Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Araştırma makalesi

Küçük Hücreli Dışı Akciğer Kanseri Hücrelerinde ROS Aracılı Klasik Apoptoz Yoluyla Pileostegia tomentella'nın Temel Bileşenlerinin Antikanser Etkileri

449 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/69008

⸱

19 Eylül 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1International Zhuang Medicine Hospital affiliated to Guangxi University of Traditional Chinese Medicine, 2School of Zhuang Medicine, Guangxi University of Chinese Medicine, 3Guangxi Zhuang Autonomous Region Institute of Ethnic Medicine, 4Graduate School of Guangxi University of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Bu protokol, küçük hücreli dışı akciğer kanseri (KHDAK) hücrelerinde doğal bileşiklerin neden olduğu reaktif oksijen türleri (ROS) aracılı apoptozu değerlendirmek için bir yöntem sunar.

Özet

Bu çalışma, Pileostegia tomentella'nın antikanser potansiyelini, reaktif oksijen türleri (ROS) aracılı yollar yoluyla H1299 küçük hücreli dışı akciğer kanseri (KHDAK) hücrelerinde klasik apoptozu indükleme yeteneğine özellikle odaklanarak araştırmaktadır. Biyoaktivite kılavuzluğunda bir izolasyon yaklaşımı kullanılarak, iki aktif bileşik, umbelliferon (UMB) ve epi-Vogelosid, ana sitotoksik bileşenler olarak tanımlandı. Her iki bileşik de hücre canlılığı üzerinde önemli inhibitör etkiler sergiledi ve H1299 hücrelerinde apoptotik hücre ölümünü etkili bir şekilde tetikledi. Mekanik araştırmalar, UMB ve epi-Vogelosid tedavisinin hücre içi ROS seviyelerinde belirgin bir artışa yol açtığını ve oksidatif stresin önemli bir aracı olduğunu gösterdi. Western blot analizi, bölünmüş kaspaz-3 seviyelerinin arttığını ve anti-apoptotik protein Bcl-2'nin ekspresyonunun azaldığını ortaya çıkardı, bu da içsel mitokondriyal apoptotik yolun aktivasyonunu gösteriyor. Ek olarak, transkriptomik profilleme, gen ekspresyonunda yaygın değişiklikler gösterdi ve bu da hücresel homeostazın bozulmasını daha da destekledi. Bu sonuçlar, Pileostegia tomentella ve aktif bileşenlerinin akciğer kanseri için potansiyel terapötik ajanlar olarak umut vaat ettiğini göstermektedir.

Giriş

Kanser, önemli bir yıllık ölüm oranıyla karakterize edilen zorlu bir küresel halk sağlığı sorunu sunmaktadır. Küçük hücreli dışı akciğer kanseri (KHDAK), akciğer kanseri vakalarının yaklaşık %85'ini oluşturan, kansere bağlı ölümlerin başlıca küresel itici gücüdür1. Moleküler ve hücresel süreçlerin doğası gereği karmaşık bir etkileşimi olan karsinojenez, reaktif oksijen türlerinin (ROS) homeostazındaki bozulmalardan kritik derecede etkilenir. Süperoksit anyonları, hidroksil radikalleri ve hidrojen peroksit gibi kararsız oksidanları içeren ROS, normal hücresel metabolizmanın yan ürünleridir ve sinyalleşme, proliferasyon, farklılaşma ve apoptozda temel işlevleri yerine getirir2. ROS konsantrasyonlarındaki bir dengesizlik, oksidatif stresi hızlandırabilir, potansiyel olarak programlanmış hücre ölüm yollarını, özellikle otofaji ve apoptozu aktive edebilir, böylece kanser hücresi proliferasyonunu ve hayatta kalmasını engelleyebilir3. Sonuç olarak, ROS onkolojide ikili bir rol sergiler ve tümör ilerlemesinin hem destekleyicileri hem de baskılayıcıları olarak hareket eder. Son on yılda, KHDAK için terapötik stratejiler, özellikle canlı bir araştırma alanını temsil eden ROS'un bu ikili doğasından yararlanmak için tasarlanmış yeni antikanser ajanların geliştirilmesiyle önemli ölçüde ilerlemiştir4.

