Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

AAV8-PCSK9 Enjekte Edilen Farelerden Aortta Aterosklerozun Yağ Kırmızısı O Boyama ile Değerlendirilmesi

1.6K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/68795

⸱

8 Ağustos 2025

 , 
1Department of Endocrinology, The First Affiliated Hospital of USTC, Division of Life Sciences and Medicine, University of Science and Technology of China, 2Anhui Provincial Key Laboratory of Metabolic Health and Panvascular Diseases

Bu makalede

Özet

Bu protokol, Yağ Kırmızısı O boyama kullanılarak fare aortlarında yüz aterosklerotik lezyonlarının diseksiyonu, perfüzyonu, boyanması, görüntülenmesi ve ölçülmesi için adım adım bir yöntemi açıklar.

Özet

Fare modelleri, ateroskleroz çalışmasında uzun süredir temel araçlar olmuştur ve plak oluşumu, lipid metabolizması ve kardiyovasküler inflamasyonun altında yatan moleküler ve hücresel mekanizmalar hakkında kritik bilgiler sağlar. Apoe-/- veya Ldlr-/- farelerin ötesinde, eşzamanlı batı tipi diyetle beslenen normal C57BL/6J farelerde AAV8-PCSK9D377Y enjeksiyonu, aterosklerozda translasyonel araştırmalar için yaygın olarak kullanılan bir model olarak ortaya çıkmaktadır. Yağ Kırmızısı O boyama, vasküler dokularda nötr lipid birikimini görselleştirmek için temel bir tekniktir. Basitliği, maliyet etkinliği ve lipid yüklü lezyonları tespit etmedeki yüksek duyarlılığı, onu klinik öncesi çalışmalarda aterosklerotik plak yükünü değerlendirmek için altın standart haline getirir. Bu çalışmada, en yüz aortunda aterosklerotik yükün diseksiyonu, perfüzyonu, longitudinal açılması, Yağ Kırmızısı O boyaması, görüntüleme ve yarı otomatik olarak ölçülmesi için pimlere veya karmaşık montaj adımlarına ihtiyaç duymadan ayrıntılı, tekrarlanabilir bir protokol sunuyoruz. Sonuçlarımız, AAV8-PCSK9D377Y enjeksiyonu ve batı tipi diyetle besleme kombinasyonunun farelerde önemli aterosklerotik lezyon oluşumunu etkili bir şekilde indüklediğini ve yüz Yağ Kırmızısı O boyamanın lipid birikimini ve plak yükünü değerlendirmek için güvenilir ve etkili bir teknik olduğunu göstermektedir. Ayrıca, bu protokol C57BL/6J farelerde AAV8-PCSK9 ile indüklenen model için optimize edilmiş olsa da, Apoe-/- fareler, Ldlr-/- fareler ve Ldlr-/- altın Suriye hamsterleri gibi diğer model ve türlerde kullanım için kolayca uyarlanabilir.

