Araştırma makalesi

Mide Kanserinde Ko-uyarıcı Molekül LLT1'in İmmünoterapi Etkinliğinde Ekspresyonu, Klinik Önemi ve Rolü Değerlendirmesi

618 görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/68827

⸱

10 Ekim 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of General Surgery, The First Affiliated Hospital of Soochow University, 2Department of Pathology, The First Affiliated Hospital of Soochow University, 3Jiangsu Institute of Clinical Immunology, The First Affiliated Hospital of Soochow University, 4Jiangsu Key Laboratory of Clinical Immunology, Soochow University, 5Jiangsu Key Laboratory of Gastrointestinal Tumor Immunology, The First Affiliated Hospital of Soochow University

Bu makalede

Özet

Bu araştırma, multi-omik ve klinik analizler yoluyla mide kanserinde öngörücü bir immünoterapi biyobelirteci olarak LLT1'i araştırmaktadır. Çalışma, gelişmiş tedavi sonuçları için hassas immünoterapi yaklaşımlarını kolaylaştırmak amacıyla LLT1'in bağışıklıktan kaçınma ve tümör mikroçevre modülasyonundaki rolünü değerlendirmektedir.

Özet

LLT1, yeni bir bağışıklık kontrol noktası molekülü ve potansiyel terapötik hedeftir. İmmünoterapi, ilerlemiş mide kanserinde sonuçları iyileştirmiştir; Bununla birlikte, birçok hasta yanıt vermez veya direnç geliştirmez ve öngörücü biyobelirteçler eksiktir. LLT1'in mide kanseri immün kaçışındaki rolü ve immünoterapi yanıtı üzerindeki etkisi belirsizliğini korumaktadır. Bunu değerlendirmek için, LLT1 ekspresyonu, bağışıklık hücresi infiltrasyonunu ölçmek için birden fazla algoritma (TIMER, CIBERSORT ve ESTIMATE) kullanılarak Kanser Genom Atlası (TCGA) gastrik adenokarsinom veri setinde analiz edildi. Protein ekspresyonu, 268 gastrik adenokarsinom örneğinde immünohistokimya (IHC) ve 115 immünoterapi sonrası dokuda multipleks immünofloresan (MIF) ile doğrulandı. Entegre transkriptomik ve proteomik veriler, tümör mikroçevre özellikleri ve klinik immünoterapi sonuçları ile ilişkiler açısından analiz edildi. Sonuçlar, yüksek LLT1 protein ekspresyonunun, daha az ilerlemiş tümör özellikleri (daha düşük invazyon derinliği ve nodal metastaz; P < 0.05) ve daha uzun genel sağkalım (P = 0.012). LLT1 mRNA ve protein seviyeleri, tümör mikroçevresinde daha fazla CD8+ T hücresi ve M1 makrofaj infiltrasyonu ve yüksek PD-L1 ekspresyonu ile korelasyon gösterdi. Mevcut prognostik verilere sahip 198 hastadan oluşan ilk kohort arasında, yüksek LLT1 ekspresyonu olan hastalar (n=117), düşük ekspresyonu olanlara (n=81) kıyasla önemli ölçüde daha uzun genel sağkalım gösterdi. Kombine immünoterapi ve kemoterapi ile tedavi edilen hastaların ikinci kohortunda, yüksek LLT1 ekspresyonu (n=48) olan tümörler, düşük LLT1 ekspresyonu olanlara (n=67) göre daha uzun progresyonsuz sağkalıma (P = 0,014) sahipti. İmmünoterapi etkili hastalarda (n=62) tedaviye dirençli hastalara (n=53) göre PD-1+CD161+ immün hücre popülasyonlarında anlamlı bir artış (P < 0,05) gözlendi. Sonuç olarak, LLT1 ekspresyonu, mide kanserinde olumlu prognozun umut verici bir biyobelirtecidir. Bildiğimiz kadarıyla, bu, LLT1 ekspresyonunun mide kanserinde kombine kemoterapi ve immünoterapiye daha iyi yanıt öngördüğünü ve immünoterapötik stratejilere rehberlik etme potansiyelini desteklediğini gösteren ilk çalışmadır.

Giriş

Gastroözofageal kanser, özellikle mide kanseri (GC), dünyaçapında en sık görülen 5. kanser türüve en ölümcül 5. kanser türü olma özelliğini taşımaktadır. Küresel istatistikler, her yıl yaklaşık 1 milyon yeni vakanın tespit edildiğini ve Doğu Asya'nın hastalığın orantısız bir payını üstlendiğini ve küresel insidansın yarısından fazlasına katkıda bulunduğunu ortaya koymaktadır1. Erken evre GC tanısı konanlar için hayatta kalma olasılığı önemli ölçüde olumludur ve %90'dan fazlası endoskopik submukozal diseksiyon (ESD) veya radikal cerrahi müdahaleyi takiben 5 yıllık sağkalım oranlarına ulaşmaktadır2. Bununla birlikte, ilk semptomların ince sunumu genellikle lokal olarak ilerlemiş veya metastatik bir faz 3,4 tanısına yol açar. Bu ileri aşamalardaki hastalar için görünüm vahimdir ve tedavi edilmeyenler ancak 6 aylık bir medyan genel sağkalım (OS) yaşarlar. Florourasil ve platin bazlı kombinasyon kemoterapi rejimlerinin uygulanmasıyla bile, medyan OS yalnızca yaklaşık bir yıla uzatılır5.

