Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Araştırma makalesi

Farelerde Siklofosfamid kaynaklı miyelosupresyonu hafifletmede Jianpi Shengxue Karışımının Mekanizması

557 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/69542

⸱

2 Ocak 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1Hunan University of Chinese Medicine, 2Department of Traditional Chinese Medicine /Integrative Oncology, Hunan Cancer Hospital/The Affiliated Cancer Hospital of Xiangya School of Medicine, Central South University

Bu makalede

Özet

Bu protokol, Jianpi Shengxue dekoksiyonunun siklofosfamid kaynaklı miyelosupresyonu, entegre ağ farmakolojisi ve hayvan deneyleri yaklaşımıyla nasıl azalttığını sistematik olarak açıklar; çoklu hedef mekanizmalarını ve yardımcı tedavi potansiyelini ortaya koyuyor.

Özet

Makale, Jianpi Shengxue Demlendirmesinin (JPSXD) kemoterapi kaynaklı miyelosupresyonu ağ farmakolojisi ve hayvan deneyleriyle nasıl hafiflettiğini araştırmayı amaçlamaktadır. Bunu yapmak için ana bileşenler ve hedefler analiz edildi, Protein-Protein Etkileşim Ağı (PPI) ve bitki-bileşen-hedef ağları oluşturuldu. Gen Ontolojisi (GO) ve Kyoto Genler ve Genomlar Ansiklopedisi (KEGG) zenginleştirmesi başlıca yolları belirlemiştir. 60 C57/BL6 faresinde siklofosfamid (CTX) ile indüklenen miyelosupresyon modeli kuruldu. JPSXD farklı dozlarda 7 gün uygulandı. Çevresel kan sayıları, sitokinler (trombopoietin [TPO], eritropoetin [EPO], granülosit-makrofaj koloni uyarıcı faktör [GM-CSF]), timus indeksi, kemik iliği morfolojisi, CD34+ hücreleri ve AKT1, JAK2 ile EGFR ekspresyonu değerlendirildi. Ağ analizi 172 bileşik ve 454 hedef tespit etti, PI3K-Akt ve JAK-STAT yollarını vurguladı. In vivo, CTX lökosit ve sinyal protein seviyelerini düşürürken, JPSXD sayıları geri kazandı, AKT1, JAK2 ve EGFR'yi yükseltti ve timus indeksini iyileştirdi (p < 0.05). Orta ve yüksek dozlu JPSXD, TPO, EPO, GM-CSF, CD34+ hücrelerini artırdı ve kemik iliği yapısını iyileştirdi; yüksek doz en güçlü etkiyi gösterdi. Sonuç olarak, JPSXD miyelosupresyonu çoklu hedefli, çok düzenlemelerle hafifletmiş ve kemoterapi kaynaklı lökopeni için yan tedavi potansiyelini destekler.

Giriş

Kemoterapi, çeşitli malignitelerin tedavisinde temel taşlardan biridir; öncelikle kanser hücre çoğalmasını ve sağkalmasını engelleyerek 1,2 böylece hasta sağkalmasını uzatır. Ancak, normal dokuları hedeflemede seçicilik eksikliği nedeniyle, kemoterapi ilaçları genellikle sağlıklı hücrelere ve dokulara ciddi zarar verir ve çeşitli yan etkilere yolaçar 3. Kemoterapinin en yaygın ve ciddi yan etkilerinden biri, beyaz kan hücreleri (WBC), kırmızı kan hücreleri (RBC) ve trombositler (PLT) dahil olmak üzere kan hücrelerinin üretiminde azalma ile karakterize edilen miyelosupresyondur2,4. Myelosupresyon, bağışıklık savunma sistemini ciddi şekilde zayıflatır ve enfeksiyon, kanama, anemi ve diğer komplikasyon riskini artırır. Ayrıca hastaların yaşam kalitesini önemli ölçüde düşürür ve hatta hayatı tehditedebilir 5. Bu nedenle, kemoterapi kaynaklı miyelosupresyonu hafifletmek ve önlemek, hastaların kemoterapiye toleransını ve genel hayatta kalmalarını artırmak için kritik öneme sahiptir.

