Allojenik ve Ksenojenik Eritrositlerin Sıçan Makrofajları ile Fagositozunun İn Vitro Kantitatif Bir Değerlendirmesi

Yu Lu; Min Ding; Xiang-Long Huang; Yu-Yun Xiong; Tong-Xv Wu; Ludi Zhang; Feng Gao; Jian-Yun Ge; Yu-Mei Li; Lijian Hui; Sha Hao; Yun-Wen Zheng

doi:10.3791/68904

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Allojenik ve Ksenojenik Eritrositlerin Sıçan Makrofajları ile Fagositozunun İn Vitro Kantitatif Bir Değerlendirmesi

775 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/68904

⸱

22 Ağustos 2025

Yu Lu^*¹^,²^,³ , Min Ding^*¹^,²^,³ , Xiang-Long Huang¹ , Yu-Yun Xiong¹ , Tong-Xv Wu¹ , Ludi Zhang⁴ , Feng Gao¹ , Jian-Yun Ge²^,³^,⁵^,⁶ , Yu-Mei Li¹ , Lijian Hui⁴ , Sha Hao² , Yun-Wen Zheng¹^,²^,³^,⁷

¹Institute of Regenerative Medicine, and Department of Dermatology, Affiliated Hospital of Jiangsu University, Jiangsu University, ²Haihe Laboratory of Cell Ecosystem, Institute of Hematology, Chinese Academy of Medical Sciences, ³Guangdong Provincial Key Laboratory of Large Animal Models for Biomedicine, and South China Institute of Large Animal Models for Biomedicine, School of Pharmacy and Food Engineering, Wuyi University, ⁴State Key Laboratory of Cell Biology, Shanghai Institute of Biochemistry and Cell Biology, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, University of Chinese Academy of Sciences, ⁵Innovation and Transformation Center, Fujian University of Traditional Chinese Medicine, ⁶Prometheus RegMed Tech Ltd, ⁷Department of Medicinal and Life Sciences, Faculty of Pharmaceutical Sciences, Tokyo University of Science

^* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Bu çalışma, izole edilmiş sıçan makrofajları tarafından ksenojenik (insan) ve allojenik (sıçan) kırmızı kan hücrelerinin fagositoz oranlarını ölçmek ve karşılaştırmak için standartlaştırılmış bir in vitro protokolü açıklamaktadır.

Özet

Ksenojenik hücre nakli, immün yetmezliği olan hayvan modellerinde bile sıklıkla önemli immün reddi ile karşı karşıyadır. Kalıntı bağışıklık bileşenleri arasında, makrofajlar nakledilen insan hücrelerini aktif olarak fagositoz edebilir ve bu da uzun süreli aşılama için bir zorluk oluşturur. Bunu ele almak için, insan ve sıçan kırmızı kan hücrelerinin (RBC'ler) makrofaj aracılı fagositozunu ölçmek için standartlaştırılmış bir in vitro test geliştirdik. Sıçan peritoneal makrofajları izole edildi, kültürlendi ve insan veya sıçan RBC'lerine maruz bırakıldı. İnsan RBC'leri CD235a kullanılarak tanımlanırken, sıçan RBC'leri DeepRed ile önceden etiketlendi. Canlı hücreleri geçit etmek için makrofajları ve propidyum iyot (PI) dışlanmasını belirlemek için CD163 kullanılarak akış sitometrisi analizi yapıldı. Sonuçlar fagositik aktivitede önemli bir fark gösterdi: makrofajların %5.08'i insan RBC'lerini yutarken, sadece %1.59'u sıçan RBC'lerini fagosite etti ve 3.21'lik bir nispi fagositoz indeksi verdi. Bu protokol, immün uyumluluğun kantitatif değerlendirmesine izin verir ve ksenotransplantasyonda doğuştan gelen immün yanıtları değerlendirmek için tekrarlanabilir bir yöntem sunar. Translasyonel araştırmalarda donör-alıcı seçimini iyileştirme ve immünosüpresif stratejilere rehberlik etme potansiyeline sahiptir.

Giriş

Ksenojenik hücre transplantasyonunun kullanımı, özellikle insan hücrelerinin hayvan modellerine aşılanması, biyomedikal araştırmalarda önemli bir stratejidir¹. Kontrollü bir in vivo ortamda hücre sağkalımı, aşılama ve bağışıklık tepkilerinin değerlendirilmesine izin verir. Fare modelleri, iyi karakterize edilmiş genetikleri ve manipülasyon kolaylıkları nedeniyle tarihsel olarak bu alana hakim olsa da, küçük boyutları, büyük kan hacimleri veya yüksek hücre verimi gerektiren çalışmalarda önemli bir sınırlama getirmektedir. Buna karşılık, sıçanlar, daha fazla vücut kütlesi, insan sistemlerine daha iyi fiz....