Araştırma makalesi

CDCA ile İndüklenen HepG2 Hücre Hasarında Gentiopikrosidin Koruyucu Etkisinin Multimodal Değerlendirmesi

DOI:

10.3791/68320

⸱

25 Temmuz 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 3Internal Medicine of Traditional Chinese Medicine, Traditional Chinese Medicine Hospital of Meishan, 4Institute of High Altitude Multimorbidity/TCM-Integrated High Altitude Medicine Center, Hospital of Chengdu University of TCM, 5Chengdu Tianxing Zhiyuan Biotechnology Co., Ltd.

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, gentiopikrosidin safra asitleri ve lipitlerin üretimini ve metabolizmasını kontrol ederek ve oksidatif stres ve inflamatuar yanıtları önleyerek kolestatik karaciğer hasarını tedavi edebileceğini göstermiştir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Swertia chirayita'nın birincil aktif bileşeni olan gentiopikrosidin (GPS) kolestaz vakalarında karaciğeri koruduğu gösterilmiştir. GPS'in kolestatik karaciğer hasarı üzerindeki koruyucu mekanizmasını aydınlatmak için, HepG2 hücreleri kolestaz ortamını in vitro olarak simüle etmek için kenodeoksikolik asit (CDCA) ile muamele edildi ve GPS'in HepG2 hücreleri üzerindeki koruyucu etkisini belirlemek için CCK-8 yöntemi kullanıldı. Biyolojik bir kit kullanılarak, hücre içi TBA, T-CHO, TG, ALP, ALT, AST, GSH, IL-1β, IL-6, TNF-α, SOD ve MDA içerikleri tespit edildi. ROS seviyesini doğrulamak için konfokal lazer mikroskobu kullanıldı. HepG2 hücrelerinin SHP-2, Tgr5, CYP7A1 ve NTCP ekspresyonları immünofloresan ve Western blot analizi kullanılarak değerlendirildi. Autodock yazılımı daha sonra ana aktif bileşenlerinin moleküler olarak yerleştirilmesini doğrulamak için kullanıldı. Bulgular, GPS'in CDCA'nın HepG2 hücrelerine verdiği hasarı önemli ölçüde önlediğini gösterdi. Bu koruyucu etki, hücre içindeki safra asitlerinin ve lipitlerin üretimini ve metabolizmasını kontrol ederek ve oksidatif stres ve inflamatuar yanıtları önleyerek elde edilmiş olabilir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Vücudun sindirim sisteminin metabolik bölgesi karaciğerdir. Safra salgılanması, hepatobiliyer sistemin yağ katabolizması sürecinde önemli bir mekanizmadır. Safranın birincil bileşenleri olan safra asitleri, karaciğer hücreleri tarafından salınır ve yağ metabolizmasının dengesini korumak için çok önemlidir. Hem sağlıklı bireyler hem de hasta vakalar için, karaciğerin fizyolojik ve patolojik süreçleri, karaciğerdeki serbest ve konjuge safra asitlerinin dengesine bağlıdır. Bu denge bozulursa, safra asidi dolaşımı normal şekilde çalışmaz, bu da intrahepatik kolestaza ve ardından karaciğer hasarına yol açabilir1. Daha önce yapılan araştırmalara göre, kolestatik karaciğer hasarı (CLI) metabolik bozukluklar, bağırsak mikrobiyota dengesizliği ve karaciğer hücresi nekrozu ile bağlantılı bir durumdur2. Safra akışının tıkanması ve CLI için karaciğer hücrelerinde safra asitlerinin birikmesi ile ortaya çıkar. Şiddetli CLI vakaları karaciğer sirozu, karaciğer fibrozu vekaraciğer yetmezliğine ilerleyebilir. Şu anda, CLI'nin altında yatan mekanizma hala biraz belirsiz ve karmaşıktır ve hastaların çoğu, önemli yan etkilerlebirlikte ilaç tedavisinden4 düşük etkinlik almaktadır 5. Sonuç olarak, bugün tıp camiasının karşı karşıya olduğu en acil sorunlardan biri, etkili CLI ilaçlarının araştırılmasıdır.

Mevcut araştırmalar, safra asidi6'nın metabolizmasında birkaç nükleer reseptörün önemini göstermiştir. Bunlar arasında, safra asidi reseptörü, BA'lara bağlanabilen ve protein tirozin fosfatazı (SHP) aktive edebilen safra asidinin çok önemli bir düzenleyici reseptörüdür7. Öte yandan, hepatositlerde kolestaz ile sonuçlanan aşırı BA birikimi, SHP reseptörünü negatif olarak inhibe edecek ve CYP7A1 (sitokrom P450 7A1) reseptörünü aktive edecek ve bu da safra asidi8 üretimine yol açacaktır. Ek olarak, G-proteinine bağlı safra asidi reseptörü TGR5'in BA'ları salgılamasını bloke etti ve BA'ları taşımak için sodyum taurokolat birlikte taşınan polipeptit (NTCP) reseptörünü uyardı. Karaciğer hücrelerinde safra asitlerinin birikmesine neden olur ve bu da karaciğerezarar verir 9. Sonuç olarak, bu mekanizmaya ilişkin ek araştırmalar, daha uygun CLI tedavi seçeneklerine ışık tutabilir.