Miyelosupresyon için mevcut klinik tedaviler öncelikle granülosit kolonisini uyaran faktör [G-CSF], eritropoetin [EPO]) ve transfüzyon tedavisi 6,7 gibi hematopoietik büyüme faktörlerini içermektedir. Ancak, bu yaklaşımlar genellikle yüksek maliyetler, potansiyel yan etkiler ve sınırlı etkililikle ilişkilidir. Sonuç olarak, miyelosupresyonu önlemek ve hafifletmek için daha güvenli ve etkili yöntemlerin araştırılması önemli bir araştırma odak noktası olmaya devam etmektedir. Son yıllarda, geleneksel Çin tıbbı (TCM), kanser tedavisindeki ve kemoterapi kaynaklı yan etkilerin yönetimindeki rolü nedeniyle önemli ilgi gördü 8,9. Shengxuebao decoction10, Dihuang Shengbaitabletleri 11 ve ginsenozidbileşikleri 12 gibi birçok TCM formülasyonunun, sadece normal hücreleri koruyup toksik yan etkileri azaltmakla kalmayıp anti-tümör etkinliğini artıran birçok TCM formülasyonunun, bağışıklık düzenleyici ve bağışıklık düzenleyici etkilere sahip olduğuna inanılır.

Jianpi Shengxue Demlendirmesi (JPSXD), Qi'yi tonlaştırma ve kan besleyici terapötik prensipleri örnekleyen klasik bir TCMformülüdür 13. Bu formül, Sijunzi Demlendirmesinin Er Zhi Wan ile birleştirilmiş gelişmiş bir modifikasyonudur ve birden fazla bitkinin sinerjik etkilerini Qi ve kaneksikliğini gidermek için entegre edilmiştir 14. Formül, ginseng (Ren Shen), astragalus (Huang Qi), epimedium (Yin Yang Huo), atractylodlar (Bai Zhu), yam (Shan Yao), salvia (Dan Shen), hazır rehmannia (Shu Di Huang), dodder tohumu (Tu Si Zi), kurtberry (Gou Qi Zi), ligustrum (Nv Zhen Zi), angelica (Dang Gui), kızarmış arpa (Chao Mai Ya), kızarmış tavuk izzard (Chao Ji Nei Jin) içerir. kurutulmuş mandalina kabuğu (Chen Pi), coix tohumu (Yi Yi Ren) ve birkaç başka ot. Her bitki, formülde özel bir rol oynar ve TCM ilkesine bağlı kalarak egemen, bakan, yardımcı ve rehber bitkiler olarak dengeli ve hedefli bir terapötik etki sağlar.

TCM'nin temel formüllerinden biri olan Sijunzi Demlendirmesi, Qi'yi tonlaştırma ve dalağı güçlendirme yeteneğiyle ünlüdür. Qi ile ilişkili hastalıklar, örneğin yorgunluk, iştahsızlık ve zayıf bağışıklık gibi durumların tedavisinde yaygın olarak kullanılmıştır. Modern farmakolojik çalışmalar, Sijunzi Decoction'un bağışıklık fonksiyonunu artırdığını, hematopoezi teşvik ettiğini ve vücudun kendi kendini onarma yeteneklerini artırdığınıgöstermiştir 15,16. Bu temel üzerine inşa edilen JPSXD, kan besleyici etkinliğini artırmak ve daha karmaşık eksiklikleri gidermek için ek bitkiler içermektedir. Örneğin, hazırlanmış rehmannia ve angelica kan besleyici temelbitkilerdir 17, astragalus ve ginseng ise Qi'yi artırmak ve genel canlılığı artırmak için sinerjik olarakçalışır 18.

