Burada, müteakip makine perfüzyonu veya transplantasyonu için klinik öncesi bir domuz modelinde böbrek alımı için cerrahi bir modeli detaylandıran bir protokol sunuyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
* These authors contributed equally
Burada, müteakip makine perfüzyonu veya transplantasyonu için klinik öncesi bir domuz modelinde böbrek alımı için cerrahi bir modeli detaylandıran bir protokol sunuyoruz.
Makine perfüzyonu, ex vivo organ değerlendirmesi, izleme, tedavi, optimizasyon ve koruma sürelerini uzatmak için uygun bir strateji olarak gelişmiştir. Büyük hayvan modelleri, bu teknolojilerin geliştirilmesi ve optimizasyonu için çok önemli olmuştur. Bununla birlikte, greft kalitesini ve veri tekrarlanabilirliğini sağlamak için, organ ve doku alımı için standardize edilmiş ve klinik olarak çevrilebilir cerrahi teknikler izlenmelidir. Bu nedenle, burada, klinik öncesi bir domuz modelinde böbrek tedariki için optimize edilmiş bir protokolü açıklıyoruz. Böbrek geri kazanımı, karışık cins (Yorkshire çapraz/karışım) domuzlar kullanılarak gerçekleştirilir. Kısaca, cerrahi alanın steril dezenfeksiyonu ve örtülmesini takiben, her iki böbreğe optimum erişim sağlamak için tam bir orta hat insizyonu yapılır. Üreter, renal ven ve arter, sırasıyla inferior vena kava ve aorttan köken alana kadar diseke edilir. Tam böbrek diseksiyonundan sonra üreter bağlanır ve distal olarak kesilir. Donör hayvan daha sonra kg / vücut ağırlığı başına 100 IU ile tamamen heparinize edilir. Daha sonra, renal arter aorta yakın klemplenir ve renal ven, bir Satinsky vasküler klempi kullanılarak vena kavaya yakın klemplenir. Böbrek grefti daha sonra rezeke edilir ve renal arter hemen arka masaya kanüle edilir. Böbrek daha sonra buz gibi bir koruma solüsyonu ile yıkanacak ve makine perfüzyonu veya transplantasyon olana kadar buz üzerinde saklanacaktır. Son olarak renal arter güdüğü 2-0 ipek ligatür ile bağlanır ve vena kava 6-0 polipropilen sütür ile kapatılır. Bu teknik böbrekleri kurtarır ve canlı (tek böbrek) veya ölmüş (çift böbrek) donör ayarını simüle eder. Tek böbrek iyileşmesi, sonraki bir ototransplantasyon gerçekleştirmek için avantaj sunar. Ölen donör modelinde, ötenaziden önce kan torbası iğneleri doğrudan aort içine sokularak kan toplanabilir, böylece hayvanın kan cezası alınması ve ex vivo makine perfüzyonu için kan sağlanması sağlanabilir.
Böbrek nakli, diyalize kıyasla daha iyi yaşam kalitesi ve uzun vadeli sonuçlar sağlayan son dönem böbrek yetmezliği (SDBY) için en uygun tedavi yöntemidir1. Organ korumadaki ilerlemelere rağmen, böbrek nakli için bekleme listesindeyken her gün düzinelerce insan SDBY'den ölmektedir2. Makine perfüzyonu, koruma sürelerini artıran, genişletilmiş donör ağları ve daha verimli organ tahsisi sağlayan büyüyen bir alandır. Bu teknoloji aynı zamanda ex vivo organ izleme ve optimizasyonuna izin verir, böylece iskemi-reperfüzyon hasarının (IRI) etkilerini en aza indirir. Statik soğuk hava deposu (SCS) ile karşılaştırıldığında, makine perfüzyonunun gecikmiş greft fonksiyonu insidansını önemli ölçüde azalttığı gösterilmiştir 3,4. Makine perfüzyonu ayrıca, aksi takdirde nakil5 kriterlerini karşılamayacak olan marjinal greftlerin yeniden canlandırıldığını göstermiştir. Teknolojik gelişmelere rağmen, en yaygın koruma tekniği buz üzerinde SCS olmaya devam ediyor. Daha fazla klinik öncesi deneyler ve veriler, makine perfüzyonunu böbrek korumanın temel dayanağı haline getirmeye yardımcı olabilir.
