Yöntem makalesi

Sıçan Pençesi Derisinde Postoklüzif Reaktif Hipereminin Lazer Benek Kontrast Görüntüleme Kullanılarak Değerlendirilmesi

DOI:

10.3791/68986

⸱

3 Ekim 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1V.A. Negovsky Research Institute of General Reanimatology, Federal Research and Clinical Center of Intensive Care Medicine and Rehabilitology, 2Research and Development Center of Biomedical Photonics, Orel State University, 3College of Engineering and Physical Sciences, Aston University

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, anestezi uygulanmış bir sıçanın derisindeki postoklüzif reaktif hiperemi parametrelerini, lazer benek kontrast görüntüleme ve invaziv kan basıncı ölçümü kullanarak değerlendirmek için bir yöntem sunar.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Lazer Benek Kontrast Görüntüleme (LSCI), insanlarda ve laboratuvar hayvanlarında mikrovasküler perfüzyonu değerlendirmek için modern, invaziv olmayan bir tekniktir. LSCI'nin invaziv kan basıncı (KB) ölçümü ve vasküler oklüzyon testi ile kombinasyonu, postoklüzif reaktif hiperemi (PORH) çalışmasına izin vererek mikrovasküler kan akış rezervi ve vasküler reaktivitenin değerlendirilmesini sağlar. Bu makale, genel anestezi altında bir sıçanın arka pençesinde PORH'u kaydetmek ve görselleştirmek için LSCI'yi kullanma tekniğini göstermektedir. Tibia seviyesinde geçici (180 s) bir damar tıkanıklığı oluşturmak için özel bir pnömatik manşet şişirilir. Sonraki PORH'un (pik hiperemi ve kinetik indeksler) değerlendirilmesi, incelenen patolojik sürecin mekanizmaları ve ciddiyeti (dolaşım şoku, kalp yetmezliği, hipertansiyon vb.) hakkında ek bilgi sağlayabilir veya istirahatte perfüzyonu değerlendirirken belirgin olmayan yeni bir ilacın vasküler etkilerini belirleyebilir. İnvaziv KB monitörizasyonu, kutanöz vasküler iletkenliğin hesaplanmasına ve kritik hastalıkların deneysel modellerinde özellikle önemli olan sistemik hemodinamikteki değişikliklerin dikkate alınmasına olanak tanır. Hemorajik şokun sıçan modelinde mikrovasküler disfonksiyonu tanımlamak için bu yaklaşımın kullanımı da gösterilecektir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mikrovasküler disfonksiyon, birçok kardiyovasküler, endokrin ve diğer hastalıkların patogenezinde rol oynar, doku perfüzyonunu ve oksijenasyonunu tehlikeye atar ve sistemik hemodinamiğin vazomotor düzenleyici mekanizmalarını bozar (örneğin, hipertansiyonda)1. Mikrosirkülasyon bozuklukları, travma, sepsis ve çeşitli şok türleri (hemorajik, septik, kardiyojenik, vb.) olan kritik hastalarda organ disfonksiyon mekanizmalarında da büyük patofizyolojik öneme sahiptir.2.

Şu anda, doku perfüzyonu ve mikrovasküler fonksiyonun non-invaziv değerlendirmesi için klinik ve klinik öncesi çalışmalarda birkaç lazer tabanlı yöntem kullanılmaktadır: Lazer Doppler Flowmetri (LDF), Lazer Doppler Görüntüleme (LDI/LDPI) ve Lazer Benek Kontrast Görüntüleme (LSCI). Bunlar arasında LSCI, klinikte cilt perfüzyonunun non-invaziv değerlendirmesi için en umut verici olanıdır. LDF ve LDI/LDPI'ye göre açık avantajları vardır, çünkü yöntemin uygulamaya konması kolaydır ve hem yüksek uzamsal hem de zamansal çözünürlükle tüm araştırma alanının görselleştirilmesini sağlar3. LSCI, benek desenleri oluşturmak için lazer ışığını kullanan ve daha sonra kan akış dinamiklerini görselleştirmek için analiz edilen bir tekniktir. Hem klinik hem de deneysel ortamlarda sinirbilim4, karın cerrahisi5, dermatoloji6 ve diğer vasküler araştırma çalışmaları 7,8 gibi çeşitli araştırma alanları için gerekli olan mikro sirkülasyonun gerçek zamanlı, yüksek çözünürlüklü değerlendirmeleri sağlanmaktadır.

