Yöntem makalesi

Orijinal Tümör Özelliklerini Koruyarak Hasta Kaynaklı Glioma Hücrelerinin İzolasyonu ve Uzun Süreli Kültürü için Optimize Edilmiş İş Akışı

DOI:

10.3791/68566

⸱

8 Temmuz 2025

 , 
1Beijing Institute for Brain Research, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, 2Chinese Institute for Brain Research

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, hasta kaynaklı glioma hücre hatlarının (PDGC'ler) oluşturulması, genetik ve fenotipik sadakatlerinin sağlanması için standartlaştırılmış bir protokol sunmaktadır. Bazal membran matris ekstrakt destekli yapışık kültür sistemi, hücre büyümesini ve homojenliğini artırarak bu modelleri ilaç taraması ve GBM araştırması için değerli kılar.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Glioblastoma (GBM) en agresif primer beyin tümörüdür, yüksek heterojenite ve standart tedavilere direnç ile karakterizedir. Geleneksel glioma hücre hatları genellikle hastaya özgü genetik ve fenotipik özellikleri koruyamaz ve translasyonel alaka düzeylerini sınırlar. Bunu ele almak için, serum içermeyen bir nöral kök hücre kültürü sistemi kullanarak 50 hasta kaynaklı glioma hücre hattı (PDGC) kurduk. Bu protokol, GBM hastalarından elde edilen tümör örneklerinin toplanmasını, işlenmesini ve uzun süreli kültürünü ana hatlarıyla belirtir ve temel moleküler özelliklerin korunmasını sağlar. Metodolojimiz, hücre canlılığını artıran ve yüksek verimli ilaç taramasını kolaylaştıran enzimatik doku ayrışması, kırmızı kan hücresi lizisi ve bazal membran matris özü destekli yapışık kültürü içerir. PDGC'lerin tüm genom ve transkriptomik dizileme ve immünofloresan boyama yoluyla karakterizasyonu, yaygın GBM genetik değişikliklerinin ve nöral kök hücre ve progenitör belirteçlerin tutulduğunu doğrular. Ek olarak, bu hücreler ksenogreft modellerinde tümörjenik potansiyel sergiler. Bu protokol, kültür koşullarını optimize ederek, terapötik keşif ve mekanik çalışmaları desteklemek için biyolojik olarak ilgili GBM modelleri oluşturmak için standartlaştırılmış bir çerçeve sağlar.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

En sık görülen primer intrakraniyal tümör olan glioma, genetik mutasyonlara uğramış nöral kök veya progenitör hücrelerden köken alır1. Dünya Sağlık Örgütü, gliomları patolojik ve moleküler özelliklere göre düşük dereceden yüksek derece 2'ye kadar derece1-4 olarak sınıflandırır. Derece 4 bir glioma olan glioblastoma (GBM), tüm gliomların yaklaşık %57'sini ve tüm primer malign santral sinir sistemi tümörlerinin %48'ini oluşturur3. GBM hastaları, medyan sağkalım süresi 2 yıldan az ve 5 yıllık sağkalım oranı sadece %5,4 olan kötü bir prognozla karşı karşıyadır4. Standart tedavi, maksimal güvenli rezeksiyonu takiben radyoterapi ve temozolomid kemoterapisini içerir5. Bu girişimlere rağmen, GBM, infiltratif doğası ve tedavilere karşı doğal direnci nedeniyle tedavi edilemez olmaya devam etmekte ve yeni tedavi yaklaşımlarına acil ihtiyaç yaratmaktadır.

Araştırmacılar, kanser gelişimi ve terapötik mekanizmaları incelemek için genellikle insan kaynaklı tümör hücre dizilerini model olarak kullanırlar. Bununla birlikte, serum içeren besiyerinde tutulan ve in vitro olarak yaygın olarak geçen klasik glioma hücre hatları, hasta tümörlerine kıyasla fenotipik özelliklerde ve genetik profillerde önemli değişiklikler gösterir 6,7,8. Sonuç olarak, bu hücre hatlarına dayanan klinik öncesi tarama modelleri genellikle klinik ortamlara etkili bir şekilde tercüme edilen terapötik hedefleri ve molekülleri tanımlamada başarısız olur. GBM tedavi başarısı, tümör heterojenliği ve plastisitesi ile daha da karmaşıktır9. Bu heterojenlik sadece transkriptomik alt tiplerde (örneğin pronöral, mezenkimal ) değil, aynı zamanda kurucu hücrelerin çeşitli gelişim durumlarında da kendini gösterir10. GBM, nörogelişimsel mekanizmaları kullanır ve tümör proliferasyonunu yönlendiren ve radyoterapi ve kemoterapiye karşı gelişmiş direnç sergileyen glioblastoma kök hücre (GSC) alt popülasyonlarını içerir11,12. Hasta kaynaklı glioma hücrelerinin serumsuz nöral kök hücre ortamında kültürlenmesi, kısmi GSC özelliklerini korurken orijinal tümörün mutasyon spektrumunu ve gen ekspresyon modellerini etkili bir şekilde korur8.

