Bu çalışma, XY kaynatma işleminin MAPK yolağını düzenleyerek akciğer adenokarsinomuna karşı terapötik etkiler gösterdiğini göstermektedir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Farelerde Akciğer Adenokarsinomu Ksenogreft Modelinin Oluşturulması ve MAPK Yolağı ile XY Kaynatma Etkinliğinin Değerlendirilmesi
Bu makalede
Özet
Özet
Akciğer adenokarsinomu dünya çapında artmakta ve etkili tedavi yöntemlerinin araştırılmasına ve geliştirilmesine yol açmaktadır. Son yıllarda, geleneksel Çin tıbbının XiaoYi (XY) kaynatma gibi akciğer adenokarsinomu için terapötik potansiyeli giderek daha fazla kabul görmektedir. Geleneksel Çin tıbbının akciğer adenokarsinomunun tedavisinde etki mekanizması aydınlatılmaya devam etmektedir. Bu çalışmada, akciğer adenokarsinomu tedavisinde XY kaynatma işleminin terapötik etkilerini araştırmak için hayvan modelleri kullanılmıştır. Farelerde XY kaynatma işleminin kan giriş kimyasal bileşenleri, UHPLC-QE-MS kullanılarak hem pozitif hem de negatif iyon modlarında ayrıldı ve analiz edildi. Bulgular daha sonra tümör boyutunun azaldığını, patolojik değişikliklerin arttığını ve apoptozun arttığını gösteren in vivo deneylerle doğrulandı. Sonuç olarak, XY kaynatma uygulamasını takiben kana emilen on beş bileşen tanımlandı: Stachyose, Quercetin-3-O-beta-glukopiranosil-7-O-alfa-ramnopiranozid; İmparatorluk; Spinosin B; Peimine; Flavon tabanı + 3O, 2MeO, O-Hex; Pikropodofilotoksin; (2S,3R,4S,5S,6R)-2-[(2R,3R,4S,5S,6R)-4,5-dihidroksi-2 [[(3S,5R,8R,10R,12R,13R,14R,17S)-12-hidroksi-17-(2-hidroksi-6-metilhept-5-en-2-il) 4,4,8,10,14-pentametil-2,3,5,6,7,9,11,12,13,15,16,17-dodekahidro-1H siklopenta[a]fenantren-3-il]oksi]-6-(hidroksimetil)oksan-3-il]oksi-6-(hidroksimetil)oksan-3,4,5-triol; Trisin; Ginsenosit Rg1; (20R)-Ginsenosit Rh1; Jujuboside B; Aucubin; Ginsenosid Rg3; ve beta-Elemonik asit. Hayvan deneyleri, XY kaynatma işleminin tümör büyümesini inhibe ettiğini, patolojik değişiklikleri iyileştirdiğini ve doza bağlı bir şekilde tümör hücresi apoptozunu teşvik ettiğini gösterdi. İlgili mekanizmalar, MAPK yolağındaki p-JNK ve p-P38 protein ekspresyonunun yukarı regülasyonu ve MAPK yolağındaki p-ERK protein ekspresyonunun aşağı regülasyonu ile ilişkili olabilir. Sonuç olarak, XY kaynatma, MAPK yolunu düzenleme ve akciğer adenokarsinomuna karşı terapötik etkiler gösterme potansiyeline sahiptir.
Giriş
Akciğer kanseri insidansı dünya çapında artmaktadır. Tüm malignitelerin %18'ini oluşturur ve kansere bağlı ölümlerin önemli bir kısmından sorumludur 1,2. Küçük hücreli dışı akciğer kanseri (KHDAK), ana patolojik tip3 adenokarsinom olan yaygın bir akciğer kanseri türüdür. Sinsi semptomları nedeniyle, NSCLC sıklıkla ileri bir aşamada teşhis edilir ve yüksek mortalite oranına sahiptir 4,5. Evre IV KHDAK hastalarının beş yıllık sağkalım oranı sadece %5'tir6, cerrahi olarak re....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm hayvan prosedürleri, Changchun Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Hayvan Etik Komitesi (Etik No. 2024008) tarafından onaylanmıştır. Spesifik patojen içermeyen (SPF) koşullar altında yetiştirilen altı haftalık C57BL / 6 erkek fareler (20 ± 2 g), sabit sıcaklık ve nem ile kontrollü bir ortamda tipik fiziksel aktivite modelleri sergiledi. Yiyecek ve suya ad libitum erişimleri vardı ve 12 saatlik bir aydınlık / karanlık döngüsü altında tutuldular. Bu çalışmada kullanılan reaktiflerin ve ekipmanın ayrıntıları Malzeme Tablosunda verilmiştir.