İstirahatte deri perfüzyon değerlerinin basit bir değerlendirmesi, mikrovasküler bozuklukları tanımlamak için genellikle bilgilendirici değildir. Bunun nedeni hem cilt dolaşımının içsel fonksiyonel özelliklerinden (yüksek değişkenlik, sıcaklığa, strese ve diğer faktörlere bağımlılık) hem de vücudun telafi edici tepkisi sırasında "yanlış normal" doku perfüzyonundan (örneğin, septik şokun erken evrelerinde kalp debisinde bir artış) kaynaklanmaktadır. Standart fonksiyonel yükün ek kullanımı, mikro dolaşımın daha iyi değerlendirilmesine ve dinlenme koşulları altında gizlenen mikrovasküler disfonksiyonun tanımlanmasına olanak tanır1. LSCI'nin farmakolojik uyaranlar altında cilt mikrosirkülasyonunun değerlendirilmesinde de yararlı olduğu bilinmektedir9.

LSCI'nin bir vasküler oklüzyon testi ile kombinasyonu, mikrosirkülasyonun önemli fonksiyonel parametrelerini, özellikle kan akış rezervini ve mikrovasküler sistemin reaktivitesini yansıtan postoklüzif reaktif hiperemi (PORH) fenomeninin invazif olmayan bir değerlendirmesine izin verir10. Bu yaklaşım, başlangıç perfüzyon ölçümlerinden11 belirgin olmayan fonksiyonel mikro dolaşım anormalliklerini tanımlamak için klinik çalışmalarda yaygın olarak kullanılmaktadır, ancak klinik öncesi hayvan çalışmalarında 12,13 PORH'un değerlendirilmesi nadirdir. Klinik çalışmalarla karşılaştırıldığında, bir in vivo deneyde vasküler oklüzyon testinin kullanılması, araştırmacıya PORH mekanizmalarını, ciddi hastalıkların patogenezini ve vazoaktif ilaçların farmakodinamiğini değerlendirmek için ek fırsatlar sağlar. Elbette bu fırsatlar, hayvanlara insancıl muamele için modern biyoetik standartların sınırları içinde olmalıdır.

Bu protokol, LSCI ve invaziv kan basıncı ölçümü kullanılarak anestezi uygulanmış bir sıçanın derisindeki PORH parametrelerini değerlendirmek için bir yöntem sunar. İkincisi, sıçanın karotis arterinin kateterizasyonunu içerir ve ortalama arter basıncının (MAP) ve nabız hızının ölçülmesine izin verir. Ek olarak, laboratuvar testleri için arteriyel kan örnekleri toplanabilir (örn. arteriyel kan gazı analizi). Bu protokolün öncelikle, deneysel prosedürlerin tamamlanmasından sonra (örneğin, kritik bir hastalığın modellenmesi) hayvanın anesteziden uyandırılmasını içermeyen akut bir deneye yönelik olduğunu belirtmekte fayda var. Sıçanlarda mikro dolaşımı değerlendirmek için önerdiğimiz yöntem nispeten basittir ve endotel disfonksiyonunun değerlendirilmesi de dahil olmak üzere karşılaştırmalı vasküler fizyoloji ve patofizyoloji çalışmalarında ve ayrıca yeni vazoaktif ilaçların klinik öncesi testlerinde özellikle yararlı olacaktır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Aşağıda açıklanan prosedürler, Federal Araştırma ve Klinik Yoğun Bakım Tıbbı ve Rehabilitasyon Merkezi Etik İnceleme Kurulu tarafından onaylanan bir protokolün parçası olarak gerçekleştirilmiştir.

