Araştırma makalesi

Neme Maruz Kalan Yanık Merheminin Diyabetik Farelerde Yara Neovaskülarizasyonu ve Plazma Ekzozomal mir-31-5p Üzerine Etkileri

623 görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/68649

⸱

26 Ağustos 2025

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Endocrinology, The Affiliated Hospital of Youjiang Medical University for Nationalities, 2Department of Cardiology, General Hospital of Central Theater Command, 3Key Laboratory for the Prevention and Treatment of Diabetic Chronic Wounds in Baise City, 4Key Laboratory of Metabolic Diseases in Baise City

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Bu makale, neme maruz kalan yanık merheminin diyabetik yara neovaskülarizasyonunu ve plazma ekzozomal mir-31-5p ekspresyonunu dinamik olarak düzenleyerek diyabetik yara onarımını nasıl desteklediğini açıklamaktadır.

Özet

Neme maruz kalan yanık merhemi (MEBO), kronik diyabetik yaraları tedavi etmek için kullanılan geleneksel bir Çin tıbbıdır; Bununla birlikte, altta yatan mekanizma belirsizdir. Son kanıtlar, yara neovaskülarizasyonunda eksozomların ve fonksiyonel miRNA'ların rolünü göstermektedir. Bu çalışmada, diyabetik farelerde MEBO'nun yara neovaskülarizasyonu ve plazma ekzozomal mir-31-5p (pExo-mir-31-5p) ekspresyonu üzerine etkilerini araştırmayı amaçladık. Toplam 120 C57BL / 6 faresi rastgele olarak diyabetik olmayan bir kontrol grubuna (n = 24) ve streptozotosin (n = 96) tarafından indüklenen bir diyabetik gruba ayrıldı ve bu ayrıca diyabetik kontrol, MEBO, beifuxin ve MHY1485 gruplara (n = 24) randomize edildi. Tam kat deri rezeksiyonu modelleri ile beş grup oluşturuldu ve bunlar sırasıyla fizyolojik salin, serum fizyolojik ile MEBO, beifuxin ve MHY1485 ile tedavi edildi. 1, 7, 13 ve 18. günlerde, yara dokularında VPS4a ve Rab27a mRNA ve protein seviyeleri ile birlikte yara kapanma hızı, mikrodamar yoğunluğu ve pExo-mir-31-5p ekspresyon seviyeleri sırasıyla ImageJ, hematoksilen-eozin (HE) boyama, kantitatif gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (qPCR) ve western blot (WB) kullanılarak analiz edildi. Ayrıca, VPS4a, Rab27a proteini, pExo-mir-31-5p ekspresyonu ile mikrodamar yoğunluğu arasındaki korelasyonlar analiz edildi. MEBO'nun diyabetik farelerde yara onarımını desteklediğini bulduk (p < 0.050). Yara iyileşmesinin erken ve orta evrelerinde yara neovaskülarizasyonunu arttırdı, ancak daha sonraki aşamada bunu inhibe etti (p < 0.050). MEBO, yara dokularında Vps4a ve Rab27a mRNA ve protein ekspresyonunu ve ayrıca iyileşmenin erken ve orta aşamalarında pExo-mir-31-5p'yi yukarı regüle ederken, sonraki aşamada bunları aşağı regüle etti (p < 0.050). Ayrıca, MEBO ile tedavi edilen farelerde VPS4a, Rab27a proteini, pExo-mir-31-5p ekspresyonu ve mikrodamar yoğunluğu pozitif korelasyon gösterdi (p < 0.050). Sonuç olarak, MEBO, diyabetik farelerde yara neovaskülarizasyonunu ve pExo-mir-31-5p ekspresyonunu dinamik olarak düzenleyerek klinik uygulaması için yeni teorik destek sağlar.

Giriş

Yaşlı hastalarda diabetes mellitus prevalansı yüksektir ve her yıl artmaktadır. Hastalık, hasta sağlığı, işlevi ve genel yaşam kalitesi üzerinde zararlı bir etkiye sahip olan kronik diyabetik yaralar (CDW'ler) ile ilişkilidir1. Tipik olarak, yara kapanması dört farklı aşamayı içerir: hemostaz, iltihaplanma, proliferasyon ve reepitelizasyon2. Bunlardan en önemlisi proliferatif fazdır. Erken proliferatif faz sırasında, kılcal endotel hücreleri çoğalır ve yaraya göç eder, yeni damarlar filizlenir ve karmaşık bir ağ oluşturur3. Bununla birlikte, yara onarımının sonraki aşamalarında, kılcal lüminenin çoğu tıkanmaya uğrar ve azınlık küçük arterlere ve damarlara geçiş yapar. CDW'li hastalarda, doku kaybı, nekroz ve kangren ve farklı seviyelerde inflamasyon ve hiperglisemi, anjiyogenez ve antianjiyogenez arasındaki dinamik dengeyi bozarak, özellikle anjiyogenez bozulduğunda yara iyileşmesini geciktirir 4,5,6. Neme maruz kalan yanık merhemi (MEBO), CDW'leri tedavi etmek için kullanılan geleneksel bir Çin tıbbıdır, ancak mekanizması belirsizliğini korumaktadır. Son zamanlarda, çok sayıda çalışma, eksozom yüklü miRNA'ların anjiyogenezi teşvik edebileceğini ve böylece diyabetik yara iyileşmesini destekleyebileceğini göstermiştir 7,8. Bununla birlikte, MEBO ile eksozom tarafından taşınan miRNA'lar arasındaki ilişkiyi araştıran az sayıda çalışma vardır. Bu nedenle, MEBO'nun CDW'lerde anjiyogenezi uyardığı mekanizmanın eksozom ve fonksiyonel miRNA perspektifinden ortaya çıkarılmasına ihtiyaç vardır.