Nörosfer kültür modelleriyle karşılaştırıldığında, bazal membran matris ekstraktı destekli yapışkan kültür, daha kararlı ve hızlı hücre büyümesini teşvik ederek onu kimyasal ve genetik tarama için daha uygun hale getirir13. Bu yaklaşımı kullanarak, 50 hasta kaynaklı GBM hücre hatları oluşturduk ve bunları potansiyel terapötik stratejileri keşfetmek için tüm genom dizileme, transkriptomik dizileme ve FDA ilaç kütüphanesi taraması yoluyla karakterize ettik. Bu kaynak, önceki çalışmalarımızda yayınlanan ayrıntılı sonuçlarla glioma araştırmalarını ilerletmektedir14. Burada, hasta kaynaklı glioma hücre dizileri (PDGC'ler) geliştirmek için kullanılan metodolojiyi açıklıyoruz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, hastane işbirlikleri yoluyla elde edilen hasta kaynaklı glioma dokusu ve kan örneklerini kullanır. Tüm örnekleme prosedürleri ve deney protokolleri, Başkent Tıp Üniversitesi Pekin Tiantan Hastanesi Etik Komitesi'nden onay almıştır (KY 2020-093-02 ve KY 2014-021-02). Hastalar ameliyattan önce imzalı bilgilendirilmiş onam verir ve numuneler laboratuvara aktarılmadan önce tüm kimlik bilgileri anonimleştirilir. Araştırmacılar bu protokolü uygulamadan önce kurumsal etik kurullarından onay almalı ve hasta onayı almalıdır.

1. Numune işlemeden önce hazırlık

  1. Makas, cımbız ve diğer aletleri otoklavlayarak sterilize edin.
  2. 47.5 mL DMEM / F12, 500 μL N2, 1 mL B27, 500 μL 100x Penisilin / Streptomisin, 250 μL 100x glutamin ikamesi, 100 μL 2.5 M HEPES, 100 μL %30 Glikoz, 50 μL 50 mM β-merkaptoetanol, 1.5 mL 1 μg / mL epidermal büyüme faktörü (EGF), ve 1.5 mL 1 μg/mL bazik fibroblast büyüme faktörü (bFGF).
  3. 8.29 g amonyum klorür, 1 g potasyum bikarbonat ve 37 mg EDTA'yı suda çözerek ve ardından 1 L'ye seyrelterek 1x Kırmızı Kan Hücresi Lizis Tamponu (ACK) hazırlayın.
  4. Sterilize edilmiş aletleri, PBS tamponunu, atık kaplarını, santrifüj tüplerini ve diğer malzemeleri bir biyogüvenlik kabinine yerleştirin ve 30 dakika boyunca UV dezenfeksiyonu gerçekleştirin.
  5. Sıvı nitrojeni yalıtımlı bir kaba koyun.

2. Hasta numunesi toplama

NOT: Sonraki hücre kültürlerinin bakteriyel kontaminasyonunu önlemek için tüm doku toplama prosedürlerini sıkı steril koşullar altında gerçekleştirin. Tüm iş akışı boyunca aseptik tekniği koruyun.

  1. Ameliyat öncesi kan örnekleri toplayın ve hastanın beyninden tümör dokusunu çıkarın. Tümörü çevredeki normal dokudan ayırt etmenin zor olduğu büyük, oldukça infiltratif tümörler için, kritik fonksiyonel beyin alanlarını korurken peritümöral doku rezeksiyonunu en üst düzeye çıkarın. Yaklaşık 500-2.000mm3 tümör çekirdek dokusunu ayırın ve 10 mL hipotermik koruma ortamı içeren 15 mL santrifüj tüplerine yerleştirin.
  2. Numune tüplerini kapatın, bir buz kutusuna yerleştirin ve işlenmek üzere hızlı bir şekilde laboratuvara taşıyın.
    NOT: Numune toplama ve işleme arasındaki sürenin 6 °C'de 4 saati geçmediğinden emin olun. Numune toplama sırasında, yanmış dokuyu ve tümör nekrozu alanlarını dikkatlice dışlayın. Doku kesilerinin yüzeyi genellikle ameliyat sırasında kullanılan elektrikli bıçak tarafından kavrulur ve bu da kültürdeki hücre canlılığını tehlikeye atabilir.