Tıpta uzun bir kullanım geçmişine sahip olan Swertia chirayita, geleneksel bir Çin Tibet tıbbıdır. En iyi Tida olarak kabul edilir ve yerel halk tarafından safra kesesi ve karaciğer rahatsızlıklarını tedavi etmek için sıklıkla kullanılır10. Safra kesesi taşları, kolesistit, siroz, hepatit ve diğer karaciğer hastalıklarını tedavi etmek için sıklıkla kullanılır11. Son araştırmalar, Swertia'nın bazı iridoid kimyasal bileşenlerinin yanı sıra aktif bileşenlerinin karaciğer fibrozu ve akut karaciğer hasarı gibi karaciğer hastalıkları üzerinde iyi bir terapötik etkiye sahip olduğunu ortaya koymuştur 12,13,14. Swertia chirayita'nın aktif bileşenleri, iltihabı15 ve antioksidan özelliklerini16 azaltarak karaciğer hastalığını hafifletir. Ön araştırmamız, ana bileşen olarak Swertia chirayita içeren Tibet tıbbı bileşik formülünün CLI üzerinde olumlu bir terapötik etki sergilediğini göstermiştir, bu da Swertia chirayita'nın CLI17 için bir tedavi olarak potansiyele sahip olduğunu düşündürmektedir. Swertia chirayita'dan ekstrakte edilen ve saflaştırılan birincil aktif bileşen, karaciğer koruması 19, glikoz metabolizması regülasyonu20, bağırsak mikrobiyomunun iyileştirilmesi21 ve anti-tümör özellikleri22 gibi bir dizi farmakolojik etkiye sahip olan GPS (Gentiopikrosid)18'dir. Önceki araştırmalar, GPS'in kolestatik koşullarda karaciğer hasarını iyileştirdiğini ve safra asidi taşıyıcılarının ekspresyonunu yukarı regüle ederek intrahepatik kolestazı azalttığını göstermiştir23,24. Buna benzer şekilde, hem in vivo hem de in vitro olarak yapılan araştırmalar, GPS'in lipid metabolizmasını artırarak, iltihabı azaltarak ve oksidatif stresi azaltarak karaciğer hasarını azaltabileceğini göstermiştir25,26.

HepG2 hücreleri, hepatosit metabolik enzim aktivitesi sergiledikleri için karaciğer hastalığının in vitro çalışmalarında sıklıkla kullanılır27. Bu arada, hepatositler, CDCA28'i içeren dört serbest safra asidi formundan birine maruz kaldıklarında daha fazla safra salgılayabilir. Sonuç olarak, CDCA, kolestatik karaciğer hasarının bir hücre modelini oluşturmak ve kolestatik ortamı in vitro olarak taklit etmek için kullanılabilir. CDCA'nın neden olduğu hepatosit hasarına kritik olarak oksidatif stres ve inflamatuar yolakların aracılık ettiği ve GPS'in diğer hepatik bağlamlarda belgelenmiş anti-oksidatif ve anti-inflamatuar etkileri göz önüne alındığında26, GPS'in HepG2 hücrelerinde CDCA'nın neden olduğu sitotoksisiteyi hafifleterek kolestatik karaciğer hasarına karşı koruma sağlayabileceğini varsayıyoruz. Bu çalışma, GPS'in CLI ve moleküler mekanizması üzerindeki koruyucu etkisini, HepG2 hücrelerine CDCA'nın neden olduğu hasarın bir modelini kullanarak araştırdı.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hücre kültürü ve tedavisi
HepG2 hücreleri ve MEM ortamı ticari bir satıcıdan satın alındı. HepG2 hücreleri, 37 °C ve %5CO2 atmosferinde %10 FBS, %1 100 U/mL penisilin ve 100 U/mL streptomisin ile desteklenmiş MEM ortamında büyütüldü. Hücre adezyonu sonrası kültür ortamı değiştirildi. Hücreler 2-3 gün sonra 1: 3 oranında yetiştirildi ve hücre kültürü% 80 birleşme elde ettikten sonra deneyde kullanıldı.