Son çalışmalar, JPSXD'nin potansiyel anti-tümör etkilerini vurgulamış olup, çok bileşenli, çok hedefli yaklaşımının tümör büyümesini engelleyebileceğini ve geleneksel kanser tedavilerinin etkinliğini artırabileceğiniöne sürmüştür 19,20. Formülün bağışıklık yanıtlarını modüle etme ve hematopoietik fonksiyonu iyileştirme yeteneği, kemoterapi veya radyasyon tedavisi gören hastalara destek olmak için özellikle değerli kılar; bu hastalar genellikle tedavinin yan etkisi olarak Qi ve kan eksikliğiyaşamaktadır 21. Ayrıca, salvia ve epimedium gibi bitkilerin dahil edilmesinin mikro sirkülasyonu iyileştirdiği ve hücresel onarım mekanizmalarını geliştirdiği gösterilmiştir; bu da formülün genel terapötik faydalarına katkıdabulunmaktadır 22.

Modern farmakolojik çalışmalar, JPSXD'deki her bitkinin hematopoietik fonksiyon, anti-myelosuppression, immünomodülasyon ve antioksidasyon ile ilgili farmakolojik aktivitelere sahip olduğunu, ayrıca mikro dolaşım iyileşmesi ile birlikte JPSXD'nin kemoterapi kaynaklı miyelosupresyonu hafifletmede dolaylı araştırma desteği sağladığını göstermiştir. Tablo 1, her bitkinin birincil farmakolojik etkilerini ve ilgili referansları özetlemekte, hematopoez, anti-miyelosupresif aktivite, immünomodülasyon ve antioksidatif veya mikrosirkülasyon güçlendirici özellikleri araştıran çalışmalara odaklanmaktadır. JPSXD'deki bileşenlerin karmaşık sinerjisi, bitkiler arasında hem işbirlikçi hem de antagonistik etkileşimleri içerir ve bütünsel bir terapötik etki elde etmek için birden fazla yolu hedefler. Örneğin, ginseng ve astragalus Qi'yi tonlaştırmak için birlikte çalışırken, salvia ve hazırlanmış rehmannia kanı beslemek ve dolaşımı iyileştirmek için birlikte çalışır. Aynı zamanda, kurutulmuş mandaralina kabuğu ve kızarmış arpa gibi otlar, sindirimi düzenlemeye ve durgunluğu önlemeye yardımcı olur; böylece formülün tonlaştırıcı etkileri vücut tarafından etkili şekilde emilirve kullanılır 23. Bu çok yönlü yaklaşım, hastalığın kök nedenini tedavi ederken semptomlarını ele alma TCM felsefesiyle uyumludur.

Sonuç olarak, JPSXD, Qi ve kan detoksifikasyonu prensiplerini barındıran, dengeli ve bilimsel olarak desteklenen bir TCM formülüdür. Bağışıklığı güçlendirme, hematopoiezi teşvik etme ve anti-tümör tedavisini destekleme konusundaki potansiyel uygulamaları, hem geleneksel hem de modern tıbbi uygulamalara değerli bir katkı sağlar. Ancak, kemoterapi kaynaklı miyelosupresyonu hafifletmede JPSXD'nin etkinliğini doğrudan değerlendiren yüksek kaliteli klinik kanıtlar hâlâ eksiktir. Temel mekanizmalarını aydınlatmak ve klinik uygulama stratejilerini optimize etmek için daha fazla araştırmaya ihtiyaç vardır. Bu nedenle, bu çalışma, JPSXD'nin potansiyel terapötik etkilerini preklinik mekanik bir bakış açısıyla kavram kanıtı sunmayı amaçlamaktadır.