3. Kan örneği işleme

  1. Kan örneği tüplerini 10 dakika boyunca 1.000 × g'da santrifüjleyin ve üst plazma tabakasını atın.
  2. Kalan beyaz kan hücresini ve kırmızı kan hücresi tabakasını 50 mL'lik bir santrifüj tüpüne aktarın. 10 mL 1x ACK ekleyin ve kırmızı kan hücrelerini parçalamak için oda sıcaklığında 5 dakika inkübe edin.
  3. Lizizi sonlandırmak için 40 mL PBS ekleyin, hafifçe karıştırın ve 1.000 × g'da 10 dakika santrifüjleyin.
  4. Süpernatanı atın, 3 mL 1x ACK ekleyin ve ikinci bir kırmızı kan hücresi lizis adımı için oda sıcaklığında 5 dakika inkübe edin.
  5. Lizizi sonlandırmak için 12 mL PBS ekleyin, hafifçe karıştırın ve 1.000 × g'da 10 dakika santrifüjleyin.
  6. Süpernatanı atın, periferik kan mononükleer hücre (PBMC) peletini 1 mL PBS'de yeniden süspanse edin, 1.5 mL'lik bir santrifüj tüpüne aktarın ve 10 dakika boyunca 510 × g'da santrifüjleyin.
  7. Süpernatanı atın, PBMC peletini sıvı nitrojen içinde dondurun ve -80 °C'de saklayın.

4. Tümör dokusu işleme

  1. Doku koruma solüsyonunu numune tüpünden çıkarın ve görünür kan pıhtılarını ve nekrotik dokuyu çıkarmak için dokuyu PBS'de yıkayın. Kalan doku üzerinde ikinci bir PBS yıkaması yapın.
  2. En sağlam doku kısmını kesin ve gece boyunca 4 °C'de %4 paraformaldehit (PFA) içinde sabitleyin.
    NOT: Sabit dokunun boyutu yaklaşık 10 mm'dir. Örnek küçükse bu adımı atlayın.
  3. 2-4 küçük doku parçası kesin, 1,5 mL'lik bir santrifüj tüpüne aktarın, sıvı nitrojen içinde dondurun ve -80 °C'de saklayın.
    NOT: Küçük doku parçalarının boyutu, dizileme için gereken DNA ve RNA miktarına bağlı olarak tipik olarak 5 ila 10 mm arasında değişir.
  4. Kalan tümör dokusunu 1,5 mL'lik bir santrifüj tüpüne koyun ve buz üzerinde tutarken makas kullanarak ince bir macun haline getirin.
  5. 1-3 mL hücre ayırma solüsyonu ekleyin ve kıyılmış dokuyu sindirim tüpüne aktarın. Dokuyu bir doku ayrıştırıcı kullanarak 37 ° C'de 16 dakika boyunca sindirin.
  6. Sindirimi durdurmak için 3x hacimde PBS ekleyin ve hücre süspansiyonunu 70 μm'lik bir hücre süzgeci ile bir santrifüj tüpüne aktarın. Hücre toplanmasını en üst düzeye çıkarmak için dokuyu küçük bir çubukla süzgeçten nazikçe öğütün. 510 × g'da 10 dakika santrifüjleyin ve süpernatanı çıkarın.
  7. 1-3 mL 1x ACK ekleyin ve kırmızı kan hücrelerini parçalamak için oda sıcaklığında 5 dakika inkübe edin. Lizizi durdurmak için 4x hacimde PBS ekleyin, hafifçe karıştırın ve süpernatanı çıkarmak için 510 × g'da 10 dakika santrifüjleyin.
  8. PDGC ortamındaki hücreleri yeniden süspanse edin ve kültür plakalarında hücre süspansiyonunun tohum kısmını yeniden süspanse edin. Plakaları 37 ° C'lik bir hipoksik inkübatöre yerleştirin. Kalan hücreleri% 10 DMSO içeren kültür ortamında dondurun.
    NOT: Tipik olarak, yaklaşık 10-20 mm ölçülerindeki doku örnekleri için, hücre süspansiyonunun yaklaşık 1/3 ila 1/10'unu 3 mL kültür ortamı içeren 6 cm'lik bir tabağa tohumlarız ve kalan hücreler 2-4 şişede dondurularak saklanır, hücre verimine bağlı olarak.
  9. Buz gibi soğuk PBS'ye 1:100 oranında bazal membran matris özütü ekleyerek plakaları kaplayın ve plakaları oda sıcaklığında 2 saat çalkalanan bir inkübatörde inkübe edin. PDGC kültür ortamını eklemeden önce PBS'yi atın.
    NOT: Sonraki tüm hücre geçişini ve kültürünü, bazal membran matrisi özü kaplı plakaları kullanarak gerçekleştirin.
  10. 2 gün sonra, hücre yapışmasını ve büyümesini sağlamak için kültürlenmiş hücreleri bazal membran matris özü kaplı plakalara aktarın.