Hücre canlılığı testi
1. günde, hücreler 2 x 104 HepG2 hücresinde (2 x 105 hücre / mL, kuyu başına 100 μL) altı kopyada 96 oyuklu bir plakadatohumlandı 29. 2. günde, aşılamadan 24 saat sonra, hücreler 12 saat boyunca farklı CDCA konsantrasyonlarında (0, 20, 40, 60, 80, 100 μM) CDCA ile tedavi edildi. Hücre canlılığı CCK-8 yöntemi ile tespit edildi. İlk hücre tohumlamasından 24 saat sonra, hücreler 24 saat boyunca farklı GPS konsantrasyonlarında (0, 25, 50, 100, 200, 400 ve 800 μM) CDCA ile muamele edildi. 3. günde, hücre canlılığı CCK-8 yöntemi ile tespit edildi. 4. günde, 2 x 104 HepG2 hücresi (2 x 105 hücre / mL, oyuk başına 100 μL), 24 saat boyunca altı kopyada 96 oyuklu bir plakaya ekildi. 5. günde hücreler altı gruba ayrılır: Kontrol, Model, Ursodeoksikolik asit (UDCA) ve GPS: 25 μM, 50 μM ve 100 μM. Kontrol grubu hariç tüm gruplara 12 saat süreyle 60 μM CDCA solüsyonu ilave edildi. Daha sonra 24 saat boyunca UDCA çözeltisi (60 μM) ve GPS çözeltisi (25 μM, 50 μM ve 100 μM) sırasıyla UDCA ve 3 GPS grubuna eklendi. 6. günde, CCK-8 yöntemi ile hücre canlılığı tespit edildi.

Sitokin testi
Bildirilen literatüre göre, farklı tedavilerden sonra HepG2 hücrelerindeki inflamatuar faktörlerin seviyelerini tespit etmek için TNF-α, IL-6 ve IL-1β kitleri kullanılmıştır30. 24 saatlik CDCA veya CDCA+GPS müdahalesinden sonra, kültür ortamını atın ve PBS ile durulayın. Hücre süspansiyonunu 10 dakika boyunca 69 x g'da santrifüjleyin, süpernatanı atın ve hücre çökeltisini alın. PBS çözeltisi ekleyin ve hücre homojenatlarını hazırlamak için buzlu su banyosu koşullarında homojenize edin. 10.005 x g ve 4 ° C'de 10 dakikalık bir santrifüjlemeden sonra, süpernatant çıkarıldı ve hücre içeriğindeki toplam proteini ölçmek için BCA tekniği kullanıldı. Üreticinin talimatlarına göre, hücre süpernatantındaki TNF-α, IL-6 ve IL-1β seviyeleri ELISA ile belirlendi. Absorbans, çok işlevli bir mikroplaka okuyucu kullanılarak 450 nm'de ölçüldü.

TBA, TG ve T-CHO tespiti
TBA, TG ve T-CHO testleri, HepG2 hücrelerinin safra asidi ve lipid metabolizmasını tanımlamak için kitin talimatlarına uygun olarak kullanıldı31. TBA, TG ve T-CHO ticari olarak satın alındı. Hücre çökeltileri bir buzlu su banyosunda ultrasonik olarak parçalandıktan sonra, hücre homojenatı 30 dakika boyunca lizat RIPA eklenerek hazırlandı. Absorbans, çok işlevli bir mikroplaka okuyucu kullanılarak 450 nm'de ölçüldü. Her bir oyuğa BCA çalışma çözeltilerinin eklenmesini ve hücrelerin homojenizasyonunu takiben, absorbans bir enzimozometre kullanılarak 562 nm'de ölçüldü ve inkübasyon süresi 30 dakika idi Standart ürünün absorbansı, standart eğriyi oluşturmak için kullanıldı ve absorbans değerini elde etmek için aşağıdaki formül kullanıldı:
TBA içeriği (μmol/gprot) = (Birörnek-A boş)/(A standart-A boş)×Ckalibrasyonu/Cpr
T-CHO, TG içeriği (mmol/gprot) = (Birörnek-A boş)/(Astandart-A boş)×Cstandardı/Cpr

Karaciğer fonksiyonunun değerlendirilmesi
Karaciğer fonksiyonu ALT, AST ve ALP kullanılarak değerlendirildi. ALT, AST ve ALP ticari olarak satın alındı. Toplanan hücreler üzerinde iki tur PBS tampon temizliğinin ardından, hücreler 69 x g'da 10 dakika boyunca santrifüjlendi, süpernatant çıkarıldı, hücreler çökeltildi, PBS tamponu eklendi ve homojenat, bir buzlu su banyosunda ultrasonik kırma ile oluşturuldu. Test ve kontrol delikleri daha sonra ayarlandı. Reaktif eklenirken, delik plakası hafifçe çalkalanırken ve karıştırılırken ve oda sıcaklığında 15 dakika bekletilirken çalışma tablası takip edildi. Her deliğin OD değeri, 505 nm dalga boyuna sahip bir enzimolog kullanılarak belirlendi. Mutlak OD değeri daha sonra standart eğriye girildi ve formül kullanılarak ek kantitatif analiz yapıldı.

SOD, MDA, GSH faaliyetlerinin belirlenmesi
SOD aktivitesi, MDA içeriği ve GSH içeriği sırasıyla üreticinin talimatlarına uygun olarak değerlendirildi. SOD, MDA ve GSH ticari olarak satın alındı. Kısaca söylemek gerekirse, hücreleri aşılamak için altı oyuklu bir plaka kullanıldı. Tedaviyi takiben, hücrelere kitin deneysel talimatlarına uygun olarak ön işlem (toplama ve kırma) uygulandı. Uygun çalışma solüsyonları daha sonra talimatların işlem adımlarına uygun olarak boş delikler, standart delikler ve ölçüm delikleri oluşturulduktan sonra hücre algılama plakasına döküldü. Daha sonra, hücreler kit talimatlarında belirtilen sıcaklık ve sürede kültürlenir. Daha sonra protein içeriğini ölçmek için bir BCA tespit kiti kullanıldı. Sonuç olarak, absorbans uygun dalga boyunda belirlendi ve oksidatif stres indeksinin daha kapsamlı bir kantitatif analizi yapıldı.

