Geleneksel tıbbın temel taşı olan akupunktur, karmaşık doku düzeyinde tepkiler yoluyla terapötik etkiler gösterir 1,2,3,4. Bununla birlikte, mekanik içgörüler, statik anlık görüntüleri yakalayan ancak canlı doku5'teki morfolojik adaptasyonların (örneğin, vazomodülasyon, hücre dışı matris yeniden şekillenmesi) gerçek zamanlı dinamiklerini çözemeyen geleneksel histoloji ile sınırlı kalmaktadır. İntravital mikroskopi dinamik görüntüleme potansiyeli sunarken, akupunktur araştırmalarında uygulaması, özellikle fiziksel uyaranlara uzay-zamansal tepkileri ölçmek için azdır 6,7. Buna karşılık, bu konfokal görüntüleme yaklaşımı, derin dokularda (örneğin, kas katmanları ve akupunktur noktaları ST 36/GB 34) kırmızı kan hücresi hareket hızındaki değişim hızı ve kollajen düzenlemesi gibi yapısal ve dinamik parametrelerin kantitatif olarak çıkarılmasını sağlar ve uzamsal çözünürlük, hacimsel görüntüleme ve uzun süreli izlemede geleneksel intravital mikroskopinin sınırlamalarının üstesinden gelir8.
Lazer konfokal görüntüleme, hücresel çözünürlükte9,10,11,12,13 in vivo görselleştirme için güçlü bir araç olarak ortaya çıkmıştır. Yine de, mevcut çalışmalar öncelikle yüzeysel dokulara (örneğin, cilt veya kornea) odaklanmakta ve çok azı derin akupunktur hedeflerini ele almakta veya kantitatif morfolojik analizi entegre etmektedir. En önemlisi, bildiğimiz kadarıyla, akupunktur manipülasyonunu canlı doku kinetik değişiklikleriyle ilişkilendirmek için standart bir metodoloji mevcut değildir.
Burada, akupunkturun neden olduğu morfolojik olayların gerçek zamanlı takibi için konfokal görüntüleme tabanlı bir metodolojik platform kurarak bu boşluğu dolduruyoruz. Kontrast madde olarak sodyum floresein (% 1 konsantrasyonda, 0.1 mL / 100g vücut ağırlığında intravenöz olarak uygulanır) kullanarak, akupunktur stimülasyonu sırasında 400 μm derinliğe kadar 450 μm × 450 μm görüş alanı boyunca mikro dolaşım ve matris değişikliklerinin yüksek çözünürlüklü izlenmesini (0.5 μm uzamsal/3.5 fps zamansal çözünürlük) elde ederiz. Bu yaklaşım ayrıca, son nokta histolojisinin sınırlamalarının üstesinden gelerek, kollajen lifinin yeniden hizalanmasının 3 boyutlu yeniden yapılandırılmasını ve parametre miktarının belirlenmesini sağlar.
Bu protokolün uygulanması için pratik hususlar şunlardır: (i) önerilen donanım, ≥0,5 μm çözünürlüğe ve ≥3 fps edinme hızına sahip bir konfokal sistem içerir, (ii) tipik sınırlamalar, 90 saniyenin ötesinde sürekli görüntüleme ve solunum veya doku hareketine duyarlılığı içeren fotoağartmayı içerir ve (iii) oldukça yoğun veya saçılan dokularda derinlik penetrasyonu azaltılabilir. Bildiğimiz kadarıyla, bu çalışma sadece akupunkturla uyarılmış doku yeniden düzenlemesinin ilk dinamik atlasını sağlamakla kalmıyor, aynı zamanda canlı sistemlerde fizik tedavilerin (örneğin yakı) değerlendirilmesi için bir emsal teşkil ediyor. Geçici fizyolojik tepkileri ölçülebilir ölçümlere dönüştürerek, nöromodülatör tedavilerin mekanik çalışmaları için yeni bir paradigma sunuyoruz.