Son zamanlarda, immün kontrol noktası inhibitörleri olarak adlandırılan bu yeni ilaçlar sayesinde geç evre mide kanserinin tedavisinde önemli bir değişiklik olmuştur. Üzerlerinde belirli bir belirteç olan PD-L1'e sahip kanser hücreleri için sihirli bir mermiye benzerler - Birleşik Pozitif Puan (CPS) ölçeğinde en az 1 puan. Bu tedaviler aynı zamanda yüksek mikrosatellit instabilitesi (MSI-H) olarak adlandırılan, DNA'larında karışan kanserler için de oldukça etkilidir. Bu yeni yaklaşım, hastalara daha fazla zaman sağlamada fark yaratmaktadır 6,7. Önemli klinik çalışmalar, PD-L1 pozitif kohortunda, CPS'si 10 veya daha yüksek olan bireylerin, PD-1 monoklonal antikorları 8,9 ile tedaviden sonra sağkalımda daha belirgin bir artış elde ettiğini göstermektedir. Bununla birlikte, mevcut immünoterapi hala birden fazla klinik zorlukla karşı karşıyadır: objektif yanıt oranları (ORR) genellikle %20'nin altında, ikincil direnç oranları %40-60 kadar yüksek, kusurlu biyobelirteç tahmin sistemleri (mevcut biyobelirteçler potansiyel yararlanıcıların sadece %30-40'ını tanımlayabilir) ve bağışıklıkla ilişkili advers olayların (irAE'ler) yönetilmesindeki zorluklar 10,11,12,13,14. İkili immün kontrol noktası blokajı (örneğin, kombine PD-1/CTLA-4 inhibisyonu) veya kemoimmünoterapi rejimleri yanıt oranlarını %40-60'a çıkarabilse de, hastaların yaklaşık yarısı hala sürdürülebilir klinik faydalar elde edememektedir15. Bu nedenle, çoklu omik özelliklere dayalı hassas sınıflandırma sistemlerinin oluşturulması, yeni prediktif biyobelirteçlerin keşfi ve yeni immün kontrol noktalarının tanımlanması, GC immünoterapisinin klinik sonuçlarını iyileştirmek için kritik araştırma yönleri haline gelmiştir.

Lektin benzeri Transkript 1 (LLT1), tanımlanmış bağlanma ortağı olarak görev yapan doğal öldürücü (NK) hücre reseptör ailesinin bir bileşeni olan CD161 ile C tipi lektin ile ilişkili bir proteindir. Sentezinden sorumlu olan CLEC2D geni, belirli ekzonları atlayan alternatif ekleme olayları yoluyla beş farklı izoforma yol açar. LLT1 olarak bilinen Varyant 1, hücre zarında16,17 bulunan tek varyant olarak doğrulanmıştır. LLT1 ekspresyonu ağırlıklı olarak B lenfositleri, NK hücreleri, dendritik hücreler (DC'ler), spesifik T hücresi popülasyonları (aktive edilmiş ve düzenleyici T hücreleri dahil), monositler ve makrofajlar gibi çeşitli bağışıklık hücresi tiplerinde gözlenir ve ayrıca bazı malign hücrelerde ve inflamatuar ataklar sırasında gözlenir18. İlk bulgular, LLT1'in Toll benzeri reseptör (TLR) stimülasyonunu takiben DC'lerde ve B hücrelerinde yukarı regüle edildiğini göstermektedir. LLT1'in CD161 ile etkileşiminin, NK hücre aracılı sitotoksisiteyi baskıladığı gösterilmiştir, bu da bağışıklık tepkisinin modüle edilmesinde rol oynadığını düşündürür18. B hücrelerinde, LLT1 ekspresyonu, viral enfeksiyon veya inflamatuar stimülasyon ile yukarı regüle edilir. Antijen sunan hücreler (APC'ler) olarak işlev görürken, LLT1-CD161 etkileşimi, T hücresi proliferasyonunu veya IFN-γ üretimini birlikte uyarırken, NK hücre fonksiyonunu baskılayarak ikili immünomodülatör etkiler gösterir19.

LLT1'in üçlü negatif meme kanseri, glioblastoma ve B hücreli Hodgkin dışı lenfoma dahil olmak üzere bir dizi kanserli hücrede bulunduğu bilinmektedir. Bu protein, NK hücrelerinde bulunan CD161 reseptörü ile etkileşime girerek kanser hücrelerini yok etme yeteneklerini etkili bir şekilde bloke eder, böylece bağışıklık tepkisinin 20,21,22 kaçmasına yardımcı olur. HPV-negatif orofaringeal skuamöz hücreli karsinomda dikkate değer bir gözlem, immünohistokimyasal çalışmalara göre, üçüncül lenfoid yapılar (TLS) içinde yüksek oranda eksprese edildiğinde pozitif bir prognostik öneme işaret eden LLT1'in değişken ekspresyonudur, oysa tümör hücreleri üzerindeki varlığı daha kötü bir sonuçla bağlantılıdır23. Ayrıca, küçük hücreli dışı akciğer kanseri (KHDAK) bağlamında, LLT1 kanser hücrelerinin kendisinde saptanmaz, ancak tümör mikroçevresinde (TME) bulunur ve mRNA ekspresyon seviyesi daha iyi bir prognoz ile ilişkilidir24.