DCFH-DA probu kullanılarak HepG2 hücrelerinde ROS değişikliklerinin tespiti
Hücre sayımları için rutin kültür yapıldı. Yoğunluğu 1 x 105 hücre/mL olan HepG2 Hücreleri, her biri 1.5 mL'lik cam tabanlı kaplara aşılandı ve yukarıdaki yönteme göre kültürlendi. Kültürden sonra besiyeri atıldı ve hücreler PBS ile yıkandı. DCFH-DA, 1:1000'lik bir konsantrasyona seyreltildi, kuyu başına 1.5 mL seyreltici ilave edildi ve 20 dakika inkübe edildi. İnkübasyondan sonra, hücreler MEM bazik kültür çözeltisi ile 3 kez durulandı. Daha sonra, her bir tabağa DAPI ile 100 μL antifade montaj ortamı eklendi. Uyarma için 488 nm'de ve emisyon32 için 525 nm'de görüntülemek ve fotoğraf çekmek için bir floresan konfokal mikroskop kullanıldı.

İmmünofloresan görüntüleme
Hücreler inkübasyonu takiben PBS tamponu ile 3 kez yıkandı. %4'lük paraformaldehit ile 30 dakika boyunca fikse edildikten sonra hücreler sallama masasında PBS tamponu kullanılarak temizlendi. Seyreltici ilave edildi, daha sonra gece boyunca ışıktan uzakta 4 °C'de soğutuldu. Bundan sonra, hücreler floresan seyreltici ile kaplandı ve 37 ° C'de 1 saat boyunca ışıktan uzakta inkübe edildi. İnkübasyonu takiben, hücreler PBS tamponu ile üç kez yıkandı. 30 dakika boyunca %4'lük paraformaldehit ile fiksasyondan sonra, hücreler döner bir çalkalayıcı üzerinde PBS tamponu ile durulandı. Daha sonra, 150 μL birincil antikor seyreltici ilave edildi ve ışıktan korunan koşullar altında gece boyunca 4 ° C'de inkübe edildi. Birincil antikor seyrelticisi geri kazanıldı, ardından yeterli hacimde PBS tamponu eklendi ve 5 dakika çalkalandı; Bu yıkama işlemi üç kez tekrarlandı. Daha sonra her bir çanak 150 μL floresan ikincil antikor seyreltici aldı ve ışık korumalı bir inkübatörde 1 saat boyunca 37 ° C'de inkübe edildi. Her tabağa uygun hacimde PBS tamponu eklendi ve 8 dakika boyunca döner bir çalkalayıcı üzerinde yıkandı, üç döngü boyunca tekrarlandı. Son olarak, hücreler 10 dakika boyunca yeterli DAPI boyama solüsyonu ile kaplandı, antifade montaj ortamı ile monte edildi ve süper çözünürlüklü bir görüntüleme sistemi33 kullanılarak görüntülendi.

Batı lekesi analizi
Çeşitli tedavilerden sonra, HepG2 hücrelerinin tüm proteini RIPA lizat kullanılarak ekstrakte edildi ve protein konsantrasyonu BCA tekniği kullanılarak tespit edildi. Hedef protein %10 SDS-PAGE kullanılarak izole edildikten sonra, 0.45 μm'lik bir PVDF membranına aktarıldı. Bundan sonra, membran %5 BSA kullanılarak 25 ° C'de 1,5 saat boyunca kapatıldı. SHP-2 (1:1000), CYP7A1 (1:1000), Tgr5 (1:1000), NTCP (1:1000) ve β-aktine (1:1000) karşı primer antikorlar gece boyunca 4 °C'de inkübe edildi. Daha sonra, zar, 25 ° C'de 2 saat boyunca yaban turpu peroksidaz ile konjuge edilmiş keçi anti-tavşan immünoglobulin G ikincil antikoru (1:10000) ile inkübe edildi. Peroksidaz kaplı bantlar daha sonra ultra yüksek hassasiyetli bir ECL kemilüminesan çözeltisi kullanılarak görüldü ve resimler bir görüntüleme sistemi34 kullanılarak çekildi.

