Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Farelerde Akciğer Adenokarsinomu Ksenogreft Modelinin Oluşturulması ve MAPK Yolağı ile XY Kaynatma Etkinliğinin Değerlendirilmesi

588 görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/68023

⸱

25 Nisan 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine, 2Respiratory Department, First Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 3Key Laboratory of Active Substances and Biological Mechanisms of Ginseng Efficacy, Changchun University of Chinese Medicine, 4Jilin Provincial Key Laboratory of Bio-Macromolecules of Chinese Medicine, Ministry of Education, Changchun University of Chinese Medicine, 5Northeast Asia Research Institute of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine

Bu makalede

Özet

Bu çalışma, XY kaynatma işleminin MAPK yolağını düzenleyerek akciğer adenokarsinomuna karşı terapötik etkiler gösterdiğini göstermektedir.

Özet

Akciğer adenokarsinomu dünya çapında artmakta ve etkili tedavi yöntemlerinin araştırılmasına ve geliştirilmesine yol açmaktadır. Son yıllarda, geleneksel Çin tıbbının XiaoYi (XY) kaynatma gibi akciğer adenokarsinomu için terapötik potansiyeli giderek daha fazla kabul görmektedir. Geleneksel Çin tıbbının akciğer adenokarsinomunun tedavisinde etki mekanizması aydınlatılmaya devam etmektedir. Bu çalışmada, akciğer adenokarsinomu tedavisinde XY kaynatma işleminin terapötik etkilerini araştırmak için hayvan modelleri kullanılmıştır. Farelerde XY kaynatma işleminin kan giriş kimyasal bileşenleri, UHPLC-QE-MS kullanılarak hem pozitif hem de negatif iyon modlarında ayrıldı ve analiz edildi. Bulgular daha sonra tümör boyutunun azaldığını, patolojik değişikliklerin arttığını ve apoptozun arttığını gösteren in vivo deneylerle doğrulandı. Sonuç olarak, XY kaynatma uygulamasını takiben kana emilen on beş bileşen tanımlandı: Stachyose, Quercetin-3-O-beta-glukopiranosil-7-O-alfa-ramnopiranozid; İmparatorluk; Spinosin B; Peimine; Flavon tabanı + 3O, 2MeO, O-Hex; Pikropodofilotoksin; (2S,3R,4S,5S,6R)-2-[(2R,3R,4S,5S,6R)-4,5-dihidroksi-2 [[(3S,5R,8R,10R,12R,13R,14R,17S)-12-hidroksi-17-(2-hidroksi-6-metilhept-5-en-2-il) 4,4,8,10,14-pentametil-2,3,5,6,7,9,11,12,13,15,16,17-dodekahidro-1H siklopenta[a]fenantren-3-il]oksi]-6-(hidroksimetil)oksan-3-il]oksi-6-(hidroksimetil)oksan-3,4,5-triol; Trisin; Ginsenosit Rg1; (20R)-Ginsenosit Rh1; Jujuboside B; Aucubin; Ginsenosid Rg3; ve beta-Elemonik asit. Hayvan deneyleri, XY kaynatma işleminin tümör büyümesini inhibe ettiğini, patolojik değişiklikleri iyileştirdiğini ve doza bağlı bir şekilde tümör hücresi apoptozunu teşvik ettiğini gösterdi. İlgili mekanizmalar, MAPK yolağındaki p-JNK ve p-P38 protein ekspresyonunun yukarı regülasyonu ve MAPK yolağındaki p-ERK protein ekspresyonunun aşağı regülasyonu ile ilişkili olabilir. Sonuç olarak, XY kaynatma, MAPK yolunu düzenleme ve akciğer adenokarsinomuna karşı terapötik etkiler gösterme potansiyeline sahiptir.

Giriş

Akciğer kanseri insidansı dünya çapında artmaktadır. Tüm malignitelerin %18'ini oluşturur ve kansere bağlı ölümlerin önemli bir kısmından sorumludur 1,2. Küçük hücreli dışı akciğer kanseri (KHDAK), ana patolojik tip3 adenokarsinom olan yaygın bir akciğer kanseri türüdür. Sinsi semptomları nedeniyle, NSCLC sıklıkla ileri bir aşamada teşhis edilir ve yüksek mortalite oranına sahiptir 4,5. Evre IV KHDAK hastalarının beş yıllık sağkalım oranı sadece %5'tir6, cerrahi olarak rezeke edilebilir erken evre KHDAK bile beş yıllık sağkalım oranı sadece %50'dir7.

Günümüzde akciğer adenokarsinomunun tedavisi cerrahi, radyoterapi, kemoterapi, immünoterapi ve hedefe yönelik tedaviyi içermektedir. Ek olarak, akciğer adenokarsinomu için geleneksel Çin tıbbı (TCM) giderek daha fazla tanınmakta ve değer görmektedir8. TCM'nin uzun bir geçmişi vardır ve etkili terapötik sonuçları olan çeşitli onkolojik hastalıkların tedavisinde kullanılmaktadır 9,10. İnsan vücudunu bir bütün olarak kabul eder, terapötik prensip Qi'nin hareketini geri kazanmaya odaklanır (Qi, kan ve vücut sıvılarının dolaşımını teşvik eden, NSCLC hastalarında bağışıklığın artmasına ve inflamasyonun azalmasına katkıda bulunan hayati enerjiyi ifade eder) genel dengeyi yeniden sağlamak ve kanserin ilerlemesini engellemek için iç organlarda.

