Method Article

Primer Sıçan Epididimal Adipositlerinde Lipolizin Doğru Miktar Tayini için Gliserol Salınımının MTT Tabanlı Normalizasyonu

DOI:

10.3791/68853

⸱

September 9th, 2025

 ,  ,  ,  , 
1College of Bee Science and Biomedicine, Fujian Agriculture and Forestry University, 2School of Pharmacy and Medical Technology, Putian University, 3School of Medicine, Huaqiao University, 4Department of Pharmacy, Taining County General Hospital, 5School of Pharmacy, Fujian Medical University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hücre canlılığındaki dalgalanmalar ve tahlil girişimi dahil olmak üzere deneysel artefaktlar, lipid açısından zengin primer adipositlerde gliserol salınımının doğru bir şekilde ölçülmesini engeller. Bu zorlukları hafifletmek için, hücre metabolik aktivitesi için gliserol ölçümlerini ayarlamak için MTT tabanlı bir normalleştirme stratejisi kullanılır, böylece lipoliz ölçümünün güvenilirliği artar.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kritik bir metabolik yol olan lipoliz, depolanmış trigliseritlerin serbest yağ asitlerine ve gliserole hidrolizini içerir. Bununla birlikte, lipid açısından zengin primer adipositlerde gliserol çıktısının doğru bir şekilde ölçülmesi, hücre canlılığındaki değişkenlik ve tahlil girişimi gibi deneysel artefaktlarla sıklıkla karıştırılır. Bu sınırlamaları ele almak için, 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolyum bromür (MTT) bazlı hücre canlılığı testi kullanılarak gliserol salınım ölçümlerini normalleştirmek için basit bir yöntem oluşturulmuştur. Bu protokol, adipositler ve sulu çözeltiler arasındaki özgül ağırlık farkından yararlanarak lipolitik çıktının ve hücre canlılığının aynı anda ölçülmesini sağlar. İlaç tarama deneylerinde, pravastatin ve simvastatin, abdominal adipositlerden gliserol salınımını önemli ölçüde arttırırken, atorvastatin ve lovastatin, gliserol çıkışını önemli ölçüde değiştirmedi. Bu bulgular, MTT tabanlı normalleştirmenin, obezite ve metabolik sendromu hedef alan ilaç keşfindeki potansiyel uygulamalarla birlikte lipolizin doğru bir şekilde ölçülmesi için sağlam ve kullanışlı bir yaklaşım sunduğunu göstermektedir. Bu çalışma, gerçek metabolik yanıtları spesifik olmayan membran sızıntısından ayırt etmek için geleneksel lipoliz testlerinin yeniden değerlendirilmesi ihtiyacının altını çizmektedir.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yağ dokusu beyaz yağ dokusu (WAT) ve kahverengi yağ dokusu (BAT) olarak ikiye ayrılabilir1. WAT, trigliseritler olarak fazla enerji depolama işlevini yerine getirirken, BAT, soğuk1'in uyarılması altında kimyasal enerjiyi ısı enerjisine dönüştüren vücut sıcaklığını korumak için ısı üretme işlevine sahiptir. Yağ dokusunun da endokrin işlevi vardır2. Çeşitli hormonlar, sitokinler ve metabolitler (topluca adipokinler olarak anılır) salgılayabilir ve merkezi sinir sisteminden yiyecek arama davranışını ve çevre dokuların metabolik aktivitesini düzenleyerek vücudun enerj....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, gliserol salınımının (lipolizin bir göstergesi olarak) ve 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolyum bromür (MTT) hücre canlılığının 96 oyuklu bir plakanın aynı kuyucuklarında eşzamanlı olarak ölçülmesini sağlamak için adipositler ve sulu çözeltiler arasındaki özgül ağırlık farkından yararlanır, böylece deneysel iş akışını kolaylaştırır ve verimliliği artırır.

Tüm hayvan prosedürleri ARRIVE yönergelerine uygundu ve Ulusal Sağlık Enstitüleri Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzuna (NIH Yayın No. 8023, 1978'de revize edildi) uygun olarak yürütüldü. Çalışma protokolü Kurums....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ön ilaç taramasından sonra, antihiperlipidemik ilaç statinleri, normalize gliserol salım yöntemi9 ile adipositlerdeki lipolitik etkileri araştırmak için kullanıldı.