1. XY kaynatma sulu ekstraktının hazırlanması....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Kontrol grubundan ve XY grubundan XY toz çözeltisi ve serum örnekleri UHPLC-QE-MS kullanılarak analiz edildi ve iyi ayrılmış pikler ortaya çıktı. Pozitif ve negatif iyon modları için toplam iyonizasyon diyagramları Şekil 3'te gösterilmiştir. XY kaynatma işleminin bileşimi, tutma süresi, edinme modu ve kütle spektrumu fragmanlarına dayalı olarak tanımlandı. Boş ve XY kaynatma oral uygulama gruplarının serumu XY toz çözeltisinin bileşenleri ile karşılaştırılara.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Kanser insidansı her yıl artmakta ve önemli klinik ve araştırma ilgisi çekmektedir22,23. Son çalışmalar, geleneksel Çin tıbbının (TCM) akciğer kanseri tedavisinde etkinliğini göstermiştir 24,25,26. Örneğin, Maimendong kaynatma işleminin NK hücrelerinin sayısını ve aktivitesini arttırdığı ve böylece akciğer kanseri metastazını inhibe etti.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.
Teşekkürler
Bu çalışma, Jilin Eyaleti Bilim ve Teknoloji Geliştirme Planı Maddesi (YDZJ202301ZYTS459) tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Asetonitril | CNW Teknolojileri | 5/8/1975 | |
| 2-Kloro-L fenilalanin | Şangay Hengbo Biyoteknoloji Co., Ltd. | 103616-89-3 | |
| Amonyum Hidroksit Çözeltisi | Çin Ulusal İlaç Grubu Kimyasal Reaktif Co., Ltd. | #2028 | |
| Antikor-β-aktin | Abcam | ab8228 | |
| Anti-Erk1 (pT202/pY204) + Erk2 (pT185/pY187) Antikor | Abcam | ab4819 | |
| Anti-ERK1/ERK2 Antikor | Abcam | ab184699 | |
| Anti-JNK1 (pY185) + JNK2 (pY185) + JNK3 (pY223) Antikor | Abcam | ab76572 | |
| Anti-JNK1/JNK2/JNK3 Antikor | Abcam | ab208035 | |
| Anti-Ki67 Antikor | Hücre Sinyal Teknolojisi | GB121141 | |
| Anti-p38 (fosfo T180) Antikor | Abcam | ab178867 | |
| Anti-p38 alfa / MAPK14 Antikor | Abcam | ab170099 | |
| BCA protein konsantrasyonu test kiti | Boster Biyolojik Teknoloji | 17E17B46 | |
| Sığır Serum Albümini (BSA) | DAKO | BIOFROXX | |
| Geniş spektrumlu fosfataz inhibitörü (100x) | Boster Biyolojik Teknoloji | AR1183 | |
| C57bl/6 fare | Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd. | SCXK2021-0006 | |
| Kromatografik kolon | Sular | ACQUITY UPLC BEH C18 1.7 & mu; m2.1 * 100 mm | |
| Cisplatin | Çin Ulusal İlaç Grubu Kimyasal Reaktif Co., Ltd. | 232120 | |
| Sitrat (pH 6.0) Antijen Alma Çözeltisi | Wuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd. | B2010 | |
| Kapak Kayma | Jiangsu Shitai Laboratuvar Equipment Co., Ltd. | 10212432C | |
| Kriyojenik Aşama | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd. | JB-L5 | |
| DAB Kromojenik Kiti | Jiangsu Shitai Laboratuvar Equipment Co., Ltd. | ||
| Renk Giderme Çalkalayıcı | Pekin Liu Yi Enstrüman Fabrikası | WD-9405A | |
| Kurutucu | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd. | JJ-12J | |
| Kurutma Fırını Shanghai | Huitai Instrument Manufacturing Co., Ltd. | DHG-9140A | |
| Dulbecco'nun modifiye kartal ortamı | Gibco | 8121587 | |
| EDTA (pH 8.0) Antijen Alma Çözeltisi | Wuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd. | B2001 | |
| EDTA (pH 9.0) Antijen Alma Çözeltisi | Wuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd. | B2002 | |
| Elektroforez tamponu | NCM Biotech | 20230801 | |
| Gömme makinesi | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd. | JB-P5 | |
| Eosin | Çin Ulusal İlaç Grubu Kimyasal Reaktif Co., Ltd. | ||
| Etanol | Çin Ulusal İlaç Grubu Kimyasal Reaktif Co., Ltd. | ||
