Yöntem makalesi

Sırın İki Taraflı Renal Lenfadenektomisi

649 görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/68695

⸱

30 Aralık 2025

 ,  ,  ,  , 
1Department of Surgery, Yale University School of Medicine, 2Department of Immunobiology, Yale University School of Medicine, 3Department of Internal Medicine, Section of Rheumatology, Yale University, 4Howard Hughes Medical Institute, Yale University School of Medicine

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Bu protokol, güvenli ve iyi tolere edilen fare çift taraflı böbrek lenfadenektomisi için bir hayatta kalma prosedürünü tanımlar.

Özet

Otoimmün hastalıklar, bağışıklık hücrelerinin kendi dokularını uygunsuz şekilde hedeflemesinin bir sonucudur ve bu da hayati organlarda patolojiye ve hasara yol açar. İkincil lenfoid organlar, B ve T hücre aktivasyonu ve çevresel bağışıklık toleransı için bir yer olarak hizmet eder; bu da antijen drenajı ve antijen sunan hücre (APC) kaçaklarının yerel lenfatikler aracılığıyla geçişine yol açar. Lokal drenaj lenf düğümlerinin lenfositlerin aktivasyonunun başlangıç yeri olarak rolü, tümörler, enfeksiyon ve organ spesifik otoimmün hastalıklarda tanımlanmış, ancak sistemik otoimmünizmde tanımlanmamıştır. Sistemik lupus eritematoz, bu hastalıklardan biri olup, yaygın bir otoimmün hastalıktır ve yaygın böbrek etkisi ile böbrek hasarına ve nihayetinde başarısızlıka yol açar. Böbreklerden antijen drenajı ve APC kaçakçılığının birincil yeri olan böbrek lenf düğümlerinin rolünün daha fazla anlaşılması, bu dokunun seçici olarak bozulmaması nedeniyle sınırlıdır. Burada tanımlanan, güvenli ve iyi tolere edilen fare bilateral renal lenfadenektomisi için bir hayatta kalma prosedürüdür. Detaylı talimatlar, görsel yardımlar, başarıyı artırmak için faydalı ipuçları ve prosedürel tuzakların giderilmesi yer alıyor. Uzun vadeli sağlıklandırma mükemmeldir ve ameliyattan sonra en az 4 ay gözlemlenmiştir. Rezeksiyona uğramış böbrek lenf düğümleri sağlam ve hemen sonraki işlemeye hazırdır. Bu prosedür, böbrek lenf düğümlerinin lokal etkisinin incelenmesi için en uygun yöntemdir.

Giriş

Otoimmün hastalıklar, otoimmün hepatit, uveit, tip 1 diyabet gibi nispeten organ kısıtlı hastalıklardan sistemik skleroz ve sjögrens 1,2,3,4,5 gibi yaygın hastalıklara kadar insan vücudundaki her organı kapsar. İmmünolojik tolerans, B ve T hücresi gelişiminde kritik bir aşamadır ve öz-reaktiviteyiönlerken 6. Timusta klonal delesiyon yoluyla merkezi tolerans gerekli ve etkili olsa da, bu tek başına otoimmünite karşı savunmadaboşluklar bırakır 7,8. Çevresel tolerans, antijen drenajı sonrası bölgesel doku drenajı lenf düğümleri dahil olmak üzere ikincil lenfoid organlarda gerçekleşen B ve T hücresi anerjisi, delezyon veya T hücresi tükenmesi yoluyla öz-reaktiviteye ikincil birengeldir. Ancak, uygunsuz aktivasyondan sonra genetik ve/veya çevresel olarak hassas bireylerde otoreaktif hücrelerin bu lenf düğümlerinde bulunup oradan göç edebileceği giderek daha nethale geliyor 11,12.