1. Damar tıkanıklığı için pnömatik manşetin hazırlanması

  1. Bir sıçanın arka pençesinde geçici vasküler tıkanıklık oluşturmak için sıçanlar için noninvaziv bir kan basıncı (NIBP) ölçüm sisteminden pnömatik bir manşet kullanın.
  2. Manşeti, insanlarda kan basıncını ölçmek için aneroid manometreye ve geleneksel bir mekanik tonometrenin lastik pompasına bağlayın. Üç parça şeffaf 3 mm plastik boru (1 m'si NIBP sistemine dahildir) ve uygun boyutta bir T konektörü kullanın (Şekil 1).
  3. Bir hayvan üzerinde kullanmadan önce monte edilmiş pnömatik sistemin işlevselliğini ve sıkılığını kontrol edin. Şişirildiğinde manşet basıncının birkaç dakika boyunca 200-220 mmHg'de tutulduğunu doğrulayın.

2. Arteriyel kateter, iş istasyonu ve cerrahi aletlerin hazırlanması

  1. Çalışma alanına p alkol uygulayın. Ameliyat masasını steril bir örtü ile örtün. Gaz, kateterleri ve aletleri sterilize eder (hayatta kalma prosedürlerinde ve kronik deneylerde).
  2. Karotis arter kateterizasyonu için, ucundan 25 mm kilitleme halkası ile 12 cm uzunluğunda bir PE-50 kateter (OD 0,9 mm, ID 0,6 mm) kullanın. Arteriyel perforasyonu önlemek için düz kenarlı bir kateter kullanın.
  3. Kateterin dış ucuna 22 G künt bir iğne ve heparinize salin (5 IU heparin / 1 mL) ile doldurulmuş 2 mL'lik bir şırınga takın. Açıklığı sağlamak ve pıhtı oluşumunu önlemek için kateteri heparinize salin (0.1-0.2 mL) ile yıkayın.

3. Anestezi ve ameliyat öncesi işlemler

NOT: Tüm anestezik maddeler solunum ve dolaşımı baskılayabilir. Ölümcül doz aşımını önlemek için hayvan türüne, türüne, yaşına ve sağlık durumuna göre uygun dozlama kritik öneme sahiptir. Personel, hayvan anestezisi ve yaşamsal belirtilerin izlenmesi konusunda eğitilmelidir. Prosedürler, ilgili Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) veya eşdeğer etik kuruluş tarafından onaylanmalıdır. İğneler, neşterler ve diğer keskin aletlerle çalışırken dikkatli olunmalıdır. Derhal imha etmek için daima kesici bir kap kullanın. İğneleri asla özetlemeyin. Zoonotik ajanları bulaştırabilecek veya fiziksel travmaya neden olabilecek iğne batması yaralanmaları riskinin farkında olun.

  1. Sıçanı tiletamin (10 mg / kg) + zolazepam (10 mg / kg) salin içinde% 2 çözelti ve salin içinde% 0.5 ksilazin (5 mg / kg) % 0.5 çözeltisi karışımının intraperitoneal (IP) enjeksiyonu ile uyuşturun. Reflekslerin yokluğunu kontrol ederek anestezinin yeterli olduğundan emin olun (ayak parmağı sıkışması).
  2. Boynun ön ve arka bölgelerinden (interskapular bölge dahil) kürkü tıraş edin. Bu bölgelerdeki cildi bir cilt antiseptiği (p alkol) ile tedavi edin. Hayvanı ısıtılmış bir ameliyat masasına sırtüstü pozisyonda yerleştirin.
  3. Anestezi derinliğini (spontan hareketler, ağrılı uyaranlara tepki), solunum düzenini (sıklık, derinlik, ritim, hırıltı), cilt ve mukoza zarının rengini düzenli olarak değerlendirerek anestezi uygulanan hayvanın durumunu izleyin. Gerektiğinde ek tiletamin + zolazepam 10 mg/kg IP enjeksiyonları kullanın.
  4. Bir ısıtma masası ve yalıtkan battaniyeler kullanarak hayvanın rektal sıcaklığını 36.5-37.0 oC'de tutarak önemli hipotermiden kaçının.