Adriamisin (doksorubisin), sisplatin ve siklofosfamid gibi kimyasal olarak sentezlenmiş çok sayıda antikanser ajanının, ROS üretimini teşvik ederek kanser hücrelerinde apoptozu indüklediği bilinmektedir5. Hedefe yönelik tedaviler ve immünoterapötik antikorlardaki gelişmelere rağmen, platin bazlı kemoterapi KHDAK hastaları için tedavinin temel taşı olmaya devam etmektedir. Bununla birlikte, kemoterapiye bağlı direnç ve yan etkilerin ortaya çıkması, yeni anti-KHDAK ilaçlarının geliştirilmesini zorunlu kılmaktadır. Sonuç olarak, antikanser bileşikleri için doğal kaynakların araştırılması, önemi ve potansiyeli nedeniyle giderek daha fazla tanınmaktadır. Son araştırmalar, belirli bitki özlerinin ve bunların aktif bileşenlerinin, düşük toksisite, yüksek özgüllük ve birden fazla yolu hedefleme yeteneği ile karakterize edilen güçlü antikanser özellikler sergilediğini vurgulamıştır6. Özellikle, bu doğal bileşiklerin bazıları ROS seviyelerini ve sinyal7'yi modüle edebilir, böylece kanser hücrelerinde otofajiyi veya apoptozu indükleyebilir ve terapötik etkiler gösterebilir 8,9.

Pileostegia tomentella El. Buttercupaceae familyasındaki Clematis cinsinden çok yıllık bir bitki olan Zucc, ağırlıklı olarak Japonya, Kuzey Kore ve Çin gibi bölgelerde bulunur. Bitkinin kökleri, gövdeleri, yaprakları ve çiçekleri de dahil olmak üzere çeşitli bileşenleri, ısıyla temizleme, detoksifikasyon, şişliği azaltma, ağrı kesici ve antibakteriyel ve antiinflamatuar etkiler gibi faydalar sunan tıbbi özellikleriyle bilinir. Son araştırmalar, Hoshi Hairy Vine özlerinin veya aktif bileşenlerinin antikanser aktivitelerine ışık tutmuş ve glioma, meme, kolon ve rahim ağzı kanseri dahil olmak üzere bir dizi kanser üzerinde tümör baskılayıcı etkiler göstermiştir10. Bununla birlikte, Pileostegia tomentella'nın spesifik antikanser mekanizmaları, özellikle de kanser hücrelerinde otofajiyi veya apoptozu indüklemek için ROS'u modüle etmedeki potansiyel rolü, büyük ölçüde keşfedilmemiş durumdadır.

Kanser tedavisi için doğal bileşiklere artan ilgiye rağmen, akciğer kanserinde Pileostegia tomentella'nın temel bileşenlerinin pro-apoptotik mekanizmaları keşfedilmemiştir. Bu çalışma, KHDAK'de seçici ROS'a bağlı apoptoz indükleyicileri olarak umbelliferon ve epi-Vogelosid'in tanımlanmasına ve mekanik diseksiyonuna öncülük etmektedir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bu çalışmada kullanılan reaktifler ve ekipmanlar Malzeme Tablosunda listelenmiştir.