Giriş

Arteriyel intima içinde lipitlerin birikmesi ve iltihaplanma ile işaretlenen ateroskleroz, koroner arter hastalığının patolojik temelini ve miyokard enfarktüsü ve inme dahil olmak üzere geniş bir kardiyovasküler hastalık (KVH) yelpazesini temsil eder 1,2,3,4. KVH, dünya çapında morbidite ve mortalitenin önde gelen nedeni olmaya devam etmekte ve önemli bir küresel sağlık ve ekonomik yük oluşturmaktadır 3,5. KVH'nın birincil patolojik temeli olan ateroskleroz, altta yatan mekanizmaları ortaya çıkarmayı ve etkili terapötik stratejiler geliştirmeyi amaçlayan kapsamlı araştırmalara dikkat çekmiştir. Fare modelleri, aterogenezin altında yatan mekanizmaların aydınlatılmasında ve potansiyel terapötik müdahalelerin değerlendirilmesinde merkezi bir rol oynamaktadır6. Hayvan modellerinin geliştirilmesi, araştırmacıların ilgili hücresel ve moleküler mekanizmaları incelemesine ve ortaya çıkan terapötik stratejileri değerlendirmesine olanak tanıyarak aterogenez anlayışımızı ilerletmede etkili olmuştur 6,7. Apolipoprotein E eksikliği olan (Apoe−/−) ve düşük yoğunluklu lipoprotein reseptör eksikliği olan (Ldlr−/−) fareler gibi aterosklerozun klasik murin modelleri, hiperlipidemi ve sağlam plak oluşumunu indüklemek için uzun süredir kullanılmaktadır. Bununla birlikte, bu genetik olarak değiştirilmiş hatların üretilmesi ve bakımı, zaman alıcı olabilen ve deneysel esnekliği sınırlayabilen kapsamlı ıslah gerektirir 8,9,10. Bu sınırlamaların üstesinden gelmek için, proprotein konvertaz subtilisin/kexin tip 9'da (AAV8-PCSK9D377Y) bir fonksiyon kazancı mutasyonunu kodlayan adeno-ilişkili virüs serotip 8'i kullanan alternatif bir yaklaşım öne çıkmıştır. Batı tipi yüksek yağlı, yüksek kolesterollü bir diyetle kombinasyon halinde vahşi tip C57BL / 6J farelere uygulandığında, bu yöntem nispeten kısa bir zaman dilimi içinde hiperkolesterolemi ve aterosklerotik lezyonları etkili bir şekilde indükler - karmaşık genetik çaprazlamalara veya ateroskleroza eğilimli arka planlara geri çaprazlamaya gerek kalmadan 9,11. Avantajlarına rağmen, AAV8-PCSK9 modelinin dikkate alınması gereken belirli sınırlamaları vardır. Özellikle, hiperkolesterolemi ve aterosklerotik lezyon gelişiminin derecesi, viral doz ve uygulama araçları gibi değişkenlerden etkilenebilir, bu da hayvanlar arası değişkenliğe neden olabilir ve deneysel sonuçların tekrarlanabilirliğini etkileyebilir11.

Bu tür modellerde hastalık yükünü değerlendirmek için, aortun yüz Yağ Kırmızısı O boyaması, vaskülatür12,13 boyunca lipid açısından zengin aterosklerotik lezyonları görselleştirmek ve ölçmek için iyi kurulmuş, hassas bir teknik sağlar. Bu yaklaşım hem kalitatif hem de kantitatif veriler sunar ve genetik manipülasyon, farmakolojik müdahale veya diyet modülasyonunun etkilerini değerlendirmek için klinik öncesi çalışmalarda yaygın olarak kullanılır14.

Bu çalışmada, tam montajlı fare aortlarında aterosklerotik lezyonların izolasyonu, perfüzyonu, longitudinal açılması, Oil Red O boyaması, görüntüleme ve yarı otomatik kantifikasyonu için pratik ve tekrarlanabilir bir protokol sunuyoruz. Bu protokolde, AAV8-PCSK9D377Y, kuyruk veni enjeksiyonu yoluyla fare başına 5 ×10 11 vektör genomu (vg) dozunda uygulanır. Yağdan %40 kcal ve %1.25 kolesterol içeren western tipi bir diyet (WD) ile kombine edildiğinde 12-16 hafta içinde sağlam aterosklerotik lezyon gelişimi gözlenebilir. Buradaki protokol, dokuların balmumu yüzeylerine sabitlenmesi ihtiyacını ortadan kaldırarak ve bunun yerine değişkenliği ve teknik talebi azaltan basitleştirilmiş bir düzleştirme tekniği kullanarak sürecin her adımını kolaylaştırır. Yöntem sadece C57BL / 6J farelerinde AAV8-PCSK9D377Y ile indüklenen model için optimize edilmekle kalmaz, aynı zamanda Apoe-/- ve Ldlr-/- fareler ve ayrıca Ldlr-/- Suriye altın hamsterleri 15,16,17,18,19, insan benzeri lipid metabolizması nedeniyle umut verici bir model olarak ortaya çıkmıştır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm hayvan prosedürleri, NIH'de belirtilen yönergelere uygun olarak gerçekleştirildi ve Çin Bilim ve Teknoloji Üniversitesi Hayvan Etik Komitesi tarafından onaylandı (Etik Onay No. USTCACUC27120124102).