4. Sol karotis arter kateterizasyonu

  1. Boynun ventral yüzeyinde 2 cm'lik orta hat cilt kesisi yapın. Bir hemostat ve forseps kullanarak, sol karotis arteri ortaya çıkarmak ve damarın 5-7 mm'lik bir bölümünü izole etmek için boynun kaslarını ve fasyasını uzunlamasına künt bir şekilde inceleyin. Vagus sinirini karotis arterden dikkatlice ayırın ve yaralanmasını önleyin.
  2. 4-0 ipek sütür kullanarak, arterin kaudal kısmına gevşek bir bağ yerleştirin ve damarın kraniyal ucunu bağlayın. Kesi sonrası kanamayı önlemek için arterin altına yerleştirilen mikrocerrahi forsepslerin çenelerini kullanarak hafifçe gerin.
  3. Kraniyal olarak 45° açılı bir mikrocerrahi makas kullanarak, iki bağ arasındaki arterde enine bir kesi yapın (damar çapının yarısından fazla olmayan bir derinliğe kadar).
  4. Atardamarda küçük bir kesi yaptıktan sonra kateteri forseps yardımıyla kalbe doğru sabitleme halkasına kadar yerleştirin. Kateteri damarın lümeninde tutarken, kaudal ligatürü sıkın ve kateterin sabitleme halkasının üzerine ek düğümler atın.
  5. Bir şırıngaya az miktarda kan aspire ederek kateterin açıklığını kontrol edin ve kateteri tekrar yıkayın. Kateteri, sabitleme halkasından 2-3 cm uzakta düz bir iğne tutucu ile kelepçeleyin. Künt iğneyi ve şırıngayı kateterden çıkarın.
  6. Fareyi dikkatlice yüzüstü pozisyona getirin. Cerrahi makas kullanarak kürek kemikleri arasında 0,5-1,0 cm'lik orta hat cilt kesisi yapın. Hemostatik klempi dorsal insizyondan ventral insizyona doğru deri altından tünelleyin. Kateterin dış ucunu kavrayın ve deri altı tünelden dikkatlice geçirerek interskapular bölgeye çıkarın.
  7. Kateterin dış ucuna 2 mL'lik bir şırınga takılı künt bir iğne yerleştirin.
  8. Ventral ve dorsal cerrahi yaraları atravmatik iğne ve 4-0 monofilament sütür kullanarak kapatın.

5. İnvaziv kan basıncı ölçümü

  1. İnvaziv BP ölçüm sisteminden kalibre edilmiş dönüştürücüyü heparinize salin (5 IU heparin/1 mL) ile doldurun.
  2. Hayvanı ventral pozisyona getirin. 2 mL'lik şırıngayı kör iğneden ayırın ve kateteri dönüştürücüye bağlayın (Şekil 2). Kelepçeyi kateterden çıkarın ve kan basıncı hattını 0.1-0.2 mL heparinize salin ile yıkayın.
  3. Kan basıncını ve kalp atış hızını ölçmek ve kaydetmek için bir veri toplama sistemi kullanın. Kan basıncı dalga formunda iyi tanımlanmış nabız (10-15 mm Hg ve daha yüksek genlik), kateterin açıklığını ve doğru pozisyonunu gösterir.
    NOT: Kan basıncını doğru bir şekilde ölçmek için dönüştürücünün hayvanın kalp seviyesine yerleştirilmesi gerekir. Kan basıncı ölçüm hattında hava kabarcıkları belirirse, iç organların hava embolisini önlemek için bunları çıkarın.
  4. Ortalama arter basıncını (MAP) ve diğer temel fizyolojik değişkenleri ölçmeden önce anestezi uygulanmış hayvanı 15-20 dakika stabilize edin.
  5. Veri toplama yazılımı uygulamasını açın. Dosya menüsünden Yeni'yi seçin.
  6. Doğru fiziksel girişin (örneğin, Giriş 1) seçildiğinden emin olun. İlgili kanalın (ör. Kanal 1) başlığındaki açılır menü okuna tıklayın ve Kanal Ayarları'nı seçin.
  7. İletişim kutusunda, beklenen sinyali karşılamak için voltaj aralığını (±100 mV) ayarlayın. Görüntüleme birimlerini mmHg olarak ayarlayın.
  8. Örnekleme Hızını Ayarlayın: Araç çubuğundaki Örnekleme Hızı düğmesine tıklayın. İnvaziv BP için örnekleme hızını 200 Hz'e (200 örnek/saniye) ayarlayın. Çalışma hedefleri darbe dalgası morfolojisi analizini içeriyorsa, örnekleme hızını 1 kHz'e yükseltin.
  9. Tıkla Başlama Deneysel verileri kaydetmeye başlamak için düğmesine basın.
  10. İstenen veri segmenti yakalandıktan sonra, dur düğmesine basın. Veri dosyasını Dosya | Farklı Kaydet... Benzersiz bir dosya adı verin.