1. Pileostegia tomentella'nın kimyasal bileşimi ve KHDAK hedef tahmini

Pileostegia tomentella'nın kimyasal bileşenleri, lineer iyon tuzağı-Orbitrap kütle spektrometrisi (HPLC-LTQ/MS) ile birleştirilmiş yüksek performanslı sıvı kromatografisi kullanılarak analiz edildi. Ekstraktlar uygun çözücüler içinde çözüldü ve enjeksiyondan önce süzüldü. Kromatografik ayırma, bileşik sınıfları için uyarlanmış bir gradyan elüsyon programı altında ters fazlı bir kolon kullanılarak elde edildi. Kütle spektrometrisi verileri, 100-1500 m/z kütle aralığında pozitif elektrosprey iyonizasyon modunda toplandı. Tanımlanan bileşiklerin moleküler yapıları, jenerik kimyasal çizim yazılımı kullanılarak çizilmiş ve SDF formatında kaydedilmiştir. Bu yapısal dosyalar, potansiyel biyolojik hedefleri belirlemek için çevrimiçi bir hedef tahmin aracına gönderildi ve daha fazla doğrulama için ilk 20 hedef seçildi. KHDAK ile ilişkili hedefler, halka açık bir gen veri tabanından alındı. Her iki veri setinden örtüşen hedefler, Pileostegia tomentella'nın potansiyel terapötik hedefleri olarak tanımlandı.

2. Bileşen-hedef ağ yapısı

Tahmin edilen hedefler için protein-protein etkileşimi verileri, açık erişimli bir protein etkileşimi veri tabanından elde edildi. Etkileşim verileri, bileşik hedef etkileşim ağını oluşturmak için genel ağ görselleştirme yazılımına aktarıldı. Derece merkeziliği, aradalık ve yakınlık dahil olmak üzere ağ topolojik özellikleri, temel düzenleyici düğümleri belirlemek için yerleşik analitik araçlar kullanılarak analiz edildi.

3. KEGG yolu zenginleştirme analizi

Tahmin edilen hedef proteinlerin fonksiyonel zenginleştirilmesi, halka açık zenginleştirme araçları ve istatistiksel yazılım aracılığıyla KEGG yolu analizi kullanılarak gerçekleştirildi. Düzeltilmiş p değerleri 0.05'ten küçük olan yollar anlamlı kabul edildi. Genel ağ görselleştirme yazılımı kullanılarak bir "bileşik-hedef-yol" etkileşim ağı oluşturmak için önemli yollar bileşik hedef verileriyle entegre edildi. Ağ topolojisi analizi, Pileostegia tomentella'nın çok bileşenli ve çok hedefli mekanizmalarını gösteren temel biyolojik düzenleyici merkezleri vurguladı.

4. Pileostegia tomentella bileşenlerinin ekstraksiyonu

Corydalis spinosa'nın kurutulmuş asma sapları ince bir toz haline getirildi. Toz haline getirilmiş malzeme, belirli bir süre boyunca oda sıcaklığında ultrasonik işlem altında% 70 etanol ile ekstrakte edildi. Ham ekstrakt süzüldü ve indirgenmiş basınç altında konsantre edildi. Sıvı-sıvı bölme, petrol eteri, etil asetat ve n-bütanol dahil olmak üzere artan polariteye sahip çözücüler kullanılarak gerçekleştirildi. Ön tahlillerde en yüksek biyolojik aktiviteyi gösteren etil asetat fraksiyonu toplandı, konsantre edildi, dondurularak kurutuldu ve daha sonra kullanılıncaya kadar -20 °C'de saklandı.

5. Hücre dizisi ve tedavi koşulları

İnsan akciğer kanseri hücre dizisi H1299, %5 CO 2 içeren nemlendirilmiş bir atmosferde 37 ° C'de %10 fetal sığır serumu ile desteklenmiş RPMI1640 ortamında kültürlendi. Hücreler uygun bir yoğunlukta tohumlandı ve tedaviden önce gece boyunca yapışmasına izin verildi. Hücreler, Tablo 1'de listelendiği gibi, UMB ve epi-Vogelosid olmak üzere iki test bileşiğinin değişen konsantrasyonlarına (500 μg/mL, 750 μg/mL ve 1.000 μg/mL) maruz bırakıldı. Standart kültür koşulları altında 24 saatlik inkübasyondan sonra, bileşiklerin biyolojik etkilerini değerlendirmek için sonraki analizler için hücreler toplandı.