NOT: AAV8-PCSK9 ile ilgili tüm prosedürler, Biyogüvenlik Seviye 2 (BSL-2) koşulları altında sertifikalı bir Sınıf II biyolojik güvenlik kabininde gerçekleştirilmelidir. Personel, laboratuvar önlüğü, tek kullanımlık eldivenler ve koruyucu gözlükler dahil olmak üzere uygun kişisel koruyucu ekipman (KKD) giymelidir.

1. Farelerde ateroskleroz indüksiyonu

  1. 8 haftalık bir C57BL / 6J fareye intravenöz olarak AAV8-PCSK9D377Y (5 × 1011 vg / fare kuyruk damarı yoluyla) enjekte edin.
  2. Fareyi enjeksiyondan hemen sonra WD'ye (yağdan %40 kcal ve %1.25 kolesterol içeren) yerleştirin.
  3. Aterosklerotik lezyon oluşumunu indüklemek için fare WD'yi 12-16 hafta boyunca besleyin.
    NOT: 12 haftalık bir beslenme periyodu yaygın olarak kullanılır ve özellikle AAV8-PCSK9 ile indüklenen modellerde belirgin aterosklerotik plak oluşumunu indüklediği gösterilmiştir. Daha uzun süreler (ör., 16 hafta) daha ileri lezyonlara neden olabilir ve spesifik deneysel hedeflere göre en uygun zaman noktası seçilmelidir.
  4. Beslenme süresi boyunca vücut ağırlığını, genel sağlığı ve plazma lipid seviyelerini düzenli olarak izleyin. Lipid profili oluşturma için, başlangıçta ve seçilen zaman noktalarında (ör., her 4 haftada bir) kısa izofluran anestezisi altında submandibular veya kuyruk ven kanaması yoluyla.

2. Ötenazi ve perfüzyon

  1. Fareyi ötenazi yapmak için sodyum pentobarbital (200 mg / kg, intraperitoneal enjeksiyon) uygulayın.
  2. Kalbi ortaya çıkarmak için göğüs boşluğunu açın.
  3. Sağ atriyal apendiksta bir kesi yapın ve kanı boşaltmak için 21 G'lik bir iğne kullanarak sol ventrikülden soğuk Fosfat Tamponlu Salin (PBS, yaklaşık 10 mL) perfüze edin.

3. Aort diseksiyonu

  1. Torasik aortu kalpten diyaframa kadar ortaya çıkarmak için akciğerler ve timus gibi fazla dokuları çıkarın.
  2. Aort arkının etrafındaki çevredeki yağ dokusunu çıkarmak için ince diseksiyon makası ve hassas forseps kullanın. Diyaframın yakınındaki torasik aortun tabanını çevreleyen yağ dokusunu nazikçe yükseltin. İnce diseksiyon makası kullanarak (vasküler yapının zarar görmediğinden emin olarak) yağ dokusunun kökü boyunca eksize edin, aort damarını tamamen açığa çıkarmak için diseksiyona aort arkına doğru devam edin.
    NOT: Perivasküler yağ dokusunun aorttan ayrılması kritiktir ve aort diseke edildikten ve PBS'ye yerleştirildikten sonra perivasküler yağın aorttan diseksiyonu teknik olarak zor olduğundan, bu adımın aort in situ ( fareden kesilmeden önce) ile gerçekleştirilmesi önerilmektedir.
  3. Hassas makas kullanarak torasik aortun tabanındaki damarı kesin. Kesilen ucu forseps ile kaldırın ve damar boyunca aort kemerine doğru yukarı doğru inceleyin. Aortun üç ana dalını uygun bir mesafede kesin.
  4. Torasik aortu kalpten ayırmak için aort kökünden transekt yapın ve daha fazla analiz için tüm segmenti izole edin.
  5. Eksize edilen kabı önceden soğutulmuş %4 paraformaldehit (PFA) çözeltisine aktarın ve gece boyunca (12-16 saat) 4 °C'de inkübe edin. Elleçlemeyi standartlaştırmak ve toplu işlemeyi kolaylaştırmak için, sabitleme sırasında tek tek aortları 24 oyuklu veya 48 oyuklu bir plakanın kuyularına yerleştirin.
    NOT: PFA'da aşırı inkübasyon damar sertleşmesine neden olabileceğinden, uzunlamasına kesitlemeyi ve daha fazla analizi engelleyebileceğinden, uzun süreli fiksasyondan (24 saatten fazla) kaçının.
    DİKKAT:% 4 PFA, solunum ve deri maruziyeti riskleri oluşturan toksik ve uçucu bir fiksatiftir. PFA fiksasyonunu içeren tüm adımlar, nitril eldivenler, laboratuvar önlüğü ve koruyucu gözlükler dahil olmak üzere KKD giyilirken bir çeker ocakta gerçekleştirilmelidir. Solumaktan ve cilt temasından kaçının. Kullanılan PFA çözeltisi, belirlenmiş formaldehit atık kaplarında toplanmalı, açıkça etiketlenmeli ve kurumsal veya lisanslı bir kimyasal atık bertaraf servisi tarafından tehlikeli kimyasal atık olarak atılmalıdır.