Moleküler yerleştirme
Bildirildiği gibi, moleküler yerleştirme işlemi aşağıdaki prosedürlere göre gerçekleştirildi35. İlacın küçük moleküllü .mol2 yapısı ChemicalBook platformundan, ligand proteini .sdf yapısı ise Uniprot ve RCSBPDB platformlarından indirilmiştir. Ligand ve su molekülleri Pymol yazılımı ile uzaklaştırıldı ve ligand proteini, hidrojenasyon ve tespit için AutoDock yazılımına aktarıldı. Son çıktı .pdbqt biçimindedir. Yerleştirme kutusu, RunAutoGrid, RunAutoDock ve AutoDock Araçları analizi AutoDock yazılımında gerçekleştirildi ve her bir yerleştirme sonucu grubunun minimum bağlama enerjisi kaydedildi. Her grubun en düşük serbest bağlanma enerjisine sahip konformasyonu seçildi ve ligand-reseptör konformasyonu Pymol yazılımı tarafından görselleştirildi.

İstatistiksel analiz
Söz konusu veriler GraphPad Prism 9.2 kullanılarak istatistiksel olarak sıralandı ve tüm deneysel sonuçlar Ortalama ± SD olarak raporlandı. Verilerin gruplar arası istatistiksel olarak karşılaştırılması için Tek Yönlü Varyans Analizi (ANOVA) kullanılmıştır. İki grup arasındaki farkp < 0.05 olduğunda anlamlı kabul edildi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

CDCA konsantrasyonu, deneyler için 0 μM, 20 μM, 40 μM, 60 μM, 80 μM ve 100 μM konsantrasyon gradyanına ayarlandı. CDCA konsantrasyonu 60 μM olduğunda, hücre aktivitesi Kontrol grubununkinden önemli ölçüde farklıydı ve son olarak CDCA konsantrasyonu olarak 60 μM kullanıldı (Şekil 1A). Sonuçlar, ilaç uygulamasından sonra 24 saat inkübasyondan sonra, her grup ile Kontrol grubu arasında hücre aktivitesinde anlamlı bir fark olmadığını gösterdi (Şekil 1B), bu da GPS'i...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

CLI, safra oluşumunun, salgılanmasının veya atılımının tıkanmasından kaynaklanan bir karaciğer hastalığıdır. Klinik olarak kaşıntı, osteoporoz olarak kendini gösterir ve hatta yaşamı ve sağlığı ciddi şekilde tehlikeye atan karaciğer fibrozu, siroz ve diğer hastalıklara dönüşür 36,37,38. UDCA, CLI39 tedavisinde en sık kullanılan ilaç olarak kabul edilmektedir. Bununla birl...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Sichuan Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı (2024NSFSC0697), Chengdu Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi (LH202402015) Ortak İnovasyon Fonu Projesi tarafından desteklenmektedir.

Yazar Katkısı:
Caitong Wu: Metodoloji, biçimsel analiz, veri küratörlüğü, orijinal taslağı yazma ve yazma ve düzenleme. Yang Xiao: Kavramsallaştırma, araştırma, görselleştirme ve doğrulama. Fuhan Fan: Doğrulama ve düzenleme. Zhangli Lei, Xianhua Zhou ve Xianli Meng: Düzenleme ve çeviri. Yong Zeng, Hou Ya ve Peng Shen: Kavramsallaştırma, metodoloji, doğrulama, araştırma, taslağın gözden geçirilmesi ve düzeltilmesi ve denetim.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
ALPNanjing Jiancheng Biyomühendislik EnstitüsüA059-2-2
ALTNanjing Jiancheng Biyomühendislik EnstitüsüC009-2-1
ASTNanjing Jiancheng Biyomühendislik EnstitüsüC010-2-1
BCABoster Biyolojik Technology Co, LtdAR0146
CDCAChengdu Medesheng Technology Co., Ltd474-25-9
hücre sayma kiti-8Boster Biological Technology Co., LtdAR1160-500
Sitokrom P450 7A1 AntikorAbmart Shanghai Co., Ltd.
DAPIBeyotime BiyoteknolojiC1005
DMSOBoster Biyolojik Technology Co, LtdPYG0040
Keçi Anti-Tavşan IgG (H & L)Chengdu Zen-Bioscience Co., Ltd.
Keçi Anti-Tavşan IgG AF488Abmart Shanghai Co., Ltd.
GPSChengdu Medesheng Technology Co., LtdRP210717
GSHNanjing Jiancheng Biyomühendislik EnstitüsüA006-2-1
HepG2 hücreleriProcell Yaşam Bilimi ve Technology Co., LtdCL-0103
HRP Keçi Anti-Tavşan IgGWuhan & nbsp; ABklonal  Biyoteknoloji Co., Ltd. AS014
IL-1 ve beta;Elabscience Biyoteknoloji Co, LtdE-EL-H0149c
IL-6Elabscience Biyoteknoloji Co, LtdE-EL-H6156
MDANanjing Jiancheng Biyomühendislik EnstitüsüA003-1-2
MEM temel ortamıProcell Yaşam Bilimi & Technology Co., LtdPM150410
PBSBoster Biological Technology Co., LtdPYG0021
Hızlı Transfer Tamponu (20 kez;)NCM BiotechWB4600
RIPABoster Biyolojik Technology Co, LtdBL651A
ROSBeyotime BiyoteknolojiS0033S
SHP2 Tavşan pAbWuhan ve nbsp; ABklonal  Biyoteknoloji Co., Ltd. A12486
SLC10A1 AntikoruAbmart Shanghai Co., Ltd.
SODNanjing Jiancheng Biyomühendislik EnstitüsüA001-3-1
TBANanjing Jiancheng Biyomühendislik EnstitüsüE003-2-1
T-CHONanjing Jiancheng Biyomühendislik EnstitüsüA111-1-1
TGNanjing Jiancheng Biyomühendislik EnstitüsüA110-1-1
TGR5 Poliklonal AntikorImmunoWay Biyoteknoloji ŞirketiYT4636
TNF-&alfa;Elabscience Biotechnology Co., LtdE-EL-H0109c
Tripsin çözeltisi (%0.25)Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd40126ES60
UDCAChengdu Lemetian Medical Technology Co., LtdDSTDX007601
β-Aktin Tavşan mAbWuhan  ABklonal  Biyoteknoloji Co., Ltd. AC026
TD2612S511202M21012MPU276166S Serisi