Mathewson ve ark. glioma araştırmasında, CD161'in bloke edilmesi, glioma hücrelerinin in vitro olarak T hücresi aracılı öldürülmesini arttırır ve in vivo anti-tümör fonksiyonlarını iyileştirerek, CD161'in bir bağışıklık kontrol noktası hedefi25 olarak terapötik potansiyelini vurgular. LLT1'in CD16118'in kanonik ligandı olduğu göz önüne alındığında, immünoterapötik bir hedef olarak rolü ciddi bir değerlendirmeyi garanti eder. İmmünoterapide PD-1 ve PD-L1 arasındaki kritik etkileşime benzer şekilde, LLT1'in mide kanserindeki biyolojik fonksiyonlarının ve immünoterapi sonuçlarıyla korelasyonunun araştırılması önemli klinik değere sahiptir.

Bu çalışma, hem mRNA hem de protein düzeyindeki araştırmaları entegre ederek mide kanseri tümörü mikroçevresindeki LLT1 ekspresyon modellerinin kapsamlı bir analizini sağlar. İlerlemiş mide kanserinde prognostik bir biyobelirteç olarak LLT1'in potansiyelini sistematik olarak değerlendirir ve immünoterapi etkinliği için prediktif değerini değerlendirir. Bu bilgiler, klinik çeviri potansiyelinin daha derinlemesine anlaşılmasına katkıda bulunur.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

İnsan denekleri içeren araştırma, Soochow Üniversitesi Birinci Bağlı Hastanesi Etik Kurulu tarafından incelendi ve onaylandı (Onay No. 2019026). Soochow Üniversitesi Birinci Bağlı Hastanesi'nin etik inceleme kurulu, bu veri kullanımının etik incelemesi için bir muafiyeti onayladı veya verdi. Ayrıca tüm katılımcılardan bilgilendirilmiş onam alındı.

Biyoinformatik veri analizi
TCGA ve Tümör IMmune Tahmin Kaynağı (TIMER) veritabanlarının kapsamlı bir Pan-kanser ekspresyon analizi incelemesinden sonra, LLT1'in davranışı, özellikle mide kanserine odaklanılarak çeşitli kanser türlerinde araştırıldı. LLT1 ekspresyon seviyeleri ile mide kanserinin farklı moleküler alt tipleri arasındaki korelasyonu araştırmak için TISIDB veri tabanından yararlanıldı. Hastaların klinik özellikleri ile LLT1 ekspresyonu arasındaki korelasyon, R programlama yoluyla TCGA verileriyle daha fazla analiz edildi. LLT1'in gastrik karsinogenezdeki fonksiyonel rolünü araştırmak için GO ve KEGG analizleri kullanıldı. ESTIMATE (Ekspresyon verilerini kullanarak MAlignant Tümör dokularındaki STromal ve Bağışıklık hücrelerinin tahmini) algoritması ayrıca LLT1 ekspresyon modellerine göre tümör dokularındaki immün ve stromal hücre infiltrasyon seviyelerini ölçmek için kullanıldı. LLT1 ekspresyon seviyeleri ile tümör mikroçevresindeki spesifik bağışıklık hücresi infiltrasyon paternleri arasındaki korelasyonları değerlendirmek için CIBERSORT algoritması kullanılarak daha fazla analiz yapıldı. LLT1 ekspresyon profilleri ve immün düzenleyici biyobelirteçler arasındaki potansiyel korelasyonları sorgulamak için TCGA veri kümeleri ve R istatistiksel programlama (v4.4.1) kullanılarak kapsamlı biyoinformatik analiz yapıldı. Son olarak, LLT1 ekspresyonunun PD-1/PD-L1 immün kontrol noktası blokaj tedavisine yanıtı tahmin edip edemeyeceğini araştırmak için TCIA (Kanser İmmün Atlası) veri tabanı kullanıldı.

GAC örnekleri ve doku mikrodizisi (TMA) yapımı
Aşağıdaki gibi iki set doku mikrodizi verisi oluşturuldu:

İlk set, 2011 yılında ameliyat edilen 268 GAC'li hastadan alınan örnekleri retrospektif olarak analiz etti. Patologlar parafin bloklarını seçtiler, tümör çekirdek bölgelerini tanımladılar ve bunları doku mikrodizileri halinde oluşturdular. Cinsiyet, yaş, neoplazm boyutları, neoplastik farklılaşma derecesi, kanser ilerleme evresi, invazyon derinliği, lenfatik tutulum ve uzak yayılımın varlığı gibi ilişkili klinik parametreleri titizlikle izlemek için her bir numune bölgesine ayrı bir tanımlayıcı tahsis edildi. Genel sağkalım (OS) süresi, tedavinin başlamasından mortalitenin ortaya çıkmasına veya Aralık 2017'nin son tarihine kadar geçen süre olarak tanımlandı. Kapsamlı işletim sistemi verilerinin yalnızca 198 katılımcıdan oluşan bir alt küme için mevcut olduğu vurgulanmalıdır.

