Yöntem makalesi

Tekrarlanabilir ve minimal invaziv fare modelleri için Rafine Aerosol Tabanlı intratrakeal bleomicin teslimat yöntemi

DOI:

10.3791/69131

⸱

16 Ocak 2026

 ,  , 
1State Key Laboratory of Common Mechanism Research for Major Diseases, Department of Biochemistry and Molecular Biology, Institute of Basic Medical Sciences, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, trakea yoluyla taşınan aerosol bleomisin kullanarak farelerde pulmoner fibrozisin modeli için bir protokol sunuyoruz. Bu optimize edilmiş yöntem, cerrahi kesi olmadan tekiz, nicel ve hassas bir doğum sağlar ve bleomisin kaynaklı fibrozun tekrarlanabilirliğini ve güvenilirliğini artırır.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Pulmoner fibroz, akciğer parenkiminde fibrotik skar dokusunun ilerleyici birikmesiyle karakterize edilir ve bu da gaz değişiminin ciddi şekilde bozulmasına yol açar. Bu hastalık, özellikle idiopatik pulmoner fibrozis, son derece kötü bir prognozla ilişkilendirilen bir durum olmak üzere, kronik interstisyel akciğer hastalıklarının temelini oluşturur. Etkili tedavilerin eksikliği nedeniyle, sağlam fare modelleri altta yatan patolojik mekanizmaların aydınlatılması ve yeni antifibrotik müdahalelerin değerlendirilmesi için kritik öneme sahiptir. Bleomisin kaynaklı pulmoner fibroz, en yaygın kullanılan deneysel model olmaya devam etmektedir. Farelerde yaygın uygulama yolları arasında intravenöz ve intraperitoneal enjeksiyonlar, invaziv açık trakeal instillasyon ve invaziv olmayan trakeal damlama bulunur. Ancak, invaziv cerrahi yöntemler genellikle ikincil doku hasarına yol açar ve modelin tekrarlanabilirliği ile stabilitesini tehlikeye atabilir. Buna karşılık, invaziv olmayan trakeal damlama genellikle akciğer lobları arasında dengesiz bleomisin dağılımına yol açar ve boğulma riski oluşturur; böylece tekrarlanabilirlik azalır ve teknik zorlukları artırır. Bu sınırlamaları gidermek için, operasyonel olarak daha basit, minimal invaziv, yüksek tekrarlanabilir ve hayvan sıkıntısını önemli ölçüde azaltarak etik olarak üstün olan rafine aerosol tabanlı intratrakeal bir teslimat yöntemi geliştirilmiştir. Rima glottidisi doğrudan görselleştirmek için küçük hayvan laringoskobu kullanılarak, fare trakeal çapından belirgin şekilde daha dar olan özel bir aerosol iğnesi trakeaya yerleştirilir. Bleomisin çözeltisi hassas kontrol edilen basınç altında teslim edilir ve ince bir aerosol oluşur. Bu, ajanın akciğer parenximası boyunca eşit ve verimli dağılmasını sağlar. Ayrıca, iğneyi uygun bronka yönlendirerek sol veya sağ akciğeri seçici olarak hedefleyebilir. Bu optimize edilmiş modelin doz-yanıt ilişkisi, akciğer fonksiyonu, histopatolojik belirtiler ve akciğer hidroksiprolin içeriğindeki değişikliklerin sistematik olarak izlenmesiyle kapsamlı şekilde karakterize edilmiştir. Bu gelişmiş deneysel protokolün laboratuvar standartlaştırmasını kolaylaştırması ve nihayetinde yeni antifibrotik tedavilerin geliştirilmesini ve preklinik doğrulamasını hızlandırması beklenmektedir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Pulmoner Fibroz (PF), ilerleyici akciğer parenkimal hasarı ve anormal onarımla karakterize edilen ölümcül hastalıklar grubudur; bunların %30-40'ını İdiopatik Akciğer Fibrozisi (IPF) oluşturur; hastaların ortalama tanı yaşı 65 yaş ve %80'den fazlası 60 yaşından büyük ve %80'den fazlası 60 yaştanbüyüktür. 1, 2. Küresel yaşlanma yoğunlaştıkça, IPF görülmesi yıl geçen yıl artmakta olup, dünya çapında IPF görülmesi 3-9/100.000/yıl olup, Amerika Birleşik Devletleri'nde 65 yaş üstü kişilerde yapılan bir çalışmaya göre, bu nüfustaki insidans 93.7/100.000/yıl 3,4'e yükselmiştir.