TCM sadece düşük toksisiteli, çoklu hedefli ve yüksek verimli11 onkolojik hastalıkları tedavi etmekle kalmaz, aynı zamanda radyoterapi ve kemoterapinin neden olduğu hasarın onarımını kolaylaştırır ve böylece sağkalımı uzatır12.

Sıvı kromatografisi-kütle spektrometresi (LC-MS) teknolojisi, karmaşık bileşik karışımlarındaki bileşenlerin ayrılmasını ve algılanmasını sağlamak için sıvı kromatografisini kütle spektrometresi ile entegre eder13. LC-MS, geleneksel Çin tıbbı (TCM) kaynatmalarında çeşitli kimyasal bileşenlerin ayrılmasına ve tanımlanmasına olanak tanıyan yüksek çözünürlük, yüksek hassasiyet ve yüksek özgüllük sunar. Oral uygulamadan14,15 sonra kan giriş aktif bileşenlerini ayıran ve tespit eden serum tıbbi kimyası ile birleştirildiğinde, LC-MS potansiyel ilaç etki mekanizmalarının tahmin edilmesini ve analiz edilmesini sağlar. Bu yaklaşım, TCM kaynatmalarının kimyasal bileşiminin ve farmakolojik bileşenlerinin anlaşılmasına yardımcı olur, farmakolojik etkileri ve klinik uygulamaları hakkında derinlemesine araştırmalar için gerekli verileri sağlar ve TCM araştırmasında oldukça uygulanabilir hale getirir16,17.

MAPK sinyal yolu, akciğer kanserinin oluşumunda, ilerlemesinde, metastazında ve invazyonunda çok önemli bir rol oynar ve Erk, p38 ve JNK önemli alt ailelerdir. TCM kaynatmalarının, MAPK yolu18'deki proteinlerin ekspresyonunu etkilediği gösterilmiştir. XiaoYi (XY) kaynatma, YiGuan kaynatma işleminden türetilmiştir ve Changchun Çin Tıbbı Üniversitesi'nin Birinci Bağlı Hastanesi'nde akciğer adenokarsinomunu tedavi etmek için kullanılır (Şekil 1), bu da kesin klinik etkinlik gösterir. Bununla birlikte, terapötik mekanizması belirsizliğini korumaktadır.

Bu çalışmada, akciğer adenokarsinomuna karşı XY kaynatma işleminin olası terapötik mekanizmasını aydınlatmak için Q-Exactive Orbitrap kütle spektrometresi (UHPLC-QE-MS) ile birleştirilmiş ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi kullanıldı ve etkileri in vivo çalışmalarla doğrulandı.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm hayvan prosedürleri, Changchun Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Hayvan Etik Komitesi (Etik No. 2024008) tarafından onaylanmıştır. Spesifik patojen içermeyen (SPF) koşullar altında yetiştirilen altı haftalık C57BL / 6 erkek fareler (20 ± 2 g), sabit sıcaklık ve nem ile kontrollü bir ortamda tipik fiziksel aktivite modelleri sergiledi. Yiyecek ve suya ad libitum erişimleri vardı ve 12 saatlik bir aydınlık / karanlık döngüsü altında tutuldular. Bu çalışmada kullanılan reaktiflerin ve ekipmanın ayrıntıları Malzeme Tablosunda verilmiştir.

1. XY kaynatma sulu ekstraktının hazırlanması

  1. Panax ginseng C.A. Mey (Renshen, 15 g), Chinemys reevesii (Gri) (Guiban, 30 g) ve Trionyx sinensis Wiegmann'ı (Biejia, 30 g) bir kaynatma kabına koyun. 1000 mL deiyonize su ekleyin ve oda sıcaklığında 30 dakika bekletin.
  2. Adım 1.1'deki üç otu 1 saat kaynatın. Aynı zamanda, Rehmannia glutinosa Libosch (Dihuang, 30 g), Trichosanthes kirilowii Maxim'i ıslatın. (Tianhuafen, 30 g), Coix lacryma-jobi L. var. mayuen (Roma.) Stapf (Yiyiren, 20 g), Paeonia lactiflora Pall. (Baishao, 30 g), Boswellia carterii Birdw. (Ruxiang, 7 g), Commiphora myrrha Engl. (Moyao, 7 g), Agrimonia pilosa Ledeb. (Xianhecao, 20 g), Alpinia oxyphylla Miq. (Yizhiren, 20 g), Ziziphus hünnap Değirmeni. spinosa (Bunge) (Suanzaören, 30 g), Melia toosendan Sieb. et Zucc. (Chuanlianzi, 5 g), Fritillaria thunbergii Miq. (Zhebeimu, 15 g), Anemarrhena asphodeloides Bge. (Zhimu, 10 g), Platycodon grandiflorum (Jacq.) (Jiegeng, 10 g), Polygala tenuifolia Willd. (Yuanzhi, 15 g) ve Phragmites communis Trin. (Lugen, 30 g) başka bir kapta 30 dakika. Suya batırdıktan sonra, 1.1 adımındaki kaynatma kabına aktarın.
  3. Adım 1.1 ve adım 1.2'deki 18 bitkinin tümünü 30 dakika kaynatın. Bitkisel sıvıyı dökün, 1000 mL deiyonize su ekleyin ve 30 dakika daha kaynatın. Üç porsiyon bitkisel sıvı elde etmek için bu kaynatma işlemini üç kez tekrarlayın, ardından birleştirin ve iyice karıştırın.
  4. Karıştırılmış bitkisel sıvıyı 400 gözenekli bir bezden süzün. Süzüntüyü düşük basınç altında konsantre edin, ardından konsantre bitkisel sıvıyı daha sonraki işlemler için soğutma ekipmanına aktarın.
  5. Konsantre bitkisel sıvıyı bir liyofilizasyon tepsisine dökün ve bir vakumlu liyofilizatörün ön dondurma odasına yerleştirin. Ön dondurma tamamlandıktan sonra, suyu çıkarmak için tepsiyi süblimasyon kurutma odasına aktarın.
  6. Yüksek sıcaklıkta kalan nemi temizleyin. İnce liyofilize XY kaynatma tozu elde etmek için dondurularak kurutulmuş bitki ekstraktını bir pulverizatör kullanarak toz haline getirin (Şekil 2).