6. LSCI kullanarak cilt perfüzyon ölçümü

  1. Cildi temizlemek için farenin arka pençesinin plantar yüzeyini suya batırılmış gazlı bezle silin.
    NOT: Ciltte hiperemiye neden olabilecek alkol veya diğer solüsyonları kullanmayın.
  2. Pnömatik manşeti sıçanın arka pençesine tibia ve gastroknemius kası seviyesinde yerleştirin.
    NOT: Şişirilebilir zara zarar vermemek ve dizin yumuşak dokularını sıkıştırmamak için parmaklarınızı ve ayak bileğini manşetin lümeninden geçirirken dikkatli olun.
  3. Sıçanın ayağını bir parça gazlı bezin üzerine yerleştirin ve ayrıca hareket artefaktlarını en aza indirmek için ayak parmaklarını bir yapışkan bant şeridi ile sabitleyin (Şekil 2).
  4. LSCI yöntemini kullanarak cilt perfüzyonunu kaydetmek için veri toplama donanım ve yazılımını hazırlayın.
    NOT: Sunulan çalışmada donanım, yüksek hızlı yakın kızılötesi (NIR) monokrom kamera, kamera objektifi, NIR doğrusal polarizör ve difüzör seti ile lazer kaynağından oluşmaktadır. Yazılım, kareleri belirli bir kare hızında (saniyede 90 kare) ve pozlama süresinde (11 ms) yakalayan bir video kayıt aracından oluşur. Kameranın görüş alanı olan alanın gerçek boyutları 16 x 16 mm'dir.
  5. İlgi alanının (tarsus ve metatars) kamera objektifinin odak noktasında olduğundan emin olun.
  6. Lazer kaynağını, aydınlatma tüm ilgi alanı üzerinde eşit olacak ve aşırı olmayacak şekilde ayarlayın.
  7. Doğrusal polarizörü, ölçülen nesneden aynasal yansıma en aza indirilecek şekilde ayarlayın.
  8. Bir video kayıt aracındaki parametrelerin doğru ayarlandığından emin olun, ardından 30 saniye boyunca ham monokrom görüntüler kaydetmek için Yakala düğmesini tıklayın (temel kayıt, daha fazla veya daha az olabilir). Benek Perfüzyon değerlerini hesaplamak için görüntüleri kullanın (aşağıdaki formül (2)'ye bakın).
    NOT: Bu çalışmada, özel olarak geliştirilmiş bir deney düzeneği kullanılmıştır, ancak LSCI yöntemini uygulayan ticari olarak temin edilebilen herhangi bir cihaz, bu protokole göre ölçümler yapmak için kullanılabilir. Dış aydınlatmanın elde edilen sonuçlar üzerindeki etkisini en aza indirmek için LSCI ölçümlerinin karanlık bir odada yapılması önerilir.