İkinci grup, 2016-2023 yılları arasında Soochow Üniversitesi Birinci Bağlı Hastanesi'nde cerrahi/endoskopik rezeksiyon uygulanan, daha önce tedavi görmemiş ileri evre GC'li 115 hastayı içeriyordu. Patologlar, hastalığın ilerlemesini yakından takip ederek parafin bloklarını değerlendirdi ve doku mikrodizileri oluşturdu. Özellikle, tüm örnekler herhangi bir preoperatif tedaviden önce toplandı ve postoperatif tedavi esas olarak kemoterapi ile kombine PD-1 monoklonal antikorlarından oluşuyordu.

Tüm cerrahi rezeksiyon spesmenleri mide antrumundan toplandı. Tüm numuneler nötr tamponlu formalin içine sabitlendi ve parafine gömüldü. H&E boyalı bölümlerin değerlendirilmesine dayanarak, iki kıdemli patolog parafine gömülü örneklerden en temsili doku bölgelerini bağımsız olarak belirledi. Doku mikrodizileri (TMA'lar), önceden tanımlanmış modüllere göre TMA bloklarında hassas bir şekilde konumlandırılmış doku çekirdekleri ile otomatik bir doku dizileyici kullanılarak oluşturuldu. Son olarak, tamamlanan TMA blokları deneyimli bir histoteknolog tarafından 4 μm kalınlığında kesitlendi.

İmmünohistokimya (IHC) ve multipleks immünofloresan (mIHC)
İmmünohistokimyasal ve multipleks immünofloresan deneyleri, yapılandırılmış bir doku mikrodizisi üzerinde gerçekleştirildi. IHC boyaması, önceden belirlenmiş bir metodolojiye26 uygun olarak gerçekleştirildi. İlk mikrodizi parafin kesitleri seti cam slaytlara aktarıldı ve 72°C'de 1 saat pişirildi. Kesitler ksilen ile deparafinize edildikten ve art arda artan etanol dilüsyonlarında rehidre edildikten sonra, 30 dakika boyunca peroksidaz bloke edici solüsyon uygulanarak endojen peroksidaz aktivitesi bloke edildi. Antijen geri kazanımı, slaytların 110 °C'de Sitrat Antijen Geri Alma Çözeltisi (pH 6.0) içinde 3 dakika kaynatılmasıyla gerçekleştirildi. %5 BSA blokaj tamponu ile bloke edildikten sonra kesitler fare anti-insan CLEC2D monoklonal, fare anti-insan CD3 monoklonal (kullanıma hazır), fare anti-insan CD4 monoklonal (kullanıma hazır), tavşan anti-insan CD8 monoklonal (kullanıma hazır), fare anti-insan CD11c monoklonal (1:50) fare anti-insan CD19 monoklonal (kullanıma hazır), fare anti-insan CD31 monoklonal (kullanıma hazır), fare anti-insan CD56 monoklonal (kullanıma hazır), fare anti-insan CD68 monoklonal (kullanıma hazır), tavşan anti-insan Foxp3 monoklonal (1:50), fare anti-insan IL-17 monoklonal (1:50), fare anti-insan IFN-γ monoklonal (1:50), fare anti-insan Ki67 monoklonal (1:50), fare anti-insan PD-L1 monoklonal (kullanıma hazır) gece boyunca 4 °C'de27,28. Slaytlar daha sonra yıkandı ve yaban turpu peroksidaz etiketli ikincil antikorlar (anti-fare ve tavşan) ile oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edildi. İnkübasyondan sonra numuneler yıkandı ve immün tespit için EnVision tespit sistemi kullanıldı. Mikroskop altında, çip üzerinde kahverengi alanlar görünmeye başladığında dikkatli gözlem gereklidir. Kahverengi alanlar artık artmadığında kromojenik reaksiyon durdurulmalıdır. Slaytlar Mayer hematoksilini ile boyandı ve nötr yapıştırıcı ile monte edildi. Negatif kontrolde, birincil antikor yerine fare veya tavşan IgG kullanıldı. Pozitif kontrol insan bademcik dokusuydu. İkinci mikrodizi kesitleri seti, multipleks immünohistokimya (mIHC) için kullanılır. Yukarıda bahsedilen antijen alma ve bloke etme koşullarını yeniden kullanarak, antikor paneli aşağıdaki gibi spektral olarak optimize edilir: PD-L1 (480 nm), CD161 (520 nm), LLT1 (570 nm), PD-1 (620 nm), CD8 (690 nm) ve PAN-CK (780 nm). Birincil antikorlar, orijinal protokol29'dakiyle aynı koşullar altında (yeni tanıtılan PANCK ve CD161 hariç), önerilen 1:100 seyreltmede inkübe edildi ve ardından tiramid sinyal amplifikasyonu (TSA) floresan boyaması yapıldı. Her floresan boyama turundan sonra, antikor sıyırma gerçekleştirilir, ardından bir sonraki birincil antikoru inkübe etmeden önce tekrarlanan antijen alımı, endojen peroksidaz blokajı ve spesifik olmayan hedef blokajı yapılır. Multipleks immünohistokimya yapılırken üç nokta çok önemlidir: her floresan boya için ön deneyler yapılmalı, güçlü eksprese edilen antikorlar zayıf floresan sinyallerle eşleştirilmeli, zayıf eksprese edilen antikorlar ise güçlü floresan sinyallerle eşleştirilmeli ve her bir floresan işaretleyici boyandıktan sonra, boyama sonuçları ışıktan korunan koşullar altında mikroskop altında gözlemlenmelidir. 6. floresan boya ile boyandıktan sonra, etiket hücre çekirdeklerine DAPI karşı boyama uygulanır ve slaytlar monte edilir. Son olarak, tüm doku mikrodizileri bir dijital patoloji tarayıcısı kullanılarak tarandı ve yapay zeka destekli bir dijital patoloji görüntü analiz yazılımı ile analiz edildi.