5. Hücre kültürü ve geçişi

  1. Hücreler kültür plakalarına yapıştıktan sonra, yapışmayan hücreleri çıkarın ve her 2-3 günde bir kültür ortamını değiştirin veya tamamlayın.
    NOT: Yapışma kapasitesi farklı hücreler arasında değişir. Bazal membran matris ekstraktının varlığında bile, sürekli süspansiyon kültürü gerektiren BNI7-11 gibi hücrelerin küçük bir kısmı yapışmadan kalabilir. Ek olarak, bazı hücreler BNI20 gibi yarı yapışık bir büyüme paterni sergiler. Bu nedenle, hücre durumunun dikkatli bir şekilde gözlemlenmesi esastır. Yapışık olmayan hücreler için, asılı hücrelerde bir artış not edilebilir. Hücre agregaları koyu, pamuk benzeri yapılar olarak görünürse ve zaman içinde önemli bir değişiklik göstermezse, tipik olarak uzun süreli genişleme yeteneğine sahip değildirler.
  2. Hücreler birleştiğinde, hücreleri ayırmak için hücre ayrışma çözeltisi ekleyin. Ayrışmayı 3x PBS ile sonlandırın ve 250 × g'da 3 dakika santrifüjleyin. Hücreleri 1:2 ila 1:4 oranında geçirin. Kalan hücreleri% 10 DMSO içeren kültür ortamında dondurun.
  3. Kararlı bir hücre hattı oluşturmak için en az 10-20 nesil boyunca pas vermeye devam edin.
    1. Her geçiş sırasında hücre morfolojisini görüntülerle belgeleyin ve geçiş numaralarını kaydedin. İlk hücre donmasını ayrıntılı bilgilerle (örneğin, geçiş numaraları) net bir şekilde etiketleyin.
    2. Hücre hattı stabilize olduğunda, 2-3 tüp hücre peleti (300.000-1.000.000 hücre / tüp) toplayın ve -80 ° C'de saklayın.