Sistemik lupus erithematosus, bu tür otoimmün hastalıklardan biridir ve birden fazla organ sisteminde net B ve T hücre etkisivardır 13. Özellikle yaygın ve morbid bir tezahür lupus nefriti ve son evre böbrek hastalığınailerlemedir 14. Otoimmün kaynaklı böbrek hastalığında yerel olarak yaşayan B ve T hücrelerinin doğrudan etkisini anlama yeteneği, dolaşımdaki sistemik patofizyolojinin aksine, bu düğümlerin seçici olarak bozulmaması nedeniyle şu anda sınırlıdır. Bu boşluk göz önünde bulundurularak fare çift taraflı böbrek lenfadenektomisi için bir hayatta kalma prosedürü geliştirildi ve burada anlatıldı.

Bu protokolün genel amacı, ameliyat sonrası hayatta kalma ve toleransı yüksek olan farelerde çift taraflı böbrek lenf düğümlerinin güvenli ve güvenilir bir şekilde kesilmesini sağlamaktır. Bu prosedür, böbrek hastalığıyla ilişkili bağışıklık hücrelerinin hazırlanması, aktive edilmesi ve tolere edilmesi üzerindeki yerel etkisinin çalışmaları için en uygun olacaktır. Bu prosedür, böbreği etkileyen otoimmün veya onkolojik modellerle birleştiğinde idealdir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm prosedürler Yale Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanım Komitesi protokollerine uygun olarak gerçekleştirilir. Bu prosedürü geliştirmek için 8-12 haftalık Balb/c suşları, Lupus'a yatkın fareler (MRL/MpJ-Faslpr/J/J) ve yaş/cinsiyet/genotip uyumlu sahte kontrollerkullanıldı 15. Ayrıca, 8-12 haftalık yabani tip C57BL/6 suş fareleri de test edildi ve düğümler güvenli bir şekilde rezek edildi. Hem erkek hem de dişi fareler dahil edildi. Reaktifler ve kullanılan ekipmanlar Malzeme Tablosu'nda listelenmiştir.

1. Aletlerin, hayvanların ve ameliyathanenin hazırlanması

  1. Tüm cerrahi aletleri sterilize edin. Ameliyat yüzeyi ve anestezik burun konisi %70 etanol ile temizlendiğinden emin olun.
  2. Ameliyat mikroskobu kurarak ameliyat cerrahı için konforlu ergonomi sağlanır.
  3. Fazla anestezik temizliği için burun koni ve emme ile solunma anestezi buharlaştırıcı kurun. Hayvan vücut sıcaklığını ve malzemelerini uygun ve steril bir konumda korumak için sıcak su dolaşım pediyle çalışma yüzeyi kurun.
  4. Solun anestezik buharlaştırıcı makineden burun konisi ile (kurumsal onaylı protokollere uygun olarak) %2-3 inhalasyon izofluran ile 2 L/dakika oksijen akış hızına sahip %2-3 inhalasyon izofluran uygulanarak anestezi başlatın.
    1. Yaklaşık 30-40 nefes hızı ve arka ayak sıkıştırmasına yanıt vermemek için uygun anestezi düzlemini sağlayın. Uygun anestezi düzlemini periyodik olarak tekrar kontrol edin ve izofluran akış hızını buna göre ayarlayın.
      NOT: Alternatif olarak, enjekte edilebilir bir anestezi de uygundur.
  5. Uygun analjezi ve lokal anestezi için kurum yönergelerine uyun. Örneğin, 3,25 mg/kg buprenorfin XR gibi uzun etkili bir ağrı aljezikini deri altı olarak verebilir ve planlanan kesi bölgelerinde deri altı olarak 0,04 mL/5 g vücut ağırlığında 1mg/mL lidokain solüsyesi uygulanabilir.
  6. Göz yağlayıcısı uygulayarak, kürkünü iki taraflı olarak kopararak veya geriye kopararak, sırtını povodin/iyot çözeltisi ile sterilize ederek ve ardından %70 etanol ile sterilize ederek ve sağ yan decubitus (sağ tarafı aşağı) yerleştirerek işlemi tamamlayın.
    1. Hayvanın sol kolunu yukarıdan, kuyruğunu ise aşağıdan sabitlemek için bant kullanın; böylece rahat ama uzun bir duruş elde edin (Şekil 1A). Bu durum böbreği daha aşağı yerinden çıkarır ve görselleştirme ile maruziyeti iyileştirir.
  7. Steril eldiven giyin ve hayvanın üzerine ameliyat alanına pencere açılan steril perdeler uygulayın. İşlem boyunca sterilliği koruyun.
    1. ISTEĞE BAĞLI: Hayvan pozisyonundan önce 10-20 μL steril, filtrelenmiş %5 Evans Blue ile fosfatla tamponlu tuzlu süzme enjekte edilir; böylece iliak lenf yolu 16 boyunca drenaj yoluyla böbrek lenf düğümlerinin daha iyi tanımlanması sağlanır (Şekil 1D-G).
      NOT: Bu boyanın boyalara ve akış sitometrik analizlerine müdahale edebileceğine dikkat edin. Ayrıca, zamanla Evans Blue cisterna chyli'ye de sızacaktır, ipuçları için "sorun giderme" bölümüne bakınız (Tablo 1).