7. Damar tıkanıklığı testi ve PORH değerlendirmesi

  1. Lastik pompanın tahliye vanasını kapatın.
  2. Temel deri perfüzyonunu (istirahatte) yakaladıktan sonra, hayvanın uzvundaki pnömatik manşeti, hayvanın sistolik kan basıncından daha yüksek bir basınca (uzuv yaralanmasına neden olmadan arteriyel ve venöz kan akışını güvenilir bir şekilde tıkamak için genellikle 200-220 mmHg) hızla şişirin.
  3. Vasküler tıkanıklığı doğrulamak ve ardından benek perfüzyonunun "biyolojik sıfırını" belirlemek için cilt LSCI sinyalini 180 saniye (çalışmanın amaçlarına bağlı olarak 30-300 saniye) kaydetmeye devam edin.
  4. Hedef oklüzyon süresine ulaştıktan sonra manşeti hızla söndürün ve PORH dinamiklerini kaydetmek için cilt LSCI sinyalini 180 saniye daha (az ya da çok olabilir) kaydetmeye devam edin.
  5. İnvaziv arteriyel basınç dalga formunu, vasküler oklüzyon öncesinde, sırasında ve sonrasında kutanöz perfüzyon değerlendirmesi ile eş zamanlı olarak kaydedin. MAP ve kutanöz vasküler iletkenliği hesaplamak için bu verileri kullanın (aşağıya bakınız).
  6. Bir yazılım ortamında yazılmış bir algoritma kullanarak Benek Perfüzyonu değerlerini elde edin. İlk adım, ham monokrom görüntüleri benek kontrastlı görüntülere dönüştürmektir. Formülü ( 1) kullanarak ortalama benek kontrastını hesaplayın:
    figure-protocol-1    (1)
    Burada Yoğunluk, belirli bir zamanda her pikselin yoğunluğudur.
    NOT: Kontrastın hesaplandığı görüntü sayısı, işlemenin sonucunu büyük ölçüde etkileyebilir. Bu çalışmada, 90'dan fazla görüntünün ortalamasını alan zamansal bir LSCI algoritması kullanılmıştır.
  7. Formül (2) kullanarak Benek Kontrastı değerlerini Benek Perfüzyon değerlerine dönüştürün:
    figure-protocol-2  (2)
  8. Benek Perfüzyon değerlerinin ortalamasını almak için ilgilenilen alanı (tarsus ve metatarsus) içeren dikdörtgen bir bölge seçin (bu dikdörtgen bölgenin içinde). İncelenen parametrelerin daha fazla hesaplanması için böyle bir prosedürle elde edilen Benek Perfüzyonunun zaman gelişimini (grafiğini) kullanın.
  9. Ölçülen cilt perfüzyon değerlerine dayanarak, ana PORH parametrelerini hesaplayın ( Şekil 3).
  10. Formül (3)'ü kullanarak kutanöz vasküler iletkenliği (CVC) hesaplayın:
    figure-protocol-3   (3)
    LSCIdinlenmesinin başlangıçta kaydedilen cilt benek perfüzyonunun ortalama değeri olduğu durumlarda (keyfi birimler = AU); MAP, aynı zaman diliminde kaydedilen ortalama arter basıncıdır (mmHg).
  11. Formül (3) kullanarak ve pik hiperemi (LSCImax) ve MAP için uygun değerleri değiştirerek pik kutanöz vasküler iletkenliği (CVCmax) hesaplayın.

8. Deneysel prosedürler ve tekrarlanan ölçümler

  1. Başlangıçta cilt perfüzyonu, PORH ve ilgilenilen diğer fizyolojik değişkenleri kaydettikten sonra, deneysel müdahaleyi onaylanmış çalışma protokolüne göre gerçekleştirin (örneğin, patolojik sürecin modellenmesi ve/veya vazoaktif bir ilacın uygulanması).
  2. Simüle edilmiş patolojik sürecin geliştirilmesinden veya uygulanan ilacın etkisinin elde edilmesinden sonraki bir sonraki çalışma zaman noktasında PORH ve diğer fizyolojik değişkenleri yeniden değerlendirin.