2. İlaç içeren serum hazırlama

  1. Altı haftalık C57BL / 6 erkek fareyi (20 ± 2 g) rastgele XiaoYi (XY) grubuna veya kontrol grubuna atayın.
    NOT: Fare dozu, insandan fareye dönüşüm faktörü kullanılarak hesaplanmıştır:
    Fareler için eşdeğer deney dozu (g / kg) = {İnsan dozu (g / kg) / Vücut ağırlığı (70 kg)} x 9.1
    Bu hesaplamaya dayanarak, fareler için dozaj 2.6 g / kg olarak belirlendi.
  2. 0.9152 g liyofilize XY kaynatma tozunu tartın ve ilaç çözeltisini hazırlamak için 3.2 mL damıtılmış su içinde çözün.
    NOT: Fareler oral uygulamadan önce 12 saat aç bırakıldı.
  3. XY kaynatma işlemini XY grubundaki farelere gavaj yoluyla uygularken, kontrol grubunu eşdeğer hacimde deiyonize su ile uygulayın.
  4. Oral uygulamadan 2 saat sonra, fareleri pentobarbital sodyum ile uyuşturun (kurumsal olarak onaylanmış protokolleri izleyerek). Kan örneklerini toplamak için cımbız kullanarak gözbebeklerini enüklee edin, ardından fareleri CO2 boğulması ve ardından etik yönergeleri izleyerek servikal çıkık yoluyla ötenazi yapın19.
  5. Kan örneklerinin oda sıcaklığında 90 dakika stabilize olmasına izin verin. Süpernatanı toplamak için 3450 x g'da (4 ° C) 15 dakika santrifüjleyin.

3. UHPLC-QE-MS analizi

  1. 500 μL ekstraksiyon çözeltisine (metanol: su = 4: 1) 100 mg XY kaynatma liyofilize toz ekleyin. İyice karıştırın, sonikat yapın ve 1 saat boyunca buzlu su banyosunda inkübe edin.
  2. Karışımı 1 saat -40 °C'de tutun, ardından 13.800 x g'da (4 °C) 15 dakika santrifüjleyin. Süpernatanı 0,22 μm'lik bir filtre membranından süzün, ardından kalite kontrol (QC) numuneleri oluşturmak için her süpernatanın 100 μL'sini birleştirin.
  3. Plazma örnekleri çözüldükten sonra, kontrol grubu plazma örneğinden 400 μL ve XY grubu plazma örneklerinden 400 μL alın. Her numuneye 40 μL hidroklorik asit (2 mol/L) ekleyin. 1 dakika vorteksleyin ve karışımı 4 °C'de 15 dakika bekletin. Bu adımı dört kez tekrarlayın.
  4. 1.6 mL asetonitril ekleyin ve 5 dakika boyunca girdap yapın. 4 ° C'de 5 dakika boyunca 13.800 x g'da santrifüjleyin. 1.800 μL süpernatanı nitrojen kurutmaya tabi tutun.
  5. Kurutulmuş numuneleri, 5 dakika boyunca girdaplama yoluyla 10 μg/mL iç standart içeren 150 μL% 80 metanol içinde sulandırın. 4 ° C'de 5 dakika boyunca 13.800 × g'da santrifüjleyin, ardından 120 μL süpernatanı LC-MS analizi için taze bir cam şişeye aktarın (Şekil 3).

4. Hücre kültürü ve hayvan hazırlama

  1. %10 fetal sığır serumu ve %1 penisilin/streptomisin ile desteklenmiş Dulbecco'nun Modifiye Eagle Medium'unu (DMEM) içeren bir kültür kabında 1 mL Lewis akciğer karsinomu hücresi tohumlayın. Hücreleri kontrollü koşullar altında 37 ° C'de% 5 CO2 ile inkübe edin.
  2. Hücreler% 80 birleşmeye ulaştığında,% 0.25 tripsin kullanarak onları geçirin. Hücre durumu stabilize olana kadar pas vermeye devam edin, ardından hücre konsantrasyonunu 3 x 106 hücre / mL'ye ayarlayın.
  3. Akciğer adenokarsinomu modelini oluşturmak için hazırlanan hücre süspansiyonunun 0.1 mL'sini erkek C57BL / 6 farelerinin sağ aksillasına deri altından enjekte edin.
    NOT: Tümör dokusu, aşılamadan 5 gün sonra farelerin aksillasında palpe edilebilir.
  4. 5 gün sonra, fareleri rastgele beş gruba ayırın (grup başına n = 6): Model grubu (M) - Tedavi yok; XY kaynatma düşük doz grubu (XY-L) - 1.3 g / kg; XY kaynatma orta doz grubu (XY-Z) - 2.6 g / kg; XY kaynatma yüksek doz grubu (XY-H) - 5.2 g / kg; Sisplatin grubu (DDP) - Sisplatin20 ile tedavi edilir.
  5. XY kaynatma tozunu karşılık gelen dozda 200 μL damıtılmış su içinde çözün ve gavaj yoluyla uygulayın. M ve DDP grupları, gavaj yoluyla eşit hacimde damıtılmış su alır.
  6. Sisplatini DDP grubuna her 3 günde bir intraperitoneal enjeksiyon (3 mg / kg) yoluyla uygulayın. Aynı hacimde fizyolojik salini diğer gruplara enjekte edin.