Akciğer fibrozis için tarihsel olarak geliştirilen ilk model, akademide sıkça kullanılan bleomisin kaynaklı modeldir; bu model şu anda en iyi karakterizasyonu ve en yaygın kullanılan hayvanmodelidir 5, IPF ve diğer fibrotik ILD'lerin akciğer iltihabı, epitel hasarı, fibroblast proliferasyonu ve aşırı ekstrasellüler matriks (ECM) birikimi gibi birçok özelliğiniözetlemektedir 6. Ayrıca, hem akut hem de kronik pulmoner fibroz, bleomisin uygulamasının dozuna ve sıklığına bağlı olarak modellenebilir. Akciğerlerin, bleomisine maruz kaldıktan sonra 5-7 gün içinde akut iltihap evresine girdiği, ardından 7. gün civarında fibrotik bir faza başladığı bildirilmiştir. 21. güne gelindiğinde, belirgin fibrotik yeniden şekillendirme genellikle gözlemlenir; bu da modelin hem erken inflamatuar yanıtı hem de geç evre fibrotik patolojiyi zamansal olarak tanımlanmışşekilde yeniden göstermesine olanak tanır 7 (Şekil 1A). Bu, ilk yaralanmadan fibrotik evreye kadar olan tüm hastalık sürecinin incelenmesine olanak tanır ve bu durum, ilaç geliştirme ve mekanizm çalışmaları için 8,9 evrelerinin tamamında çok önemlidir.

Bleomisin modelleme yolları çeşitli olup, endotrakeal, burun, intravenöz ve intraperitoneal yollar dahil olmak üzere lokal veya sistematik olarak uygulanabilir. En yaygın kullanılan enjeksiyon endotrakeal enjeksiyondur. Dezavantajı, farelerde kesiler oluşturmasıdır ve bu da modellenen farelerin hayatta kalma oranınıetkiler. Daha sonra,11 numaralı farelerde trakeal entübasyon ve damlama enjeksiyonu için yerleşik iğnenin kullanılmasına olanak tanıyacak iyileştirmeler yapıldı. Ancak, şırıngadan itilen ilaç sadece akciğerlerde bir blok olarak dağıtılabilir; bu da her akciğer lobunda bleomisinin eşit olmayan dağılımına yol açabilir, yerel aşırı yoğunluk yaratabilir ve fare modelinin stabilitesini etkileyebilir. Ayrıca, bleomisin teslimatı için odalı nebulizer kartuşları kullanılmıştır, ancak her farede solunan bleomisin aerosol miktarı kesin olarak ölçülemez ve tek indüksiyon süresi uzun12'dir. Bu nedenle, tekrarlanabilir ve minimal invaziv fare modelleri için rafine aerosol bazlı intratrakeal bleomisin teslimat yöntemi geliştirilmiştir. Bleomisin aerozolize olur, bu da akciğerlerde eşit dispersiye ve birikmeyi sağlar ve böylece akciğer hastalığı patolojisini daha iyi tekrarlar. Bu yöntemin ortaya çıkmasının, pulmoner fibrozunu tamamen iyileştirebilecek ilaçlar üzerine araştırmaları hızlandıracağı umuluyor.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm hayvan prosedürleri, Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanan kurumsal yönergeler kapsamında gerçekleştirilmiştir. Deney boyunca uygun hayvan refahı önlemleri uygulandı. Deney için 6-8 haftalık ve yaklaşık 25 g ağırlığında erkek C57BL/6 fareleri seçildi. Materyal Tablosu , bu çalışmada kullanılan tüm hayvanları, reaktifleri ve ekipmanları ile ticari kaynaklarını listeler.

1. Hayvan seçimi ve uyum

  1. Tüm fareleri belirli patojensiz koşullar altında, 12 saatlik ışık/karanlık döngü ve geçici olarak yiyecek ve suya erişimle barındırın.
  2. Fareleri aerosol tabanlı modele başlamadan önce tesise 5-7 gün boyunca alıştırın.

2. Bleomisin çözeltisi hazırlama

DIKKAT: Bleomisin sitotoksik bir antitümör ajanıdır. Tüm adımları uygun PPE giyerek sertifikalı bir biyogüvenlik dolabında gerçekleştirin.