IHC/mIHC boyama değerlendirmesi
Boyama sonuçları iki uzman patolog tarafından çift kör bir şekilde yorumlandı. Yüksek güçlü bir objektif (200x büyütme) veya eşleşen floresan ayarı (200x) kullanarak boyama derinliğini ölçtüler ve 0 (boyama yok) ile 3 (yoğun boyama) arasında değişen puanlar verdiler. Mide karsinomu numunelerindeki LLT1 pozitif hücrelerin fraksiyonları dört tabakaya ayrıldı: 0 (%<5), 1 (%5-25), 2 (%26-50) ve 3 (%>50). İmmünoreaktivite Skoru (IRS), LLT1 pozitif hücrelerin boyama derinliği ve oranının ürününden türetilmiştir. Sıfır puan alan örnekler negatif olarak kabul edilirken, 1-4 arası puanlar zayıf ekspresyon, 5-7 orta ve 8-9 güçlü ekspresyon gösterdi; Ki67 ve CD3 gibi diğer belirteçlerin ekspresyonunu değerlendirmek için de aynı kriterler uygulandı. Değerlendirme ve gruplama metodolojisine göre numuneler güçlü (IRS8-9), orta (IRS5-7), zayıf (IRS1-4) veya ekspresyonu yok (IRS0) olarak etiketlendi. En düşük puana sahip hastalar (IRS≤4) düşük ekspresyon grubuna, daha yüksek skorlara sahip hastalar (IRS≥5) ise yüksek ekspresyon grubuna atandı.

Bununla birlikte, PD-L1 belirteci için, CPS kullanılarak farklı bir yaklaşım benimsenmiştir. Bu puan, PD-L1 pozitif hücrelerin (tümör, bağışıklık ve stromal hücreler dahil) 100 kat büyütülen toplam canlı tümör hücresi sayısına oranıyla belirlendi. CPS'si beşi aşan bireyler yüksek ifadeli kohorta yerleştirilirken, CPS'si beş veya daha düşük olanlar düşük ifadeli kohortta gruplandırıldı.

İmmünoterapi yanıt gruplaması
Solid Tümörlerde Yanıt Değerlendirme Kriterleri versiyon 1.1 (RECIST 1.1) doğrultusunda, hastalarda hedef lezyonların değerlendirilmesi dört farklı kategoriye ayrılır: (a) Tam Yanıt (CR): tüm hedef lezyonlar tamamen kaybolmuştur ve tüm patolojik lenf düğümlerinin (hem hedef hem de hedef olmayan) kısa ekseni 10 mm'den az olmalıdır; (b) Kısmi Yanıt (PR): tüm ölçülebilir hedef lezyonların kümülatif çapı, başlangıç ölçümlerine göre en az %30 oranında azalmıştır; (c) İlerleyici Hastalık (PD): Bu kategori, hedef lezyonların kümülatif çapı, çalışma sırasında kaydedilen en küçük değere kıyasla en az %20 arttığında (en küçük değeri temsil ediyorsa referans olarak referans olarak kullanıldığında) geçerlidir, mutlak artış 5 mm'den az olmamalıdır; ayrıca yeni lezyonların ortaya çıkması da Progresif Hastalık (PD) olarak kategorize edilir; (d) Stabil Hastalık (SD): Hedef lezyonların kümülatif çapı, çalışma boyunca ne PR için azalma kriterlerini ne de PD için artış kriterlerini karşılayamaz. İki tabakalaşma tekniği uygulandı. İlk yöntem, PD (n=53) ve SD (n=46) hastalarının yanıt vermeyen grubu (n=99) oluşturduğu, PR (n=15) ve CR (n=1) hastalarının yanıt veren grubu (n=16) oluşturduğu hastaların yanıt durumlarına göre ayrılmasını içeriyordu. İkinci yaklaşım, CR, PR ve SD hastalarının immünoterapide etkili kohort (n=62) ve PD hastalarının immünoterapide etkili olmayan kohort (n=53) olarak sınıflandırıldığı, hastaların hastalığın ilerlemesine göre kategorize edilmesini gerektiriyordu.

