Method Article

Erişkin Xenopus'ta Erişilebilir Dokuların Kapsamlı Örneklemesi için Etkili Teknikler

DOI:

10.3791/68353

⸱

June 10th, 2025

 ,  , 
1Department of Systems Biology, Harvard Medical School

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu, kapsamlı bir Xenopus örnekleme protokolünün birinci parçasıdır. Örnek alınan dokular kalp ventrikülü, arteriyel gövde, sol karaciğer lobu, safra kesesi, akciğer, pankreas, dalak, gırtlak, yemek borusu, mide, bağırsaklar, testisler, yağ cisimleri, yumurta kanalı, eşleştirilmiş böbrekler, siyatik pleksus, cilt, timus ve tüm gözdür.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Xenopus , uzun zamandır omurgalı gelişimini ve hastalıklarını araştırmak için çok önemli bir model organizma olmuştur ve hücresel süreçler ve gen işlevi hakkında derin bilgiler sunmaktadır. Embriyonik Xenopus hakkındaki bilgi zenginliğine rağmen, özellikle kantitatif proteomik gibi modern yaklaşımlar için, yetişkin doku örneklemesi için standartlaştırılmış yöntemlerde önemli bir boşluk vardır. Bu çalışma, yetişkin Xenopus'ta birden fazla dokunun hızlı, kesin ve verimli bir şekilde örneklenmesi için kapsamlı bir protokol sunmaktadır. Protokol, diğer anuranlara kıyasla ince anatomik farklılıklarla ilgili zorlukları ele alarak, kurbağa diseksiyonunda sınırlı deneyime sahip olanlar için bile tekrarlanabilirliği sağlar. Bu protokol, numune tazeliğine öncelik vererek yüksek kaliteli biyokimyasal analizler için optimize edilmiştir. Bir saat içinde 18 adede kadar dokunun hızlı bir şekilde toplanmasını kolaylaştırıyoruz. Ek olarak, yöntemler perfüze edilmiş ve perfüze edilmemiş koşullara uygulanır ve bir dizi deneysel ihtiyaç için esneklik sağlar. Bu çalışma sadece Xenopus laevis ve tropicalis için kritik bir metodolojik boşluğu doldurmakla kalmıyor, aynı zamanda teknikleri benzer amfibi modellerine uyarlayan araştırmacılar için değerli bir kaynak olarak hizmet ediyor ve böylece karşılaştırmalı biyolojik ve evrimsel çalışmaların kapsamını ve güvenilirliğini artırıyor.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Xenopus, özellikle gelişimsel ve evrimsel bağlamlarda insan hastalıklarını incelemek için fareler, zebra balığı ve diğer model organizmalara göre benzersiz avantajlar sunar. Dış embriyonik gelişimi ve büyük, kolayca manipüle edilebilir embriyoları, farelerde zor olan, dahili olarak gelişen ve invaziv prosedürler gerektiren gerçek zamanlı gözlem ve deneysel müdahalelere (örneğin, doku greftleme, gen düzenleme) olanak tanır. Ek olarak, Xenopus'un üç odacıklı kalbi ve tetrapod uzuvları, doğuştan kusurlar 1, uzuv rejenerasyonu2 ve kardiyak gelişim3'ü incelemek için daha doğ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm deneyler Harvard Tıp Fakültesi IACUC (Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi IS 00001365_3) tarafından onaylanmış ve bunlara uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Numune almadan önce perfüzyon protokolü13 takip edilirse, adım 2.3'e geçin.

1. Hazırlık (perfüzyon olmadan)

  1. Araştırma kurumunun bu protokolde açıklanan ötenazi tekniğini onayladığından emin olun.
  2. 5 g/L MS-222 (trika metansülfonat) ve 5 g/L sodyum bikarbonattan oluşan bir çözelti hazırlayın (Malzeme Tablosuna bakınız). ≥7 olduğundan emin olmak için pH'ı kontrol edin.
    NOT: Haci....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokolün tüm adımları izlenerek, kalp ventrikülü, arteriyel gövde, sol karaciğer lobu, safra kesesi, akciğer, pankreas, dalak, gırtlak, yemek borusu, mide, bağırsaklar, testisler, yağ cisimleri, yumurta kanalı, eşleştirilmiş böbrekler, siyatik pleksus, cilt, timus ve tüm göz ötenaziden sonraki bir saat içinde temiz bir şekilde çıkarıldı (bkz. Şekil 1, Şekil 2, Şekil 3, Şekil 4

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada sunulan protokol, temel dokuların zamanında ve verimli bir şekilde toplanmasını sağlarken çeşitli deneyim seviyelerindeki kullanıcılar için esneklik sağlamak üzere tasarlanmıştır. Yeni kullanıcıların, dokuların sistematik olarak toplanmasını sağlamak için protokoldeki her adımı belirtildiği gibi takip etmeleri önerilir. Bununla birlikte, daha deneyimli kullanıcılar, belirli adımları atlamayı ve yalnızca ihtiyaç duydukları dokuları örneklemeyi tercih edebilir. Örneğin, mezenterin a.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların beyan etmek için rekabet eden çıkarları yoktur.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, NIH'nin OD R24 hibe ODO31956 tarafından desteklenmiştir. Ayrıca yardımları ve destekleri için Samantha Jalbert ve Jill Ralston'a teşekkür ederiz.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
1x PBS Corning21-040-CV
5x LED Işıklı ve Standlı Büyüteçamazon.comB08QJ6J8P1ışık ısı üretmemelidir
Tek Kullanımlık Transfer PipetleriVWR414004-036
İnce Uçlu Forseps DiseksiyonuFisher Scientific08-875
Diseksiyon makası keskin piont, düz 6.5 "VWR76457-374
Diseksiyon TepsisiFisher Scientific14-370-284strafor levhalar kabul edilebilir bir alternatiftir
Ötenazi kabıUS Plastic Ürün  2860alternatif opak kaplar kabul edilebilir
Ötenazi konteyner kapağıUS Plastic Ürün  3047
İridektomi Makası 6 "VWR470018-938iris makası kabul edilebilir bir alternatiftir
MS-222: Syncaine (eski adıyla tricaine)Pentair AESTRS1
Sıçan Diş Dokusu Forseps 5.5 inç, Paslanmaz ÇelikFisher ScientificS08100
Sodyum Bikarbonat, Toz, USPFisher Scientific18-606-333
Numune Forsepsleri, TırtıklıVWR82027-442
Fisher SinetificS99385'iDiseksiyon için T-Pimleri

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Duncan, A. R., Khokha, M. K. Xenopus as a model organism for birth defects—Congenital heart disease and heterotaxy. Semin Cell Biol. 51, 73(2016).
  2. Kawasumi-Kita, A., et al. hoxc12/c13 as key regulators for rebooting....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Xenopus Tissue SamplingAdult XenopusFrog DissectionQuantitative ProteomicsBiochemical AnalysisTissue CollectionAmphibian ModelsComparative BiologyPerfused TissuesReproducible Protocol

Related Articles