Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Helicobacter pylori Enfeksiyonu ve Antibiyotik Direncinin Dışkı ile Saptanması Kantitatif Polimeraz Zincir Reaksiyonu Analizi

2.1K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/67710

⸱

16 Mayıs 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Guangdong Provincial People's Hospital (Guangdong Academy of Medical Sciences), Southern Medical University, 2Medical Technology School, Xuzhou Medical University

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Protokol, Helicobacter pylori enfeksiyonu ve klaritromisin ve kinolonlara direnci için uygun ve hızlı bir tanı yöntemi sunmak için kantitatif bir polimeraz zincir reaksiyonu ile birlikte invaziv olmayan bir dışkı örneklemesi kullanır.

Özet

Helicobacter pylori (H. pylori) dünya çapında yaygın olarak yaygındır ve küresel nüfusun yaklaşık% 50'sinde H. pylori enfeksiyonu öyküsü vardır. Çin'de enfeksiyon oranı %40 ile %70 arasında değişmektedir. H. pylori öncelikle kronik gastrit, mide ülseri ve duodenum ülseri gibi gastrointestinal hastalıklarla ilişkilidir. Şu anda, H. pylori enfeksiyonu için klinik tedavi üçlü veya dörtlü tedaviyi içerir. Bununla birlikte, antibiyotiklerin yaygın kullanımı, H. pylori'de antibiyotik direncinin gelişmesine yol açmıştır. Bu nedenle, hem H. pylori'nin hem de antibiyotik direncinin saptanması, klinik tedavinin yönlendirilmesi için çok önemlidir.

H. pylori için tanı yöntemleri arasında üre nefes testi (UBT), antijen testi, serolojik antikor testi, endoskopi, hızlı üreaz testi (RUT) ve bakteri kültürü bulunur. İlk üç yöntem non-invaziv olsa da, bakteri kazanımına izin vermezler ve bu nedenle direnç testi için kullanılamazlar. Son üç yöntem invazivdir, pahalıdır, yüksek teknik uzmanlık gerektirir ve hastalara zarar verebilir.

Bu nedenle, H. pylori enfeksiyonu ve antibiyotik direncinin aynı anda saptanması için invaziv olmayan, hızlı bir yöntem, H. pylori'nin etkili eradikasyonu için son derece klinik öneme sahiptir. Bu makale, H. pylori enfeksiyonunu ve antibiyotik direncini hızlı bir şekilde tespit etmek için kantitatif polimeraz zincir reaksiyonunu (qPCR) TaqMan floresan prob teknolojisi ile birleştiren spesifik bir protokolü tanıtmayı amaçlamaktadır. Bu yöntem, geleneksel bakteri kültürü ve diğer tekniklerin aksine, H. pylori enfeksiyonunu ve direncini teşhis etmek için uygun, hızlı ve invaziv olmayan bir yol sağlar. qPCR, enfeksiyonu tanımlamak ve sırasıyla klaritromisin ve kinolonlara dirençle bağlantılı olan 23S rRNA ve gyrA genlerindeki mutasyonları tespit etmek için kullanılır. Konvansiyonel kültür teknikleriyle karşılaştırıldığında, bu yaklaşım Helicobacter pylori enfeksiyonunu tespit etmek ve antibiyotik direncini belirlemek için non-invaziv, uygun maliyetli ve zaman açısından verimli bir yöntem sunar.