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Li, T., Hasan, M. N., Gu, L. Bile acids regulation of cellular stress responses in liver physiology and diseases. eGastroenterology. 2 (2), e100074(2024).
  2. Lin, S., et al. A systemic combined nontargeted and targeted LC-MS based metabolomic strategy of plasma and liver on pathology exploration of alpha-naphthylisothiocyanate induced cholestatic liver injury in mice. J Pharma Biomed Anal. 171, 180-192 (2019).
  3. Pouwels, S., et al. Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD): a review of pathophysiology, clinical management and effects of weight loss. BMC Endocr Disord. 22 (1), 63(2022).
  4. Wagner, M., Fickert, P. Drug Therapies for Chronic Cholestatic Liver Diseases. Ann Rev Pharmacol Toxicol. 60, 503-527 (2020).
  5. Nasr, P., Ignatova, S., Kechagias, S., Ekstedt, M. Natural history of nonalcoholic fatty liver disease: A prospective follow-up study with serial biopsies. Hepatol Commun. 2 (2), 199-210 (2017).
  6. Halilbasic, E., Claudel, T., Trauner, M. Bile acid transporters and regulatory nuclear receptors in the liver and beyond. J Hepatol. 58 (1), 155-168 (2013).
  7. Katafuchi, T., Makishima, M. Molecular Basis of Bile Acid-FXR-FGF15/19 Signaling Axis. Int J Mol Sci. 23 (11), 6046(2022).
  8. Ding, L., Yang, L., Wang, Z., Huang, W. Bile acid nuclear receptor FXR and digestive system diseases. Acta Pharma Sinica. B. 5 (2), 135-144 (2015).
  9. Wei, S., et al. The contribution of small heterodimer partner to the occurrence and progression of cholestatic liver injury. J Gastroenterol Hepatol. 39 (6), 1134-1144 (2024).
  10. Bhatt, A., Rawal, R. S., Dhar, U. Ecological features of a critically rare medicinal plant, Swertia chirayita in Himalaya. Plant Species Biol. 21, 49-52 (2006).
  11. Swati, K., Bhatt, V., Sendri, N., Bhatt, P., Bhandari, P. Swertia chirayita: A comprehensive review on traditional uses, phytochemistry, quality assessment and pharmacology. J Ethnopharmacol. 300, 115714(2023).
  12. Yong, Q., et al. Gentiopicroside improves NASH and liver fibrosis by suppressing TLR4 and NLRP3 signaling pathways. Biomed Pharmacother. 177, 116952(2024).
  13. Shi, M., Tang, J., Zhang, T., Han, H. Swertiamarin, an active iridoid glycoside from Swertia pseudochinensis H. Hara, protects against alpha-naphthylisothiocyanate-induced cholestasis by activating the farnesoid X receptor and bile acid excretion pathway. J Ethnopharmacol. 291, 115164(2022).
  14. He, X., et al. Swertia bimaculata moderated liver damage in mice by regulating intestine microbiota. Ecotoxicol Environ Saf. 263, 115223(2023).
  15. Lad, H., Bhatnagar, D. Amelioration of oxidative and inflammatory changes by Swertia chirayita leaves in experimental arthritis. Inflammopharmacology. 24 (6), 363-375 (2016).
  16. Chen, Y., et al. In vitro and in vivo antioxidant effects of the ethanolic extract of Swertia chirayita. J Ethnopharmacol. 136 (2), 309-315 (2011).
  17. Qin, J., et al. Determination of the pharmacodynamic substances and mechanism of Shiwuwei Saierdou Pills against cholestatic hepatitis through chemical profile identification and network pharmacology analysis. Arabian J Chem. 17 (2), 105504(2024).
  18. Guo, S., et al. Swertia L.: A comprehensive review of its genetic relationship, chemical compositions, pharmacological effects, toxicities, and applications. Phytother Res. 37 (6), 2605-2643 (2023).
  19. Zhang, Y., Pan, S., Yi, S., Sun, J., Wang, H. Gentiopicroside ameliorates CCl4-induced liver injury in mice by regulating the PPAR-γ/Nrf2 and NF-κB/IκB signaling pathways. J Int Med Res. 51 (10), 3000605231204501(2023).
  20. Xiao, H., et al. Gentiopicroside targets PAQR3 to activate the PI3K/AKT signaling pathway and ameliorate disordered glucose and lipid metabolism. Acta Pharma Sinica. B. 12 (6), 2887-2904 (2022).