Eksozomlar, canlı hücreler tarafından salınan, 30-200 nm boyutunda, yoğunluğu 1.1-1.2 g/mL olan ve CD81 ve tümör duyarlılığı 101 (TSG101) gibi işaretleyici proteinler içeren küresel membranöz veziküllerdir.9. Eksozom üretimi ve sekresyonu, transport (ESCRT) bağımlı ve ESCRT'ye bağımlı olmayan yollar için gerekli endozomal sıralama kompleksi olarak kategorize edilir. Bu yolaklar içindeki en kritik düzenleyiciler, vakuolar protein sınıflandırması 4 homolog a (VPS4a) ve Ras ile ilişkili protein Rab-27a'dır (Rab27a)10,11,12. Vps4a, eksozomun boyutunu ve eksozom oluşum hızını düzenleyen ESCRT'ye bağlı membran yeniden şekillenme sürecini katalize eden bir ATPaz görevi görür13,14. Rab27a, multiveziküler cisimlerin plazma zarına15 kenetlenmesini düzenleyen önemli bir küçük GTPazdır. Eksozom sekresyonu, rapamisin 17'nin ATP yapısal alanına rekabetçi MHY1485 bağlanma ile aktive edilen rapamisin kompleksi 1'in (mTORC1)16 memeli hedefi tarafından negatif olarak düzenlenir. Genel olarak, MHY1485 dolaylı olarak eksozomların sentezini ve salgılanmasını engelleyebilir. Eksozomlar hemen hemen tüm vücut sıvılarında tespit edilebilir. Plazma eksozomları, diğer vücut sıvılarından türetilen eksozomlardan daha üretkendir18. Ayrıca eksozomlar taşıdıkları nükleik asitleri bozunmadankorurlar 19.

MiRNA'lar, hücresel aktiviteyi düzenleyen küçük, kodlamayan RNA molekülleridir20. Eksozomlar, yara anjiyogenezini arttırmak için çok önemli olan çok sayıda miRNA'da, özellikle mir-126, mir-125a ve mir-31-5p'de bol miktarda keşfedilmiştir. Önceki bir çalışma, mir-126 aşırı eksprese eden kemik iliği mezenkimal kök hücrelerinden türetilen eksozomların, mir-12621'i transfer ederek in vitro olarak insan göbek damarı endotel hücrelerinin proliferasyonunu, göçünü ve tüp oluşumunu desteklediğini göstermiştir. Başka bir çalışma, insan adipoz kaynaklı mezenkimal kök hücreler tarafından salgılanan eksozomların mir-125a'yı endotel hücrelerine aktardığını ve yaralarda9 anjiyojenik inhibitör delta benzeri 4'ü baskılayarak anjiyogenezi desteklediğini göstermiştir. Yan ve ark. süt eksozomlarına yüklenen mir-31-5p'nin in vitro olarak endotel hücre fonksiyonlarını iyileştirdiğini, anjiyogenezi desteklediğini ve in vivo22 diyabetik yara iyileşmesini artırdığını bildirmiştir. Bu miRNA'lar arasında, mir-31-5p, diyabetik fare yaralarında normal fare yaralarına kıyasla önemli ölçüde aşağı regüle edilen tek miRNA'ydı22.