Giriş

Helicobacter pylori , insan mide epitelini1 kalıcı olarak enfekte edebilen gram negatif, spiral şekilli bir bakteridir. 1994 yılında, Dünya Sağlık Örgütü H. pylori'yi mide kanseri için Grup 1 kanserojen olarak sınıflandırdı ve enfekte bireylerin ~% 3'ü sonuçtahastalık 2'yi geliştirdi. Yakın zamanda yayınlanan bir sistematik derleme, son on yılda H. pylori'nin antibiyotik direnç oranının arttığı genel bir eğilimin gözlendiğini ve bu eğilimin dünya çapında endişe verici seviyelere, özellikle de klaritromisin direncineulaştığını göstermiştir 3. Çin'de, en son anket verileri, kentsel Çin halkı arasında H. pylori'nin toplam prevalansının %27,08 olduğunu göstermiştir; klaritromisin ve levofloksasin için direnç oranları %50.83 ve %47.17 idi.4 ve bunlar Amerika Birleşik Devletleri'nden (levofloksasin %37.6, klaritromisin %31.5)5ve Avrupa'dan (levofloksasin %15.8 ve klaritromisin %21.4)6. Bu nedenle erken ve doğru tanı ve tedavi çok önemlidir. Bununla birlikte, H. pylori'nin artan antibiyotik direnci, tedavi etkinliğini önemli ölçüde azaltmakta ve tanı ve tedavisi için devam eden araştırmalara acil ihtiyaç olduğunu vurgulamaktadır.

H. pylori tanı yöntemleri invaziv ve non-invaziv teknikler olarak kategorize edilir7. İnvaziv yöntemler arasında histopatolojik inceleme, hızlı üreaz testi (RUT) ve bakteri kültürübulunur 8. Histopatolojik inceleme, biyopsi örneklerinin işlenmesine ve mikroskobik gözlemine dayanır ve doğruluk, histolojik hazırlık ve patoloji uzmanlığı ile sınırlıdır9. RUT, H. pylori'yi üreayı amonyak üretmek üzere hidrolize eden ve reaktifte alkali bir kaymaya neden olan ve böylece bakteri9'un varlığını gösteren üreaz aktivitesi yoluyla tespit eder. Basit ve uygun maliyetlidir. "Altın standart" olarak kabul edilen bakteri kültürü, H. pylori10'un benzersiz fizyolojik özellikleri nedeniyle genellikle %50'nin altında bir başarı oranına sahiptir.

Non-invaziv yöntemler arasında 13C/14C üre nefes testi (UBT), serolojik tanı ve dışkı antijen testi (SAT) bulunur11. Nefes testi, enfeksiyonu doğrulamak için solunan havada izotopik olarak etiketlenmiş CO2'yi tespit ederek RUT'unkine benzer bir prensipte çalışır12. Serolojik tanı, bakteri eradikasyonundan sonra devam edebilen antikorları tespit eder ve bu da tedavi etkinliğini değerlendirmeyi zorlaştırır13. Dışkı antijen testi, dışkı örneklerinde H. pylori'ye özgü antijenleri tespit ederek, daha düşük yanlış pozitif oranı ve aktif enfeksiyonları teşhis etmek için iyi doğruluk ile güvenilir bir non-invaziv yöntem sağlar14.

Her tanı yönteminin kendine özgü avantajları ve sınırlamaları vardır15. Bakteri kültürü dışında, diğer yöntemler antibiyotik direncini tespit etmekte zorlanırken, kültür düşük başarı oranları nedeniyle engellenmektedir16. Son zamanlarda, gerçek zamanlı kantitatif PCR (qPCR) gibi moleküler tanı yöntemleri, mikrobiyal saptama için yaygın olarak uygulanmaktadır17. qPCR, H. pylori'yi doğru bir şekilde tespit edebilir ve direnç gen mutasyonlarını analiz ederek enfeksiyonun daha kapsamlı bir görünümünü sunar18.

Floresan problar, qPCR işlemi sırasında DNA'daki bir hedef diziye spesifik olarak bağlanmak üzere tasarlanmıştır. Bu problar tipik olarak, prob hedefine bağlandığında bir sinyal yayan ve amplifikasyon sırasında polimeraz tarafından parçalanan bir floresan boya ile etiketlenir. Bu, PCR işleminin gerçek zamanlı bir ölçümünü sağlar. Floresan problar, yalnızca hedef DNA dizisinin tespit edilmesini sağlayan, spesifik olmayan bağlanma şansını azaltan ve test özgüllüğünü iyileştiren probun benzersiz tasarımı nedeniyle yüksek özgüllükleri ile bilinir. Bu, floresan prob teknolojisini özellikle dışkı örneklerinde Helicobacter pylori DNA'sı gibi düşük bolluktaki hedefleri tespit etmek için kullanışlı hale getirir. SYBR Green, PCR'de yaygın olarak kullanılan bir DNA bağlayıcı boya olsa da, herhangi bir çift sarmallı DNA'ya bağlanabilir, bu da spesifik olmayan amplifikasyona ve yanlış pozitiflere neden olabilir.

