar etiketleme bandıVWR International89097
Laktoz Test KitiSigma-AldrichMAK487
Mini Dikenli polipropilen bağlantı parçalarıCole-Parmer Instrument Company6365-90
Fare diyetiLaboratuvar Diyeti5015
NuPAGE Bis-Tris Mini Protein Jelleri, 4– %12InvitrogenNP0335BOX
Optixcare Göz YağıAventixN/AVeteriner Ofisi Aracılığıyla Satın Alındı 
OksitosinBimeda1OXY015Veteriner Ofisi aracılığıyla satın alındı 
P200 pipet uçlarıGilsonF1733001
PVC boru: 1/8 '' IDVWR UluslararasıMFLX07407-75 &
PVC boru: 5/32 '' IDVWR InternationalMFLX07407-77
Septum durdurucuChemglass Yaşam BilimleriCG-3022-91
Vakum pompasıDrummond Scientific Co.P-103635
XylazineAkorn Hayvan SağlığıNDC 59399-110-20Veteriner Ofisi aracılığıyla satın alındı 

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Ericsson, A. C., Crim, M. J., Franklin, C. L. A brief history of animal modeling. Mo Med. 110 (3), 201-205 (2013).
  2. Bryda, E. C. The mighty mouse: The impact of rodents on advances in biomedical research. Mo Med. 110 (3), 207-211 (2013).
  3. Watford, M., Erbelding, E. J., Smith, E. M. Glutamine metabolism in rat small intestine: Response to lactation. Biochem Soc Trans. 14 (6), 1058-1059 (1986).
  4. Robinson, A. M., Williamson, D. H. Comparison of glucose metabolism in the lactating mammary gland of the rat in vivo and in vitro. Effects of starvation, prolactin or insulin deficiency. Biochem J. 164 (1), 153-159 (1977).
  5. Kowalski, T. J., Wu, G., Watford, M. Rat adipose tissue amino acid metabolism in vivo as assessed by microdialysis and arteriovenous techniques. Am J Physiol. 273 (3 Pt 1), E613-E622 (1997).
  6. Ashcroft, S. P., et al. Protocol to assess arteriovenous differences across the liver and hindlimb muscles in mice following treadmill exercise. STAR Protoc. 4 (1), 101985(2023).
  7. Hallemeesch, M. M., Ten Have, G. A., Deutz, N. E. Metabolic flux measurements across portal drained viscera, liver, kidney and hindquarter in mice. Lab Animal. 35 (1), 101-110 (2001).
  8. Le, H., Nguyen, M., Manso, H. E. C., Wang, M. D., Watford, M. Adipocytes are the only site of glutamine synthetase expression within the lactating mouse mammary gland. Curr Dev Nutr. 8 (6), 102168(2024).
  9. Giordano, A., Smorlesi, A., Frontini, A., Barbatelli, G., Cinti, S. White, brown and pink adipocytes: The extraordinary plasticity of the adipose organ. Eur J Endocrinol. 170 (5), R159-R171 (2014).
  10. Knight, C. H., Maltz, E., Docherty, A. H. Milk yield and composition in mice: Effects of litter size and lactation number. Comp Biochem Physiol A Comp Physiol. 84 (1), 127-133 (1986).
  11. Willingham, K., et al. Milk collection methods for mice and reeves' muntjac deer. J Vis Exp. (89), e51007(2014).
  12. Muranishi, Y., et al. Method for collecting mouse milk without exogenous oxytocin stimulation. Biotechniques. 60 (1), 47-49 (2016).
  13. Gómez-Gallego, C., et al. A method to collect high volumes of milk from mice (mus musculus). Anales de Veterinaria de Murcia. 29, 55-61 (2014).
  14. DePeters, E. J., Hovey, R. C. Methods for collecting milk from mice. J Mammary Gland Biol Neoplasia. 14 (4), 397-400 (2009).
  15. Oxytocin- oxytocin injection. , https://dailymed.nlm.nih.gov/dailymed/fda/fdaDrugXsl.cfm?setid=a9b62187-4141-487c-a9da-f42ad7f9b408&type=display (2019).