İstatistiksel analiz
Ampirik değerlendirmeler R bilgi işlem platformu (sürüm 4.4.1) ve SPSS İstatistik yazılım paketi (sürüm 27.0) kullanılarak yapıldı. Çalışma kohortları arasındaki eşitsizlikler, ki-kare olasılık tablosu analizi uygulanarak araştırıldı. Değişkenler arasındaki ilişkilerin gücünü ve yönünü araştırmak için Spearman'ın parametrik olmayan korelasyon tekniği kullanıldı. Hayatta kalma süresi varyasyonları, anlamlılık için log-rank testi ile tamamlanan Kaplan-Meier tahmincilerinin oluşturulması yoluyla analiz edildi. Daha sonra, hasta sağkalım sonuçlarını potansiyel olarak etkileyen faktörleri belirlemek için Cox orantılı tehlike regresyon modelleri kullanıldı. İstatistiksel anlamlılık, <0.05'lik iki taraflı bir p-değeri eşiği olarak önceden tanımlandı. Bulguların sağlamlığını sağlamak amacıyla, potansiyel kafa karıştırıcı değişkenleri değerlendirmek amacıyla kapsamlı duyarlılık analizleri yapıldı ve çok değişkenli modeller buna göre ayarlandı. Ayrıca, klinik anlayışı kolaylaştırmak için tehlike oranlarının açık yorumları sağlanmış ve tanımlanan risk faktörlerinin hasta prognozu üzerindeki pratik etkileri vurgulanmıştır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

CLEC2D mRNA ekspresyonu ile mide kanseri alt sınıflandırması/klinik parametreleri arasındaki ilişki
TIMER veri tabanı tarafından kolaylaştırılan TCGA veri setini kullanan ilk kapsamlı kanser muayenesi, Şekil 1A'da gösterildiği gibi çeşitli kanserli dokularda CLEC2D transkript seviyelerinde kayda değer bir artış olduğunu ortaya çıkardı. Bu gözlem, CLEC2D'nin çeşitli kanserlerin patogenezinde ve evriminde rol oyn...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Çalışmamız, tümör dokularında normal dokulara göre daha yüksek CLEC2D mRNA ekspresyonu gösterdi. Mide kanserinin immünohistokimyasal sonuçları, tümör dokularında yüksek LLT1 protein ekspresyonunun daha iyi prognoz ile ilişkili olduğunu ve tümör mikroçevresinde immün hücre infiltrasyonu ile pozitif korelasyon gösterdiğini ortaya koydu. İmmünoterapi alan mide kanseri hastalarından alınan dokuların analizi, yüksek LLT1 ekspresyonunun daha iyi immünoterapötik yanıtı öngördüğünü göst...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar tarafından herhangi bir potansiyel çıkar çatışması bildirilmemiştir.

Teşekkürler

Veri desteği sağladığı için TCGA veritabanına minnettar teşekkürler iletilir. Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (Hibe No. 81974375) ve Suzhou Bilim ve Teknoloji Geliştirme Planı Hibeleri (SKY2022129) tarafından desteklenmiştir. Çalışma ARRIVE yönergelerine uygundur.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
%5 BSA Engelleme TamponuPekin Solarbio Bilim ve Teknoloji Co., Ltd., ÇinSW3015 Serisi
anti-CD11c ZSGB-BIO, Çin5D11
Anti-CD161Abcam, Cambridge, Birleşik KrallıkAB302564
anti-CD19   ZSGB-BIO, ÇinEPl69 Serisi
anti-CD3 ZSGB-BIO, ÇinLNl0
anti-CD31ZSGB-BIO, Çin  UMAB30 Serisi
anti-CD4ZSGB-BIO, ÇinUMAB64
anti-CD56 ZSGB-BIO, ÇinUMAB83
anti-CD68 ZSGB-BIO, ÇinKP1
anti-CD8ZSGB-BIO, ÇinEP334 Serisi
Anti-CLEC2DAbcam, Cambridge, Birleşik KrallıkAB197341
anti-Foxp3R& D Systems, ABD1054C
anti-IFN-γ  Santa Cruz BiyoteknolojiSC-74108
anti-IL-17R& D Systems, ABD  MAB317 
anti-Ki67 ZSGB-BIO, Çin8H5
Anti-pan Cytokeratin Abcam, Cambridge, Birleşik Krallıkab7753
Anti-PD-1Abcam, Cambridge, Birleşik KrallıkAB137132
PD-L1 KarşıtıDAKO, Danimarka22C3
Otomatik Doku Dizisi EkipmanıEstigen OU, Tartu, EstonyaBeecher ATA 27Bu alet öncelikle doku mikrodizilerinin yapımında kullanılır.
Sitrat Antijen Alma SolüsyonuAladdin Biyokimyasal Teknoloji Co, Ltd, ÇinC752119
DAB chromogen kit AiFang Biyolojik, ÇinAFIHC004
Dijital patoloji tarayıcıNingbo Jiangfeng Biyo-Bilgi Teknolojisi Co, Ltd, ÇinKF-FL-020 SerisiBu cihaz öncelikle immünohistokimya ve multipleks immünohistokimya çiplerini taramak için kullanılır.
GraphPad Prizma 10GraphPad Yazılımı, ABDsürüm 10.0.3Bu yazılım, Kaplan-Meier eğrilerini çizmek (log-rank istatistiksel analiz ile), Bilimsel veri görselleştirme ve Şekil Hazırlama içindir.
PBSAladdin Biyokimyasal Teknoloji Co, Ltd, ÇinP743267
Peroksidaz Bloke Edici ÇözeltiAiFang Biyolojik, ÇinAFIHC012
Polimer-HRP konjuge keçi anti-fare/tavşan sekonder antikoruAiFang Biyolojik, ÇinAFIHC001
Altı renkli yedi işaretli multipleks immünofloresan boyama kitiAiFang Biyolojik, ÇinAFIHC037Bu reaktif kiti, multipleks immünohistokimya (mIHC) için tasarlanmıştır.
SPSS DergisiIBM Şirketi, ABDIBM SPSS İstatistikleri 27Verilerin istatistiksel analizi için yazılım kullanıldı.
R ProjesiR Çekirdek EkibiV4.4.1 (İngilizce)Tüm R paketleri, ilgili kod ve özgün dosyalar genel veritabanına yüklendi.
VİZİOPHARM yazılımıVisiopharm, Danimarka2025.02.2.18022 x64Bu yazılım öncelikle patolojik görüntülerin kantitatif analizi için tasarlanmıştır.