  21. Wang, L., et al. Gentiopicroside improves high-fat diet-induced NAFLD in association with modulation of host serum metabolome and gut microbiome in mice. Front Microbiol. 14, 1145430(2023).
  22. Chen, Q., et al. Gentiopicroside inhibits the progression of gastric cancer through modulating EGFR/PI3K/AKT signaling pathway. Euro J Med Res. 29 (1), 47(2024).
  23. Tang, X., et al. Target profiling analyses of bile acids in the evaluation of hepatoprotective effect of gentiopicroside on ANIT-induced cholestatic liver injury in mice. J Ethnopharmacol. 194, 63-71 (2016).
  24. Han, H., Xu, L., Xiong, K., Zhang, T., Wang, Z. Exploration of Hepatoprotective Effect of Gentiopicroside on Alpha-Naphthylisothiocyanate-Induced Cholestatic Liver Injury in Rats by Comprehensive Proteomic and Metabolomic Signatures. Cell Physiol Biochem Int J Exp Cell Physiol Biochem Pharmacol. 49 (4), 1304-1319 (2018).
  25. Jin, M., et al. Gentiopicroside Ameliorates Oxidative Stress and Lipid Accumulation through Nuclear Factor Erythroid 2-Related Factor 2 Activation. Oxid Med Cell Longev. 2020, 2940746(2020).
  26. Huang, C., et al. Gentiopicroside improves non-alcoholic steatohepatitis by activating PPARα and suppressing HIF1. Front Pharmacol. 15, 1335814(2024).
  27. Choi, J. M., et al. HepG2 cells as an in vitro model for evaluation of cytochrome P450 induction by xenobiotics. Arch Pharma Res. 38 (5), 691-704 (2015).
  28. Labib, P. L., Goodchild, G., Pereira, S. P. Molecular Pathogenesis of Cholangiocarcinoma. BMC Cancer. 19 (1), 185(2019).
  29. Bai, J., et al. The enhanced mitochondrial dysfunction by cantleyoside confines inflammatory response and promotes apoptosis of human HFLS-RA cell line via AMPK/Sirt 1/NF-κB pathway activation. Biomed Pharmacother. 149, 112847(2022).
  30. Xie, N., et al. Rhodiola crenulate alleviates hypobaric hypoxia-induced brain injury via adjusting NF-κB/NLRP3-mediated inflammation. Phytomed Int J Phytother Phytopharmacol. 103, 154240(2022).
  31. Liu, Y. H., Guo, Y., Xu, H., Feng, H., Chen, D. Y. Impact of Non-Alcoholic Simple Fatty Liver Disease on Antituberculosis Drug-Induced Liver Injury. Infect Drug Resist. 14, 3667-3671 (2021).
  32. Fu, Q., Jiang, Z. Z., Zhang, L. Y. Impairment of triptolide on liver mitochondria in isolated liver mitochondria and HL7702 cell line. Chinese J Integrat Med. 19 (9), 683-688 (2013).
  33. Tang, Y., et al. Salidroside attenuates CoCl2-simulated hypoxia injury in PC12 cells partly by mitochondrial protection. Eur J Pharmacol. 912, 174617(2021).
  34. Wang, X., et al. Rhodiola crenulata attenuates apoptosis and mitochondrial energy metabolism disorder in rats with hypobaric hypoxia-induced brain injury by regulating the HIF-1α/microRNA 210/ISCU1/2(COX10) signaling pathway. J Ethnopharmacol. 241, 111801(2019).
  35. Hou, Y., et al. Salidroside intensifies mitochondrial function of CoCl2-damaged HT22 cells by stimulating PI3K-AKT-MAPK signaling pathway. Phytomed Int J Phytother Phytopharmacol. 109, 154568(2023).
  36. Yu, H., Wangensteen, K., Deng, T., Li, Y., Luo, W. MRGPRX4 in Cholestatic Pruritus. Semin Liver Dis. 41 (3), 358-367 (2021).
  37. Rini, S. S., Wibawa, I. D. N. Evaluation and Management of Chronic Cholestatic Liver Diseases. Middle East J Digest Dis. 15 (3), 148-155 (2023).
  38. Srivastava, A. Progressive familial intrahepatic cholestasis. J Clin Exp Hepatol. 4 (1), 25-36 (2014).
  39. Samant, H., et al. Cholestatic liver diseases: An era of emerging therapies. World J Clin Cases. 7 (13), 1571-1581 (2019).
  40. Younossi, Z. M., et al. Obeticholic acid for the treatment of non-alcoholic steatohepatitis: interim analysis from a multicentre, randomised, placebo-controlled phase 3 trial. Lancet. 394 (10215), 2184-2196 (2019).
  41. Trauner, M., et al. Safety and Sustained Efficacy of the Farnesoid X Receptor (FXR) Agonist Cilofexor Over a 96-Week Open-label Extension in Patients With PSC. Clin Gastroenterol Hepatol. 21 (6), 1552-1560.e2 (2023).