6. Hücre canlılığı için MTT testi

Bileşiklerin sitotoksik etkileri, kolorimetrik bir MTT testi kullanılarak değerlendirildi. H1299 hücreleri, belirli bir yoğunlukta 96 oyuklu plakalara ekildi ve gece boyunca yapışmasına izin verildi. Hücreler daha sonra standart kültür koşulları altında 72 saat boyunca test bileşikleri ile muamele edildi. Tedaviyi takiben, her bir oyuğa bir MTT çözeltisi eklendi ve canlı hücrelerin MTT'yi çözünmeyen mor formazan kristallerine dönüştürmesine izin vermek için inkübe edildi. İnkübasyondan sonra ortam çıkarıldı ve formazan kristalleri dimetil sülfoksit (DMSO) içinde çözüldü. Absorbans, bir mikroplaka okuyucu kullanılarak 570 nm'de ölçüldü. Absorbans değerleri hücre canlılığına karşılık gelir ve bileşik sitotoksisitesinin niceliksel bir değerlendirmesini sağlar.

7. LDH salınımı yoluyla membran bütünlüğünün değerlendirilmesi

Hücre zarı bütünlüğü, sitotoksisitenin bir göstergesi olarak laktat dehidrojenaz (LDH) salınımı ölçülerek değerlendirildi. H1299 hücreleri, 24 saat, 48 saat veya 72 saat boyunca test bileşikleri ile muamele edildi. Her zaman noktasında, kültür süpernatanları toplandı ve üreticinin protokolüne göre bir LDH aktivite testine tabi tutuldu. LDH sadece hasarlı zarları olan hücrelerden salındığından, ölçülen absorbans değerleri, bileşiklerin zaman içinde neden olduğu zar hasarının boyutunu yansıtır.

8. Apoptozun akış sitometrik analizi

Apoptoz indüksiyonu, Ek V ve 7-Aminoaktinomisin D (7-AAD) boyaması kullanılarak akış sitometrisi ile değerlendirildi. Test bileşikleri ile muameleyi takiben, H1299 hücreleri santrifüjleme ile toplandı, soğuk fosfat tamponlu salin ile yıkandı ve bağlanma tamponunda yeniden süspanse edildi. Hücreler daha sonra boyama protokolüne göre bir floresan boyaya konjuge edilmiş Ek V ve 7-AAD ile inkübe edildi. Numuneler hemen akış sitometrisi ile analiz edildi. Bu yöntem, canlı hücreler (boyanmamış), erken apoptotik hücreler (Ek V pozitif, 7-AAD negatif) ve geç apoptotik veya nekrotik hücreler (her iki boyama için pozitif) arasında farklılaşmaya izin verdi.

9. Hücre içi ROS ölçümü

Hücre içi reaktif oksijen türleri (ROS) seviyeleri, floresan bazlı bir test kullanılarak ölçüldü. H1299 hücreleri, kuyucuk başına 1 × 105 hücre yoğunluğunda 12 oyuklu plakalara ekildi ve yaklaşık %80 birleşme noktasına ulaşana kadar kültürlendi. Hücreler daha sonra 72 saat boyunca belirlenen bileşiklerle muamele edildi. Tedaviyi takiben hücreler, karanlıkta 30 dakika boyunca 37 °C'de 1 μM ROS'a duyarlı floresan prob 2',7'-diklorodihidrofloresein diasetat (DCFH-DA) ile inkübe edildi. İnkübasyondan sonra hücreler toplandı ve floresan yoğunluğu, bir floresan mikroplaka okuyucu kullanılarak 525 nm'lik bir emisyon dalga boyunda ölçüldü. Floresan yoğunluğu, hücre içi ROS seviyelerine karşılık gelir.