4. Yağ Kırmızısı O boyama

  1. Artık PFA'yı çıkarmak için sabit aortları PBS ile üç kez yıkayın.
  2. Şekil 1'de gösterildiği gibi, aortu diseksiyon mikroskobu altında ince bir makas kullanarak, aort kökünden başlayarak iç eğriliğin yanında uzunlamasına açın. Alternatif olarak, fiksasyondan önce aortu açın, bu da montaj sırasında damarın daha kolay açılmasını ve hizalanmasını kolaylaştırabilir. Gerekirse, ek bölgeleri ortaya çıkarmak için brakiyosefalik arter (BCA), sağ karotis arter (RCA) ve sol subklavyen arter gibi aort kemerinin ana dallarını uzunlamasına açın11. Bu alanlardaki plaklar ayrılabileceğinden veya hasar görebileceğinden bu adım sırasında dikkatli olun.
    NOT: Her iki yaklaşım da operatör tercihine ve dokunun durumuna göre seçilebilir.
  3. İzopropanol içindeki %0,5'lik stoğu 3:2 oranında (h/h, nihai konsantrasyon %0,3) deiyonize su ile seyrelterek Oil Red O çalışma solüsyonunu hazırlayın. Boyayı tamamen çözmek için 37 ° C'lik bir su banyosunda 5 dakika inkübe edin.
  4. Çökeltileri gidermek için 0.22-0.45 μm'lik bir membrandan süzün. Solüsyonu kullanana kadar 37 °C su banyosunda tutun.
  5. PBS'yi her kuyudan çıkarın. Aortları tamamen daldırmak için Yağ Kırmızısı O çalışma solüsyonu ekleyin. Oda sıcaklığında (RT) 10 dakika inkübe edin.
  6. İnkübasyondan sonra, çözeltiyi aspire edin ve hemen her oyuğa 1 mL% 60 izopropanol ekleyin. Plakayı bir çalkalayıcı üzerine yerleştirin ve yıkamak için hafifçe çalkalayın.
  7. Yaklaşık 30 saniye sonra, damarın lezyon olmayan alanları yarı saydam göründüğünde, izopropanolü aspire ederek yıkamayı durdurun. Numuneleri PBS ile iki kez durulayın.
  8. Yağ Kırmızısı O boyamadan sonra, gerekirse kalan perivasküler yağ dokusunu daha da kesin. Bu aşamada, yağ dokusu tipik olarak iyi boyanır ve görsel olarak ayırt edilebilir, bu da vasküler duvarın bütünlüğünden ödün vermeden daha doğru tanımlama ve çıkarma sağlar.
  9. Yağ Kırmızısı O boyamadan sonra, aortu uzunlamasına açın ve stereomikroskop altında anında görüntüleme için dikkatlice bir cam slayt üzerine düz bir şekilde monte edin.
  10. Alternatif olarak, görüntülemeden önce numuneleri kısa süreli PBS'de 4 °C'de saklayın. Düzleşmesi zor arterler için, optimum konumlandırma ve netlik sağlamak için ince iğneler kullanarak damarları siyah bir balmumu plakasına sabitleyin. Uzun süreli koruma için, lekeli kapları cam slaytlara monte edin, gliserol jelatin ile kapatın ve ardından doğrudan görüntüleyin.
    NOT: Artık Yağ Kırmızı O'dan kaynaklanan kontaminasyonu önlemek için lekeli aortları yıkamak için yeni bir plakaya aktarın.
    DİKKAT: Oil Red O, tipik olarak izopropanol içinde hazırlanan, yanıcı ve tahriş edici olan lipofilik bir boyadır. Dumanların solunmasını önlemek için ORO çözeltilerini kimyasal bir davlumbazda kullanın. Cilt ve gözlerle temasından kaçının. Yağ Kırmızısı O boyama solüsyonları yanıcı kimyasal atık kaplarında ayrı olarak toplanmalıdır. Yerel tehlikeli atık bertaraf yönetmeliklerine göre bertaraf edin.