Kaynaklar

  1. Bray, F., et al. Global cancer statistics 2022: Globocan estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J Clin. 74 (3), 229-263 (2024).
  2. Suzuki, H., et al. Long-term survival after endoscopic resection for gastric cancer: Real-world evidence from a multicenter prospective cohort. Clin Gastroenterol Hepatol. 21 (2), 307-318.e2 (2023).
  3. Ma, S., et al. Clinical application and detection techniques of liquid biopsy in gastric cancer. Mol Cancer. 22 (1), 7(2023).
  4. Ugai, T., et al. Is early-onset cancer an emerging global epidemic? Current evidence and future implications. Nat Rev Clin Oncol. 19 (10), 656-673 (2022).
  5. Wagner, A. D., et al. Chemotherapy for advanced gastric cancer. Cochrane Database Syst Rev. 8 (8), Cd004064(2017).
  6. Chao, J., et al. Assessment of pembrolizumab therapy for the treatment of microsatellite instability-high gastric or gastroesophageal junction cancer among patients in the keynote-059, keynote-061, and keynote-062 clinical trials. JAMA Oncol. 7 (6), 895-902 (2021).
  7. Lee, K. W., et al. Association of tumor mutational burden with efficacy of pembrolizumab±chemotherapy as first-line therapy for gastric cancer in the phase III Keynote-062 study. Clin Cancer Res. 28 (16), 3489-3498 (2022).
  8. Wainberg, Z. A., et al. Efficacy of pembrolizumab monotherapy for advanced gastric/gastroesophageal junction cancer with programmed death ligand 1 combined positive score ≥10. Clin Cancer Res. 27 (7), 1923-1931 (2021).
  9. Zhao, J. J., et al. Low programmed death-ligand 1-expressing subgroup outcomes of first-line immune checkpoint inhibitors in gastric or esophageal adenocarcinoma. J Clin Oncol. 40 (4), 392-402 (2022).
  10. Zhu, Q., Zhang, R., Zhao, Z., Xie, T., Sui, X. Harnessing phytochemicals: Innovative strategies to enhance cancer immunotherapy. Drug Resist Updat. 79, 101206(2025).
  11. Khosravi, G. R., et al. Immunologic tumor microenvironment modulators for turning cold tumors hot. Cancer Commun (Lond). 44 (5), 521-553 (2024).
  12. Gibney, G. T., Weiner, L. M., Atkins, M. B. Predictive biomarkers for checkpoint inhibitor-based immunotherapy. Lancet Oncol. 17 (12), e542-e551 (2016).
  13. Sharma, P., Hu-Lieskovan, S., Wargo, J. A., Ribas, A. Primary, adaptive, and acquired resistance to cancer immunotherapy. Cell. 168 (4), 707-723 (2017).
  14. Naidoo, J., et al. Toxicities of the anti-PD-1 and anti-PD-L1 immune checkpoint antibodies. Ann Oncol. 27 (7), 1362(2016).
  15. Yang, M., Lin, W., Huang, J., Mannucci, A., Luo, H. Novel immunotherapeutic approaches in gastric cancer. Precis Clin Med. 7 (4), pbae020(2024).
  16. Germain, C., et al. Characterization of alternatively spliced transcript variants of clec2d gene. J Biol Chem. 285 (46), 36207-36215 (2010).
  17. Boles, K. S., Barten, R., Kumaresan, P. R., Trowsdale, J., Mathew, P. A. Cloning of a new lectin-like receptor expressed on human NK cells. Immunogenetics. 50 (1-2), 1-7 (1999).
  18. Rosen, D. B., et al. Cutting edge: Lectin-like transcript-1 is a ligand for the inhibitory human nkr-p1a receptor. J Immunol. 175 (12), 7796-7799 (2005).
  19. Germain, C., et al. Induction of lectin-like transcript 1 (llt1) protein cell surface expression by pathogens and interferon-γ contributes to modulate immune responses. J Biol Chem. 286 (44), 37964-37975 (2011).
  20. Marrufo, A. M., et al. Blocking llt1 (clec2d, ocil)-nkrp1a (cd161) interaction enhances natural killer cell-mediated lysis of triple-negative breast cancer cells. Am J Cancer Res. 8 (6), 1050-1063 (2018).
  21. Germain, C., et al. Lectin-like transcript 1 is a marker of germinal center-derived B-cell non-Hodgkin's lymphomas, dampening natural killer cell functions. Oncoimmunology. 4 (8), e1026503(2015).
  22. Roth, P., et al. Malignant glioma cells counteract antitumor immune responses through expression of lectin-like transcript-1. Cancer Res. 67 (8), 3540-3544 (2007).
  23. Sanchez-Canteli, M., et al. Lectin-like transcript 1 (llt1) checkpoint: A novel independent prognostic factor in hpv-negative oropharyngeal squamous cell carcinoma. Biomedicines. 8 (12), 535(2020).
  24. Braud, V. M., et al. Expression of llt1 and its receptor CD161 in lung cancer is associated with better clinical outcome. Oncoimmunology. 7 (5), e1423184(2018).
  25. Mathewson, N. D., et al. Inhibitory CD161 receptor identified in glioma-infiltrating T cells by single-cell analysis. Cell. 184 (5), 1281-1298.e26 (2021).