10. Gerçek zamanlı kantitatif PCR (RT-qPCR)

H1299 hücreleri, kuyu başına 2 × 105 hücre yoğunluğunda 6 oyuklu plakalara ekildi ve yaklaşık %80 birleşme noktasına ulaşana kadar kültürlendi. Hücreler daha sonra 72 saat boyunca belirlenen bileşiklerle muamele edildi. Toplam RNA, yaygın olarak kullanılan bir fenol-kloroform yöntemi kullanılarak ekstrakte edildi. Tamamlayıcı DNA (cDNA) sentezi, üreticinin talimatlarına göre bir ters transkripsiyon kiti kullanılarak gerçekleştirildi. Kantitatif gerçek zamanlı PCR (qRT-PCR), spesifik primerlere sahip gerçek zamanlı bir PCR sistemi kullanılarak gerçekleştirildi ( Tablo 2'de listelenmiştir). Göreceli gen ekspresyon seviyeleri, karşılaştırmalı Ct yöntemi kullanılarak hesaplandı ve temizlik genleri dahili kontroller olarak kullanıldı.

11. Protein ekspresyonu için immünoblotlama

Western blot analizi, kültürlenen ve tedavi edilen H1299 hücreleri üzerinde yapıldı. Toplam protein, uygun bir lizis tamponu kullanılarak ekstrakte edildi ve lizatlar, 4 °C'de 15 dakika boyunca 10.000 × g'da santrifüjleme ile berraklaştırıldı. Protein konsantrasyonları spektrofotometrik bir test kullanılarak belirlendi. Her numuneden eşit miktarda protein SDS-PAGE ile ayrıldı ve bir poliviniliden diflorür (PVDF) membranına aktarıldı. Membranlar, oda sıcaklığında 2 saat boyunca %5 yağsız kuru sütle bloke edildi ve daha sonra optimize edilmiş seyreltmelerde Bcl-2, kaspaz-3, PARP1, BAX, GAPDH ve Tubulin'e özgü birincil antikorlarla 4 °C'de gece boyunca inkübe edildi. Yıkamadan sonra membranlar uygun sekonder antikorlarla oda sıcaklığında 2 saat inkübe edildi. Protein bantları, kemilüminesan bir substrat kullanılarak görselleştirildi ve görüntülendi. Görüntü analiz yazılımı ile dansitometrik analiz yapıldı ve bant yoğunlukları yükleme kontrolleri olarak GAPDH ve Tubulin'e normalleştirildi.

12. Kaspaz-3'ün immünofloresan mikroskobu

Önemli bir apoptotik protein olan kaspaz-3'ün ekspresyonu ve hücre altı lokalizasyonu, immünofloresan boyama ile değerlendirildi. Tedaviden sonra, H1299 hücreleri paraformaldehit ile sabitlendi, hafif bir deterjan çözeltisi ile geçirgenleştirildi ve kaspaz-3'e karşı bir birincil antikor ile inkübe edildi. Daha sonra birincil antikor sinyalini tespit etmek için floresan etiketli bir ikincil antikor uygulandı. Hücre çekirdekleri, DNA bağlayıcı bir floresan boya kullanılarak boyandı. Boyanan hücreler floresan mikroskobu altında görselleştirildi. Floresan sinyalinin yoğunluğu ve hücresel dağılımı, kaspaz-3 aktivasyonu hakkında kalitatif ve uzamsal bilgi sağlayarak, bileşik kaynaklı apoptotik yanıta katılımını destekledi.

13. Transkriptomik sıralama

Test bileşiklerine hücresel transkripsiyonel yanıtın profilini çıkarmak için, işlenmiş H1299 hücrelerinden toplam RNA ekstrakte edildi ve standart kalite kontrol yöntemleri kullanılarak bütünlük açısından değerlendirildi. Dizileme kitaplıkları, yerleşik protokoller izlenerek hazırlandı ve yeni nesil bir dizileme platformu kullanılarak yüksek verimli dizilemeye tabi tutuldu. Ham dizileme verileri, kalite kontrol filtreleme, referans genoma hizalama ve transkript bolluğunun ölçülmesini içeren geleneksel bir biyoinformatik boru hattı aracılığıyla işlendi. Tedaviyi takiben ekspresyonda istatistiksel olarak anlamlı değişiklikler olan genleri belirlemek için diferansiyel gen ekspresyon analizi yapıldı. Bileşiklerden etkilenen temel biyolojik süreçleri aydınlatmak için diferansiyel olarak eksprese edilen genlerin zenginleştirme ve yol analizleri yapıldı, böylece moleküler etkilerine kapsamlı bir transkriptomik genel bakış sağlandı.