figure-protocol-1
Şekil 1: Fare ve organların anatomik konumlandırılması ve isteğe bağlı Evans Blue enjeksiyonu. (A) Sol böbrek maruziyeti için hayvanların konumlandırılması ve sabitlenmesi. (B) Ameliyat pencereleri içindeki anatomik yönelim. Sol böbrek lenf düğüm zinciri, böbreksel damarların ve aortanın yanında, böbrek damarlarının üstünde bulunur. Sağ böbrek lenf notu, böbrek damarlarının hemen üstünde bulunabilir. (C) Sağ böbrek maruziyeti için hayvan konumlandırması ve emniyeti. (D-G) 20 μL 5% Evans Blue enjeksiyonunun uygulanması. (D) Boyamadan önce sol arka ayak ve sol böbrek lenf düğümü zinciri (beyaz ok). Cisterna chyli'nin (kesik kutu) genel konumuna dikkat edin; genellikle şeffaf ve/veya lenfle dolgu olmadan tanımlanması zordur. (E) Sol arka ayak ve sol böbrek lenf düğümü zinciri (beyaz ok) boya enjeksiyonundan 5 dakika sonra. Afferent lenfatik damarlara (siyah ok) dikkat edin. (F) Boyadan önce sağ arka ayak ve sağ böbrek lenf düğümü (beyaz ok). G) Sağ arka ayak ve sağ böbrek lenf düğümü (beyaz ok) boya enjeksiyonundan 5 dakika sonra. Afferent lenfatik damarlara (siyah oklar) dikkat edin. Ölçek çubukları: A,C = 1,0 cm; D-G (arka ayak görünümü) = 0,5 cm; D-G (iç görünümler) = 0,1 cm. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