  26. Guo, L., et al. Association of increased B7 protein expression by infiltrating immune cells with progression of gastric carcinogenesis. Medicine (Baltimore). 98 (8), e14663(2019).
  27. Quan, Q., et al. Expression and clinical significance of PD-L1 and infiltrated immune cells in the gastric adenocarcinoma microenvironment. Medicine (Baltimore). 102 (48), e36323(2023).
  28. Varaden, D., Moodley, J., Onyangunga, O. A., Naicker, T. Morphometric image analysis of placental c-type lectin domain family 2, member d (clec2d) immuno-expression in hiv associated pre-eclampsia. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol X. 3, 100039(2019).
  29. Chen, S., et al. B7-h3 and CD47 co-expression in gastric cancer is a predictor of poor prognosis and potential targets for future dual-targeting immunotherapy. J Cancer Res Clin Oncol. 149 (18), 16609-16621 (2023).
  30. Cancer Genome Atlas Research Network. Comprehensive molecular characterization of gastric adenocarcinoma. Nature. 513 (7517), 202-209 (2014).
  31. Cristescu, R., et al. Molecular analysis of gastric cancer identifies subtypes associated with distinct clinical outcomes. Nat Med. 21 (5), 449-456 (2015).
  32. Thorsson, V., et al. The immune landscape of cancer. Immunity. 48 (4), 812-830.e14 (2018).
  33. Tumeh, P. C., et al. Pd-1 blockade induces responses by inhibiting adaptive immune resistance. Nature. 515 (7528), 568-571 (2014).
  34. Lopez De Rodas, M., et al. Biological and clinical significance of tumour-infiltrating lymphocytes in the era of immunotherapy: A multidimensional approach. Nat Rev Clin Oncol. , (2025).
  35. Myojin, Y., et al. Multiomics analysis of immune correlatives in hepatocellular carcinoma patients treated with tremelimumab plus durvalumab. Gut. , (2025).
  36. Marvel, D., Gabrilovich, D. I. Myeloid-derived suppressor cells in the tumor microenvironment: Expect the unexpected. J Clin Invest. 125 (9), 3356-3364 (2015).
  37. Sautès-Fridman, C., Petitprez, F., Calderaro, J., Fridman, W. H. Tertiary lymphoid structures in the era of cancer immunotherapy. Nat Rev Cancer. 19 (6), 307-325 (2019).
  38. Ye, Z., et al. Gastric cancer-derived exosomal let-7 g-5p mediated by serpine1 promotes macrophage m2 polarization and gastric cancer progression. J Exp Clin Cancer Res. 44 (1), 2(2025).
  39. Gajewski, T. F., Schreiber, H., Fu, Y. X. Innate and adaptive immune cells in the tumor microenvironment. Nat Immunol. 14 (10), 1014-1022 (2013).
  40. Vivier, E., et al. Innate or adaptive immunity? The example of natural killer cells. Science. 331 (6013), 44-49 (2011).
  41. Xiong, S., Dong, L., Cheng, L. Neutrophils in cancer carcinogenesis and metastasis. J Hematol Oncol. 14 (1), 173(2021).
  42. Mantovani, A., Locati, M. Tumor-associated macrophages as a paradigm of macrophage plasticity, diversity, and polarization: Lessons and open questions. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 33 (7), 1478-1483 (2013).
  43. Niu, X., et al. Autophagy in cancer development, immune evasion, and drug resistance. Drug Resist Updat. 78, 101170(2025).
  44. Ikeda, H., et al. Immune evasion through mitochondrial transfer in the tumour microenvironment. Nature. 638 (8049), 225-236 (2025).
  45. Gabrilovich, D. I., Nagaraj, S. Myeloid-derived suppressor cells as regulators of the immune system. Nat Rev Immunol. 9 (3), 162-174 (2009).
  46. Pan, Y., et al. The protective and pathogenic role of Th17 cell plasticity and function in the tumor microenvironment. Front Immunol. 14, 1192303(2023).
  47. Smyth, M. J., et al. Perforin-mediated cytotoxicity is critical for surveillance of spontaneous lymphoma. J Exp Med. 192 (5), 755-760 (2000).
  48. Galon, J., et al. Type, density, and location of immune cells within human colorectal tumors predict clinical outcome. Science. 313 (5795), 1960-1964 (2006).
  49. Galon, J., Bruni, D. Approaches to treat immune hot, altered, and cold tumours with combination immunotherapies. Nat Rev Drug Discov. 18 (3), 197-218 (2019).
  50. Chen, D. S., Mellman, I. Elements of cancer immunity and the cancer-immune set point. Nature. 541 (7637), 321-330 (2017).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

LLT1 Ekspresyonumm n Kontrol NoktasT m r Mikro evresimm n H cre nfiltrasyonuPD L1 EkspresyonuCD8 T H crelerimm nohistokimyaMultiplex mm nofloresans

İlgili makaleler