5. Tümör dokusunun patolojik analizi

  1. 21 gün sonra, CO2 asfiksiasyonu ve ardından servikal çıkık (etik kurallara izleyerek) kullanarak tüm farelere ötenazi yapın ve tümör dokusunuçıkarın 21. Tümör hacmini ve ağırlığını ölçün (Şekil 4).
  2. Eksize edilen tümör dokularını 24 saat boyunca% 4 paraformaldehit içinde sabitleyin). Dereceli etanol çözeltileri kullanarak dokuyu kurutun.
  3. Susuz kalmış doku bloklarını ksilen kullanarak temizleyin, ardından erimiş parafin mumuna gömün. Balmumunun bir parafin bloğu halinde katılaşmasına izin verin. Doku bloğunu bir mikrotom kullanarak 5 μm kalınlığında dilimler halinde bölümlere ayırın.
  4. Doku bölümlerini ksilen içinde mumdan arındırın, ardından kademeli etanol çözeltilerinde rehidrasyon yapın. Bölümleri hematoksilen ile 5 dakika boyayın, ardından deiyonize su ile durulayın.
  5. Bölümleri 1 dakika boyunca% 0,5 eozin çözeltisi ile boyayın. Lekeli bölümleri optik mikroskop altında gözlemleyin ve analiz için görüntüleri yakalayın.

6. Tümör dokusunun immünohistokimyasal analizi

  1. Adım 5.2-5.4'te açıklanan prosedürleri izleyerek mum alma ve rehidrasyon gerçekleştirin.
  2. Bölümleri endojen bir peroksidaz blokerinde oda sıcaklığında 15 dakika inkübe edin. Bölümleri keçi serumu ile inkübe ederek spesifik olmayan bağlanmayı engelleyin.
  3. Birincil antikorları uygulayın: Ki-67 (1:600) ve Kaspaz-3 (1:100). Bölümleri gece boyunca 4 °C'de inkübe edin. PBS tamponu ile yıkayın), ardından genel amaçlı bir ikincil antikor (1:500) uygulayın ve 37 ° C'de 30 dakika inkübe edin.
  4. DAB çözeltisi ekleyerek renk reaksiyonunu geliştirin. Bölümleri hematoksilen çözeltisi ile lekeleyin.
  5. Lekeli bölümlerin dehidrasyonunu, temizlenmesini ve sızdırmazlığını gerçekleştirin. Optik mikroskop altında protein ekspresyonunu gözlemleyin ve analiz için görüntüler yakalayın.

7. Batı lekesi analizi

  1. Bir doku parçalayıcı kullanarak tümör dokularını homojenize edin. Toplam proteini ekstrakte edin ve bir bikinkoninik asit (BCA) tahlil kiti kullanarak konsantrasyonunu belirleyin (bkz. Malzeme Tablosu).
  2. Protein miktar tayinini gerçekleştirin, ardından SDS-PAGE elektroforezi ve bir zar üzerine protein transferi yapın.
  3. Membranı gece boyunca 4 ° C'de birincil antikorlarla inkübe edin: P38 (1:2000), p-P38 (1:1000), ERK (1:20000), p-ERK (1:500), JNK (1:2000), p-JNK (1:5000), β-aktin (1:200) (bkz.
  4. Ertesi gün, zarı yaban turpu peroksidaz (HRP) konjuge ikincil antikoru ile oda sıcaklığında 1.5 saat inkübe edin. Gelişmiş bir kemilüminesans (ECL) sistemi kullanarak protein bantlarını tespit edin.
    NOT: Protein bant yoğunlukları ImageJ yazılımı kullanılarak ölçülmüştür.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Kontrol grubundan ve XY grubundan XY toz çözeltisi ve serum örnekleri UHPLC-QE-MS kullanılarak analiz edildi ve iyi ayrılmış pikler ortaya çıktı. Pozitif ve negatif iyon modları için toplam iyonizasyon diyagramları Şekil 3'te gösterilmiştir. XY kaynatma işleminin bileşimi, tutma süresi, edinme modu ve kütle spektrumu fragmanlarına dayalı olarak tanımlandı. Boş ve XY kaynatma oral uygulama gruplarının serumu XY toz çözeltisinin bileşenleri ile karşılaştırılara...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Kanser insidansı her yıl artmakta ve önemli klinik ve araştırma ilgisi çekmektedir22,23. Son çalışmalar, geleneksel Çin tıbbının (TCM) akciğer kanseri tedavisinde etkinliğini göstermiştir 24,25,26. Örneğin, Maimendong kaynatma işleminin NK hücrelerinin sayısını ve aktivitesini arttırdığı ve böylece akciğer kanseri metastazını inhibe etti...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