5. Görüntüleme

  1. Kontrastı artırmak için lekeli aortları beyaz bir arka plan üzerine monte edin. Gemi esnekliğini koruyun.
    NOT: Yüksek kontrastlı bir arka plan, görüntü analiz yazılımı kullanarak daha verimli plak tanımayı kolaylaştırır. Kullanıcı tercihine bağlı olarak diğer arka plan renkleri de kullanılabilir.
  2. Yüksek çözünürlüklü bir kamera ile düz yataklı bir tarayıcı veya diseksiyon mikroskobu kullanarak tüm aortu görüntüleyin.
  3. Numuneler arasında eşit aydınlatma ve tutarlı büyütme sağlayın (örneğin, 6 ila 8 kat büyütme). Görüntüleme sırasında aort kurursa, tuzlu su veya PBS'ye batırılmış kivi mendilleri kullanarak rehidrate edin.

6. Aterosklerotik lezyonların miktar tayini

  1. Görüntüyü ImageJ'de açın. Aşağıdaki adımlar, örnek olarak ImageJ kullanılarak yapılan analiz prosedürünü açıklamaktadır.
    NOT: Kullanıcı tercihine ve kullanılabilirliğine bağlı olarak diğer görüntü analiz yazılımları (ör. Zeiss Zen, Fiji) de kullanılabilir.
  2. Bilinen bir referans (örn. ölçek çubuğu veya cetvel) kullanarak ölçeği ayarlayın. Bilinen mesafeyi aşmak için Düz Çizgi Aracı'nı kullanın. Analiz Et > Ölçeği Ayarla'ya gidin, mesafeyi ve birimleri girin, Genel'i seçin ve Tamam'a tıklayın.
  3. Tüm aort bölgesinin ana hatlarını çizmek için Poligon veya Serbest El Seçim Aracını kullanın.
  4. Analiz > Ölç'ü kullanarak alanı ölçün.
  5. Görüntü > Renk Eşiğini Ayarla'yı kullanarak aterosklerotik plak alanlarını belirleyin>. Petrol Kırmızısı O-pozitif bölgeleri izole etmek için Doygunluğu ve Parlaklığı ayarlayın.
  6. Lekeli alanların ikili seçimini oluşturmak için Seç'e tıklayın. Analiz > Ölç'ü kullanarak seçili bölgeleri ölçün. Bir toplu işlemdeki tüm görüntülere aynı eşik ayarlarını uygulayın.
    NOT: Artık yağ veya artefaktların yanlış pozitif lekelenmeye neden olabileceği göz önüne alındığında, kullanıcılar özel deneysel ihtiyaçlarına ve görüntü kalitesine göre plak bölgelerini manuel veya yarı otomatik olarak tanımlamayı seçebilirler. Plak alanının manuel olarak izlenmesi, toplam damar alanını tanımlamak için kullanılan yöntemin aynısı kullanılarak gerçekleştirilebilir.
  7. Daha fazla analiz için sonuçları (Dosya > Farklı Kaydet > Sonuçlar) .csv olarak dışa aktarın.
  8. Plak alanını plak alanı/toplam aort alanı olarak ifade × %100'dür. Aterosklerotik plak yükünün daha doğru bir değerlendirmesini elde etmek için, plak alanını anatomik bölgelere göre ölçün (örneğin, aort arkı, özellikle daha az eğrilik ve toplam aort) ve sonuçları, her bir bölgenin toplam yüzey alanına göre plak alanı yüzdesi olarak ifade edin: plak alanı (%) = (plak alanı / bölgenin toplam alanı) × %100.