  16. Lucas, A., Gibbs, J. A., Lyster, R. L., Baum, J. D. Creamatocrit: Simple clinical technique for estimating fat concentration and energy value of human milk. Br Med J. 1 (6119), 1018-1020 (1978).
  17. Paul, H. A., Hallam, M. C., Reimer, R. A. Milk collection in the rat using capillary tubes and estimation of milk fat content by creamatocrit. J Vis Exp. (106), e53476(2015).
  18. Ernst, O., Zor, T. Linearization of the Bradford protein assay. J Vis Exp. (38), e1918(1918).
  19. Hueso, D., Fontecha, J., Gomez-Cortes, P. Comparative study of the most commonly used methods for total protein determination in milk of different species and their ultrafiltration products. Front Nutr. 9, 925565(2022).
  20. Anderson, S. M., Rudolph, M. C., Mcmanaman, J. L., Neville, M. C. Key stages in mammary gland development. Secretory activation in the mammary gland: It's not just about milk protein synthesis. Breast Cancer Res. 9 (1), 204(2007).
  21. Meier, H., Hoag, W. G., Mcburney, J. J. Chemical characterization of inbred-strain mouse milk. I. Gross composition and amino acid analysis. J Nutr. 85 (3), 305-308 (1965).
  22. Hohlbaum, K., et al. Severity classification of repeated isoflurane anesthesia in c57bl/6jrj mice-assessing the degree of distress. PLoS One. 12 (6), e0179588(2017).
  23. Weaver, S. R., et al. Serotonin deficiency rescues lactation on day 1 in mice fed a high fat diet. PLoS One. 11 (9), e0162432(2016).
  24. Statement on resuming breastfeeding after anesthesia. , Committee on Obstetric Anesthesia. https://www.asahq.org/standards-and-practice-parameters/statement-on-resuming-breastfeeding-after-anesthesia (2009).
  25. Lee, J. J., Rubin, A. P. Breast feeding and anaesthesia. Anaesthesia. 48 (7), 616-625 (1993).
  26. Reece-Stremtan, S., Campos, M., Kokajko, L. Academy of Breastfeeding, M. Abm clinical protocol #15: Analgesia and anesthesia for the breastfeeding mother, revised 2017. Breastfeed Med. 12 (9), 500-506 (2017).
  27. Oosting, A., Verkade, H. J., Kegler, D., Van De Heijning, B. J., Van Der Beek, E. M. Rapid and selective manipulation of milk fatty acid composition in mice through the maternal diet during lactation. J Nutr Sci. 4, e19(2015).
  28. Silverman, J., Stone, D. W., Powers, J. D. The lipid composition of milk from mice fed high or low fat diets. Lab Animal. 26 (2), 127-131 (1992).
  29. Rodgers, C. T. Practical aspects of milk collection in the rat. Lab Animal. 29 (4), 450-455 (1995).
  30. Chen, Y., et al. Effect of high-fat diet on secreted milk transcriptome in midlactation mice. Physiol Genomics. 49 (12), 747-762 (2017).
  31. Kucia, M., et al. High-protein diet during gestation and lactation affects mammary gland mrna abundance, milk composition and pre-weaning litter growth in mice. Animal. 5 (2), 268-277 (2011).
  32. Ragueneau, S. Early development in mice. Iv: Quantity and gross composition of milk in five inbred strains. Physiol Behav. 40 (4), 431-435 (1987).
  33. Falconer, D. S. Milk production in mice. J Agric Sci. 37 (3), 224-235 (1947).

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Milk SamplingLaboratory MiceLactation ResearchRodent Milk CollectionSingle Person TechniqueMilk MacronutrientsOxytocin AdministrationVacuum Pump MethodMammary GlandMilk Protein Analysis

İlgili makaleler