Helicobacter pylori'nin klinik örneklerden kültürlenmesi, doğrudan antibiyotik direnci verileri sağlamaz. Buna karşılık, floresan prob tabanlı qPCR daha hızlı, daha kullanışlıdır ve H. pylori ve antibiyotik direnç belirteçlerinin aynı anda tespiti için uyarlanabilir. Bu yöntem yalnızca geleneksel kültür yöntemlerinden daha hızlı sonuçlar vermekle kalmaz, aynı zamanda antibiyotik direnç genlerinin aynı anda tespit edilmesine izin vererek tespit verimliliğini ve rahatlığını büyük ölçüde artırır. Bu yöntem, geleneksel bakteri kültürü ve diğer tekniklerin aksine, H. pylori enfeksiyonunu ve direncini teşhis etmek için uygun, hızlı ve invaziv olmayan bir yol sağlar.

H. pylori antibiyotik direnci için göz önünde bulundurulması gereken iki önemli konu vardır: i) genotip ve fenotip tutarlılığı, ii) çoklu ilaç direnci. Çin'de yapılan büyük ölçekli çok merkezli bir çalışma, klaritromisin/levofloksasin için çift direnç modellerinin %26.1 olduğunu buldu. Klaritromisin ve levofloksasine dirençli H pylori fenotipleri ve genotipleri tatmin edici bir uyum gösterdi (kappa katsayısı = sırasıyla 0.810 ve 0.782)19. Bu nedenle, H. pylori enfeksiyonunu ve ilaç direncini tespit etmek için qPCR yönteminin kullanılması mümkündür. Dışkı antijen testi (SAT) ve qPCR yöntemleri, örnekleme kolaylığı nedeniyle giderek daha fazla kullanılmaktadır. H. pylori tespiti için yöntemlerin duyarlılığı, özgüllüğü ve doğruluğu aşağıdaki gibidir: qPCR > UBT > SAT > RUT> CagA IgG > kültürü20. Tüm non-invaziv yöntemler primer tarama için uygundur. qPCR ayrıca ilaca dirençli genleri de tespit edebildiğinden, qPCR ve kültür tedaviyi yönlendirmek için daha uygun olacaktır.

Endoskopik görüntüler21, dijital mikroakışkanlar22 ve RPA-CRISPR/Cas12a23 ile birleştirilmiş yapay zeka (AI) algoritmaları gibi diğer yenilikçi yaklaşımlar, teorik olarak iyi tanısal verimlilik ve umut verici uygulama beklentileri göstermektedir. Bununla birlikte, qPCR şu anda H. pylori enfeksiyonlarının tanı ve tedavisi için üstün bir çözüm sağlama potansiyeline sahip en gelişmiş moleküler biyoloji tekniğidir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bu çalışma, Guangzhou, Çin'deki Güney Tıp Üniversitesi, Guangdong İl Halk Hastanesi Etik Komitesi tarafından belirlenen etik yönergelere uygundur (Onay No: KY2024-445-01). Bu araştırmada kullanılan malzemelerle (reaktifler, kimyasallar, ekipman ve yazılım) ilgili ayrıntılı bilgiler Malzeme Tablosunda bulunabilir.

1. Katılımcı seçimi

  1. 18 ila 60 yaş aralığındaki katılımcıları seçin.
  2. Gastrit, peptik ülser veya dispepsi gibi semptomlarla başvuran hastalar ve asemptomatik bireyler gibi Helicobacter pylori enfeksiyonu taraması yapılabilecek katılımcıları seçin.
  3. Geçen ay içinde antibiyotik, bizmut içeren ajanlar (potasyum bizmut sitrat kapsülleri, kolloidal bizmut pektin kapsülleri veya bizmut-alüminyum bileşik tabletler gibi) veya antimikrobiyal Çin ilaçları kullanan hastaları veya proton pompa inhibitörleri veya H2 reseptör antagonistleri (omeprazol, pantoprazol, rabeprazol, simetidin veya nizatidin gibi) kullanmış olanları çalışma dışı bırakın. Ayrıca adet dönemindeki kadınları çalışmadan hariç tutun.