Böbrek nakli için domuz modeli iyi kurulmuştur ve böbrek koruma teknolojisinin, özellikle de makine perfüzyonunun geliştirilmesinin ayrılmaz bir parçası olmuştur. Tek lobüler kemirgen böbreklerinin aksine, domuz ve insan böbreklerinin her ikisi de çok lobürdür, boyut olarak benzerdir ve benzer arteriyel, venöz ve idrar anatomisini paylaşır 6,7. Bu nedenle, domuz böbreği, özellikle tıbbi cihazlar ve ilaç tedavileri açısından klinik ortama doğrudan bir çeviri kolaylaştırır. Ek olarak, domuz böbrekleri, insan böbrekleriyle benzer bir IRI patofizyolojisi gösterir8, bu da onları böbrek koruma çalışmaları için ideal kılar.
Greft kalitesini ve veri tekrarlanabilirliğini sağlamak için, organ ve doku alımı için standardize edilmiş ve klinik olarak çevrilebilir cerrahi teknikler izlenmelidir. Bu nedenle, burada, klinik öncesi bir domuz modelinde böbrek tedariki için optimize edilmiş bir protokolü açıklıyoruz. Bu protokol böbreklerin geri kazanılmasına izin verir ve canlı (tek böbrek) veya ölen (çift böbrek) donör ayarını simüle eder. Tek böbrek iyileşmesi, müteakip bir ototransplantasyon gerçekleştirme avantajı sunar. Çift böbrek kurtarma modelinde, ötenazi öncesi kan alımı, kan torbası iğnelerinin doğrudan aort içine sokulması, böylece hayvanın kan durumunun açığa çıkarılması ve ex vivo makine perfüzyonu için kan sağlanması ile mümkündür.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklanan tüm prosedürler, Amerika Birleşik Devletleri Tarım Bakanlığı (USDA) lisanslı, Laboratuvar Hayvanları Refahı Ofisi (OLAW) güvencesinde ve Laboratuvar Hayvanları Bakımı Değerlendirme ve Akreditasyon Derneği (AAALAC) tarafından akredite edilmiş bir kurum olan Johns Hopkins Üniversitesi Kurumsal Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır. Hayvanlar, Amerika Birleşik Devletleri Tarım Bakanlığı'nın Hayvan Refahı Yasası, Ulusal Sağlık Enstitüleri'nin Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Rehberi ve Amerika Birleşik Devletleri Halk Sağlığı Servisi'nin Laboratuvar Hayvanlarının İnsani Bakımı ve Kullanımı Politikası'na uygun olarak muhafaza edildi.
1. Hayvanlar ve barınma
2. Ameliyat öncesi prosedür ve anestezi
3. Böbrek toplama prosedürü
4. Kan alımı prosedürü
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Araştırma grubumuz, hem katı organ nakli hem de vaskülarize kompozit allotransplantasyonun domuz modelleri ile yaklaşık 15 yıla yayılan geniş bir deneyime sahiptir 9,10,11,12,13,14,15,16,17
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Böbrek nakli için domuz modeli, makine perfüzyon teknolojisinin geliştirilmesi ve optimizasyonu için hayati önem taşımaktadır. İnsan böbreklerine 6,7,8 anatomik, immünolojik ve patofizyolojik benzerlikler göz önüne alındığında, domuz böbrekleri klinik test ve uygulamaya kolaylaştırılmış bir çeviri sunar.