Ağ farmakolojisi, sistemik ve bütünleştirici yapısıyla, Çin ilaçlarının aktif bileşenlerini tanımlamak ve etki mekanizmalarını açıklamak için yaygın olarakkullanılmıştır 24,25. Bu çalışmada, JPSXD'nin etkilediği potansiyel sinyal yolları ve temel hedefler myelosupresyon bağlamında analiz etmek için ağ farmakolojisi kullanılmıştır. Ayrıca, ilgili göstergeleri değerlendirmek ve JPSXD'nin miyelosupresyon üzerindeki etkilerini değerlendirmek için siklofosfamid (CTX) kaynaklı bir miyelosupresyon fare modeli oluşturuldu. Ağ farmakolojisi yoluyla belirlenen ana hedefler ve yolların ön doğrulanması da gerçekleştirildi. Bu, JPSXD'nin kemoterapi kaynaklı miyelosupresyonu, PI3K-AKT yolu gibi sinyal yollarının çoklu hedefli düzenlemesi yoluyla nasıl hafiflettiğini moleküler mekanizmasını aydınlatmak için hayvan deneyleriyle sistematik olarak entegre edilen ilk çalışmadır; böylece bu bileşik formülün hematopoietik koruyucu etkilerinin mekanistik anlaşılmasındaki boşluğu doldurur.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm hayvan deneyleri, Laboratuvar Hayvanlarının Yönetimi Yönetmelikleri ve Hunan Kanser Hastanesi Deneysel Hayvan Merkezi'nin etik yönergelerine sıkı şekilde uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Çalışma protokolü, Hunan Kanser Hastanesi Hayvan Etik Komitesi tarafından onaylandı (Onay No.: KNZY-202416). Çalışma boyunca araştırmacılar, kullanılan hayvan sayısını en aza indirmek ve acılarını hafifletmek için her türlü çabayı gösterdiler.

Hayvan hazırlığı
Hunan Slack Jingda Laboratory Animal Co., Ltd.'den toplam 60 adet 10 haftalık erkek C57/BL6 faresi alındı (Lisans No.: SCXK [Hu] 2021-0002). Tüm fareler, kontrollü çevresel koşullar altında Hunan Kanser Hastanesi Deneysel Hayvan Merkezi'nde tutuldu: sıcaklık: 23 ± 2 °C, nem: %50 ± %10 ve 12 saat ışık/karanlık döngü (8:30-20:30). Farelerin yiyecek ve suya ima kadar erişimi vardı. Deneylerden önce, 3 gün boyunca 5 dakika boyunca günlük bakım yoluyla çevreye alıştılar. Aklimatizasyonun ardından, tüm 60 fare vücut ağırlığına göre sınıflandırıldı ve bilgisayar tarafından oluşturulan rastgele sayı tablosu kullanılarak altı gruba (n = 10 grup) ayrıldı. Gruplar arasında: boş kontrol, model, normal salin (NS) kontrol, yüksek dozlu JPSXD (40 mg/kg), orta doz JPSXD (30 mg/kg) ve düşük dozlu JPSXD (20 mg/kg) yer alıyordu. Rastgeleleştirme süreci, gruplar arasında ortalama vücut ağırlığında anlamlı bir fark olmamasını sağladı (p > 0.05). Rastgeleleştirme dizisi, yanlılığı en aza indirmek için sonraki deneysel prosedürlere dahil olmayan araştırmacılar tarafından oluşturulmuş ve yürütülmüştür.

Malzeme hazırlığı
Güvenlik ve atık bertarafı: Bu çalışma, son derece toksik bir kemoterapötik ajan olan CTX'i içeriyordu. Tüm prosedürler, Tehlikeli Kimyasalların Güvenlik Yönetimi Yönetmelikleri ve Biyogüvenlik Seviye 2 laboratuvar standartlarına sıkı şekilde uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Özel önlemler arasında tüm personel tarafından tek kullanımlık koruyucu giysiler, nitril eldivenler, N95 solunum cihazları ve koruyucu gözlükler kullanılıyordu. CTX hazırlanması ve uygulaması Sınıf II biyogüvenlik kabinde gerçekleştirildi. CTX enjeksiyon çözeltisi hazırlanış, aerosol oluşumunu önlemek için özel aletler kullanılarak bir duman davlumbazında gerçekleştirildi. CTX ile kirlenmiş keskin silahlar ve şırıngalar, eldivenler gibi, delinmeye dayanıklı keskin kaplara atıldı. Diğer kontamine malzemeler (örneğin yatak takımı, hayvan dokuları) %10 sodyum hipokloritle 24 saat boyunca inaktive edilip ardından sertifikalı tıbbi atık bertaraf sağlayıcısı tarafından yakıldı. CTX dökülmesi durumunda, alan hemen emici pamukla kaplanır ve %1 sodyum tiyosülfat çözeltisi ile nötralize edilirdi. Olay daha sonra güvenlik amirine bildirildi.