6. Sonraki deneysel işlemler

  1. PFA ile sabitlenmiş numuneler için, gece boyunca fiksasyonun ardından, numuneleri %60 etanol, %70 etanol, %80 etanol, %90 etanol, %95 etanol ve her biri 40 dakika boyunca iki adet %100 etanol değişikliğine sıralı daldırma yoluyla kademeli bir dizi etanol çözeltisinden dehidre edin. Daha sonra, numuneleri her biri 40 dakika boyunca iki ksilen değişikliğinde temizleyin ve ardından her biri 40 dakika boyunca iki parafin çözeltisi değişikliği ile sızın. Son olarak, susuz kalmış ve sızmış numuneleri, sonraki kesitleme ve boyama için parafin bloklarına gömün15.
  2. -80 °C'de saklanan PBMC peletleri, tümör dokusu veya tümör hücresi örnekleri için, tüm genom dizilimi, ekzom dizilimi, toplu RNA dizilimi ve gerektiğinde tek hücreli RNA dizilimi dahil olmak üzere çeşitli omik çalışmalar için DNA ve RNA'yı çıkarın.
  3. Fare ksenogreft modeli oluşturma, yüksek verimli ilaç taraması, mekanizma araştırması ve diğer ilgili deneyler için kararlı PDGC hücre hatları kullanın.
    1. PDGC'lerin intrakraniyal ortotopik ksenogreft modelini oluşturmak için, hücreleri ayırın ve sayın, ardından bunları 100.000 hücre / μL'lik bir nihai konsantrasyona kadar 1: 1 bazal membran matris özütü ve buz gibi soğuk PBS karışımında yeniden süspanse edin. Bir mikroşırga ve standart bir stereotaksik alet kullanarak 6-8 haftalık immün yetmezliği olan farelerin sol striatumuna stereotaktik olarak 5 μL hücre süspansiyonu enjekte edin. Enjeksiyon koordinatlarını bregmaya göre aşağıdaki gibi ayarlayın: +0.5 mm ön-arka (AP), -1.9 mm medial-lateral (ML) ve -3.6 mm dorsal-ventral (DV).
    2. Lusiferaz eksprese eden PDGC'ler oluşturun ve tümör büyümesinin biyolüminesans görüntülemesi için intrakraniyal ksenogreftler oluşturun.
      1. Luciferase-tdTomato raportör genini lentiviral partiküllere paketleyin, ardından kararlı ekspresyon16 oluşturmak için PDGC'leri paketlenmiş lentivirüs ile enfekte edin.
      2. Enfeksiyondan sonra, lusiferaz eksprese eden stabil bir hücre popülasyonu elde etmek için tdTomato-pozitif hücreleri akış sitometrisi ile sıralayın.
      3. Görüntülemeden önce, 15 mg / mL D-lusiferin çözeltisi kullanarak 10 μL / g vücut ağırlığı dozunda intraperitoneal olarak D-lusiferin enjekte edin. Fareleri izofluran ile uyuşturun ve D-lusiferin enjeksiyonundan sonra 10 dakika bekleyin. Fareleri biyolüminesans görüntüleme sistemine yerleştirin. Görüntüleme sırasında pozlama süresini otomatik moda ayarlayın17.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Şekil 1, protokolün kapsamlı bir iş akışına genel bakışı sağlar. Hasta örnekleri periferik kan ve tümör çekirdek dokusunu içerir. Kan örnekleri, plazmayı çıkarmak için santrifüjlemeye tabi tutulur ve ardından sıralama analizleri için kontrol görevi gören PBMC'leri elde etmek için iki ACK lizis turu yapılır. Tümör örnekleri, küçük parçalar halinde işlenmeden önce kan pıhtılarını ve nekrotik alanları çıkarmak için PBS ile yıkanır. Çoklu doku fragmanları, gelecekteki DNA / RNA ekstraksiyonu ve ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

GBM'nin heterojenliği önemli tedavi zorlukları ortaya çıkarmaktadır. Konvansiyonel GBM hücre hatları genellikle homojen genetik arka planlar geliştirir ve serum içeren ortamda uzun kültürden sonra hasta tümör özelliklerini kaybeder ve bu da translasyon değerlerini sınırlar. GBM kültür koşullarının optimize edilmesi ve hasta numunesi işleme iş akışlarının standartlaştırılması, araştırmadaki sınırlı klinik kaynakları en üst düzeye çıkarmak için çok önemlidir. Kapsamlı bir GBM hücre modeli ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklanacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Çin Ulusal Anahtar Araştırma ve Geliştirme Programı (#2022YFA1103900'den JC'ye), Changping Laboratuvarı ve CAMS Tıp Bilimleri İnovasyon Fonu (CIFMS) (#2024-I2M-3-022'den JC'ye) tarafından finanse edilmiştir. J.C.'ye ek fonlar Çin Beyin Araştırmaları Enstitüsü'nden geliyor. Şekil 1 https://BioRender.com yılında oluşturulmuştur.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
70 μ m hücre süzgeciFalcon352350
Accutase hücre ayırma çözeltisiBioLegend423201
Amonyum klorürAladdin60-92-4
Anti-Sox2 antikoruMerckmilliporeAB5603
BeyotimeP0131
Anti-Nestin antikoruNOVUSile Antifade Montaj OrtamıNB100-1604
B27 vitamin takviyesi olmadanGibco12587010
BD FACSAria Füzyon Akış SitometresiBD Biosciences/
Hücre kültürü kabıNEST705001
D-Luciferin, Potasyum TuzuInvitrogenL2916
DMEM/F12GibcoC11330500BT
DMSOSinopharm30072418
EDTABBI Yaşam BilimleriA600107-0500
GlikozSangon BiotechA50991-0500
GlutaMAXGibco35050-061glutamin ikamesi
Hematoksilen-Eozin boyama KitiSolarbioG1120
HEPESBeyotimeST090
İnsan bFGFOrigeneTP750002
İnsan EGFNovoproteinC029-500μ g
HypoThermosol FRSBiolife Solutions101104hipotermik koruma ortamı
IsofluraneRWD Life ScienceR510-22-10
IVIS Lumina XR III PerkinElmer/biyolüminesans görüntüleme sistemi
MatrigelCorning356231bazal membran matris özü
MikroşırıngaHamilton80300
N2 TakviyesiGibco17502048
Nunclon Sphera 6 Kuyulu PlakaThermo Scientific174932ultra düşük bağlantı plakaları
ParaformaldehitSangon BiotechA500684-0500
PBS tamponuSolarbioP1010-100*2L
Penisilin / StreptomisinSolarbioP8420 / S8290
Potasyum bikarbonatSangon BiotechA501195-0500
RWD doku ayrıştırıcıRWD Yaşam BilimleriDSC-410
Standart stereotaksik aletRWD Yaşam Bilimleri68801
Doku örneği işleme tüpüRWD Yaşam BilimleriSCT-100
ve beta; -merkaptoetanolSigmaM3148-100mL
DAPI