MEBO, CDW'ler23,24 gibi refrakter yaraları tedavi etmek için kullanılabilen yağlı bir merhemdir. Bununla birlikte, MEBO'nun yara iyileşmesini teşvik etme mekanizması açıklığa kavuşturulmamıştır. Önceki çalışmalar, MEBO'nun diyabetik sıçanlarda vasküler endotelyal büyüme faktörü ekspresyonunu yukarı regüle ederek yara neovaskülarizasyonunu desteklediğini göstermiştir25. Bununla birlikte, sadece birkaç çalışma bu konuyu eksozom tarafından taşınan miRNA'lar perspektifinden ele almıştır. Bu çalışmada, MEBO'nun CDW'ler üzerindeki etkilerini araştırmak için, streptozotosin (STZ) ve yüksek yağlı bir diyet kullanarak diyabetik farelerde tam kalınlıkta bir yara modeli indükledik. MEBO'nun diyabetik farelerde yara iyileşmesini önemli ölçüde hızlandırdığını gösterdik. Ayrıca, MEBO'nun mikrodamar yoğunluğu, pExo-mir-31-5p'nin ekspresyon seviyeleri, VPS4a ve Rab27a mRNA ile birlikte yara dokularında protein üzerindeki etkilerini inceledik. Bu nedenle, MEBO'nun diyabetik farelerde yara anjiyogenezini düzenlemek için pExo-mir-31-5p'yi düzenleyerek yara iyileşmesini desteklediğini varsaydık. Çalışma tasarımının şematik bir özeti Şekil 1'de sunulmuştur.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm hayvan deney protokolleri, Youjiang Tıp Üniversitesi Milliyetler için Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylandı, Baise, Çin (2018051501). Spesifik patojen içermeyen (SPF) erkek C57BL / 6 fareler (7 haftalık), Youjiang Milliyetler Tıp Koleji'nin SPF Laboratuvar Hayvanları Merkezi'ne yerleştirildi ve sıradan veya yüksek yağlı bir diyet ve temiz su ile beslendi. Çalışma boyunca, hayvan besleme odasının sıcaklığı 23 °C ila 25 °C arasında tutuldu, nem %40 ila %60 ve aydınlık/karanlık döngüsü 12 saat idi. Hayvan bakımı, ABD Ulusal Sağlık Enstitüleri ve Çin Ulusal Sağlık Enstitüsü'nün (Pekin, Çin) yönergelerine uygun olarak sağlandı. Tüm cerrahi girişimler anestezi altında sodyum pentobarbital (%0.3, 50 mg/kg) ile laboratuvarımızda oluşturulan standart bir protokol kullanılarak yapıldı. Kullanılan hayvan sayısını azaltmak ve hayvan rahatsızlığını en aza indirmek için tüm çabalar gösterildi. Bu raporun tüm bölümleri, hayvan araştırmalarının raporlanması için ARRIVE Kılavuzuna uygundur.

Fare yara modeli ve tedavisi
Toplam 120 fare, diyabetik olmayan bir kontrol (NDB-CTR; n = 24) veya diyabetik (n = 96) gruba rastgele atandı. İnsan tip 2 diyabetini simüle etmek için, diyabetik gruptaki fareler 4 hafta boyunca yüksek yağlı, rafine şekerli bir diyetle beslendi ve daha sonra 16 saat boyunca oruç tuttuktan sonra 2 ardışık gün boyunca günde bir kez STZ (100 mg / kg) ile intraperitoneal olarak enjekte edildi (ip). Açlık kan şekeri düzeyleri STZ enjeksiyonundan sonraki 5. ve 6. günlerde ölçüldü. Açlık kan şekeri değerleri iki kez 16.7 mmol / L'den yüksek olan ve polifaji, polidipsi, poliüri ve kilo kaybı gibi semptomları olan fareler başarılı diyabet modelleri olarak kabul edildi26. 1 hafta sonra, dorsal kıllar traş edildi ve intraperitoneal sodyum pentobarbital (% 0.3, 50 mg / kg) uygulamasını takiben her farenin arkasında yuvarlak tam kalınlıkta bir kutanöz yara (çap = 15 mm) oluşturuldu. Diyabetik gruptaki fareler rastgele olarak MEBO, BFX (beifuxin), DB-CTR (diyabetik kontrol) veya MHY1485 (MHY) gruplarına atandı. MEBO ve BFX gruplarındaki fareler, yaraya günde bir kez uygulanan MEBO (0.2 g / cm2) ve BFX jel (0.2 g / cm2) ile tedavi edildi. Jenerik adı sığır bazik fibroblast büyüme faktörü jeli olan BFX jeli, kronik yaraları tedavi etmek için kullanılan topikal bir ilaçtır27. NDB-CTR, DB-CTR ve MHY gruplarındaki fareler fizyolojik salin ile tedavi edildi. MHY grubu ayrıca art arda 2 gün boyunca MHY1485 (10 mg / kg, ip) ile tedavi edildi. Diyabetik farelere, kan şekeri seviyesini kontrol etmek için günde bir kez 2-4 IU / kg'lık bir dozda deri altına insülin enjekte edildi.