2. Sol böbrek lenfadenektomisi

  1. Dalağın hemen altında (kaburganın yaklaşık 1 cm altında) deriden 1 cm eğik bir kesi yapın. Deriyi karın/göğüs duvarından kesin ve karın içindeki dalağı tespit edin.
    1. Dalağın hemen altında karın duvarı kaslarından 1 cm kesi açarak peritoneal boşluğa ulaşmak için (Şekil 2A,B).
      NOT: Pigmentsiz cilde olan farelerde, dalak hazırlanmış deriden karın bölgesinde yan tarafta bulunan ve kaburganın hemen altında yer alan koyu ve hareketli bir organ olarak kolayca görülebilir.
  2. Sol böbreği, arka karın duvarı boyunca ve dalağın hemen altında düz bir organ olarak tanımlayın. Böbrekler ve ilişkili böbrek lenf düğümleri retroperitoneumda bulunur. İki açılı forseps kullanarak, retroperitoneuma erişmek için sol böbreğin arka kısmını kesin (Şekil 2C).
    NOT: Doğru ve güvenli bir küt diseksiyon tekniği, istenen doku düzlemine kapalı forsepsle küçük bir basınç uygulanarak aletin nazikçe açılmasına izin verilerek doku düzlemlerini ayırmayı içerir.
  3. Sol böbreği anteromedial olarak yansıtın.
  4. Disseksiya mikroskobu kullanılarak, sol böbrek lenf düğümünü kaplayan yağ pedini tespit edin; bu bono sol böbreğin arkasında ve sol böbrek damarlarının üstünde olacak. Adrenal bezi yukarıdan, aortayı arka tarafta ve sarnıçlı şili anteromedialdan tanımlayın ve kaçının (Şekil 1B,D).
  5. İnce uçlu bir forseps kullanarak, lenf düğümü kapsülünün etrafını (çevresindeki damarlardan ayırarak) kesin ve açılı bir forseps ile hafif karşı gerilim uygulayarak (Şekil 2E). Bu düzlemi kesmek için ince uçlu makas da kullanılabilir.
  6. İnce uçlu düz forsepsle, sol böbrek lenf notu cephaladını geri çekin ve ince uçlu makasla lenf düğümünün posteromedial bağlarını keskin bir şekilde kesin. Yakındaki kan damarlarını ve sarnıç şili/torakik kanalını bozmamaya dikkat edin (Şekil 2F).
  7. Hemostaz bölgesini gözlemleyin (Şekil 2G).
  8. Böbreği anatomik yerine döndürün ve karın bölgesini iki katman halinde (karın duvarı ve deri) 6-0 monofilament polipropilen dikişiyle koşu şeklinde kapatın. Yaraya steril cerrahi yapıştırıcı uygulayın.

figure-protocol-2
Şekil 2: Sol böbrek lenfadenektomi. (A) Dalak gölgesinin hemen altında ve arkasında sol eğik kesi. (B) Dalağı üst tarafta (beyaz çizgi), sol adrenal arka tarafta (siyah ok) ve sol böbreği alt tarafta (siyah çizgi) tanımlamak. (C) Retroperitoneuma doğru bir düzlem, böbreğin hemen arkasında (siyah ok) küçümçe diseksiyon yoluyla oluşturulur. (D) Sol böbrek lenf düğümü (beyaz oklar) yağlı bir kılıf içinde hemen görünür. (E) Yakındaki kaplar ile düğüm (beyaz oklar) arasında bir düzlem oluşturulur. (F) Düğüm, oluşturulan düzlem boyunca nazikçe geri çekilir ve keskin bir şekilde kesilir. (G) Hemostaz doğrulanır ve lenf düğümünün (beyaz ok) daha önce yaşadığı boşluk ((D)'den gelen solmuş oklar) herhangi bir kalıntı lenf düğümünden arınmış olarak kaydedilir. (H) Sol lenf düğümü genellikle birden fazla düğümden oluşan bir zincirdir (beyaz oklar). Daket, ex vivo sol lenf düğüm zinciridir (1 mm x 3,5 mm). Ölçek çubukları: 0,2 cm. Tick = 1 mm. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