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Weller, M., et al. Glioma. Nat Rev Dis Primers. 10 (1), 33(2024).
  2. Louis, D. N., et al. The 2021 WHO classification of tumors of the central nervous system: A summary. Neuro Oncol. 23 (8), 1231-1251 (2021).
  3. Miller, K. D., et al. Brain and other central nervous system tumor statistics, 2021. CA Cancer J Clin. 71 (5), 381-406 (2021).
  4. Ostrom, Q. T., Cote, D. J., Ascha, M., Kruchko, C., Barnholtz-Sloan, J. S. Adult glioma incidence and survival by race or ethnicity in the United States from 2000 to 2014. JAMA Oncol. 4 (9), 1254-1262 (2018).
  5. Horbinski, C., Berger, T., Packer, R. J., Wen, P. Y. Clinical implications of the 2021 edition of the WHO classification of central nervous system tumours. Nat Rev Neurol. 18 (9), 515-529 (2022).
  6. Pardal, R., Clarke, M. F., Morrison, S. J. Applying the principles of stem-cell biology to cancer. Nat Rev Cancer. 3 (12), 895-902 (2003).
  7. Pandita, A., Aldape, K. D., Zadeh, G., Guha, A., James, C. D. Contrasting in vivo and in vitro fates of glioblastoma cell subpopulations with amplified EGFR. Genes Chromosom Cancer. 39 (1), 29-36 (2004).
  8. Lee, J., et al. Tumor stem cells derived from glioblastomas cultured in bFGF and EGF more closely mirror the phenotype and genotype of primary tumors than do serum-cultured cell lines. Cancer Cell. 9 (5), 391-403 (2006).
  9. Yabo, Y. A., Niclou, S. P., Golebiewska, A. Cancer cell heterogeneity and plasticity: A paradigm shift in glioblastoma. Neuro-Oncol. 24 (5), 669-682 (2021).
  10. Neftel, C., et al. An integrative model of cellular states, plasticity, and genetics for glioblastoma. Cell. 178 (4), 835-849.e21 (2019).
  11. Bao, S., et al. Glioma stem cells promote radioresistance by preferential activation of the DNA damage response. Nature. 444 (7120), 756-760 (2006).
  12. Chen, J., et al. A restricted cell population propagates glioblastoma growth after chemotherapy. Nature. 488 (7412), 522-526 (2012).
  13. Pollard, S. M., et al. Glioma stem cell lines expanded in adherent culture have tumor-specific phenotypes and are suitable for chemical and genetic screens. Cell Stem Cell. 4 (6), 568-580 (2009).
  14. Wu, M., et al. Multi-omics and pharmacological characterization of patient-derived glioma cell lines. Nat Commun. 15 (1), 6740(2024).
  15. Zhanmu, O., Yang, X., Gong, H., Li, X. Paraffin-embedding for large volume bio-tissue. Sci Rep. 10 (1), 12639(2020).
  16. Wang, X., McManus, M. Lentivirus production. J Vis Exp. (32), e1499(2009).
  17. Sun, A., et al. Firefly luciferase-based dynamic bioluminescence imaging: A noninvasive technique to assess tumor angiogenesis. Neurosurgery. 66 (4), 751-757 (2010).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Gliom H cre K lt rT m r rne i lemeSerums z K lt rN ral K k H crelerEnzimatik Doku DisosiasyonuEritrosit LiziziBazal Membran MatrisiT m Genom Dizilememm nofloresan Boyama
Video yakında

İlgili makaleler