9. Deneyin sonu

  1. Akut deneyin tamamlanmasının ardından, derin genel anestezi (tiletamin + zolazepam ve ksilazin) altında% 2 lidokain (2 mL) intraarteriyel enjeksiyonu ile sıçanı ötenazi yapın. Yerel yasalara ve protokollere bağlı olarak, laboratuvar kemirgenleri için Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmış alternatif bir insancıl ötenazi yöntemi kullanın.
    NOT: Hayatta kalma prosedürleri ve hayvanın anesteziden planlı olarak kurtarılması için, hipoterminin önlenmesi ve yeterli postoperatif analjezi (örneğin, ketoprofen 5-10 mg / kg IM) dahil olmak üzere hayvanın durumunun uygun bakımını ve düzenli değerlendirmesini sağlayın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mikrovasküler fonksiyonun değerlendirilmesi için yukarıda açıklanan yöntem, 250-300 g ağırlığındaki Wistar erkek sıçanlarda hemorajik şokun (hesaplanan kan hacminin 5'i kadar kan kaybı) modellenmesine yönelik bir dizi deneyde tarafımızdan uygulanmıştır. Kanamalı hayvan grubunda (HS, n = 13), kanamanın tamamlanmasından 30 dakika sonra invaziv KB'nin eşzamanlı izlenmesi ile PORH parametrelerinin değerlendirilmesi yapıldı. Sahte ameliyat edilen hayvanlardan oluşan kontrol grubunda (Sham, n =...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, kemirgenlerde bir in vivo deneyde kutanöz mikrosirkülasyon ve vasküler reaktiviteyi değerlendirmek için modernize edilmiş bir teknolojiyi açıklıyoruz. Bu yöntemin fizyolojik ve farmakolojik çalışmalarda başarılı ve standart kullanımı için birkaç ek hususun dikkate alınması gerekir. Yukarıdaki protokolde, sıçanlar, esas olarak laboratuvar hayvanlarıyla çalışmak için yerel standartlar ve buprenorfin, ketamin ve diğer yaygın olarak kullanılan enjekte edilebilir analjeziklere ve anes...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların beyan edecekleri herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Proje 24-25-00310 kapsamında Rus Bilim Vakfı tarafından desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Cerrahi sütür naylonlu atravmatik iğne, 4C-0.5x16-4/0-NMedtekhnika, RusyaYOKMavi. Uzunluk 75 cm. USP 4/0 (MP1.5). Cerrahi bir yarayı dikmek için
Sıçanın karotis arteri için künt uçlu şırınga iğneli kateter 22 GSciCat, Rusya YOKPE-50, uzunluk 12 cm, OD=0,9 mm, ID= 0,6 mm.Bir sabitleme halkası ile
Deltran Tek Kullanımlık Basınç TransdüseriUtah Medical Products, ABD 606912" kablo
İnfüzyon tedavisi ve izleme için DiscofixC 3 muslukB. Braun, Almanya 16494C
HeparinBelmedpreparaty, Belarus YOKHeparin sodyum 5000 IU/ml, ampuller 5 mL
LidokainVelpharm, RusyaYOKEnjeksiyonluk çözelti 20 mg/mL, ampuller 2 mL
Pnömatik manşet "Sistol"Neurobotics, RusyaYOKKemirgenler için non-invaziv kan basıncı ölçümünün bir parçası. Tip 5-10 mm kuyruk (sıçanlar)
Sodyum klorürPharmasyntez, Rusya YOKİnfüzyon çözeltisi %0,9, 250 mL
Yazılım LabChart8 ADInstruments, AvustralyaYOKSürüm 8.1.13
Yazılım MATLAB MathWorks Inc., ABDN/A Sürüm R2019b
Tek kullanımlık steril şırınga, 1 mL, 3 parçalıHuaian Şehri Hengchun Tıbbi Ürün Co. Ltd., ÇinN/A 27 G iğne
Tek kullanımlık steril şırınga, 2 (2,5) mL, 3 parçalıVogt Medical Vertrieb GmbH, Almanya131052423 gr iğne
Sütür İPEK-SPolytechmed, Rusya YOKEmilmez, örgülü, silikon kaplamalı doğal ipekten yapılmıştır, kasette siyah. USP 4/0 (MP1.5). Uzunluk 100 m. Bağlama kapları için
XylaInterchemie, HollandaN/A Ksilazin 20 mg/mL, 50 mL
Zoletil 100Virbac, Fransa N/A Tiletamin HCl 50 mg/mL, zolazepam HCl 50 mg/mL, 5 mL