14. İstatistiksel analiz

Tüm veriler, en az üç bağımsız deneyden elde edilen ortalama ± standart sapma (SD) olarak ifade edilir. Gruplar arasındaki istatistiksel anlamlılık, uygun olduğunda Student's t-testi veya tek yönlü ANOVA dahil olmak üzere standart yöntemler kullanılarak belirlendi. Farklılıklar, 0.05'ten küçük P değerleri için istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Pileostegia tomentella'nın temel bileşenlerinin akciğer kanserine karşı taranması
Deneysel tasarıma genel bir bakış Şekil 1'de sunulmuştur. HPLC-LTQ/Orbitrap MS, Pileostegia tomentella'da bulunan yedi ana biyoaktif bileşeni karakterize etmek için kullanıldı (Tablo 3). Daha sonra, SwissTargetPrediction veritabanı11 kullanılarak bu bileşikler üzerinde bir in silico hedef tahmini ge...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Küçük hücreli dışı akciğer kanseri (KHDAK), agresif biyolojisi, hızlı klinik ilerlemesi ve yüksek metastatik potansiyeli ile karakterize edilen ve sıklıkla kötü hasta sonuçlarına neden olan acil bir küresel sağlık sorunu olmaya devam etmektedir12. Cerrahi rezeksiyon, radyoterapi ve kemoterapi gibi standart girişimler erken evre hastalıkta terapötik fayda sağlasa da, ileri evrelerde ilaç direncinin ortaya çıkması ve sistemik toksisite yükü nedeniyle etkinlikleri az...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların beyan edecekleri herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

Bu çalışma, Geleneksel Çin Tıbbı Devlet İdaresi'nden Geleneksel Çin Tıbbı - Etnik Azınlık Eczanesi (Zhuang Eczanesi) Üst Düzey Anahtar Disiplin İnşa Projesi tarafından desteklenmiştir (No. zyyzdxk-2023165); Guangxi Uluslararası Zhuang Tıp Hastanesi'nin Yetenek Geliştirme Programı "Gençlik Projesi" (No. 2022001); Guangxi Çin Tıbbında Multidisipliner Çapraz İnovasyon Ekibi Projesi (No. GZKJ2309); Guangxi Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi'nin Üst Düzey Yetenek Yetiştirme İnovasyon Ekibi Programı (No. 2022A008); Guangxi Bilim ve Teknoloji Departmanının Temel Araştırma ve Geliştirme Projesi (No. Gui Ke AB21196057); Guangxi Uluslararası Zhuang Tıp Hastanesi'nin Üst Düzey Yetenek Ekibi İnşası için 2023 Üç Yıllık Eylem Planı (No. GZCX20231203, GZCX20231202); Guangxi Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi'nin "Qihuang Projesi" Üst Düzey Yetenek Ekibi Yetiştirme Programının Üçüncü Partisi (No. 202414).

YAZAR KATKISI:

Wen Zhong, Leimin Jiang ve Bing Qing bu çalışmaya eşit derecede katkıda bulundular ve ilk yazarlığı paylaşıyorlar. Öncelikle deneysel tasarım, veri toplama ve sonuçların yorumlanmasından sorumluydular. Xiumei Ma veri analizi yaptı ve makale hazırlanmasına katkıda bulundu. Shi Xianyi, Deng Qingmei ve Zhou Guangyun çalışma tasarımına, veri toplamaya ve literatür araştırmasına katıldı. Sorumlu yazar Jiangcun Wei, veri analizi ve yorumlamayı denetledi ve makalenin taslağının hazırlanmasında ve gözden geçirilmesinde öncü bir rol oynadı.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Ek V– PE / 7-AAD Apoptoz Tespit KitiBD Biyolojik Bilimler556547Akış sitometrisi tabanlı apoptoz tespiti
Antikor: BAXAbcamAB32503Pro-apoptotik protein için Western blot
Antikor: Bcl-2AbcamAB182858 (İngilizce)Western blot/immünofloresan
Antikor: Bölünmüş Kaspaz-3AbcamAB32042Western blot / IF
Antikor: GAPDHAbcamAB8245Western blot'ta iç kontrol
Antikor: PARP1AbcamAB32064Apoptoz belirteci için Western blot
Antikor: TübülinAbcamAB78078Western blot'ta iç kontrol
Kimya ÇizimiPerkinElmer BilişimCCG821391Küçük moleküllerin yapı çizimi
Kemilüminesans Görüntüleme SistemiTanon Bilimi ve TeknolojiTanon 5200Protein bantlarını görselleştirmek için
Hücre manzarasıCytoscape.orghttps://cytoscape.orgAğ yapımı ve analizi
DAPI Nükleer LekeSigma D9542 SerisiIF için mavi nükleer karşı leke
DEMİRELNIHhttps://david.ncifcrf.govİşlevsel açıklama ve KEGG yolu zenginleştirme
DMSO'nunSigma 
MFCD00002089		Formazan kristallerini çözmek için kullanılır
Etanol (ekstraksiyon için)SigmaMFCD00003568Ultrasonik destekli ekstraksiyon çözücüsü
Etil AsetatSigmaMFCD00009171Biyoaktif fraksiyonlama için kullanılır
FITC konjuge İkincil AntikorAbcamAB6785İmmünofloresanda kullanılır
Akış SitometresiTermo BilimselA29001 SerisiApoptoz ve ROS tespiti için kullanılır
Floresan MikroskobuOlympus ŞirketiBX53F Serisiİmmünofloresan slaytları görüntülemek için
Dondurarak KurutucuLabconco Şirketi7670520Numune liyofilizasyonu ve muhafazası için
Gen KartlarıWeizmann Enstitüsühttps://www.genecards.orgHastalıkla ilgisi için gen veritabanı
HPLC-LTQ-Orbitrap Kütle SpektrometresiTermo BilimselIQLAAEGAAVFACZMAIKMS ile bileşik tanımlama
Illumina NovaSeq Sıralama PlatformuIllumina A.Ş.20012850RNA dizisi için kullanılır
LDH Sitotoksisite Test KitiBeyotimeC0016Sitotoksisite göstergesi olarak LDH salınımını ölçmek için
Mikroplaka OkuyucuTermo BilimselVL0000D0MTT ve LDH testlerinde absorbans ölçümleri için
MTT Hücre Canlılığı Test KitiBeyotime C0009SHücre canlılığını değerlendirmek için MTT testi için kullanılır
qPCR MakinesiTermo Bilimsel4485701Gen ekspresyonu analizi için
R yazılımıR Vakfıhttps://www.r-project.orgİstatistiksel hesaplama ve yol çizimi
Ters Transkripsiyon Kiti (RT Kiti)VazymeMR201cDNA sentezi için
RNA-seq Kitaplığı Hazırlık KitiIllumina A.Ş.20020594Sıralama için kütüphane hazırlığı
SwissTargetPredictionİsviçre Enstitüsühttp://www.swisstargetprediction.chBileşik hedef tahmin aracı
SYBR Yeşil qPCR KarışımıVazymeQ311-02Kantitatif PCR için
TRIzol Reaktifi (RNA ekstraksiyonu)Sigma T3934 SerisiToplam RNA ekstraksiyonu için
Ultrasonik TemizleyiciBransonM1800-CPXHUltrasonik yardımlı ekstraksiyon için
Western Blot AparatıTermo BilimselA56727Jel elektroforezi ve protein transferi