3. Sağ böbrek lenfadenektomisi

  1. Hayvanı sol lateral dekubitus'a (sol taraf aşağı) yeniden konumlandırın. Yine, hayvanın sağ kolunu yukarıdan, kuyruğunu aşağıdan sabitlemek için bant kullanın ki rahat ama uzun bir duruş oluşsun. Bu özellikle sağda önemlidir; karaciğer maruziyeti bozabilir (Şekil 1C).
  2. Cilt içinden 1 cm eğik bir kesi yapın, kaburganın hemen altında (sol taraftan biraz daha üstün). Deriyi karın/göğüs duvarından kesin ve karın duvarı kaslarından 1 cm kesik açarak peritoneal boşluğa ulaşın (Şekil 3A).
  3. Sağ böbreği, arka karın duvarı boyunca pürüzsüz bir organ olarak ve karaciğerin hemen altında olduğunu belirtin. Karaciğer cephaladını geri çekmek için pamuk uçlu bir sürüntü kullanmak gerekebilir. İki açılı forseps kullanarak, retroperitoneuma erişim sağlamak için sağ böbreğin arka kısmını kesin (Şekil 3B,C).
  4. Sağ böbreği anteromedial olarak yansıtın.
  5. Disseksiya mikroskobu kullanılarak, sağ böbrek lenf düğümünü çevreleyen yağ pedini tespit edin; bu bono sağ böbreğin arkasında ve sağ böbrek damarlarının üstünde olacak. Adrenal bezi yukarıdan tanımlayın ve ondan kaçının (Şekil 1B,D).
  6. İnce uçlu forseps veya ince uçlu makas kullanarak, lenf düğümü kapsülünün etrafını (çevresindeki damarlardan ayırarak) kesik bir şekilde inceleyin ve açılı bir forseps ile nazik karşı çekim uygulayın (Şekil 3E).
  7. İnce uçlu düz forsepsle, sağ böbrek lenf düğümü cephaladını geri çekin ve ince uçlu makasla lenf düğümünün posteromedial bağlarını keskin kesin hale getirin (Şekil 3F). Lenf düğümünün hemen altında bulunan böbrek kan damarlarını bozmamaya dikkat edin.
  8. Hemostaz bölgesini gözlemleyin (Şekil 3G).
    NOT: Genel olarak, sağ böbrek lenf düğümünde daha büyük, arka drenaj veren bir kan damarı bulunur ve lenf düğümü başarılı alındığında kanama olasılığı daha yüksektir. Bu damardan gelen kanama, hemostaz sağlanana kadar pamuk uçlu bir sürüntle hafif bir baskı ile kontrol edilebilir.
  9. Böbreği anatomik yerine döndürün ve karın bölgesini iki katman halinde (karın duvarı ve deri) 6-0 monofilament polipropilen dikişiyle koşu şeklinde kapatın. Yaraya steril cerrahi yapıştırıcı uygulayın.

figure-protocol-3
Şekil 3: Sağ böbrek lenfadenektomi. (A) Sağ eğik kesi, son kaburganın hemen alt ve arkasında. (b) Karaciğer kenarı üst (beyaz çizgi) ve sol böbrek alt olarak (siyah çizgi) tanımlanır. Sağ adrenal karaciğer kenarı tarafından gizlenir. (C) Retroperitoneuma doğru bir düzlem, böbreğin hemen arkasında (siyah ok) küçümçe diseksiyon yoluyla oluşturulur. (D) Sağ böbrek lenf düğümü (beyaz oklar) yağ örtüsünün içinde hemen görünür. (E) Düğümün etrafında bir düzlem oluşturulur (beyaz ok). (F) Düğüm, oluşturulan düzlem boyunca nazikçe geri çekilir ve keskin bir şekilde kesilir. (G) Hemostaz doğrulanır ve lenf düğümünün (beyaz ok) daha önce yaşadığı boşluk ((D)'den gelen solmuş oklar) herhangi bir kalıntı lenf düğümünden arınmış olarak kaydedilir. (H) Sağ lenf düğümü tek, küresel bir düğümdür (beyaz ok). Inset, ex vivo lenf düğümü (2 mm x 1,5 mm) ölçülerindedir. Ölçek çubukları: 0,2 cm. Tick = 1 mm. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

