Bu protokol, Yağ Kırmızısı O boyama kullanılarak fare aortlarında yüz aterosklerotik lezyonlarının diseksiyonu, perfüzyonu, boyanması, görüntülenmesi ve ölçülmesi için adım adım bir yöntemi açıklar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Bu protokol, Yağ Kırmızısı O boyama kullanılarak fare aortlarında yüz aterosklerotik lezyonlarının diseksiyonu, perfüzyonu, boyanması, görüntülenmesi ve ölçülmesi için adım adım bir yöntemi açıklar.
Fare modelleri, ateroskleroz çalışmasında uzun süredir temel araçlar olmuştur ve plak oluşumu, lipid metabolizması ve kardiyovasküler inflamasyonun altında yatan moleküler ve hücresel mekanizmalar hakkında kritik bilgiler sağlar. Apoe-/- veya Ldlr-/- farelerin ötesinde, eşzamanlı batı tipi diyetle beslenen normal C57BL/6J farelerde AAV8-PCSK9D377Y enjeksiyonu, aterosklerozda translasyonel araştırmalar için yaygın olarak kullanılan bir model olarak ortaya çıkmaktadır. Yağ Kırmızısı O boyama, vasküler dokularda nötr lipid birikimini görselleştirmek için temel bir tekniktir. Basitliği, maliyet etkinliği ve lipid yüklü lezyonları tespit etmedeki yüksek duyarlılığı, onu klinik öncesi çalışmalarda aterosklerotik plak yükünü değerlendirmek için altın standart haline getirir. Bu çalışmada, en yüz aortunda aterosklerotik yükün diseksiyonu, perfüzyonu, longitudinal açılması, Yağ Kırmızısı O boyaması, görüntüleme ve yarı otomatik olarak ölçülmesi için pimlere veya karmaşık montaj adımlarına ihtiyaç duymadan ayrıntılı, tekrarlanabilir bir protokol sunuyoruz. Sonuçlarımız, AAV8-PCSK9D377Y enjeksiyonu ve batı tipi diyetle besleme kombinasyonunun farelerde önemli aterosklerotik lezyon oluşumunu etkili bir şekilde indüklediğini ve yüz Yağ Kırmızısı O boyamanın lipid birikimini ve plak yükünü değerlendirmek için güvenilir ve etkili bir teknik olduğunu göstermektedir. Ayrıca, bu protokol C57BL/6J farelerde AAV8-PCSK9 ile indüklenen model için optimize edilmiş olsa da, Apoe-/- fareler, Ldlr-/- fareler ve Ldlr-/- altın Suriye hamsterleri gibi diğer model ve türlerde kullanım için kolayca uyarlanabilir.
Arteriyel intima içinde lipitlerin birikmesi ve iltihaplanma ile işaretlenen ateroskleroz, koroner arter hastalığının patolojik temelini ve miyokard enfarktüsü ve inme dahil olmak üzere geniş bir kardiyovasküler hastalık (KVH) yelpazesini temsil eder 1,2,3,4. KVH, dünya çapında morbidite ve mortalitenin önde gelen nedeni olmaya devam etmekte ve önemli bir küresel sağlık ve ekonomik yük oluşturmaktadır 3,5. KVH'nın birincil patolojik temeli olan atero....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tüm hayvan prosedürleri, NIH'de belirtilen yönergelere uygun olarak gerçekleştirildi ve Çin Bilim ve Teknoloji Üniversitesi Hayvan Etik Komitesi tarafından onaylandı (Etik Onay No. USTCACUC27120124102).
NOT: AAV8-PCSK9 ile ilgili tüm prosedürler, Biyogüvenlik Seviye 2 (BSL-2) koşulları altında sertifikalı bir Sınıf II biyolojik güvenlik kabininde gerçekleştirilmelidir. Personel, laboratuvar önlüğü, tek kullanımlık eldivenler ve koruyucu gözlükler dahil olmak üzere uygun kişisel koruyucu ekipman (KKD) giymelidir.
1. Farelerde ateroskleroz indüksiyonu
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Aort duvarındaki lipid birikiminin derecesini değerlendirmek için, AAV8-PCSK9D377Y enjekte edilen ve 12 hafta boyunca Batı diyetiyle beslenen erkek C57BL / 6J farelerinden izole edilen aortlar üzerinde yaş uyumlu kontrol fareleri ile birlikte yüz Yağ Kırmızısı O boyaması yapıldı. PBS ile sistemik perfüzyon ve dikkatli diseksiyondan sonra, lipid yüklü aterosklerotik lezyonları görüntülemek için tüm aortlar dikkatlice longituden diseke edildi ve Oil Red O ile boyandı. Genel deneysel prosedür
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu çalışmada anlatılan yüz Yağı Kırmızı O boyama yöntemi, tüm aorttaki aterosklerotik lezyon yükünü değerlendirmek için sağlam, tekrarlanabilir ve zaman açısından verimli bir yaklaşım sunmaktadır. Bu çalışmada plak analizi için tüm aorttan ziyade aortik ark ve torasik aort ilgilenilen bölgeler olarak özellikle seçildi. Bu karar, Apoe−/− ve Ldlr−/− fareleri gibi klasik genetik nakavt modellerine kıyasla ti.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.
Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı'ndan (Hibe No. 82370444) alınan hibelerle desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| C57BL / 6J fareler | GemPharmatech | N000013 | |
| % 4 paraformaldehit | Beyotime | P0099 | |
| AAV8-PCSK9D377Y viral partikülleri dokuları sabitlemek için | Wzbio | pAV208001 | Aterosklerozu indüklemek için |
| İnce Forseps | Güzel Bilim Araçları | No. 11254-20 | Aort diseksiyonu için |
| ImageJ | NIH | 1.47 | |
| İzopropanol | Sangon biyoteknoloji | A600918 | Fazla yağı temizlemek için kırmızı |
| Yağ Kırmızı O İzopropanol içinde %0.5 Çözelti | Poly Scientific R& D Corp | S1849-32OZ | Yağ kırmızısı O boyama için |
| Fosfat tamponlu salin | Servicebio | G4202 | Aortların perfüzyonu ve temizliği için |
| Bahar | Makası Güzel Bilim Araçları | No. 15003-08 | Aort diseksiyonu için |
| Stereoskopik mikroskop | Mshot | MZ62 | Aort diseksiyonu ve görüntüleme için |
| Batı diyeti | Araştırma Diyeti | D12108C | Aterosklerozu indüklemek için |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu makale yayımlandı
Video yakında