  42. Sanyal, A. J., et al. Potent suppression of hydrophobic bile acids by aldafermin, an FGF19 analogue, across metabolic and cholestatic liver diseases. JHEP Rep Innovat Hepatol. 3 (3), 100255(2021).
  43. Iracheta-Vellve, A., et al. FXR and TGR5 Agonists Ameliorate Liver Injury, Steatosis, and Inflammation After Binge or Prolonged Alcohol Feeding in Mice. Hepatol Commun. 2 (11), 1379-1391 (2018).
  44. Han, H., Xu, L., Xiong, K., Zhang, T., Wang, Z. Exploration of Hepatoprotective Effect of Gentiopicroside on Alpha-Naphthylisothiocyanate-Induced Cholestatic Liver Injury in Rats by Comprehensive Proteomic and Metabolomic Signatures. Cell Physiol Biochem. 49 (4), 1304-1319 (2018).
  45. Lai, Q., et al. Mechanisms for Bile Acids CDCA- and DCA-Stimulated Hepatic Spexin Expression. Cells. 11 (14), 2159(2022).
  46. Li, X., et al. UDCA and CDCA alleviate 17α-ethinylestradiol-induced cholestasis through PKA-AMPK pathways in rats. Toxicol Appl Pharmacol. 311, 12-25 (2016).
  47. Sonne, D. P., et al. Postprandial Plasma Concentrations of Individual Bile Acids and FGF-19 in Patients With Type 2 Diabetes. J Clin Endocrinol Metabol. 101 (8), 3002-3009 (2016).
  48. Tang, X., et al. Target profiling analyses of bile acids in the evaluation of hepatoprotective effect of gentiopicroside on ANIT-induced cholestatic liver injury in mice. J Ethnopharmacol. 194, 63-71 (2016).
  49. Hao, J., et al. Gentiopicroside Ameliorated Ductular Reaction and Inflammatory Response in DDC-induced Murine Cholangiopathies Model. Curr Mol Pharmacol. , (2023).
  50. Han, S., et al. Probiotic Pediococcus pentosaceus Li05 Improves Cholestasis through the FXR-SHP and FXR-FGF15 Pathways. Nutrients. 15 (23), 4864(2023).
  51. Yan, M., et al. Diosgenin alleviates nonalcoholic steatohepatitis through affecting liver-gut circulation. Pharmacol Res. 187, 106621(2023).
  52. Huang, C., et al. Gentiopicroside improves non-alcoholic steatohepatitis by activating PPARα and suppressing HIF1. Front Pharmacol. 15, 1335814(2024).
  53. Xie, X., et al. Therapeutic effects of gentiopicroside on adjuvant-induced arthritis by inhibiting inflammation and oxidative stress in rats. Int Immunopharmacol. 76, 105840(2019).
  54. Peiseler, M., et al. Immune mechanisms linking metabolic injury to inflammation and fibrosis in fatty liver disease - novel insights into cellular communication circuits. J Hepatol. 77 (4), 1136-1160 (2022).
  55. Ren, G., et al. Synthesis and Biological Evaluation of Gentiopicroside Derivatives as Novel Cyclooxygenase-2 Inhibitors with Anti-Inflammatory Activity. Drug Des Devel Ther. 17, 919-935 (2023).
  56. Zhang, Y., Pan, S., Yi, S., Sun, J., Wang, H. Gentiopicroside ameliorates CCl4-induced liver injury in mice by regulating the PPAR-γ/Nrf2 and NF-κB/IκB signaling pathways. J Int Med Res. 51 (10), 3000605231204501(2023).
  57. Wu, L., et al. Lactobacillus acidophilus ameliorates cholestatic liver injury through inhibiting bile acid synthesis and promoting bile acid excretion. Gut microbes. 16 (1), 2390176(2024).
  58. Zhang, L., et al. Isoastragaloside I attenuates cholestatic liver diseases by ameliorating liver injury, regulating bile acid metabolism and restoring intestinal barrier. J Ethnopharmacol. 335, 118649(2024).
  59. Ma, X., et al. Paeoniflorin inhibited GSDMD to alleviate ANIT-induced cholestasis via pyroptosis signaling pathway. Phytomedicine. 134, 156021(2024).
  60. Zhang, Z., et al. Biliary NIK promotes ductular reaction and liver injury and fibrosis in mice. Nat Commun. 13 (1), 5111(2022).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Gentiopicroside KorumasKolestatik Karaci er HasarCDCA TedavisiSafra Asidi MetabolizmasOksidatif Stresnflamatuar Yan tWestern BlotKonfokal MikroskopiMolek ler Kenetlenme
Video yakında

İlgili makaleler