2. Dışkı örneklerinin toplanması

NOT: Bölüm 2'yi katılımcılara talimat olarak verin.

  1. Numune alma kitinin dış ambalajının hasarsız ve son kullanma tarihi içinde olduğunu onaylayın. Malzemeleri kitten çıkarın.
  2. Klozetin içine beyaz bir dışkı toplama kağıdı yerleştirin ve dışkılayın (idrarla kontaminasyonu önlemek için).
  3. Bir spatula kullanarak, yaklaşık bir bakla büyüklüğünde (~ 5 g) dışkı toplayın ve numune kabına aktarın.
  4. Numune alma spatulasını, dışkı numunesi ile birlikte toplama tüpüne yerleştirin ve sıvı seviyesinin tüp üzerinde belirtilen numune alma çizgisinin yakınına yükseldiğinden emin olun.
  5. Tüp kapağını güvenli bir şekilde sıkın. Numunenin koruyucu solüsyonla iyice karışmasını sağlamak için tüpü birkaç kez ters çevirin.
  6. H. pylori'nin aşağıdaki tanımlaması ve qPCR ile antibiyotik direnç profillerinin değerlendirilmesi için numuneyi klinik laboratuvara teslim edilene kadar buzdolabında saklayın.

3. Nükleik asit ekstraksiyonu

NOT: Kontaminasyonu önlemek için tüm prosedürleri bir biyogüvenlik kabini içinde tamamlayın.

  1. Numune koruma tüpünü ters çevirin ve iyice karıştırın. Dışkı örneği çözeltisinin 1.0 mL'sini bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın.
  2. Santrifüj tüplerini karıştırdıktan sonra, 80 °C'de 10 dakika boyunca metal bir banyoya yerleştirin ve beşinci dakikada 30 saniye aralıklı olarak karıştırın. Tüpler oda sıcaklığına soğuduktan sonra, 5 dakika boyunca 10.000 × g'da santrifüjleyin ve daha sonraki işlemler için süpernatanı toplayın.
  3. Manyetik boncukları yeniden askıya almak için 96 oyuklu plakayı birden çok kez ters çevirin. Dökülmeyi önlemek için sallanmamaya dikkat ederek alüminyum folyo contayı dikkatlice çıkarın.
  4. Hazırlanan numuneden 200 μL (adım 3.2'den itibaren) lizis tamponu içeren 96 oyuklu plakanın her bir oyuğuna ekleyin ve her bir oyuğun tek bir numuneye karşılık geldiğinden emin olun. 96 oyuklu plakayı, otomatik ekstraksiyon için nükleik asit ekstraksiyon cihazının belirlenmiş numune bölmesine yerleştirin.
  5. Kalan numuneleri ve ekstrakte edilen nükleik asit numunelerini uzun süreli koruma ve ileride kullanım için -20 °C'de saklayın.