  1. Steril 1 mL bir şırınga kullanarak, 3 mL steril %0,9 sodyum klorür çekip 15 U bleomisin hidroklorür içeren bir şişeye enjekte edin.
  2. Şişeyi toz tamamen çözünene kadar nazikçe çevirerek 5 U/mL stok çözeltisi elde edin.
  3. Stok çözeltiyi steril 1.5 mL mikrosantrifüj tüplerine Aliquot yapın. 3.75 U/mL ve 2.5 U/mL çalışma çözeltilerini steril salin ile seyreltileyerek hazırlayın.
    NOT: 25 g fare için bu konsantrasyonlar sırasıyla 7.5 U/kg ve 5 U/kg dozlarına karşılık gelir. Farenin ağırlıkları değişiyorsa konsantrasyonları ayarlayın.
  4. Çalışan çözücüleri 4 °C'de 1 haftaya kadar veya -80 °C'de 1 aya kadar saklayabilirsiniz. Eritin ve kullanmadan önce oda sıcaklığına getirin.

3. Aerosol bazlı intratrakeal bleomisin teslimatı

  1. Anestezi hazırlığı ve uygulaması
    1. Anestezik çalışma çözeltisi, 0,1 g sodyum pentobarbital tozu 10 mL steril fizyolojik salinde çözünerek hazırlayın. 0.22 μm PES membran filtresi ile filtre kullanın. Çözeltiyi 4 °C'de ışık korumalı bir ortamda saklayın ve hazırlandıktan sonra 3 gün içinde kullanın.
    2. Sodyum pentobarbital çözeltisi 1 mL enjekte ile intraperitoneal enjeksiyon ile 26 gauge iğneyle 60 mg/kg vücut ağırlığı dozunda uygulanır. Anestezi derinliği veya süresi yetersizse, dozu hayvan tepkisine göre tedavi eden veterinerin rehberliğinde ayarlayın.
    3. Enjeksiyondan birkaç dakika sonra anestezi derinliğini değerlendirin; parmağı sıkıca sıkıca sıkıştırın ve yoksunluk refleksinin olmadığını doğrulayın, ardından sonraki işlemlere geçin.
  2. Aerosol teslimat cihazının hazırlanması
    1. Aerosol dağıtım cihazını hazırlayın; böylece nebulizasyon iğnesi, nebulizasyon şırıngası ve doz direğinin hepsinin mevcut ve steril olduğundan emin olun (Şekil 1B).
    2. Aerosol dağıtım şırıngasını steril salin içine batırın. Sıvıyı yavaşça aspire edin ve 8 saniye duraklayın. Sıvıyı hızlıca dışarı at. Sistemi doldurmak ve temizlemek için bunu üç kez tekrarlayın.
    3. Son dışarıdan sonra şırıngayı salinle doldurun. Aerosol iğnesini takın, birleşimin salin ile doldurulduğundan emin olun.
    4. Monte edilen iğneyi tuzlu suyla batırın ve hava kabarcıklarını yok etmek için aspirasyon-duraklat-fırlatma döngüsünü üç kez daha tekrarlayın.
      NOT: Hazır olmayı doğrulamak için, koyu bir arka plana salin atın. Hızla dışarı atılan tuzlu suyun koyu bir arka plana karşı yelpaze şeklinde bir sis oluşturduğundan emin olun.
  3. İntracheal aerosol teslimat prosedürü
    1. Aerosol iğnesini bleomisin çalışan çözeltiyle astarlayın, aspirasyon ve üç kez 8 saniyelik duraklama ile dışarı çıkarın.
    2. Hacmi kalibre etmek için 50 μL sütunun üzerine 25 μL doz sütunu yerleştirin. Gerekli hacmi (50 μL) aspire edin. Fazla sıvıyı dışarı at.
      NOT: Bu dozlama konfigürasyonu, insan hatasını en aza indirerek tutarlı teslimatı sağlar.
    3. Anestezi altındaki fareyi entübe platformuna yerleştirin, üst kesici dişleri kandırın ve uzuvları sabitlemek için bantlayın (Şekil 1C).
      NOT: Ritmik göğüs hareketlerini doğrulayın. Hayvan aktif görünüyorsa, ek bir anestezik dozu verin.
    4. Dili nazikçe çekmek için kıvrımlı forseps kullanın. Glottis'i açığa çıkarmak için küçük bir hayvan laringoskobu yerleştirin (Şekil 1D).
    5. Aerosol iğnesini dikey olarak glottis'ten geçirin. Bleomisin aerosolünü hızla teslim edin (Şekil 1E).
      NOT: İğne ucunu hedefli teslimat için istenen akciğere doğru eğit. Travmayı önlemek için çok derin sokmaktan kaçının. Nebulizer iğnesinin ucu, en iyi modelleme etkiyi elde etmek için farenin trakeasının bifurkasyon noktasına (ilk bifurkasyon) yakın ama temas etmeden konumlandırılmalıdır. Uç sadece trakeanın ortasına yerleştirilirse, aerosol sadece trakeal duvara çarpabilir ve büyük damlacıklar oluşturabilir ve bunlar öksürür veya yutulur. Eğer uç trakeal bifurkasyona çok yakınsa, trakeal hasar riski vardır.