Bu çalışma, Jilin Eyaleti Bilim ve Teknoloji Geliştirme Planı Maddesi (YDZJ202301ZYTS459) tarafından desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
AsetonitrilCNW Teknolojileri5/8/1975
2-Kloro-L fenilalaninŞangay Hengbo Biyoteknoloji Co., Ltd.103616-89-3
Amonyum Hidroksit ÇözeltisiÇin Ulusal İlaç Grubu Kimyasal Reaktif Co., Ltd.#2028
Antikor-β-aktinAbcamab8228
Anti-Erk1 (pT202/pY204) + Erk2 (pT185/pY187) AntikorAbcamab4819
Anti-ERK1/ERK2 AntikorAbcamab184699
Anti-JNK1 (pY185) + JNK2 (pY185) + JNK3 (pY223) AntikorAbcamab76572
Anti-JNK1/JNK2/JNK3 AntikorAbcamab208035
Anti-Ki67 AntikorHücre Sinyal TeknolojisiGB121141
Anti-p38 (fosfo T180) AntikorAbcamab178867
Anti-p38 alfa / MAPK14 AntikorAbcamab170099
BCA protein konsantrasyonu test kitiBoster Biyolojik Teknoloji17E17B46
Sığır Serum Albümini (BSA)DAKOBIOFROXX
Geniş spektrumlu fosfataz inhibitörü (100x)Boster Biyolojik TeknolojiAR1183
C57bl/6 fareLiaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd.SCXK2021-0006
Kromatografik kolonSularACQUITY UPLC BEH C18 1.7 & mu; m2.1 * 100 mm
CisplatinÇin Ulusal İlaç Grubu Kimyasal Reaktif Co., Ltd.232120
Sitrat (pH 6.0) Antijen Alma ÇözeltisiWuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd.B2010
Kapak KaymaJiangsu Shitai Laboratuvar Equipment Co., Ltd.10212432C
Kriyojenik AşamaWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JB-L5
DAB Kromojenik KitiJiangsu Shitai Laboratuvar Equipment Co., Ltd.
Renk Giderme ÇalkalayıcıPekin Liu Yi Enstrüman FabrikasıWD-9405A
KurutucuWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JJ-12J
Kurutma Fırını ShanghaiHuitai Instrument Manufacturing Co., Ltd.DHG-9140A
Dulbecco'nun modifiye kartal ortamıGibco8121587
EDTA (pH 8.0) Antijen Alma ÇözeltisiWuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd.B2001
EDTA (pH 9.0) Antijen Alma ÇözeltisiWuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd.B2002
Elektroforez tamponuNCM Biotech20230801
Gömme makinesiWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JB-P5
EosinÇin Ulusal İlaç Grubu Kimyasal Reaktif Co., Ltd.
EtanolÇin Ulusal İlaç Grubu Kimyasal Reaktif Co., Ltd.
Fetal sığır serumuGibco2166090RP
Formik asitSIGMA64-18-6
GraphPad Prizma yazılımıGraphPad yazılımı, LLCSürüm 9.0.0
HematoksilenÇin Ulusal İlaç Grubu Kimyasal Reaktif Co., Ltd.H3136
Yüksek performanslı sıvı kromatografisiAgilent1260 Infinity II Prime
Yüksek hızlı soğutmalı santrifüjThermo Fisher ScientificLegend Micro 17R
Yüksek Çözünürlüklü Kütle SpektrometresiThermo Fisher ScientificQ Exactive Focus
HRP konjuge Keçi Anti-Fare SeraCare5220-0341
HRP konjuge Keçi Anti-TavşanSeraCare5220-0336
HRP konjuge Keçi Anti-Tavşan / Fare Evrensel İkincil AntikorDAKOK5007
HRP-konjuge Keçi Anti-SıçanSeraCare5220-0364
HRP-konjuge Tavşan Anti-KeçiSeraCare5220-0362
Hidroklorik asitÇin Ulusal İlaç Grubu Kimyasal Reaktif Co., Ltd.H9892
Hidrojen PeroksitÇin Ulusal İlaç Grubu Kimyasal Reaktif Co., Ltd.B12555
Aşırı duyarlı ECL kemilüminesans kitiNCM BiotechP10300
ImageJ yazılımıUlusal Sağlık Enstitüleriv1.8.0
Görüntüleme SistemiNikon (Japonya)NIKON DS-U3
Lewis akciğer karsinomu hücreleriÇin Ulusal İlaç Grubu Kimyasal Reaktif Co., Ltd.
Örgü kumaşBaijie 100110779650
Metal ısıtma sıcaklık kontrol cihazıBaiwan Electronictechnology Co., Ltd.HG221-X3
MetanolAladdinM116118
MikropipetDlab Scientific Co., Ltd.KE0003087/KA0056573
Mikroskop SlaytıJiangsu Shitai Laboratuvar Equipment Co., Ltd.10212432C
MikrotomŞangay Leica Instruments Co., Ltd.RM2016
Mikrodalga FırınGalanz Mikrodalga Elektrikli Ev Aletleri Co., Ltd.P70D20TL-P4
Nötr BalsamÇin Ulusal İlaç Grubu Kimyasal Reaktif Co., Ltd.
Optik mikroskopNikon (Japonya)Nikon Eclipse CI
FırınShanghai Huitai Instrument Manufacturing Co., Ltd.DHG-9140A
PAGE jel hızlı hazırlama kitiBiosharpPL566B-5
ParaformaldehitÇin Ulusal İlaç Grubu Kimyasal Reaktif Co., Ltd.8.18715
Fosfat tamponlu tuzlu su (1x)Gibco8120485
Önceden boyanmış renkli protein işaretleyici (10-180 kDa)Cywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW176-02
Protein yükleme tamponu (5X)Boster Biyolojik TeknolojiAR1112
pulverizatörShangzhiqiao Co., Ltd.DFT-100A
PVDF (0.45 μ m)Cywin İnovasyon (Pekin) Biyoteknoloji Co., Ltd.SW120-01
Hızlı membran transfer çözümüCywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW171-02
RIPA lizatBoster Biyolojik Technology Co., Ltd.AR0105
TBS tamponuNCM Biotech23HA0102
Doku Flotasyon İş İstasyonuJinhua Kedi Instrument Equipment Co., Ltd., Zhejiang Eyaleti.KD-P
Transmembran tamponNCM Biotech23CA2000
Tripsin (% 0.25, 1x)HyCloneJ210045
Ultrasonik hücre bozulma aparatıNingbo Xinyi ultrasonik ekipman Co., Ltd.JY92-IIDN
Dik Optik MikroskopNikon (Japonya)Nikon Eclipse CI
vakumlu liyofilizatörLanjing Co., Ltd.HD-LG20D
Vorteks karıştırıcıKylin-BellXW-80A
KsilenÇin Ulusal İlaç Grubu Kimyasal Reaktif Co., Ltd.
20052892129544935119002010410004160214736