Domuz böbreği tedarik modeli, çeşit...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarların açıklanacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Yazarlar, Johns Hopkins Üniversitesi Tıp Fakültesi'ndeki birçok veteriner teknisyenine teknik yardımları için teşekkür eder. Ayrıca Dr. Jessica Izzi ve Amanda Maxwell'e ve Dr. Mallory Brown, Jessica Plunkard ve Alexis Roach da dahil olmak üzere çok sayıda veteriner asistanına hayvanlarımıza mükemmel klinik bakım ve veteriner gözetimi sağladıkları için minnettarlığımızı ifade etmek isteriz. Son olarak, Johns Hopkins Tıp Fakültesi'ndeki Vaskülarize Kompozit Allotransplantasyon (VCA) Laboratuvarı'nın tüm üyelerine, laboratuvarımızda gerçekleştirilen böbrek temini veya diğer organ temini prosedürlerinde herhangi bir kapasitede yardımcı olan teşekkür ederiz. Bu çalışma, Ulusal Diyabet ve Sindirim ve Böbrek Hastalıkları Enstitüsü (NIDDK) hibe R44DK136396 tarafından desteklenmiştir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| %70 etanol çözeltisi | Fisher Scientific | 04-355-122 | |
| Adson Tissue ForceA2:D30ps, 4.75", 1 x 2 Diş | Wexler Cerrahi | FL0081.1 | |
| Bair Hugger Hayvan Sağlığı Üstten Battaniyesi | 3M | 53777 | |
| Bair Hugger Isıtma Birimi | 3M | 77500 | |
| Balfour Karın Retraktoru, Sabit Yan Kanatlı, 4" Derinlik, 10" Maksimum Yayılım | MPM Tıbbi Tedarik | 124-7017 | |
| Betadine Çözeltisi (%5 Providon-iyot) | MWI Hayvan Sağlığı | NDC-67618-155-01 | |
| Sefazolin için enjeksiyon, USP | MWI Hayvan Sağlığı | NDC-63323-237-10 | |
| Klorheksidin Çözeltisi | MWI Hayvan Sağlığı | NDC-30798-624-31 | |
| Temizlik HTK Organ Koruma Çözümü | Temel İlaçlar | 25767073545 | |
| DeBakey Tissue Penset, 7.75", 2 mm uçlar | Wexler Cerrahi | FL0789.1 | |
| EUTHASOL (pentobarbital sodyum ve fenitoin sodyum) | Virbac | NDC-051311-050-01 | |
| Heparin Sodyum Enjeksiyonu, USP | MWI Hayvan Sağlığı | NDC-71288-402-10 | |
| Sosisli Sıcaklık Kontrol Cihazı | Augustine Surgical Inc. | WC71V | |
| Hot Dog Veteriner Alt Beden Isıtıcı Yatak | Augustine Surgical Inc. | V106 | |
| Invisishield İzolasyon Çantası, 20" x 20" | Medline | DYNJSD1003 | |
| Jacobson Mikro İğne Tutucu, Düz Çene, Yuvarlak Sap, 7.25" | Wexler Cerrahi | NL0729.11 | |
| Ketamin Hidroklorür Enjeksiyon Çözeltisi | NexGen Pharmaceuticals | NC-0256 | |
| Lap Süngerleri 18" x 18" | Medline | MDS231318LF | |
| Metzenbaum diseksiyon makasi, 7" kavisli | Wexler Cerrahi | SL5011.1S | |
| İletken Olmayan Emiş Boru ve Dallop Konnektörler, 1/4" x 10' | Medline | DYND50251 | |
| Enjeksiyon İçin Pantoprazol Sodyum | MWI Hayvan Sağlığı | NDC-55150-202-00 | |
| Perfüzyon Kanülü, Serbest Akış, 3 mm Küt Uç | MED İttifakı Çözümleri | PER-3003S | |
| Rijit Ampul Ucu Yankauer | Medline | DYND50130 | |
| Satinsky kelepçe, 30 mm açılı DeBakey travmasız çeneler, kavisli şaftlar, 10" | Wexler Cerrahi | AL2150.1 | |
| Bistüri Sapı #3 | Dünya Hassas Aletleri | 500236 | |
| Servator B UW (Wisconsin Üniversitesi) | Küresel Nakil Çözümleri | JFISERB10A r2 | |
| Tek Toplama Ünitesi Ön Doldurulmuş CPDA-1, 450 mL | Jorgensen Laboratuvarları | JO520 | |
| Sofsilk Dikiş Kravat, 2-0, Siyah, 18" | Covidien | S-195 | |
| Cerrahi Smashtel Bıçağı No. 10 | Dünya Hassas Aletleri | 500239 | |
| Surgipro II Dikiş, 6-0, Mavi, 30", çift kollu, CV-22 İğne | Covidien | VP-733-X | |
| Üçte Dörtte Cerrahi Örtü | Medline | DYNJP2414 | |
| Valleylab Paslanmaz çelik elektrotlu elektrocerrahi kalem | Covidien | CVNE2516H | |
| Valleylab Force FXc Elektrocerrahi Jeneratör | Covidien | MFI-MDT-FORCE-FXC | |
| Valleylab Polihezive Yetişkin Hasta Dönüş Elektrotu | Covidien | E7507-SD | |
| Ksilazin Hidroklorür Enjeksiyon Çözeltisi | NexGen Pharmaceuticals | NC-0334 |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.