4. Helicobacter pylori nükleik asitlerinin qPCR tespiti ve klaritromisin ve kinolonlara direnç mutasyonları

  1. Reaktifleri reaktif saklama alanından alın ve oda sıcaklığında çözdürün.
    NOT: Bu kit, 23S rRNA genindeki (A2143G, A2143C, A2144G) ve gyrA genindeki (261A, 261G, 260T, 271A, 271T, 272G) mutasyonlar dahil olmak üzere H. pylori nükleik asidinin kalitatif tespiti için kullanılmıştır. Primerler, problar, Taq enzimi, UNG enzimi ve dNTP'ler kitte mevcuttu. H. pylori ve insan β-aktininin hedef genleri pozitif kalite kontrolüne dahil edildi. İnsanβ-aktin geni, iç kalite kontrol olarak seçildi.
  2. Test edilecek numune sayısına bağlı olarak, liyofilize reaktifin N + 2 kopyasını kullanın, burada N test edilecek numune sayısını ve 2 negatif ve pozitif QC'leri temsil eder.
  3. Liyofilize tozun tüplerin dibine çöktüğünden emin olmak için kısa bir süre santrifüjleyin. Liyofilize reaktifin kapağını açın (tozun herhangi bir şekilde dökülmesini önlemeye dikkat edin) ve test edilecek numunelerden ekstrakte edilen nükleik asitlerin yanı sıra pozitif ve negatif kontrollerin her yerine 25 μL ekleyin. Tüpleri sıkıca kapatın.
  4. PCR reaktiflerini 8-10 saniye vorteksleyin, ardından kabarcık oluşumunu önlemek için 3-5 saniye kısa bir süre santrifüjleyin.
  5. 96 oyuklu qPCR plakasını qPCR makinesine yerleştirin. Döngü programını aşağıdaki gibi ayarlayın: önce reaksiyon karışımını (primerler, problar, Taq polimeraz, UNG enzimi, dNTP'ler vb. İçeren) 42 °C ve 95 °C'de (her iki adım bir döngüde) 2 dakika inkübe edin; daha sonra 10 °C'de 10 s ve 95 °C'de 65 s ile 65x döngü; son olarak, denatürasyon, tavlama ve uzatma için 35 °C'de 10 s ve 45 °C'de 58 s ile 58x döngü.
  6. Floresan sinyali algılama parametrelerini aşağıdaki gibi ayarlayın: H. pylori korunmuş genlerin ROX floresan etiketlemesi; H. pylori klaritromisin direnç genlerinin FAM floresan etiketlemesi; H. pylori kinolon direnç genlerinin HEX floresan etiketlemesi; ve kitin dahili kontrolü olarak insan β-aktin geninin CY5 floresan etiketlemesi kullanıldı. 58 °C'de veri toplayın. Reaksiyonun tamamlanmasının ardından, verilerin gelecekteki analizler için kaydedildiğinden emin olun.
  7. Cihaz referans değer eşiğini otomatik olarak seçtiği için qPCR'ye özel yazılımı kullanarak verileri analiz edin. Helicobacter pylori enfeksiyonu veya direnci de dahil olmak üzere tüm tanı kriterlerini BT değeri ≤30'a ayarlayın; karakteristik S şeklinde bir eğri sergilediklerini onaylayın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Dışkı örneklerinde Helicobacter pylori enfeksiyonu ve antibiyotik direncinin tespiti için qPCR uygulaması
Helicobacter pylori'nin korunmuş genlerindeki nokta mutasyonlarının yanı sıra 23S rRNA geni ve gyrA genindeki nokta mutasyonlarına dayalı primerler ve problar tasarladık. Bu primerler ve problar farklı floresan boyalarla etiketlendi ve daha sonra qPCR tespiti için kullanıldı. qPCR deneyleri için kalite k...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Son yıllarda, moleküler tespit yöntemleri mikrobiyoloji alanında yaygın olarak uygulanmakta ve çeşitli bulaşıcı hastalıkların klinik yönetimini önemli ölçüde değiştirmektedir. Bu yöntemler genetik düzeyde çalışır ve sadece bakteri varlığının doğrulanmasına değil, aynı zamanda gen tiplemesi ve antibiyotik direnci testine de izin verir. Gerçek zamanlı floresan kantitatif PCR (qPCR), kısa işlem süresi, yüksek hassasiyeti ve doğruluğu ve düşük çapraz kontaminasyon riski nedeniyle giderek dah...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar rekabet eden çıkarları olmadığını beyan ederler.