Örnek toplama
1, 7, 13 ve 18. günlerde, her gruptaki altı fare, servikal çıkık ile ötenazi için rastgele seçildi ve yara da dahil olmak üzere halka şeklindeki epidermal doku örnekleri, steril doku makası ile yara kenarından 0,5 cm uzakta alındı. Daha sonra yara dokuları HE boyama, qPCR analizi ve WB testleri için toplandı. Sodyum pentobarbital anestezi altında retro-orbital yöntem kullanılarak DB-CTR ve MEBO gruplarındaki farelerden kan örnekleri alındı. Kan örnekleri antikoagülan tüplerde heparin ile karıştırıldı ve plazma süpernatanı geri kazanmak için 15 dakika boyunca 3.000 x g'da santrifüj edildi. Tüm numuneler -80 °C'de saklandı. Yara kapanma oranını hesaplamak için, yanda dereceli bir ölçek ile sabit bir zaman noktasında ve eşit mesafede yara iyileşmesinin resimlerini çekmek için bir dijital kamera kullanıldı. Yara alanı ImageJ yazılımı kullanılarak ölçüldü. Yara kapanma oranı şu şekilde hesaplandı:

yara kapanma oranı (%) = [W1-Wn] / W1 x %100

burada W1 ve Wn, sırasıyla 1. ve n günlerindeki yara bölgelerine atıfta bulunur.

Histopatolojik tahlil
Patolojik yara iyileşmesini dinamik olarak gözlemlemek için HE boyaması yapıldı. 16 saat boyunca% 4'lük bir paraformaldehit çözeltisi ile fiksasyondan sonra, yara dokuları kurutuldu, parafine gömüldü ve daha sonra 3 μm'lik bölümlere dilimlendi. Doku preparatlarına HE boyama yapıldı. Yara dokularının mikro damar yoğunluğunu araştırmak için, doku slaytları optik mikroskop kullanılarak görüntülendi. Her bir numunenin mikro damar yoğunluğunu ölçmek için, 10x mikroskop altında en yüksek kılcal yoğunluğa sahip alanı seçtik, ardından 20x mikroskop altında örtüşmeyen üç alanı seçtik ve fotoğrafladık. Mikrodamar yoğunlukları ImageJ kullanılarak hesaplandı ve ortalaması alındı.

Plazma eksozomlarının izolasyonu ve karakterizasyonu
Ultrasantrifüjleme, plazma eksozomlarını küçük modifikasyonlarla yayınlanmış bir protokole göre izole etmek için gerçekleştirildi28. Kısaca 2 mL plazma 2.000 x g'da 4 °C'de 30 dakika santrifüj edildi. Süpernatant, daha büyük vezikülleri çıkarmak için 4 ° C'de 4 ° C'de 10.000 x g'da tekrar santrifüjlendi. Süpernatant, 0.45 μm'lik bir filtre membranından süzüldü ve süzüntü toplandı. Süzüntü daha sonra 70 dakika boyunca 4 ° C'de 100.000 x g'da santrifüjlendi. Süpernatan çıkarıldıktan sonra, pelet 10 mL önceden soğutulmuş 1x PBS ile yeniden süspanse edildi ve 70 dakika boyunca 4 °C, 100.000 x g'da santrifüjlendi. Süpernatan çıkarıldı ve pelet 150 μL önceden soğutulmuş 1x PBS ile yeniden süspanse edildi ve -80 °C'de saklandı. Yukarıda toplanan plazma eksozomlarını doğrulamak için, eksozomların morfolojisini belirlemek için transmisyon elektron mikroskobu (TEM), eksozomların boyutunu ve konsantrasyonunu analiz etmek için bir nano akış sitometri sistemi ve eksozom belirteçleri CD81 ve TSG101'in ekspresyon seviyelerini tespit etmek için WB kullandık.

RNA ekstraksiyonu, ters transkripsiyon (RT) ve qPCR
Vps4a, Rab27a ve pExo-mir-31-5p'nin mRNA ekspresyon seviyelerini ölçmek için qPCR yapıldı. RNA ekstraksiyon reaktifi kullanılarak toplam RNA'yı çıkarmak için yara dokuları toplandı. 400-700 ng/μL arasında bir toplam RNA konsantrasyonu kabul edilebilir olarak kabul edildi. RNA örnekleri, üreticinin talimatlarına göre dsDNaz ile ters transkriptaz kullanılarak cDNA'ya ters transkribe edildi. qPCR, SYBR Green qPCR Mix (ROX Yok) kullanılarak gerçekleştirildi. mir-31-5p'ye gelince, plazma eksozomlarından RNA, mini kit kullanılarak ekstrakte edildi, Birinci İplikli cDNA Sentez Kiti kullanılarak ters kopyalandı ve SYBR Green qPCR Master Mix kullanılarak amplifiye edildi. mRNA'ların ve miRNA'ların ekspresyonları, sırasıyla β-aktin ve cel-mir-39'a göre 2-ΔΔCt yöntemi kullanılarak analiz edildi. Kullanılan primerler Tablo 1'de sunulmuştur.