    NOT: Potansiyel yanlılığı en aza indirmek için kör analiz önerilir. Çok sayıda görüntü analiz ediliyorsa, eşiklemeden ölçüme kadar tüm iş akışı Makro Kaydedici (Eklentiler > Makrolar > Kayıt) kullanılarak otomatikleştirilebilir ve Toplu > Makro > Proses kullanılarak toplu olarak işlenebilir. Bu, verimli ve tekrarlanabilir yüksek verimli analiz sağlar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Aort duvarındaki lipid birikiminin derecesini değerlendirmek için, AAV8-PCSK9D377Y enjekte edilen ve 12 hafta boyunca Batı diyetiyle beslenen erkek C57BL / 6J farelerinden izole edilen aortlar üzerinde yaş uyumlu kontrol fareleri ile birlikte yüz Yağ Kırmızısı O boyaması yapıldı. PBS ile sistemik perfüzyon ve dikkatli diseksiyondan sonra, lipid yüklü aterosklerotik lezyonları görüntülemek için tüm aortlar dikkatlice longituden diseke edildi ve Oil Red O ile boyandı. Genel deneysel prosedür

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu çalışmada anlatılan yüz Yağı Kırmızı O boyama yöntemi, tüm aorttaki aterosklerotik lezyon yükünü değerlendirmek için sağlam, tekrarlanabilir ve zaman açısından verimli bir yaklaşım sunmaktadır. Bu çalışmada plak analizi için tüm aorttan ziyade aortik ark ve torasik aort ilgilenilen bölgeler olarak özellikle seçildi. Bu karar, Apoe−/− ve Ldlr−/− fareleri gibi klasik genetik nakavt modellerine kıyasla ti...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı'ndan (Hibe No. 82370444) alınan hibelerle desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
C57BL / 6J farelerGemPharmatech N000013
  % 4 paraformaldehitBeyotimeP0099
AAV8-PCSK9D377Y viral partikülleri dokuları sabitlemek için WzbiopAV208001Aterosklerozu indüklemek için
İnce ForsepsGüzel Bilim AraçlarıNo. 11254-20Aort diseksiyonu için
ImageJNIH1.47
İzopropanolSangon biyoteknolojiA600918Fazla yağı temizlemek için kırmızı
Yağ Kırmızı O İzopropanol içinde %0.5 ÇözeltiPoly Scientific R& D CorpS1849-32OZYağ kırmızısı O boyama için
Fosfat tamponlu salinServicebioG4202Aortların perfüzyonu ve temizliği için
BaharMakası Güzel Bilim AraçlarıNo. 15003-08Aort diseksiyonu için
Stereoskopik mikroskopMshotMZ62Aort diseksiyonu ve görüntüleme için
Batı diyeti Araştırma DiyetiD12108CAterosklerozu indüklemek için