Teşekkürler

Bu çalışma, Guangdong Eyalet Halk Hastanesi İleri Yetenekler Araştırma Vakfı tarafından finanse edilmiştir. KY012023293]. Bu çalışma Jiangsu Mole Bioscience Co. tarafından desteklenmiştir. Fon sağlayıcıların çalışma tasarımında, veri toplama ve analizinde, yayınlama kararında veya makalenin hazırlanmasında hiçbir rolü yoktu.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
BSC-1500IIA2-XBİYOBAZSEDABiyogüvenlik kabini
Tek kullanımlık dışkı toplama ve saklama tüpüKöstebekDışkı örneklerini toplayın
E-SantrifüjWEALTECTüpün duvarından kalan sıvıyı santrifüjleyin
Helicobacter pylori nükleik asit, klaritromisin ve kinolon direnci mutasyon tespit kitiKöstebekHelicobacter pylori enfeksiyonu ve antibiyotik direncinin tespiti; dondurularak kurutulmuş H. pylori reaktifi (primerler, problar, Taq polimeraz, UNG enzimi, dNTP'ler, vb. İçeren), H. pylori için pozitif kontrol (Helicobacter pylori ve insan β-aktin hedef genleri içeren) ve H. pylori için negatif kontrol (insan β-aktin hedef genleri içeren)
Köstebekekstraksiyonu
Nükleik asit ekstraksiyon kitiKöstebekNükleik asidi çıkarmak için; lizis tamponu (guanidin tuzu, tris hidroksimetil aminometan, Tween-20, sodyum klorür), Yıkama Tamponu 1 (sodyum klorür), Yıkama Tamponu 2 (tris hidroksimetil aminometan, Tween-20), Yıkama Tamponu 3 (manyetik boncuklar, Tween-20), Yıkama Tamponu 4 (nükleaz içermeyen su) ve Elüsyon Tamponu (tris hidroksimetil aminometan) içerir
HONGSHIVeri Analizi
SLAN-96S Gerçek Zamanlı PCR makinesiHONGSHIFloresan kantitatif PCR amplifikasyonu
Ultra düşük sıcaklıklı dondurucular (DW-YL450)MELINGSEDA20172220091-20 derece; Reaktifleri saklamak için C
Vortex-5Kylin-bellReaktifi karıştırmak için
20143222263 DNA için köstebek