Kaynaklar

  1. Ferlay, J., et al. Cancer statistics for the year 2020: An overview. Int J Cancer. 149 (4), 778-789 (2021).
  2. Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J Clin. 71 (3), 209-249 (2021).
  3. Ahn, M. J., et al. Asian Thoracic Oncology Research Group (ATORG) expert consensus statement on MET alterations in NSCLC: Diagnostic and therapeutic considerations. Clin Lung Cancer. 23 (8), 670-685 (2022).
  4. Seguin, L., Durandy, M., Feral, C. C. Lung adenocarcinoma tumor origin: A guide for personalized medicine. Cancers (Basel). 14 (7), 1759(2022).
  5. Nasim, F., Sabath, B. F., Eapen, G. A. Lung cancer. Med Clin North Am. 103 (3), 463-473 (2019).
  6. Miller, K. D., et al. Cancer treatment and survivorship statistics, 2022. CA Cancer J Clin. 72 (5), 409-436 (2022).
  7. Torrente, M., et al. Understanding prognosis and survival outcomes in patients with early-stage non-small-cell lung cancer. Clin Med (Lond). 22 (Suppl 4), 38-40 (2022).
  8. Li, Z., Feiyue, Z., Gaofeng, L. Traditional Chinese medicine and lung cancer--From theory to practice. Biomed Pharmacother. 137, 111381(2021).
  9. Wei, Z., et al. Traditional Chinese medicine has great potential as candidate drugs for lung cancer: A review. J Ethnopharmacol. 300, 115748(2023).
  10. Miao, K., et al. Harnessing the power of traditional Chinese medicine monomers and compound prescriptions to boost cancer immunotherapy. Front Immunol. 14, 1277243(2023).
  11. Wang, K., et al. Anticancer activities of TCM and their active components against tumor metastasis. Biomed Pharmacother. 133, 111044(2021).
  12. Chen, S., et al. Efficacy and safety of TCM combined with chemotherapy for SCLC: A systematic review and meta-analysis. J Cancer Res Clin Oncol. 146 (11), 2913-2935 (2020).
  13. Yu, Y., Yao, C., Guo, D. A. Insight into chemical basis of traditional Chinese medicine based on the state-of-the-art techniques of liquid chromatography-mass spectrometry. Acta Pharm Sin B. 11 (6), 1469-1492 (2021).
  14. Wei, J., et al. Integrated serum pharmacochemistry and network pharmacology approach to explore the effective components and potential mechanisms of Menispermi rhizoma against myocardial ischemia. Front Chem. 10, 869972(2022).
  15. Shao, D., et al. Identification of the active compounds and functional mechanisms of Jinshui Huanxian formula in pulmonary fibrosis by integrating serum pharmacochemistry with network pharmacology. Phytomedicine. 102, 154177(2022).
  16. Han, J., et al. Using network pharmacology to explore the mechanism of panax notoginseng in the treatment of myocardial fibrosis. J Diabetes Res. 2022, 8895950(2022).
  17. Wang, Y., et al. Mechanisms underlying the therapeutic effects of Qingfeiyin in treating acute lung injury based on GEO datasets, network pharmacology and molecular docking. Comput Biol Med. 145, 105454(2022).
  18. Rubio, K., et al. Non-canonical integrin signaling activates EGFR and RAS-MAPK-ERK signaling in small-cell lung cancer. Theranostics. 13 (8), 2384-2407 (2023).
  19. Guo, T. F., Li, W., Xi, B. Animal welfare and slaughter methods of fur animal. J Econ Anim. 15 (2), 112-119 (2011).
  20. Moar, K., et al. Synergistic anticancer activity of resveratrol with cisplatin and carboplatin in A549 lung adenocarcinoma cells. Int J Clin Exp Pathol. 17 (11), 411-420 (2024).
  21. Li, Z., et al. Exploring tumor-suppressive effect and mechanism of action of Zilongjin Tablets combined with icotinib in Lewis tumor-bearing mice based on EGFR/PI3K/Akt signaling pathway. Chin Tradit Herb Drugs. 56 (2), 529-535 (2025).
  22. Mullard, A. Addressing cancer's grand challenges. Nat Rev Drug Discov. 19 (12), 825-826 (2020).
  23. Williams, P. A., Zaidi, S. K., Sengupta, R. AACR cancer disparities progress report 2022. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 31 (7), 1249-1250 (2022).
  24. Zhao, W., et al. Si Jun Zi decoction inhibits the growth of lung cancer by reducing the expression of PD-L1 through TLR4/MyD88/NF-κB pathway. J Ethnopharmacol. 318 (Pt A), 116948(2024).
  25. Ye, Y., et al. Integrating network pharmacology and experimental validation to explore the effects and mechanisms of Qinghao Biejia decoction and its active compound artemisinin B against non-small-cell lung cancer. Drug Des Devel Ther. 17, 2461-2479 (2023).