İlaçlar ve reaktifler: CTX enjeksiyonu Almanya'daki Baxter Oncology GmbH'den (Parti No.: HJ20160467) alınmıştır. JPSXD, Hunan Kanser Hastanesi Geleneksel Çin Tıbbı Bölümü tarafından hazırlanmıştır. 15 geleneksel ottan oluşuyordu — Panax ginseng, Astragalus membranaceus, Epimedium brevicornum, Atractylodes macrocephala, Dioscorea opposita, Salvia miltiorrhiza, Rehmannia glutinosa, Cuscuta chinensis, Lycium barbarum, Ligustrum lucidum, Angelica sinensis, kızarmış malt, tavuk gızı astarı, kurutulmuş mandalina kabuğu ve Coix tohumu — klasik uyumlulukoranlarına göre birleştirilmişti 20. Demlendirme, nihai konsantrasyon olarak 3 kg/L (yani 3 g/mL) konsantrasyonuna konsantre edildi. Gavajdan önce, konsantre NS ile seyreltilerek her doz grubu için gerekli konsantrasyonlara ulaşıldı: yüksek dozlu grup için 4 mg/mL (40 mg/kg), orta doz grubu için 3 mg/mL (30 mg/kg) ve düşük dozlu grup için 2 mg/mL (20 mg/kg)26. Gavaj hacmi, vücut ağırlığının 10 g'ı başına 0,1 mL olarak hesaplandı ve fare başına nihai uygulama hacmi 0,2-0,25 mL arasında (20-25 g ağırlık aralığına dayanarak)27 olarak hesaplandı.

ELISA kitleri: Fare Granülosit-Makrofaj Koloni Uyarıcı Faktörü (GM-CSF), EPO ve Trombopoietin (TPO) için ticari olarak mevcut ELISA kitleri kullanıldı. Serum örnekleri testten önce PBS tamponunda (pH 7.4) 1:5 seyreltildi. Standartlar, kuyu başına 100 μL olarak yeniden oluşturuldu.

İkincil antikor: HRP ile bağlanmış keçi anti-tavşan IgG, %5 yağsız kuru süt ve %0,05 Tween-20 içeren TBST tamponu içinde 1:5000 (nihai konsantrasyon: 0,04 μg/mL) seyreltilmiştir. Çözelti taze hazırlanıp oda sıcaklığında 1 saat kuluçka halindeydi.

Western blot için birincil antikorlar: GAPDH (tavşan poliklonal), AKT (tavşan poliklonal), JAK2 (tavşan monoklonal) ve EGFR (fare monoklonal) kullanıldı. Tüm antikorlar %5 BSA içeren TBST tamponu içinde seyreltilmiştir: GAPDH (1:1000), AKT (1:1000), JAK2 (1:800) ve EGFR (1:800). Kuluçka hacmi membran başına 100 μL idi.

Doku Fiksasyonu: PFA tozu PBS'de (pH 7.4) çözülerek %4 paraformaldehit (PFA) çözeltisi hazırlandı. 24 saat boyunca mendil düzeltildi.

Hematoksilin ve eozin (H&E) boyama çözeltisi: Hematoksilin çözeltisi (%0,1 Harris hematoksilin) ve eozin Y çözeltisi (%0,5) standart patolojiprotokollerine uygun olarak hazırlanmıştır 28. Boyama süreleri hematoksilin için 5 dakika, eozin için ise 3 dakika idi.