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Roustit, M., Cracowski, J. Non-invasive assessment of skin microvascular function in humans: an insight into methods. Microcirculation. 19 (1), 47-64 (2012).
  2. Duranteau, J., et al. The future of intensive care: the study of the microcirculation will help to guide our therapies. Crit Care. 27 (1), 190(2023).
  3. Basak, K., Manjunatha, M., Dutta, P. K. Review of laser speckle-based analysis in medical imaging. Med Biol Eng Comput. 50 (6), 547-558 (2012).
  4. Goldberg, J., et al. Intraoperative laser speckle contrast imaging to assess vessel flow in neurosurgery: a pilot study. Neurosurgery. 94, 983-992 (2024).
  5. Paramasivam, R., et al. Laser speckle contrast imaging for intraoperative assessment of intestinal microcirculation in normo- and hypovolemic circulation in a porcine model. Eur Surg Res. 65 (1), 1-8 (2023).
  6. Linkous, C., et al. Applications of laser speckle contrast imaging technology in dermatology. JID Innov. 3 (5), 100187(2023).
  7. Golubova, N., et al. Effect of thinned-skull cranial window on monitoring cerebral blood flow using laser speckle contrast imaging. IEEE J Sel Top Quantum Electron. 31 (4), 1-8 (2025).
  8. Golubova, N., Potapova, E., Seryogina, E., Dremin, V. Time-frequency analysis of laser speckle contrast for transcranial assessment of cerebral blood flow. Biomed Signal Process Control. 85, 104969(2023).
  9. Escobar, S., et al. Evaluation of systemic endothelial-dependent and endothelial-independent microvascular reactivity in metabolically healthy obesity: an observational study. Microvasc Res. 148, 104553(2023).
  10. Shirazi, B. R., Valentine, R. J., Lang, J. A. Reproducibility and normalization of reactive hyperemia using laser speckle contrast imaging. PLoS One. 16 (1), e0244795(2021).
  11. Tew, G. A., Klonizakis, M., Crank, H., Briers, J. D., Hodges, G. J. Comparison of laser speckle contrast imaging with laser Doppler for assessing microvascular function. Microvasc Res. 82 (3), 326-332 (2011).
  12. Yuan, X., et al. A comparison of the cutaneous microvascular properties of the spontaneously hypertensive and the Wistar-Kyoto rats by spectral analysis of laser Doppler. Clin Exp Hypertens. 41 (4), 342-352 (2019).
  13. Dubensky, A., et al. Post-occlusive reactive hyperemia variables can be used to diagnose vascular dysfunction in hemorrhagic shock. Microvasc Res. 152, 104647(2024).
  14. Meglinski, I. V., Kal'chenko, V. V., Kuznetsov, Y. L., Kuznik, B. I., Tuchin, V. V. Towards the nature of biological zero in the dynamic light scattering diagnostic modalities. Dokl Phys. 58, 323-326 (2013).
  15. Feng, J., et al. Catheterization of the carotid artery and jugular vein to perform hemodynamic measures, infusions and blood sampling in a conscious rat model. J Vis Exp. (95), e51881(2015).
  16. Henninger, N., Heimann, A., Kempski, O. Electrophysiology and neuronal integrity following systemic arterial hypotension in a rat model of unilateral carotid artery occlusion. Brain Res. 1163, 119-129 (2007).
  17. Souza-Silva, E., Ascenso, R., Tonussi, C. R., Da Silva-Santos, J. E. Detection of blood flow perfusion and post-occlusive reactive hyperemia in the skeletal muscle of rats. Life Sci. 278, 119571(2021).
  18. Roustit, M., Millet, C., Blaise, S., Dufournet, B., Cracowski, J. L. Excellent reproducibility of laser speckle contrast imaging to assess skin microvascular reactivity. Microvasc Res. 80 (3), 505-511 (2010).
  19. Nilsson, M., et al. Day-to-day variability in cutaneous microcirculation measured with multi-exposure laser speckle contrast imaging and multispectral imaging. Microvasc Res. 160, 104819(2025).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Lazer Spekle G r nt lemeMikrovask ler Perf zyonVask ler Okl zyonKan Bas nc zlemeS an Pat ModeliKutan z Vask ler Kond ktansMikrovask ler DisfonksiyonHemorajik okVask ler Reaktivite

İlgili makaleler