Batı lekesi
WB testi, Vps4a ve Rab27a proteinlerinin ekspresyon seviyelerinin yanı sıra eksozom belirteçleri CD81 ve TSG101'in seviyelerini tespit etmek için kullanıldı. Yara dokularının ve plazma eksozomlarının toplam protein seviyeleri RIPA lizis tamponu ile ekstrakte edildi ve protein konsantrasyonu Bikinkoninik Asit Protein Test Kiti ile belirlendi. Toplam 50 μg protein sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid ile ayrıldı. Poliviniliden florür membranları üzerine lekelendikten sonra, membranlar sığır serum albümini ile bloke edildi, daha sonra Vps4a (1:3000), Rab27a (1:1000), gliseraldehit-3-fosfat dehidrojenaz (GAPDH) (1:5000), CD81 (1:3000), TSG101 (1:3000) antikorları ile gece boyunca 4 ° C'de inkübe edildi, daha sonra ikincil antikorlar, anti-tavşan IgG peroksidaz konjuge (1:3000), 37 ° C'de 1 saat boyunca inkübe edildi. Membranlar, geliştirilmiş bir kemilüminesans kiti kullanılarak görselleştirildi.

İstatistiksel analiz
Bu çalışmada sunulan tüm veriler SPSS paket programı kullanılarak istatistiksel anlamlılık açısından analiz edilmiştir. Bu analizlerde elde edilen tüm sonuçlar GraphPad Prism yazılımı kullanılarak görselleştirilmiştir. İki grup arasındaki farklılıklar bağımsız örneklem t-testi kullanılarak incelendi. Çoklu grup karşılaştırmalarında homojen varyans verileri için tek yönlü varyans analizi kullanılırken, heterojen varyans verileri için Welch testi uygulanmıştır. Ayrıca, eşit varyans verilerinin ikili olarak karşılaştırılması için en az anlamlı fark testi ve eşit olmayan varyans verileri için Tamhane'nin T2 testi kullanılmıştır. Nicel veriler ortalama ± standart sapma olarak sunulmuştur. Korelasyonlar, normal dağılım göstermeyen değişkenler için Spearman'ın korelasyon analizi kullanılarak analiz edildi ve korelasyon katsayıları ve %95 güven aralıkları olarak tanımlandı. P < 0.050 istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi. Tüm deneyler en az üç kez tekrarlandı.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

MEBO, diyabetik farelerde yara iyileşmesini hızlandırır
Diyabetik yaralarda MEBO'nun etkinliğini doğrulamak için bir diyabetik yara modeli oluşturduk ve 1, 7, 13 ve 18. günlerde fotoğraflar çektik. Her gruptaki yaralar zamanla yavaş yavaş iyileşti (Şekil 2A). NDB-CTR grubundaki yaralar 18. günde tamamen iyileşti. MEBO grubundaki yaralar, diyabetik yaralar arasında en hızlı şekilde iyileşti, 7. günde birkaç pembe granülasyon partikülü oluşturdu, daha sonra 13. günde kabukl...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Diyabetin bir komplikasyonu olan CDW'ler, önemli mortalite ve sakatlığa yol açabilir ve sıklıkla vasküler bozukluklarla ilişkilidir29. MEBO, CDW'lerin tedavisinde etkilidir; Bununla birlikte, altta yatan mekanizması belirsizdir30. Bu nedenle, eksozomlar ve fonksiyonel miRNA'lar açısından incelemeyi amaçladık. Bu çalışmada, MEBO grubunun yara kapanma oranı ve mikro damar yoğunluğunun diyabetik farelerde tüm zaman noktalarında en yüksek olduğ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar rekabet eden çıkarları olmadığını beyan ederler.

Teşekkürler

Bu çalışma, Hibe kapsamında Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı [sayı 81960875], Hibe kapsamında Guangxi Doğa Bilimleri Vakfı [sayı 2023GXNSFDA026008], Hibe kapsamında Guangxi tıbbi ve sağlığa uygun teknoloji geliştirme ve uygulama projesi [sayı S2022134], Guangxi Zhuang Özerk Bölgesi Sağlık Komisyonu Batı Tıbbı Hibe kapsamında kendi kendini finanse eden araştırma projesi [sayı 20210234] ve Guangxi Geleneksel Çin Tıbbı Bürosu tarafından kendi kendini finanse etti Hibe kapsamındaki araştırma projesi [sayı GZZC2020255].