| Fetal sığır serumu | Gibco | 2166090RP | |
| Formik asit | SIGMA | 64-18-6 | |
| GraphPad Prizma yazılımı | GraphPad yazılımı, LLC | Sürüm 9.0.0 | |
| Hematoksilen | Çin Ulusal İlaç Grubu Kimyasal Reaktif Co., Ltd. | H3136 | |
| Yüksek performanslı sıvı kromatografisi | Agilent | 1260 Infinity II Prime | |
| Yüksek hızlı soğutmalı santrifüj | Thermo Fisher Scientific | Legend Micro 17R | |
| Yüksek Çözünürlüklü Kütle Spektrometresi | Thermo Fisher Scientific | Q Exactive Focus | |
| HRP konjuge Keçi Anti-Fare SeraCare | 5220-0341 | ||
| HRP konjuge Keçi Anti-Tavşan | SeraCare | 5220-0336 | |
| HRP konjuge Keçi Anti-Tavşan / Fare Evrensel İkincil Antikor | DAKO | K5007 | |
| HRP-konjuge Keçi Anti-Sıçan | SeraCare | 5220-0364 | |
| HRP-konjuge Tavşan Anti-Keçi | SeraCare | 5220-0362 | |
| Hidroklorik asit | Çin Ulusal İlaç Grubu Kimyasal Reaktif Co., Ltd. | H9892 | |
| Hidrojen Peroksit | Çin Ulusal İlaç Grubu Kimyasal Reaktif Co., Ltd. | B12555 | |
| Aşırı duyarlı ECL kemilüminesans kiti | NCM Biotech | P10300 | |
| ImageJ yazılımı | Ulusal Sağlık Enstitüleri | v1.8.0 | |
| Görüntüleme Sistemi | Nikon (Japonya) | NIKON DS-U3 | |
| Lewis akciğer karsinomu hücreleri | Çin Ulusal İlaç Grubu Kimyasal Reaktif Co., Ltd. | ||
| Örgü kumaş | Baijie 100110779650 | ||
| Metal ısıtma sıcaklık kontrol cihazı | Baiwan Electronictechnology Co., Ltd. | HG221-X3 | |
| Metanol | Aladdin | M116118 | |
| Mikropipet | Dlab Scientific Co., Ltd. | KE0003087/KA0056573 | |
| Mikroskop Slaytı | Jiangsu Shitai Laboratuvar Equipment Co., Ltd. | 10212432C | |
| Mikrotom | Şangay Leica Instruments Co., Ltd. | RM2016 | |
| Mikrodalga Fırın | Galanz Mikrodalga Elektrikli Ev Aletleri Co., Ltd. | P70D20TL-P4 | |
| Nötr Balsam | Çin Ulusal İlaç Grubu Kimyasal Reaktif Co., Ltd. | ||
| Optik mikroskop | Nikon (Japonya) | Nikon Eclipse CI | |
| Fırın | Shanghai Huitai Instrument Manufacturing Co., Ltd. | DHG-9140A | |
| PAGE jel hızlı hazırlama kiti | Biosharp | PL566B-5 | |
| Paraformaldehit | Çin Ulusal İlaç Grubu Kimyasal Reaktif Co., Ltd. | 8.18715 | |
| Fosfat tamponlu tuzlu su (1x) | Gibco | 8120485 | |
| Önceden boyanmış renkli protein işaretleyici (10-180 kDa) | Cywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd. | SW176-02 | |
| Protein yükleme tamponu (5X) | Boster Biyolojik Teknoloji | AR1112 | |
| pulverizatör | Shangzhiqiao Co., Ltd. | DFT-100A | |
| PVDF (0.45 μ m) | Cywin İnovasyon (Pekin) Biyoteknoloji Co., Ltd. | SW120-01 | |
| Hızlı membran transfer çözümü | Cywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd. | SW171-02 | |
| RIPA lizat | Boster Biyolojik Technology Co., Ltd. | AR0105 | |
| TBS tamponu | NCM Biotech | 23HA0102 | |
| Doku Flotasyon İş İstasyonu | Jinhua Kedi Instrument Equipment Co., Ltd., Zhejiang Eyaleti. | KD-P | |
| Transmembran tampon | NCM Biotech | 23CA2000 | |
| Tripsin (% 0.25, 1x) | HyClone | J210045 | |
| Ultrasonik hücre bozulma aparatı | Ningbo Xinyi ultrasonik ekipman Co., Ltd. | JY92-IIDN | |
| Dik Optik Mikroskop | Nikon (Japonya) | Nikon Eclipse CI | |
| vakumlu liyofilizatör | Lanjing Co., Ltd. | HD-LG20D | |
| Vorteks karıştırıcı | Kylin-Bell | XW-80A | |
| Ksilen | Çin Ulusal İlaç Grubu Kimyasal Reaktif Co., Ltd. |
Kaynaklar
- Ferlay, J., et al. Cancer statistics for the year 2020: An overview. Int J Cancer. 149 (4), 778-789 (2021).
- Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancer....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