  26. Zhang, J., et al. Ze-Qi decoction inhibits non-small cell lung cancer growth and metastasis by modulating the PI3K/Akt/p53 signaling pathway. J Tradit Complement Med. 13 (5), 417-429 (2023).
  27. Zhang, Z., et al. Maimendong decoction inhibits lung cancer metastasis by increasing the proportion and killing activity of NK cells. J Ethnopharmacol. 338 (Pt 3), 119127(2025).
  28. Zhang, W., et al. Explore the mechanism and substance basis of Mahuang FuziXixin decoction for the treatment of lung cancer based on network pharmacology and molecular docking. Comput Biol Med. 151 (Pt A), 106293(2022).
  29. Lee, J. Y., et al. Picropodophyllotoxin inhibits cell growth and induces apoptosis in gefitinib-resistant non-small lung cancer cells by dual-targeting EGFR and MET. Biomol Ther (Seoul). 31 (2), 200-209 (2023).
  30. Li, J. X., et al. Metabolomics and integrated network pharmacology analysis reveal Tricin as the active anticancer component of Weijing decoction by suppression of PRKCA and sphingolipid signaling. Pharmacol Res. 171, 105574(2021).
  31. Hong, J., Gwon, D., Jang, C. Y. Ginsenoside Rg1 suppresses cancer cell proliferation through perturbing mitotic progression. J Ginseng Res. 46 (3), 481-488 (2022).
  32. Wei, H., et al. Shuangshen granules attenuate lung metastasis by modulating bone marrow differentiation through mTOR signaling inhibition. J Ethnopharmacol. 281, 113305(2021).
  33. Nakhjavani, M., et al. Anti-Angiogenic properties of Ginsenoside Rg3. Molecules. 25 (21), 4905(2020).
  34. Liu, Z., et al. Insights into the antitumor mechanism of ginsenosides Rg3. Mol Biol Rep. 48 (3), 2639-2652 (2021).
  35. Huang, G., et al. Stachyose-induced apoptosis of Caco-2 cells via the caspase-dependent mitochondrial pathway. Food Funct. 6 (3), 765-771 (2015).
  36. Lin, Q., et al. Mechanistic and therapeutic study of novel antitumor function of natural compound imperialine for treating non-small cell lung cancer. J Ethnopharmacol. 247, 112283(2020).
  37. Zhang, T., et al. Peimine-induced apoptosis and inhibition of migration by regulating reactive oxygen species-mediated MAPK/STAT3/NF-κB and Wnt/β-catenin signaling pathways in gastric cancer MKN-45 cells. Drug Dev Res. 83 (7), 1683-1696 (2022).
  38. Sun, J., et al. Peimine inhibits MCF-7 breast cancer cell growth by modulating inflammasome activation: Critical roles of MAPK and NF-κB signaling. Anticancer Agents Med Chem. 23 (3), 317-327 (2023).
  39. Zhang, P., et al. Jujuboside B suppresses angiogenesis and tumor growth via blocking VEGFR2 signaling pathway. Heliyon. 9 (6), e17072(2023).
  40. Guo, L., et al. Jujuboside B inhibits the proliferation of breast cancer cell lines by inducing apoptosis and autophagy. Front Pharmacol. 12, 668887(2021).
  41. Shao, M., et al. Aucubin exerts anticancer activity in breast cancer and regulates intestinal microbiota. Evid Based Complement Alternat Med. 2022, 4534411(2022).
  42. Yang, Z., et al. Jujuboside B reverses CUMS-promoted tumor progression via blocking PI3K/Akt and MAPK/ERK and dephosphorylating CREB signaling. J Immunol Res. 2022, 5211368(2022).
  43. Sun, J., et al. Peimine inhibits MCF-7 breast cancer cell growth by modulating inflammasome activation: Critical roles of MAPK and NF-κB signaling. Anticancer Agents Med Chem. 23 (3), 317-327 (2023).
  44. Shan, X., et al. Ginsenoside Rg3-induced EGFR/MAPK pathway deactivation inhibits melanoma cell proliferation by decreasing FUT4/LeY expression. Int J Oncol. 46 (4), 1667-1676 (2015).
  45. Wang, J., et al. Low toxicity ginsenoside Rg1-carbon nanodots as a potential therapeutic agent for human non-small cell lung cancer. Colloids Surf B Biointerfaces. 246, 114392(2025).
  46. Colic, E., Patel, P. U., Kent, O. A. Aberrant MAPK signaling offers therapeutic potential for treatment of ovarian carcinoma. Onco Targets Ther. 15, 1331-1346 (2022).
  47. Bahar, M. E., Kim, H. J., Kim, D. R. Targeting the RAS/RAF/MAPK pathway for cancer therapy: From mechanism to clinical studies. Signal Transduct Target Ther. 8 (1), 455(2023).
  48. Sugiura, R., Satoh, R., Takasaki, T. ERK: A double-edged sword in cancer. ERK-dependent apoptosis as a potential therapeutic strategy for cancer. Cells. 10 (10), 2509(2021).
  49. Ullah, R., et al. RAF-MEK-ERK pathway in cancer evolution and treatment. Semin Cancer Biol. 85, 123-154 (2022).
  50. Romany, A., et al. Analysis of the ERK pathway cysteinome for targeted covalent inhibition of RAF and MEK kinases. J Chem Inf Model. 63 (8), 2483-2494 (2023).