Yazar Katkısı:
Yuanyuan Xu: Yazma - orijinal taslak, Yazılım, Metodoloji, Araştırma, Biçimsel analiz, Kavramsallaştırma. Jianchang Xu: Kaynaklar, Metodoloji, Araştırma. Anbang Zhou: Soruşturma, Biçimsel analiz. Nimiao Cen: Görselleştirme, Lina Huang: Denetim. Biaoliang Wu: Yazma-gözden geçirme ve düzenleme, Kaynaklar, Proje yönetimi, Metodoloji, Fon edinme, Veri iyileştirme, Kavramsallaştırma.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
1&kez; PBS Solarbio (Pekin, Çin)#P1020Tamponlu çözüm
%4 paraformaldehit çözeltisiSolarbio (Pekin, Çin)#P1110Dokuyu düzelt
anti-tavşan IgG peroksidaz konjuge İlgi#S0001İkincil antikor
Beifuxin jeliEssexbio (Zhuhai, Çin)#042404A06Kronik yaraları tedavi etmek için bir merhem
CD81 antikoruSinyal Yolu Antikoru#41779Birincil antikor
Geliştirilmiş Chemiluminescence Kit Epizyme (Çin)#SQ101Protein bandı için kemilüminesans kiti
Gliseraldehit-3-fosfat dehidrojenaz (GAPDH) antikoruİlgi#AF7021Birincil antikor
GraphPad Prizmasıhttps://www.graphpad.com/prism/Görsel -leştirme
ResimJ https://imagej.net/ij/Yara alanını ölçün 
Anında Bicinchoninic Asit (BCA) Protein Testi Kiti Epizyme (Çin)#ZJ102Protein konsantrasyonunu belirleyin
LightCycler96 SistemiRocheqPCR ekipmanı
MHY1485MedChemExpress (ABD)#326914-06-1Rapamisin kompleksi 1'in (mTORC1) 
miRNeasy Mini kit Tiangen (Çin)#217004RNA ekstraksiyonu (miRNA)
Neme maruz kalan yanık merhemiMebo (Shantou, Çin)#2403103BKronik yaraları tedavi etmek için bir merhem
MonAmp SYBR Yeşil qPCR Karışımı (ROX Yok) Monad (Çin)#MQ10101SqPCR kiti (mRNA)
MonScript RTIII All-in-One Mix with dsDNase Monad (Çin)#MR05101STers transkripsiyon kiti (mRNA)
Nano Akış Sitometri SistemiN30E (Çin)Eksozomların boyutunu ve konsantrasyonunu analiz etmek için bir ekipman
Optik mikroskopOlympus (Tokyo, Japonya)Doku patomorfolojisini gözlemleyin
fizyolojik salinKelun (Sichuan, Çin)#L24041709Fizyolojik salin
Poliviniliden florür membranlarMillipore (ABD)#IPVH00010Western blot membranı
AstarGeneray Biotech Co., Ltd. (Şangay, Çin)
Rab27a antikoruHücre Sinyalizasyon Teknolojisi#69295Birincil antikor
RevertAid First Strand cDNA Sentez KitiThermo Fisher (ABD)#K1622Ters transkripsiyon kiti (miRNA)
RIPA lizis tamponuSolarbio (Pekin, Çin)#R0010Toplam protein ekstraksiyonu
sodyum dodesil sülfat– poliakrilamid Epizyme (Çin)#PG222Elektroforez tamponu
sodyum pentobarbitalMerck (Şanghay, Çin)#P3761Anestezi
Spesifik patojen içermeyen erkek C57BL/6 fareleriGuangdong Vital River Laboratuvarı Hayvan Teknolojisi Co., Ltd (Guangdong, Çin)Deney hayvanları
SPSS Dergisihttps://www.ibm.com/spssİstatistiksel analiz
streptozotosinSolarbio (Pekin, Çin)#S8050Diyabetik fare modelini indükleyin 
SYBR Yeşil qPCR Master Mix Roche (İsviçre)#4943914001-SRqPCR kiti (miRNA)
Transmisyon elektron mikroskobuHitachi (Japonya)HT-7700 SerisiEksozomların morfolojisini belirlemek için bir ekipman
TRIZOL Invitrogen (ABD)#15596026CNRNA ekstraksiyonu (mRNA)
TSG101 antikoruAbcam# ab125011Birincil antikor
Vps4a antikoruAbcam# ab197896Birincil antikor