Kaynaklar

  1. Yuan, C., et al. The global prevalence of and factors associated with Helicobacter pylori infection in children: a systematic review and meta-analysis. Lancet Child Adolesc Health. 6 (3), 185-194 (2022).
  2. Watari, J., et al. Helicobacter pylori associated chronic gastritis, clinical syndromes, precancerous lesions, and pathogenesis of gastric cancer development. World J Gastroenterol. 20 (18), 5461-5473 (2014).
  3. Yu, Y., et al. Global primary antibiotic resistance rate of Helicobacter pylori in recent 10 years: A systematic review and meta-analysis. Helicobacter. 29 (3), e13103(2024).
  4. Wang, L., et al. cross-sectional surveillance of Helicobacter pylori prevalence and antibiotic resistance to clarithromycin and levofloxacin in urban China using the string test coupled with quantitative PCR. Lancet Microbe. 5 (6), e512-e513 (2024).
  5. Ho, J. J. C., Navarro, M., Sawyer, K., Elfanagely, Y., Moss, S. F. Helicobacter pylori antibiotic resistance in the United States between 2011 and 2021: A systematic review and meta-analysis. American J Gastroenterol. 117 (8), 1221-1230 (2022).
  6. Megraud, F., et al. Helicobacter pylori resistance to antibiotics in Europe in 2018 and its relationship to antibiotic consumption in the community. Gut. 70 (10), 1815-1822 (2021).
  7. Guevara, B., Cogdill, A. G. Helicobacter pylori: A review of current diagnostic and management strategies. Dig Dis Sci. 65 (7), 1917-1931 (2020).
  8. Rotimi, O., Cairns, A., Gray, S., Moayyedi, P., Dixon, M. F. Histological identification of Helicobacter pylori: Comparison of staining methods. J Clin Pathol. 53 (10), 756-759 (2000).
  9. Lim, L. L., Ho, K. Y., Ho, B., Salto-Tellez, M. Effect of biopsies on sensitivity and specificity of ultra-rapid urease test for detection of Helicobacter pylori infection: A prospective evaluation. World J Gastroenterol. 10 (13), 1907-1910 (2004).
  10. Hortelano, I., Moreno, Y., Vesga, F. J., Ferrús, M. A. Evaluation of different culture media for detection and quantification of H. pylori in environmental and clinical samples. Int Microbiol. 23 (4), 481-487 (2020).
  11. Wang, Y. K., et al. Diagnosis of Helicobacter pylori infection: Current options and developments. World J Gastroenterol. 21 (40), 11221-11235 (2015).
  12. Gisbert, J. P., Pajares, J. M. Review article: 13C-Urea breath test in the diagnosis of Helicobacter pylori infection -- a critical review. Aliment Pharmacol Ther. 20 (10), 1001-1017 (2004).
  13. Laheij, R. J., Straatman, H., Jansen, J. B., Verbeek, A. L. Evaluation of commercially available Helicobacter pylori serology kits: A review. J Clin Microbiol. 36 (10), 2803-2809 (1998).
  14. Gisbert, J. P., Pajares, J. M. Stool antigen test for the diagnosis of Helicobacter pylori infection: A systematic review. Helicobacter. 9 (4), 347-368 (2004).
  15. Benigno, T. G. D. S., et al. pylori primary strains and virulence genotypes in the Northeastern region of Brazil. Rev Inst Med Trop Sao Paulo. 64, e47(2022).
  16. Savoldi, A., Carrara, E., Graham, D. Y., Conti, M., Tacconelli, E. Prevalence of antibiotic resistance in Helicobacter pylori: A systematic review and meta-analysis in World Health Organization regions. Gastroenterology. 155 (5), 1372-1382.e17 (2018).
  17. Kalach, N., et al. Usefulness of gastric biopsy-based real-time polymerase chain reaction for the diagnosis of Helicobacter pylori infection in children. J Pediatr Gastroenterol Nutr. 61 (3), 307-312 (2015).
  18. Han, X., et al. Quantitative PCR of string-test collected gastric material: A feasible approach to detect Helicobacter pylori and its resistance against clarithromycin and levofloxacin for susceptibility-guided therapy. Helicobacter. 28 (4), e12985(2023).
  19. Zhong, Z., et al. A retrospective study of the antibiotic-resistant phenotypes and genotypes of Helicobacter pylori strains in China. Am J Cancer Res. 11 (10), 5027-5037 (2021).
  20. Hussein, R. A., Al-Ouqaili, M. T. S., Majeed, Y. H. Detection of Helicobacter pylori infection by invasive and non-invasive techniques in patients with gastrointestinal diseases from Iraq: A validation study. PloS One. 16 (8), e0256393(2021).
  21. Bang, C. S., Lee, J. J., Baik, G. H. Artificial intelligence for the prediction of Helicobacter pylori infection in endoscopic images: Systematic review and meta-analysis of diagnostic test accuracy. J Med Internet Res. 22 (9), e21983(2020).
  22. Liu, J., et al. Rapid and multi-target genotyping of Helicobacter pylori with digital microfluidics. Biosens Bioelectron. 256, 116282(2024).
  23. Liu, H., Wang, J., Hu, X., Tang, X., Zhang, C. A rapid and high-throughput Helicobacter pylori RPA-CRISPR/Cas12a-based nucleic acid detection system. Clin Chim Acta. 540, 117201(2023).
  24. Fan, C. J., et al. Diagnostic accuracy of a real-time PCR assay for detection of Helicobacter pylori and resistance to clarithromycin and levofloxacin directly from stool. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 28 (12), 3836-3840 (2024).
  25. Patel, S. K., Pratap, C. B., Jain, A. K., Gulati, A. K., Nath, G. Diagnosis of Helicobacter pylori: what should be the gold standard. World J Gastroenterol. 20 (36), 12847-12859 (2014).
  26. Celiberto, F., et al. The state of the art of molecular fecal investigations for Helicobacter pylori (H. pylori) antibiotic resistances. Int J Mol Sci. 24 (5), 4361(2023).
  27. Yang, H., Hu, B. Diagnosis of Helicobacter pylori infection and recent advances. Diagnostics. 11 (8), 1305(2021).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Gaita qPCRKantitatif PCRTaqMan ProbFekal Örnek Testi23S rRNA MutasyonugyrA MutasyonuKlaritromisin DirenciKinolon Direnci
Helicobacter pylori Enfeksiyonu ve Antibiyotik Direncinin Dışkı ile Saptanması Kantitatif Polimeraz Zincir Reaksiyonu Analizi
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.