Method Article

İnsan Renal Arteriyel Dallarının Çok Düzeyli Mikrodiseksiyonu ve Fonksiyonel-Yapısal Profillemesi

DOI:

10.3791/68579

⸱

September 5th, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institute of Cardiovascular Sciences, School of Basic Medical Sciences, Peking University Health Science Center; State Key Laboratory of Vascular Homeostasis and Remodeling, Peking University, 2Beijing Key Laboratory of Cardiovascular Receptors Research, 3Department of Cardiology and Institute of Vascular Medicine, Peking University Third Hospital, Peking University, 4Department of Urology, Peking University First Hospital; Institute of Urology, Peking University; Beijing Key Laboratory of Urogenital Diseases (Male) Molecular Diagnosis and Treatment Center, National Urological Cancer Center, 5Institute of Cardiovascular Diseases, First Affiliated Hospital of Dalian Medical University, 6NHC Key Laboratory of Cardiovascular Molecular Biology and Regulatory Peptides, Peking University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu makale, insan renal arter dallarının izolasyonu ve fonksiyonel değerlendirmesi için adım adım bir protokol sunmakta ve farmasötik geliştirme için klinik öncesi çalışmaları kolaylaştırmaktadır.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Renal vasküler disfonksiyon, akut böbrek hasarı, renal iskemi ve hipertansiyon dahil olmak üzere birçok klinik durumun patogenezinde kritik bir rol oynar ve klinik yönetimde önemli zorluklar sunar ve hasta sonuçlarını olumsuz etkiler. İntrarenal arterlerin izolasyonu ve fonksiyonel karakterizasyonu, özellikle böbrek hasarı ile ilişkili renal vasküler disfonksiyonun altında yatan mekanizmaların aydınlatılması ve hedefe yönelik terapötik gelişimin yönlendirilmesi için çok önemlidir. Klinik önemine rağmen, farklı dallanma seviyelerinde insan intrarenal arterlerini izole etmek ve fonksiyonel olarak değerlendirmek için standartlaştırılmış yaklaşımlar az gelişmemiştir. Bu protokol, intrarenal arter dallarının sistematik izolasyonu ve multimodal değerlendirmesi için hem fizyolojik hem de patolojik koşullar altında fonksiyonel ve yapısal değerlendirmeleri içeren kapsamlı bir çerçeve sağlar. Metodoloji üç temel bileşeni kapsar: (1) yapısal doğrulama için Hematoksilen-Eozin (H & E) boyaması ile birlikte donör böbreklerden intrarenal arterlerin hassas anatomik tanımlanması ve mikrodiseksiyonu; (2) ölçüm tekrarlanabilirliğini ve güvenilirliğini artırmak için tel miyografisinde titiz normalizasyon prosedürleri; ve (3) hassas tel miyografi teknikleri kullanılarak vazomotor yanıtların kantitatif analizi. Normalizasyon, arteriyel segmentlerin artımlı gerilmesinin, aktin-miyozin örtüşmesini en üst düzeye çıkarmak için optimal bir dinlenme gerilimi oluşturduğu ve böylece pik kasılma tepkilerini ortaya çıkardığı kas uzunluğu-gerilim ilişkisine dayanır. Tel miyografide, izole edilmiş damar segmentleri iki paralel tel arasına asılarak damar gerginliğinin hassas bir şekilde ölçülmesini sağlar. Bu teknik, titiz normalizasyon protokolleri uygulayarak, çeşitli patofizyolojik durumlar ve farmakolojik müdahaleler arasında vasküler reaktivitenin tekrarlanabilir ve güvenilir bir şekilde ölçülmesini sağlar.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Böbrek, metabolik atıkların temizlenmesi, elektrolit dengesi ve sıvı regülasyonu yoluyla insan homeostazını korumaktan sorumlu hayati bir organdır - son derece yüksek kan akışı gerektiren işlevler. Fizyolojik koşullar altında, böbrekler her dakika kalp tarafından pompalanan toplam kan hacminin yaklaşık% 25'ini alır (kalp debisi), sistemik kan akışındaki önemli rollerini ve genel fizyolojik dengenin korunmasında böbrek perfüzyonunun kritik önemini vurgular1. Renal arteriyel sistem, sistemik hemodinamik değişikliklere uyum sağlarken GFR'yi korumak için bu büyük kan dağıtımını hassas bir şekilde düzenler. Sonuç ol....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada açıklanan protokol ve örnekler, Pekin Üniversitesi Birinci Hastanesi Üroloji Bölümü tarafından gözden geçirilerek onaylanmıştır (onay No. 2023yan500-002) ve Helsinki Deklarasyonu'na uygun olarak yürütülmüştür. Tüm katılımcılar katılımdan önce yazılı bilgilendirilmiş onam verdiler.