  51. Ghosh, A. K., et al. Covalent inhibition in drug discovery. ChemMedChem. 14 (9), 889-906 (2019).
  52. Kaoud, T. S., et al. Modulating multi-functional ERK complexes by covalent targeting of a recruitment site in vivo. Nat Commun. 10 (1), 5232(2019).
  53. Qian, X., et al. Qingyihuaji formula promotes apoptosis and autophagy through inhibition of MAPK/ERK and PI3K/Akt/mTOR signaling pathway on pancreatic cancer in vivo and in vitro. J Ethnopharmacol. 307, 116198(2023).
  54. Yue, S. J., et al. A ferulic acid derivative FXS-3 inhibits proliferation and metastasis of human lung cancer A549 cells via positive JNK signaling pathway and negative ERK/p38, AKT/mTOR and MEK/ERK signaling pathways. Molecules. 24 (11), 2165(2019).
  55. Ozgun, G. S., et al. Piperine induces cellular stresses, apoptosis, and cytotoxicity via JNK signaling and has concentration-dependently additive or synergistic effects with sorafenib in hepatocellular carcinoma: An in vitro study. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. , (2024).
  56. Martínez-Limón, A., et al. The p38 pathway: From biology to cancer therapy. Int J Mol Sci. 21 (6), 1913(2020).
  57. Xie, C. Q., et al. Triptolide exerts pro-apoptotic and cell cycle arrest activity on drug-resistant human lung cancer A549/Taxol cells via modulation of MAPK and PI3K/Akt signaling pathways. Oncol Lett. 12 (5), 3586-3590 (2016).
  58. Luo, Y. H., et al. Anticancer effects of baicalein on cervical carcinoma cells through down-regulation of the ERK/p38/MAPK pathway. J Biol Regul Homeost Agents. 35 (3), 945-952 (2021).
  59. Lan, H. Y., et al. Aidi injection induces apoptosis of hepatocellular carcinoma cells through the mitochondrial pathway. J Ethnopharmacol. 274, 114073(2021).
  60. Remnant, L., et al. The intrinsically disorderly story of Ki-67. Open Biol. 11 (8), 210120(2021).
  61. Ma, W., et al. Breast cancer Ki67 expression prediction by DCE-MRI radiomics features. Clin Radiol. 73 (10), 909.e1-909.e5 (2018).
  62. Ahmed, S. T., et al. Proliferative index (Ki67) for prediction in breast duct carcinomas. Asian Pac J Cancer Prev. 19 (4), 955-959 (2018).
  63. Sobecki, M., et al. Cell-cycle regulation accounts for variability in Ki-67 expression levels. Cancer Res. 77 (10), 2722-2734 (2017).
  64. Gown, A. M. The biomarker Ki-67: Promise, potential, and problems in breast cancer. Appl Immunohistochem Mol Morphol. 31 (7), 478-484 (2023).
  65. Piri, R., et al. Ki-67/MIB-1 as a prognostic marker in cervical cancer - A systematic review with meta-analysis. Asian Pac J Cancer Prev. 16 (16), 6997-7002 (2015).
  66. Pelosi, G., et al. Ki-67 antigen in lung neuroendocrine tumors: Unraveling a role in clinical practice. J Thorac Oncol. 9 (3), 273-284 (2014).
  67. Li, H., et al. A correlation research of Ki67 index, CT features, and risk stratification in gastrointestinal stromal tumor. Cancer Med. 7 (9), 4467-4474 (2018).
  68. Asadi, M., et al. Caspase-3: Structure, function, and biotechnological aspects. Biotechnol Appl Biochem. 69 (4), 1633-1645 (2022).
  69. Eskandari, E., Eaves, C. J. Paradoxical roles of caspase-3 in regulating cell survival, proliferation, and tumorigenesis. J Cell Biol. 221 (6), e202201159(2022).
  70. Jiao, C., et al. Caspase-3/GSDME mediated pyroptosis: A potential pathway for sepsis. Int Immunopharmacol. 124 (Pt B), 111022(2023).
  71. Zhou, M., et al. Caspase-3 regulates the migration, invasion and metastasis of colon cancer cells. Int J Cancer. 143 (4), 921-930 (2018).
  72. Ke, H., et al. Effect of weimaining on apoptosis and Caspase-3 expression in a breast cancer mouse model. J Ethnopharmacol. 264, 113363(2021).
  73. Xu, H., et al. The natural product dehydrocurvularin induces apoptosis of gastric cancer cells by activating PARP-1 and caspase-3. Apoptosis. 28 (3-4), 525-538 (2023).
  74. Huang, Y. L., et al. Expression levels of Caspase-3 and gasdermin E and their involvement in the occurrence and prognosis of lung cancer. Cancer Rep (Hoboken). 5 (9), e1561(2022).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Geleneksel in T bbT m r ApoptozuUHPLC QE MST m r B y mesinin nhibisyonuProtein EkspresyonuHayvan Modeli

Bu makale yayımlandı

Video yakında

Bize ulaşın
Kütüphaneye tavsiye et

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.