4. İşlem sonrası iyileşme

  1. Vücut sıcaklığını korumak için fareyi ısıtıcı pedin üzerine koyun. Anesteziden iyileşene kadar (genellikle 1-2 saat içinde) fareyi sürekli gözlemleyin.
  2. Refleksleri kontrol etmek ve farenin hayatta olduğundan emin olmak için parmak sıkıştırması yapın.
  3. 21 gün boyunca vücut ağırlığı, aktivite seviyesi, bakım ve solunum belirtileri dahil olmak üzere günlük klinik izleme yap.
  4. Aşağıdaki kriterlerden herhangi biri karşılandığında hayvanları ötenazi yapın: (i) >tedavi öncesi başlangıç seviyesine göre vücut kilosunda %20 kaybı veya diğer klinik rahatsızlık belirtileriyle birlikte ≥%15 kayb; (ii) dinlenme anında kalıcı şiddetli solunum sıkıntısı (zorlanan veya karın snefesi, belirgin tahipne veya bradypnea, burun alevlenmesi veya açık ağız snefesi), uzuvlarda siyanoz olsun ya da olmasın; (iii) yiyecek veya su alamaması, belirgin halsizlik veya ölü görünüm (ele alınmaya tepki olmaması ve/veya düzeltme refleksinin kaybı); veya (iv) şiddetli susuzluk, hipotermi veya tedavi gören veterinerin değerlendirdiği geri dönüşü olmayan bozulma belirtileri. Bu insancıl son noktalara ulaşıldığında, hayvanları aşırı dozda sodyum pentobarbital (≥150 mg/kg, i.p.) ötanaze edin, ardından ikincil bir fiziksel yöntem (örneğin, servikal dislokasyon) uygulanarak ölüm ve ağrı ile sıkıntıyı en aza indirin.

5. Terminal akciğer fonksiyonu ölçümü ve doku toplama

  1. 21. günde, fareyi aynı anestezi çözeltisinden 90 mg/kg i.p. ile anestezi ile anestezi yapın; böylece derin anestezi indüksiyonu yapılabilir ve nefes almayı bastırılır.
  2. Ayak sıkıştırmasıyla tam anestezi doğrulan. Deriyi keserek ve kasları ayırarak trakeayı açığa çıkarın.
  3. Trakeada küçük bir eğimli kesi yapın ve entübasyon iğnesini yerleştirin. Cerrahi bağ ile sabitlen.
  4. Fareyi bilgisayar kontrollü küçük hayvan akciğer mekaniği ventilatörüne aktarın. Mekanik ventilasyon başlatın ve spontan nefes almadığınızdan önün. Akciğer fonksiyon parametrelerini ölçmek için ventilatör sistemini kullanın.
  5. Akciğerler ağarmış görünene kadar 5-10 ml steril salin ile sağ ventriküler perfüzyon yapın.
  6. Tüm akciğeri disseksiye et. Sol akciğeri 24 saat boyunca nötr tamponlu formalinde sabitleyin.
  7. Sabit akciğer dokusunu parafine yerleştirin, kesitleyin ve COL1A1 ile α-SMA için H&E boyama, Masson trikrom boyama ve immünohistokimyasal boyama işlemlerini gerçekleştirin.
  8. Sağ akciğeri boncuklu 2 mL'lik bir homojenizasyon tüpüne yerleştirin. Hidroksiprolin kitinin protokolüne göre su ekleyin. Homojenleştirin ve testi başlatın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada, bleomisin kullanarak farelerde pulmoner fibrozisi indüklemek için aerosol tabanlı intrabronşiyal bir doğum yöntemi önerdik. Ön deneylerde, yeşil bir boya aerosol olarak farklı farelerin akciğerlerine uygulandı. Boya, akciğerler boyunca benekli bir dağılım deseni gösterdi ve aerosol bazlı intrabronşiyal uygulamanın ajanın tüm akciğer loblarında eşit şekilde yayılmasına izin verdiğini gösteriyor (Şekil 1F). Şekil 1F'de