Kaynaklar

  1. Libby, P., et al. Atherosclerosis. Nat Rev Dis Primers. 5 (1), 56(2019).
  2. Björkegren, J. L. M., Lusis, A. J. Atherosclerosis: Recent developments. Cell. 185 (10), 1630-1645 (2022).
  3. Libby, P. The changing landscape of atherosclerosis. Nature. 592 (7855), 524-533 (2021).
  4. Wang, Z., Chen, S., Zhang, F., Akhmedov, S., Weng, J., Xu, S. Prioritization of Lipid Metabolism Targets for the Diagnosis and Treatment of Cardiovascular Diseases. Research (Wash D C). (8), 0618(2025).
  5. GBD 2021 Stroke Risk Factor Collaborators. Global, regional, and national burden of stroke and its risk factors, 1990-2021: A systematic analysis for the global burden of disease study 2021. Lancet Neurol. 23 (10), 973-1003 (2024).
  6. Von Scheidt, M., et al. Applications and limitations of mouse models for understanding human atherosclerosis. Cell Metab. 25 (2), 248-261 (2017).
  7. Gisterå, A., Ketelhuth, D. F. J., Malin, S. G., Hansson, G. K. Animal models of atherosclerosis-supportive notes and tricks of the trade. Circ Res. 130 (12), 1869-1887 (2022).
  8. Emini Veseli, B., et al. Animal models of atherosclerosis. Eur J Pharmacol. 816, 3-13 (2017).
  9. Ilyas, I., et al. Mouse models of atherosclerosis in translational research. Trends Pharmacol Sci. 43 (11), 920-939 (2022).
  10. Jiang, H., et al. Innovative atherosclerosis models: Advancing pathophysiology and translational research. Research (Wash D C). 8, 0617(2025).
  11. Bjørklund, M. M., et al. Induction of atherosclerosis in mice and hamsters without germline genetic engineering. Circ Res. 114 (11), 1684-1689 (2014).
  12. Chen, P. -Y., Qin, L., Simons, M. Imaging and analysis of oil red o-stained whole aorta lesions in an aneurysm hyperlipidemia mouse model. J Vis Exp. (183), e61277(2022).
  13. Nunnari, J. J., Zand, T., Joris, I., Majno, G. Quantitation of oil red o staining of the aorta in hypercholesterolemic rats. Exp Mol Pathol. 51 (1), 1-8 (1989).
  14. Xu, S., et al. The novel coronary artery disease risk gene jcad/kiaa1462 promotes endothelial dysfunction and atherosclerosis. Eur Heart J. 40 (29), 2398-2408 (2019).
  15. Sun, L., et al. Endothelial MICU1 protects against vascular inflammation and atherosclerosis by inhibiting mitochondrial calcium uptake. J Clin Invest. 135 (7), e181928(2025).
  16. Su, M., et al. Endothelial IGFBP6 suppresses vascular inflammation and atherosclerosis. Nat Cardiovasc Res. 4 (2), 145-162 (2025).
  17. Zhang, Z., et al. A natural small molecule isoginkgetin alleviates hypercholesterolemia and atherosclerosis by targeting acly. Theranostics. 15 (10), 4325-4344 (2025).
  18. Zhao, Y., et al. Small rodent models of atherosclerosis. Biomed Pharmacother. 129, 110426(2020).
  19. Zhang, F., Yin, Y., Weng, J., Xu, S. Cepharanthine aggravated atherosclerosis and liver injury in Apoe−/− and Ldlr−/− mice. Cardiol Plus. 10 (1), 23-33 (2025).
  20. Liu, M. -N., et al. Revisiting the role of GDF15 in atherosclerosis in mouse and human. Acta Pharmacol Sin. , doi: 10.1038/s41401-025-01561-3 (2025).
  21. Balamurugan, K., et al. Protocol to evaluate hyperlipidemia in zebrafish larvae. STAR Protoc. 3 (4), 101819(2022).
  22. Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. NIH image to imageJ: 25 years of image analysis. Nat Methods. 9 (7), 671-675 (2012).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Ateroskleroz DeğerlendirmesiAAV8-PCSK9 FareleriEn Face AortPlak YüküLipid BirikimiBatı Tipi Diyet FareleriFare Aort DiseksiyonuAterosklerotik LezyonLipid Akümülasyonu

Bu makale yayımlandı

Video yakında

Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.