4. Ameliyat sonrası bakım

  1. Hayvanı, sıcak su dolaşımı platformunun yarısı üzerinde ve yarısı dışarıda olan temiz bir kafese yerleştirin; yiyecek ve suya erişim sağlanır.
  2. Hayvanın anesteziden iyileşmesine izin verin (~10-15 dakika) ve sıkıntı belirtilerini yakından takip edin. Hayvanlar uygun davranışlarla (örneğin, artan solunum hızı, kendini düzeltme, yürüyüş, tımar yapma) anesteziden erken iyileşmezse, hayvanı insancıl bir şekilde ötanazi ile (kurumsal onaylı protokollere uygun olarak) gerçekleştirin.
  3. Tüm hayvanlar anesteziden iyileştikten sonra, kafesleri su, yiyecek, yatak ve libitum olarak zenginleştirici malzemelere erişimli hayvan bakım tesisine geri gönderin.
  4. Ameliyat sonrası farelerde 3 gün boyunca her 12 saatte bir ağrı veya sıkıntı belirtileri (örneğin, kambur duruş, azalmış aktivite, azalmış etkileşim, kötü bakım) değerlendirin. Sıkıntı belirtileri gösteren fareleri insancıl bir şekilde ötenazi yapın.
  5. Kalıcı dikiş (örneğin 6-0 monofilament polipropilen gibi) kullanıyorsanız, ameliyat sonrası 10. günde kesileri inceleyin ve kalan dikiş materyalini çıkarın.

5. Lenf düğümü yönetimi

NOT: Çıkarılan lenf düğümü, sonraki uygulamalar için hemen gaz hatlarına girmeye hazırdır.

  1. Bu prosedürü ve anatomiyi ilk öğrenirken, lenf düğümünün eksizyonunu histoloji veya akış sitometrisi ile seçtiğiniz antikor boyalarıyla doğrulayın.
  2. Dokuyu hücre kültürü ortamına (örneğin, DMEM, RPMI) veya fosfatla tamponlu tuzlu süzme (PBS) canlı hücre teknikleri için buz üzerine veya planlı histoloji için fiksatif (örneğin, %10 nötr tamponlu formalin, %4 paraformaldehit) yerleştirin.
    NOT: Lenf düğümlerini doğrulamanın hızlı ama daha az doğru bir yolu, rezeksiyon edilen örneği PBS'ye yerleştirmektir. Genel olarak, ağırlıklı olarak lenf düğümlerinden oluşan bir numune batırken, ağırlıklı olarak yağ dokusu içeren bir numune yüzer; Ancak, bu prosedürü optimize ederken daha fazla onaylayıcı testler önerilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Bu işlem fare başına 15-20 dakika içinde gerçekleştirilebilir. Bu prosedürün doğruluğunu doğrulamak için, 8-12 haftalık, yaş, cinsiyet ve genotiple eşleşen beş küçük böbrek lenfederektomisi yapıldı. Tüm fareler işlemi iyi tolere etti ve %100 perioperatif hayatta kaldı. Çıkarılan örnekler buz üzerinde PBS'ye yerleştirildi. Tüm örnekler hemen battı ve düşük yağ içeriği doğrulandı. Çıkarılan örnekler (ve dört ayrı visseral yağ kontrolü) daha sonra 100 μm hücre süzgecinden ezildi ve PBS ile ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Burada tanımlanan, güvenli ve iyi tolere edilen fare bilateral renal lenfadenektomisi için bir hayatta kalma prosedürüdür. Bu prosedürün en büyük sınırlaması, böbrek lenf düğümlerinin nispeten küçük olmasıdır ve bu nedenle ameliyat mikroskobu gerekmektedir. Çalışan bir mikroskop olmadan, kendinden emin rezeksiyon elde etmek zor olabilir. Bazı genetik fare modellerinde lenf düğümleri büyütülmüş, bu da tanımlama ve teknik öğreniminikolaylaştırmaktadır 17. Sağlıklı, ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

R.A.F., Glaxo Smith Kline, Plythera Inc. ve Ventus Therapeutics'e danışmanlık yapmaktadır. Diğer tüm yazarlar rekabet eden çıkarlar belirtmemektedir.