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, farelerde bleomisin kaynaklı pulmoner fibrozun optimize edilmiş invaziv olmayan trakeal nebulizasyon modelini önerdi. Glottis'i bulmak için küçük bir hayvan laringoskobu kullanıldı ve farenin hava yoluna küçük bir nebulizasyon iğnesi yerleştirildi. İlacın akciğerlere nebulize edilmesi için manuel olarak basınç uygulandı; böylece noninvaziv enjeksiyonda kullanılan tutma iğnesinin rahatsızlığı ve boğulmasıazaltıldı 13,14

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Pekin Birliği Tıp Fakültesi 2024 Merkezi Üniversite Eğitim ve Öğretim Reformu Özel Fon Destek Projesi (Proje Adı: OSF-Solunum Sistemi; Proje No.2024bkjg036), Çin Tıp Bilimleri Akademisi Tıp Bilimleri İnovasyon Fonu (2021-I2M-1-014) ve Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81570077) tarafından desteklenmiştir. Sponsorların çalışma tasarımı, veri toplama ve analizi, yayın kararı veya makale hazırlama süreçlerinde hiçbir rolü yoktu.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
0.22 μ m polietersülfon şırınga filtresiCytosciCSTPE3320
1 mL tek kullanımlık şırıngaBD300481
1.5 mL mikrosantrifüj tüpüServicebioEP-150-M
2.0 mL takviyeli liz tüpüServicebioHT-200-M
4 derece ve derece; C laboratuvar buzdolabıMeilingBCD-402WPCX
50 mL konik santrifüj borusuServicebioEP-5001-J
-80 ve derece; C ultra düşük sıcaklıklı dondurucuHaier BiomedicalDW-86L828J
Mutlak etanolSinopharm Kimyasal Reaktif Şirketi, Ltd100092683
Asidik farklılaşma çözeltisiServicebioG1039
Küçük hayvan entübasyonu için aerosol mikro püskürtücüŞanghay Yuyan Enstrümanları A., LtdYan-30012
Temel cerrahi alet setiŞanghay Yuyan Enstrümanları A., LtdYAN-21A3
Bleomisin hidroklorür çözeltisiHanhui İlaç A.Ş., LtdH20055883
Bluing reaktifiServicebioG1040
Bilgisayar kontrollü küçük hayvan akciğer mekaniği ventilatörüEMKA Biotech Beijing Co., Ltd.FX-2
Elektrik yalıtım bandı3M1500
Eozin Y boyama çözeltisiZhuhai Baso Biotech Co., LtdBA4022
Yeşil işaretleme mürekkebiPilotChiku-rin
Hematoksilin boyama çözeltisiServicebioG1004
Hidroksiprolin nicelendirme test kitiAbcamAB222941
Laminar akış başlığıHDLDL-CJ-1N
Küçük hayvan prosedürleri için laringoskopShenzhen Bilead Bilead Biyoloji Teknolojisi CO., LtdDXSHJ0
Işık mikroskobuNikonE100
Düşük toksisiteli mum giderme çözeltisiServicebioG1128
Masson'ın trikrom boyama kitiZhuhai Baso Biotech Co., LtdBA4079B
Absorbans algılamalı mikroplaka okuyucuÇevikSynergy H1
Nötr tamponlu formalinServicebioG1101-3ML
Nötr montaj ortamıSinopharm Kimyasal Reaktif Şirketi, Ltd10004160
Rekombinant Tavşan Monoklonal Anti-COL1A1 AntikorHuabioHA722517
Soğutmalı santrifüjEppendorf5424R
RNase-içermeyen suGeneralbiolTYJC002
Küçük hayvan trakeal entübasyon platformuŞanghay Yuyan Enstrümanları A., LtdCG-02M
Steril %0,9 sodyum klorür çözeltisiÇin Otsuka İlaç Şirketi, LtdH12020024
Doku homojenizeriServicebioKZ-III
KsilenSinopharm Kimyasal Reaktif Şirketi, Ltd10023418
Zirkonyum öğütme boncuklarıServicebioG0203