Statinlerin primer sıçan abdominal adipositlerinden gliserol salınımı üzerindeki etkisi
Statinlerin primer sıçan abdominal adipositlerinde lipoliz üzerindeki etkisi, hücrelerin 4 saat boyunca 50 μM pravastatin, simvastatin, atorvastatin, lovastatin ve% 0.5 DMSO ile muamele edilmesiyle değ.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, lipid yüklü primer adipositlerde lipolizi ölçmek için daha doğru bir yöntem sunmaktadır. Pravastatin ve simvastatinin, sıçan epididimal adipositlerinde gliserol salınımını indüklediği ve canlılığı azalttığı, atorvastatin ve lovastatinin ise önemli bir etki göstermediği bulundu. Simvastatin uygulaması, adipositlerden gliserol salınımında minimal bir artışa neden oldu. Bu sorunu çözmek için, lipoliz ölçümünü standartlaştırmak için MTT testi kullanıldı. Bu yaklaşım, hem pravasta.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, bu çalışmada bildirilen çalışmayı etkileyebilecek hiçbir rakip finansal veya kişisel çıkar beyan etmemektedir.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma Fujian Tarım ve Ormancılık Üniversitesi ve Putian Üniversitesi (her ikisi de Leo Tsui'den) tarafından desteklenmiştir.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
0.22-&mikro; m filtresiSangon Biyoteknoloji Ltd. Şti.F513165-0001Şırınga filtresi, aquo-system, steril
3-(4,5-Dimetiltiyazol-2-il)-2,5-difenil tetrazolyum bromür Sangon Biyoteknoloji Ltd. Şti.A600799-00011 gr
96-kuyucuklu hücre kültürü plakaları Sangon Biyoteknoloji Ltd. Şti.F603204-0001steril
Atorvastatin kalsiyum tuzuCayman Kimya10493-55 mg
Hücre süzgeci Sangon Biyoteknoloji Ltd. Şti.F513450-000180 elek ağı
Kloral hidratSangon Biyoteknoloji Ltd. Şti.A500288-0250250 gr
Dimetil sülfoksitSangon Biyoteknoloji Ltd. Şti.A460700-0100100 mL
Dulbecco'nun Modifiye Kartal Orta Sangon Biyoteknoloji Ltd. Şti.E600003500 mL, yüksek glikoz, steril
Fetal sığır serumuSangon Biyoteknoloji Ltd. Şti.E600001100 ml, steril
Gliserol Kolorimetrik Test KitiCayman Kimya10010755-9696 kuyu
LovastatinCayman Kimya10010338-55 mg
Erkek yetişkin sıçanlar Putian ÜniversitesiWistaryaklaşık 10-12 hafta
Penisilin-streptomisin çözeltisi Sangon Biyoteknoloji Ltd. Şti.B540732-001010 mL, steril
Fosfat tamponlu salinSangon Biyoteknoloji Ltd. Şti.E607009-0500500 mL, steril, kalsiyum veya magnezyum içermez
Pravastatin sodyum tuzuCayman Kimya10010343-55 mg
Simvastatin Cayman Kimya10010344-55 mg
Tripsin çözeltisi Sangon Biyoteknoloji Ltd. Şti.E607003-0100100 mL, EDTA ve fenol kırmızısı içermez, steril
Tip II kollajenaz Sangon Biyoteknoloji Ltd. Şti.A004174-0100100 mg

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Saely, C. H., Geiger, K., Drexel, H. Brown versus white adipose tissue: A mini-review. Gerontology. 58 (1), 15-23 (2012).
  2. Ahima, R. S., Flier, J. S. Adipose tissue as an endocrine organ. Trends Endocrinol Metab. 11 (8), 327-332 (2000).
  3. Lass, A., Zimmermann, R., Oberer, M., Zechner,....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Lipolysis QuantificationGlycerol ReleaseMTT AssayCell ViabilityPrimary AdipocytesRat Epididymal AdipocytesTriglyceride HydrolysisDrug ScreeningStatin EffectsMetabolic Syndrome

Related Articles