1. Çözelti hazırlama

  1. 119.0 mM NaCl, 4.7 mM KCl, 2.5 mM CaCl2, 1.0 mM MgCl2, 25.0 mM NaHCO3, 1.2 mM KH2PO4 ve pH 7.4'te 11.0 mM D-glikoz içeren Krebs-Ringer çözeltisi (Krebs) hazırlayın.
  2. 64.0 mM NaCl, 60 mM KCl, 2.5 mM CaCl2

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İnsan böbreğinde, interlobar arter, karşılık gelen damarı ile birlikte böbrek piramitleri arasında uzanır. Nispeten kalın bir vasküler duvar ve önemli yağ dokusu kaplaması ile karakterize edilen bu arter, özellikle dikkatli bir diseksiyon gerektirir. İzolasyon işlemi sırasında aşırı kuvvet uygulamamak için çevredeki yağ dokusu titizlikle çıkarılmalıdır (Şekil 1C).

Kavisli arter anatomik olarak kortikomedüller bileşkede konumlandırılmıştır ve böbrek piramitlerinin .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Renal perfüzyon stabilitesi hem kritik bir terapötik hedef hem de hemodinamik patofizyolojiye açılan bir pencere olarak hizmet eder39,40. Taze nefrektomi örneklerinden insan renal arterlerinin hiyerarşik izolasyonu ve fonksiyonel değerlendirmesi için mevcut metodolojilerdeki önemli boşlukları ele alan bir protokol sunuyoruz. Kadavra örnekleri veya hayvan modelleriyle sınırlı mevcut yaklaşımların aksine, tekniğimiz hem morfolojik .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, bu çalışmaya katıldıkları için gönüllülere teşekkür eder ve ayrıca Pekin Üniversitesi Birinci Hastanesi Üroloji Bölümü'ndeki cerrahi personele böbrek dokusu sağladıkları için teşekkür eder. Bu çalışma Pekin Belediye Doğa Bilimleri Vakfı (F251013'dan Y. Z.'ye, 7232096'dan Y. L.'ye); Çin Ulusal Bilim Vakfı (82325004, 92168114 Y. Z.'ye, 82170422 Y. L.'ye); Çin Ulusal Anahtar Ar-Ge Programı (2021YFF0501401, 2018YFA0800501 - NZ, 2021YFF0501404 - YL, 2023YFC2415500 - LY); Pekin Üniversitesi Üçüncü Hastanesi Devlet Vasküler Homeostaz ve Yeniden Modelleme Anahtar Laboratuvarı Araştırma Projesi (Pekin Üniversitesi; 2024-VHR-SY-07 - Y....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Asetilkolin klorürSigma-Aldrich, Merck, Darmstadt, AlmanyaA6625 Serisi
Siyah tabanlı kültür tabağıDanimarka Myo Technology, Aarhus, Danimarka300412
CaCl2Sangon Biotech Co., Ltd., Şanghay, ÇinA501330
D-glikozSangon Biotech Co., Ltd., Şanghay, ÇinA610219
Dumont forsepsDanimarka Myo Technology, Aarhus, Danimarka300413
Geuder diseksiyon makasıDanimarka Myo Technology, Aarhus, Danimarka400431
Kılavuz telDanimarka Myo Technology, Aarhus, Danimarka400447Çap 40 &mikro; m
KartalSangon Biotech Co., Ltd., Şanghay, ÇinA100395
KH2PO4Sangon Biotech Co., Ltd., Şanghay, ÇinA100781
LabChart Professional sürüm 8.3 ADInstruments, Avustralya-
MgCl2· 6H2OSangon Biotech Co., Ltd., Şanghay, ÇinA100288
Çoklu miyograf sistemi Danimarka Myo Technology, Aarhus, Danimarka620 DK.
NaClSangon Biotech Co., Ltd., Şanghay, ÇinA100241
NaHCO3Sangon Biotech Co., Ltd., Şanghay, ÇinA100865
FenilefrinSigma-Aldrich, Merck, Darmstadt, AlmanyaP6126

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Molema, G., Aird, W. C. Vascular heterogeneity in the kidney. Semin Nephrol. 32 (2), 145-155 (2012).
  2. Jentzer, J. C., et al. Contemporary management of severe acute kidney injury and refractory cardiorenal syndrome: Jacc council perspectives.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Renal Arterial BranchesMicrodissection TechniqueWire MyographyVascular DysfunctionIntrarenal Artery IsolationVasomotor ResponsesMuscle Length TensionHematoxylin Eosin StainingPhenylephrine ContractionArterial Normalization

Related Articles