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Morgan, J. E., Barkman, H. W., Waring, N. P. Idiopathic pulmonary fibrosis. Semin Respir Med. 5 (3), 255-263 (1984).
  2. Jo, H. E., Randhawa, S., Corte, T. J., Moodley, Y. Idiopathic pulmonary fibrosis and the elderly: diagnosis and management considerations. Drugs Aging. 33 (5), 321-334 (2016).
  3. Raghu, G., et al. Idiopathic pulmonary fibrosis in US Medicare beneficiaries aged 65 years and older: incidence, prevalence, and survival, 2001-11. Lancet Respir Med. 2 (7), 566-572 (2014).
  4. Hutchinson, J., Fogarty, A., Hubbard, R., McKeever, T. Global incidence and mortality of idiopathic pulmonary fibrosis: a systematic review. Eur Respir J. 46 (3), 795-806 (2015).
  5. Williamson, J. D., Sadofsky, L. R., Hart, S. P. The pathogenesis of bleomycin-induced lung injury in animals and its applicability to human idiopathic pulmonary fibrosis. Exp Lung Res. 41 (2), 57-73 (2015).
  6. Horowitz, J. C., Thannickal, V. J. Epithelial-mesenchymal interactions in pulmonary fibrosis. Semin Respir Crit Care Med. 27 (6), 600-612 (2006).
  7. Izbicki, G., Segel, M. J., Christensen, T. G., Conner, M. W., Breuer, R. Time course of bleomycin-induced lung fibrosis. Int J Exp Pathol. 83 (3), 111-119 (2002).
  8. Moeller, A., Ask, K., Warburton, D., Gauldie, J., Kolb, M. The bleomycin animal model: a useful tool to investigate treatment options for idiopathic pulmonary fibrosis. Int J Biochem Cell Biol. 40 (3), 362-382 (2008).
  9. Peng, R., et al. Bleomycin induces molecular changes directly relevant to idiopathic pulmonary fibrosis: a model for "active" disease. PLoS One. 8 (4), e59348(2013).
  10. Gul, A., et al. Pulmonary fibrosis model of mice induced by different administration methods of bleomycin. BMC Pulm Med. 23 (1), 91(2023).
  11. Barbayianni, I., Ninou, I., Tzouvelekis, A., Aidinis, V. Bleomycin revisited: A direct comparison of the intratracheal micro-spraying and the oropharyngeal aspiration routes of bleomycin administration in mice. Front. Med. (Lausanne). 5, 269(2018).
  12. Song, D., et al. A mouse model of pulmonary fibrosis induced by nasal bleomycin nebulization. J. Vis. Exp. (191), e64097(2023).
  13. Li, W., Hu, Y., Yuan, W., Li, L., Huang, W. Comparison of two mouse models of lung fibrosis induced by intratracheal instillation and intratracheal aerosol administration of bleomycin. Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 32 (2), 221-225 (2012).
  14. Meng, J., Peng, Z., Tao, L. Murine pulmonary fibrosis model induced by repeated low-dose intravenous injection and intratracheal instillation of bleomycin. Zhong Nan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban. 38 (12), 1228-1232 (2013).
  15. Kadam, A. H., Schnitzer, J. E. Highly calibrated relationship between bleomycin concentrations and facets of the active phase fibrosis in classical mouse bleomycin model. Int J Mol Sci. 25 (22), (2024).
  16. Orlando, F., et al. Induction of mouse lung injury by endotracheal injection of bleomycin. J Vis Exp. (146), e58922(2019).
  17. Morita, S., et al. Establishment of a stem cell administration imaging method in bleomycin-induced pulmonary fibrosis mouse models. Sci Rep. 14 (1), 18905(2024).
  18. Olsson, I. A., Hansen, A. K., Sandoe, P. Ethics and refinement in animal research. Science. 317 (5845), 1680(2007).
  19. Jenkins, R. G., et al. An official American Thoracic Society workshop report: use of animal models for the preclinical assessment of potential therapies for pulmonary fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol. 56 (5), 667-679 (2017).
  20. Degryse, A. L., et al. Repetitive intratracheal bleomycin models several features of idiopathic pulmonary fibrosis. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 299 (4), L442-L452 (2010).
  21. Li, Q., et al. Cellular and molecular mechanisms of fibrosis and resolution in bleomycin-induced pulmonary fibrosis mouse model revealed by spatial transcriptome analysis. Heliyon. 9 (12), e22461(2023).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Aerosol Tabanl ModelIntratrakeal UygulamaFare Akci er ModeliFibrozis KantifikasyonuKollajen BirikimiAkci er KompliyansHistopatolojik Analizmm nohistokimyasal Boyama

İlgili makaleler