Kaynaklar

  1. Fan, D., Yu, S., Yang, Y., Qu, S. Pyoluteorin induces apoptosis and autophagy in NSCLC cells. Biol Pharm Bull. 44 (7), 976-983 (2021).
  2. Cui, Q., et al. Modulating ROS to overcome multidrug resistance in cancer. Drug Resist Updat. 41, 1-25 (2018).
  3. Wang, Y., et al. The double-edged roles of ROS in cancer prevention and therapy. Theranostics. 11 (10), 4839-4857 (2021).
  4. Sahoo, B. M., Banik, B. K., Borah, P., Jain, A. Reactive oxygen species (ROS): Key components in cancer therapies. Anticancer Agents Med Chem. 22 (2), 215-222 (2022).
  5. Perillo, B., et al. Ros in cancer therapy: The bright side of the moon. Exp Mol Med. 52 (2), 192-203 (2020).
  6. Luo, H., et al. Naturally occurring anticancer compounds: Shining from Chinese herbal medicine. Chin Med. 14, 48(2019).
  7. Han, X., et al. Quercetin hinders microglial activation to alleviate neurotoxicity via the interplay between NLRP3 inflammasome and mitophagy. Redox Biol. 44, 102010(2021).
  8. Lv, C., et al. Ainsliadimer a induces ROS-mediated apoptosis in colorectal cancer cells via directly targeting peroxiredoxin 1 and 2. Cell Chem Biol. 30 (3), 295-307.e5 (2023).
  9. Jiaqi, L., et al. Andrographolide promoted ferroptosis to repress the development of non-small cell lung cancer through activation of the mitochondrial dysfunction. Phytomedicine. 109, 154601(2023).
  10. Liu, Y., et al. Total coumarins of Pileostegia tomentella induces cell death in SCLC by reprogramming metabolic patterns, possibly through attenuating β-catenin/AMPK/sirt1. Chin Med. 18 (1), 1(2023).
  11. Daina, A., Michielin, O., Zoete, V. Swisstargetprediction: Updated data and new features for efficient prediction of protein targets of small molecules. Nucleic Acids Res. 47 (W1), W357-W364 (2019).
  12. Catania, C., et al. New options and open issues in the management of unresectable stage III and in early-stage NSCLC: A report from an expert panel of Italian medical and radiation oncologists - interaction group. Crit Rev Oncol Hematol. 190, 104108(2023).
  13. Guo, H., et al. Biomarker-targeted therapies in non-small cell lung cancer: Current status and perspectives. Cells. 11 (20), 3200(2022).
  14. Mcnamee, N., Da Silva, I. P., Nagrial, A., Gao, B. Small-cell lung cancer update on targeted and immunotherapies. Int J Mol Sci. 24 (9), 8129(2023).
  15. Jiang, R., et al. The sodium new houttuyfonate suppresses NSCLC via activating pyroptosis through tcons-14036/mir-1228-5p/prkcdbp pathway. Cell Prolif. 56 (7), e13402(2023).
  16. Chen, P., Liu, Y., Wen, Y., Zhou, C. Non-small cell lung cancer in China. Cancer Commun (Lond). 42 (10), 937-970 (2022).
  17. Amorim, R., et al. Mitochondriotropic antioxidant based on caffeic acid antioxcin(4) activates Nrf2-dependent antioxidant defenses and quality control mechanisms to antagonize oxidative stress-induced cell damage. Free Radic Biol Med. 179, 119-132 (2022).
  18. Long, K., et al. Small-molecule inhibition of ape1 induces apoptosis, pyroptosis, and necroptosis in non-small cell lung cancer. Cell Death Dis. 12 (6), 503(2021).
  19. Lin, Z., Cheng, X., Zheng, H. Umbelliferon: A review of its pharmacology, toxicity and pharmacokinetics. Inflammopharmacology. 31 (4), 1731-1750 (2023).
  20. Cruz, L. F., et al. Umbelliferone (7-hydroxycoumarin): A non-toxic antidiarrheal and antiulcerogenic coumarin. Biomed Pharmacother. 129, 110432(2020).
  21. Zheng, S., et al. Systematic review of lonicerae japonicae flos: A significant food and traditional Chinese medicine. Front Pharmacol. 13, 1013992(2022).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

ROS Aracılı ApoptozUmbelliferonEpi-VogelozidHücre CanlılığıOksidatif StresMitokondriyal Apoptotik YolakWestern Blot
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.