Teşekkürler

J. Alderman, B. Cadugan, E. Hughes-Picard ve J. Horrocks'a idari yardımları için, C. Hughes'a ise fare koloni yönetimi için teşekkür ediyoruz. H.N.B., Yale Cerrah Bilim İnsanı Eğitim Programı'nın üyesidir ve bu programın kısmen bu projeyi finanse ettiği ve destekleyen bir üyesidir. Bu çalışma ayrıca Howard Hughes Tıp Enstitüsü (R.A.F.) ve Amerikan Cerrahlar Koleji Resident Research Award (H.N.B.'ye) tarafından finanse edilmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Anestezi devresiHerhangi birYa da enjekte edilebilir anestezik
BD LSRII akış sitometresi (veya eşdeğeri)BD BiosciencesFACS Diva Yazılımı ile donatılmış
Buprenorfin XRHerhangi birAnaljezi için
Hücre kültürü medyası Herhangi bir(canlı hücre teknikleri için; yani. DMEM veya RPMI)
DAPIBiolegend422801Çalışma yoğunluğu: 15 ug/mL
İkili/çift boğazlı mikroskop LED ışıklarıHerhangi bir
Etanol (%70 suda)Herhangi birTemizlik için
FITC ile konjuge edilmiş anti-fare CD45.2 (104)Biolegend109806Çalışma yoğunluğu: 5 ug/mL
Forseps: Açılı ince uçlu forseps (x2)RobozRS-5058Malzeme: Dumoxel; Pattern #5, 45 derece açı; uç boyutu 0.1 X 0.06mm
Penset: İnce uçlu forsepsRobozRS-4960Malzeme: Dumostar; Pattern #1; Uç boyutu: 0.20 X 0.12mm
Penset: İnce uçlu forsepsRobozRS-4966Malzeme: Dumostar, Biyolojik uç; Pattern #3; Uç boyutu: 0.08 x0.04mm
LidokainHerhangi birAnaljezi için
FarelerJaxC57BL/6 suşları için, vahşi tip fareler: Jackson Laboratuvarları #000664
İğne sürücüleriRobozRS-6410Castroviejo iğne tutucu; Düz
Çalışma mikroskobuLeicaMZ9.5Leica Mz9.5 stereo baş çalışma mikroskobu
OPTIONAL: Evans Blue boyasıSigmaE2129-10GLenf izleme için.
Fosfatla tamponlanmış tuzlu (PBS)Herhangi bir
Povidon/İyot çözeltisiHerhangi birCilt hazırlığı/sterilizasyonu için
Makas: Ekstra ince uçlu makaslarRobozRS-5605McPherson-Vannas; 3mm kesici kenar; eğri
Makas: Orta makasRobozRS-5676Noyes; 13mm kesici kenar; düz
Cerrahi yapıştırıcıHerhangi birÖrneğin 3M Vetbond doku yapıştırıcısı
Dikiş: 6-0 mavi monofilament polipropilenHerhangi bir
Doku fiksasyonuHerhangi bir(planlı histoloji için; yani %10 nötr tamponlu formalin veya %4 paraformaldehit)
Sıcak su dolaşımı ısı pediHerhangi bir
Fare   Jackson laboratuvarlarıBalb/c suşları için, Lupus'a yatan fareler (MRL/MpJ-Fas-lpr/J): #000485