Kaynaklar

  1. Zhi, Q., et al. The effectiveness of cell-derived exosome therapy for diabetic wound: A systematic review and meta-analysis. Ageing Res Rev. 85, 101858(2023).
  2. David, S., Vikrant, R., Sarah, M., Kira, C., Devendra, K. A. Impact of resolvin mediators in the immunopathology of diabetes and wound healing. Expert Rev Clin Immunol. 17 (6), 681-690 (2021).
  3. Holly, N. W., Matthew, J. H. Wound healing: cellular mechanisms and pathological outcomes. Open Biol. 10 (9), 200223(2020).
  4. Vikrant, R., Rebecca, M., Devendra, K. A. Stem Cells and Angiogenesis: Implications and Limitations in Enhancing Chronic Diabetic Foot Ulcer Healing. Cells. 11 (15), 2287(2022).
  5. Nour, S., Imani, R., Chaudhry, G. R., Sharifi, A. M. Skin wound healing assisted by angiogenic targeted tissue engineering: A comprehensive review of bioengineered approaches. J Biomed Mater Res A. 109 (4), 453-478 (2020).
  6. Shirin, N., Rana, I., Chaudhry, G. R., Ali, M. S. Skin wound healing assisted by angiogenic targeted tissue engineering: A comprehensive review of bioengineered approaches. J Biomed Mater Res A. 109 (4), 453-478 (2020).
  7. Ruo, L., et al. Exosome-cargoed microRNAs: Potential therapeutic molecules for diabetic wound healing. Drug discovery today. 27 (10), 103323(2022).
  8. Li, Q., et al. MiR146a-loaded engineered exosomes released from silk fibroin patch promote diabetic wound healing by targeting IRAK1. Signal transduction and targeted therapy. 8 (1), 62(2023).
  9. Yang, A., et al. Exosomes from adipose-derived stem cells and application to skin wound healing. Cell Prolif. 54 (3), 119(2021).
  10. Fang, W., Yan, L. The emerging roles of exosome-derived noncoding RNAs in the tumor immune microenvironment and their future applications. Biomed Pharmacother. 156, 113863(2022).
  11. Phyllis, I. H., Anil, C. Multivesicular body morphogenesis. Annu Rev Cell Dev Biol. 28, 337-362 (2012).
  12. Matias, O., et al. Rab27a and Rab27b control different steps of the exosome secretion pathway. Nat Cell Biol. 12 (1), 1-13 (2009).
  13. Christophe, C., Sourav, M., Nolwenn, M., Wouter, H. R., Winfried, W. The role of VPS4 in ESCRT-III polymer remodeling. Biochem Soc Trans. 47 (1), 441-448 (2019).
  14. Hao, L., Rui, Z., Wen, W., Li, L. miR-4454 Promotes Hepatic Carcinoma Progression by Targeting Vps4A and Rab27A. Oxid Med Cell Longev. 2021, 9230435(2021).
  15. Mostafa, J., et al. Identification of the first structurally validated covalent ligands of the small GTPase RAB27A. RSC Med Chem. 13 (2), 150-155 (2022).
  16. Wen, Z., et al. Exosome Release Is Regulated by mTORC1. Adv Sci (Weinh). 6 (3), 1801313(2019).
  17. Ji, Z., et al. Administration of follicle-stimulating hormone induces autophagy via upregulation of HIF-1α in mouse granulosa cells. Cell Death Dis. 8 (8), e3001(2017).
  18. Tânia, S. M., José, C., Ilka, M. R., Odete, A. S. Henriques Ana Gabriela. Exosome isolation from distinct biofluids using precipitation and column-based approaches. PLoS One. 13 (6), e0198820(2018).
  19. Yuan, Z., Yun, L., Hai, L., Wai, T. Exosomes: biogenesis, biologic function and clinical potential. Cell Biosci. 9, 19(2019).
  20. Kehinde, R. MiR equal than others: MicroRNA enhancement for cutaneous wound healing. J Cell Physiol. 236 (12), 8050-8059 (2021).
  21. Lei, Z., et al. Exosomes from microRNA-126 overexpressing mesenchymal stem cells promote angiogenesis by targeting the PIK3R2-mediated PI3K/Akt signalling pathway. J Cell Mol Med. 25 (4), 2148-2162 (2020).
  22. Cheng, Y., et al. Milk exosomes-mediated miR-31-5p delivery accelerates diabetic wound healing through promoting angiogenesis. Drug Deliv. 29 (1), 214-228 (2022).
  23. Yuan, G., Yan, J., Jin, H., Zuo, H., Qian, T. Moist exposed burn ointment accelerates diabetes-related wound healing by promoting re-epithelialization. Front Med (Lausanne). 9, 1042015(2023).
  24. Ming, S., et al. Combined application of moist exposed burn ointment and maggot therapy in wound healing. J Wound Care. 31 (Sup10), S41-S52 (2022).
  25. Qian, T., et al. Moist exposed burn ointment promotes cutaneous excisional wound healing in rats involving VEGF and bFGF. Mol Med Rep. 9 (4), 1277-1282 (2014).
  26. Xiao, Q., et al. Role of Hydrogen Sulfide in the Development of Colonic Hypomotility in a Diabetic Mouse Model Induced by Streptozocin. J Pharmacol Exp Ther. 384 (2), 287-295 (2022).
  27. Jia, Z., et al. Hydrogel plus growth factors treatment after 2940nm erbium:YAG lattice laser improves periorbital wrinkles and wound healing: a case report. J Int Med Re.s. 49 (9), 3000605211042506(2021).