Kaynaklar

  1. Amador-Patarroyo, M. J., Peñaranda, A. C., Bernal, M. T. Autoimmunity. Autoimmunity: From bench to bedside. Anaya, J. -M. , El Rosario University Press. Colombia. (2013).
  2. Echeverri, A. F., Tobón, G. J. Systemic autoimmune diseases. Autoimmunity: From bench to bedside. Anaya, J. -M. , El Rosario University Press. Colombia. (2013).
  3. García-Carrasco, M., et al. Autoimmune disorders and pathogenesis. Autoimmunity: From bench to bedside. Anaya, J. -M. , El Rosario University Press. Colombia. (2013).
  4. Sarmiento-Monroy, J. C., Mantilla, R. D., Rojas-Villarraga, A., Anaya, J. -M., et al. Lupus and immunological profiling. Autoimmunity: From bench to bedside. Anaya, J. -M. , El Rosario University Press. In: Anaya, J.-M. (2013).
  5. Solari, N. F., Cherñavsky, A. C., et al. Rheumatologic autoimmune syndromes. Autoimmunity: From bench to bedside. Anaya, J. -M. , El Rosario University Press. Colombia. (2013).
  6. Kamradt, T., Mitchison, N. A. Tolerance and autoimmunity. N Engl J Med. 344 (9), 655-664 (2001).
  7. Rouiz-Argüelles, A., et al. Hematologic autoimmune conditions. Autoimmunity: From bench to bedside. Anaya, J. -M. , El Rosario University Press. Colombia. (2013).
  8. Venanzi, E. S., Benoist, C., Mathis, D. Good riddance: Thymocyte clonal deletion prevents autoimmunity. Curr Opin Immunol. 16 (2), 197-202 (2004).
  9. Meng, X., et al. Immunological mechanisms of tolerance: Central, peripheral and the role of T and B cells. Asia Pac Allergy. 13 (4), 175-186 (2023).
  10. Swartz, M. A., Hubbell, J. A., Reddy, S. T. Lymphatic drainage function and its immunological implications: From dendritic cell homing to vaccine design. Semin Immunol. 20 (2), 147-156 (2008).
  11. O'Byrne, A. M., Van Baarsen, L. G. M. Lymph nodes as gatekeepers of autoimmune diseases. RMD Open. 10 (4), e004097(2024).
  12. Hampton, H. R., Chtanova, T. Lymphatic migration of immune cells. Front Immunol. 10, 1168(2019).
  13. Fortuna, G., Brennan, M. T. Systemic lupus erythematosus: Epidemiology, pathophysiology, manifestations, and management. Dent Clin North Am. 57 (4), 631-655 (2013).
  14. Hanly, J. G., et al. The frequency and outcome of lupus nephritis: Results from an international inception cohort study. Rheumatology. 55 (2), 252-262 (2016).
  15. Andrews, B. S., et al. Spontaneous murine lupus-like syndromes: Clinical and immunopathological. J Exp Med. 148, 1198-1215 (1978).
  16. Harrell, M. I., Iritani, B. M., Ruddell, A. Lymph node mapping in the mouse. J Immunol Methods. 332 (1-2), 170-174 (2008).
  17. Morse, H. C., et al. Abnormalities induced by the mutant gene, lpr. Patterns of disease and expression of murine leukemia viruses in SJL/J mice homozygous and heterozygous for lpr. J Exp Med. 161 (3), 602-616 (1985).
  18. Ayalon, G., et al. Antibody semorinemab reduces tau pathology in a transgenic mouse model and engages tau in patients with Alzheimer's disease. Sci Transl Med. 13 (593), eabb2639(2021).
  19. Dong, X., et al. Antigen presentation by dendritic cells in renal lymph nodes is linked to systemic and local injury to the kidney. Kidney Int. 68 (3), 1096-1108 (2005).
  20. Lan, H. Y., Nikolic-Paterson, D. J., Atkins, R. C. Trafficking of inflammatory macrophages from the kidney lymph nodes during experimental glomerulonephritis. Clin Exp Immunol. 92, 336-341 (1993).
  21. Karmali, R. J., Suami, H., Wood, C. G., Karam, J. A. Lymphatic drainage in renal cell carcinoma: Back to the basics. BJU Int. 114 (6), 806-817 (2014).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Renal Lenf D mleriB brek HasarBa kl k H cresi Trafi iLenf D m EkstraksiyonuAk SitometrisiOtoimm n B brek HastalAntijen DrenajCD45 Pozitif H crelerMurin Cerrahi

İlgili makaleler