  28. Hina, K., et al. Comparative proteomics evaluation of plasma exosome isolation techniques and assessment of the stability of exosomes in normal human blood plasma. Proteomics. 13 (22), 3354-3364 (2013).
  29. Yi, H., et al. Exosomes derived from pioglitazone-pretreated MSCs accelerate diabetic wound healing through enhancing angiogenesis. J Nanobiotechnology. 19 (1), 150(2021).
  30. Ai, Z., et al. Effects of Moist Exposed Burn Therapy and Ointment (MEBT/MEBO) on the autophagy mTOR signalling pathway in diabetic ulcer wounds. Pharm Biol. 58 (1), 124-130 (2020).
  31. Nina, D., et al. Updates in Diabetic Wound Healing, Inflammation, and Scarring. Semin Plast Surg. 35 (3), 153-158 (2021).
  32. Dimitrios, B., Ioanna, E., Aristidis, V. Pathogenesis and treatment of impaired wound healing in diabetes mellitus: new insights. Adv Ther. 31 (8), 817-836 (2014).
  33. Heng, G., et al. Metal-polyphenol nanocomposite hybrid hydrogel: A multifunctional platform for treating diabetic foot ulcers through metabolic microenvironment reprogramming. Biomaterials. 322, 123414(2025).
  34. Elof, E., et al. Chronic wounds: Treatment consensus. Wound Repair Regen. 30 (2), 156-171 (2022).
  35. Elena, T., Andreas, B., Hannes, R., Andreas, R., Stefan, R. B. Current aspects in the pathophysiology and treatment of chronic wounds in diabetes mellitus. Biomed Res Int. 2013, 385641(2013).
  36. Jamie, L. B., Wyant, W. A., Beatriz, A. A., Robert, S. K., Ivan, J. Diabetic Wound-Healing Science. Medicina (Kaunas). 57 (10), 1072(2021).
  37. Xin, Z., Yan, G., Kun, Y., Peng, L., Jun, W. The signaling pathways of traditional Chinese medicine in promoting diabetic wound healing. J Ethnopharmacol. 282, 114662(2021).
  38. Vilelmine, J. C., Evangelia, G. T., Georgia, C. S., Fotini, N. A., John, D. I. Comparing oil based ointment versus standard practice for the treatment of moderate burns in Greece: a trial based cost effectiveness evaluation. BMC Complement Altern Med. 11, 122(2011).
  39. Hong, Z., Qing, S., Lei, Y., Jia, C. Clinical Study of MEBO Combined with Jinhuang Powder for Diabetic Foot with Infection. Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 5531988(2021).
  40. Ya, T., Xiao, L., Lei, J. Simultaneous Determination of 12 Components in Moist Exposed Burn Ointment by HPLC. China Pharm. 31 (16), 73-77 (2022).
  41. Wei, L., Yu, M., Qi, Y., Yu, P., Qing, M. Moist exposed burn ointment for treating pressure ulcers: A multicenter randomized controlled trial. Medicine (Baltimore). 96 (29), e7582(2017).
  42. Qing, H., et al. Vps4A mediates the localization and exosome release of β-catenin to inhibit epithelial-mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma. Cancer Lett. 457, 47-59 (2019).
  43. Zhi, W., et al. Extracellular vesicles in fatty liver promote a metastatic tumor microenvironment. Cell Metab. 35 (7), 1209-1226 (2023).
  44. Sathish, M., Asawari, B., Rashmi, J., Naveen, J., Madhan, J. Exosomal therapy-a new frontier in regenerative medicine. Stem Cell Investig. 8, 7(2021).
  45. Sonam, G., Dany, P., Loukia, T. o, Julien, B. The exosome journey: from biogenesis to uptake and intracellular signalling. Cell Commun Signal. 19 (1), 47(2021).
  46. Roi, I., Felipe, C. R., Wei, Y., Jerrold, M. O. Exosomes as mediators of intercellular crosstalk in metabolism. Cell Metab. 33 (9), 1744-1762 (2021).
  47. Xiao, Z., et al. The function and clinical application of extracellular vesicles in innate immune regulation. Cell Mol Immunol. 17 (4), 323-334 (2020).
  48. Li, C., Shu, S., Song, W. LncRNA SNHG16 Knockdown Promotes Diabetic Foot Ulcer Wound Healing via Sponging MiR-31-5p. Tohoku J Exp Med. 261 (4), 283-289 (2023).
  49. Ai, S., Ning, S., Xiao, L., Zhen, H. Circ-FBXW12 aggravates the development of diabetic nephropathy by binding to miR-31-5p to induce LIN28B. Diabetol Metab Syndr. 13 (1), 141(2021).
  50. Wei, X., Ya, L., Ying, Z., Zhi, Y. Identification of miRNA-mRNA Regulatory Networks Associated with Diabetic Retinopathy using Bioinformatics Analysis. Endocr Metab Immune Disord Drug Targets. 23 (13), 1628-1636 (2023).
  51. Fei, W., et al. MicroRNA-31 Can Positively Regulate the Proliferation, Differentiation and Migration of Keratinocytes. Biomed Hub. 5 (2), 93-104 (2021).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Eksozom FonksiyonuMikrodamar Yo unlu uYara yile mesiKantitatif PCRWestern BlotRab27a Ekspresyonu
Video yakında

İlgili makaleler