İmmünoflüoresans bloke tamponu: %10 keçi serumu ve %1 BSA içeren PBS tamponu bloklama için kullanıldı ve 30 dakikalık kuluçka yapıldı.

İmmünoflüoresans için antikor seyreltme tamponu: İmmünfloresans için birincil antikorlar (CD34+, TPO, EPO, GM-CSF) üreticinin önerdiği seyreltme oranına (1:200) uygun olarak %1 BSA içeren PBS tamponunda seyreltildi ve nihai konsantrasyon 2,5 μg/mL oldu. Kuluçka hacmi doku kesiti başına 50 μL idi.

Hayvan modelinin indüksiyonu
60 fare rastgele olarak altı gruba ayrıldı (n = 10 her grupta): boş kontrol, model, yüksek dozlu, orta dozlu, düşük dozlu ve NS kontrol. Boş kontrol grubu hariç, tüm farelere myelosupresyon modeli oluşturmak için 3 gün üst üste günde 1 kez intraperitoneal CTX (20 mg/kg) enjeksiyonları yapıldı. Tüm model farelerde WBC < 1.8 ×10 9/L, PLT <85 × 10⁹/L ve son enjeksiyondan 24 saat sonra kemik iliği çekirdekli hücrelerde %>55 azalma gösterdi. Bu protokol, yerleşik CTX kaynaklı miyelosupresyonmodelleri ile uyumludur 29,30. Enjeksiyondan sonra, fareler günlük olarak genel durum için izlendi; aktivite seviyesi, tüy görünümü ve vücut ağırlığındaki değişiklikler dahil. Modellemenin başlangıcından deneyin sonuna kadar, vücut ağırlığı her gün aynı zamanda elektronik bir denge kullanılarak kaydedildi. Vücut ağırlığı değişim oranı şu şekilde hesaplandı: (nihai ağırlık / başlangıç ağırlığı) x %100, JPSXD'nin genel fizyolojik durumu ve potansiyel koruyucu etkisi değerlendirilmiştir. Enjeksiyondan sonra, fareler bireysel olarak havalandırılan kafeslerde (IVC) tutuldu ve her biri açıkça CTX ile kontamine olarak işaretlendi. Yatak takımı her 2 günde bir değiştiriliyor ve kullanılan tüm yatak malzemeleri yukarıda açıklanan tehlikeli atık protokollerine uygun olarak bertaraf ediliyordu.

İntragastrik uygulama
Yüksek, orta ve düşük dozlu gruplardaki fareler, JPSXD'yi garaj yoluyla sırasıyla 40 mg/kg, 30 mg/kg ve 20 mg/kg dozlarda aldı. Tuzlu su kontrol grubu eşit miktarda NS aldı. Gavaj çözeltileri sırasıyla 4 mg/mL, 3 mg/mL ve 2 mg/mL konsantrasyonlarda hazırlandı ve vücut ağırlığının her 10 g'ı başına 0,1 mL hacimde uygulandı. Tüm fareler 7 gün ardışık günde 2 kez gavidasyon yapıldı. Salin kontrol grubu ise fare başına 0.2-0.25 ml NS aldı. Blank ve model gruplara herhangi bir tedavi yapılmadı. Gavaj sırasında öksürük veya zorlanma olmaması doğru uygulama yöntemini gösterir.

Kan toplama ve serum hazırlığı
CTX enjeksiyonundan sonraki 3. günde, tam otomatik hematoloji analizörü kullanılarak periferik kan hücresi sayıları ölçülerek model kurulumunun başarısını değerlendirmek için kuyruk damarından 0,2 mL kan alındı. JPSXD'nin son garajından 24 saat sonra, rastgele seçilmiş farelerin orbital sinüslerinden kan alındı (n = grup başına 10). Kanın bir kısmı tam kan sayım analizi için kullanılırken, geri kalan kısmı serum hazırlığı için işlendi. Örnekler 3.000 x g sıcaklıkta, 4 °C'de 15 dakika boyunca santrifüjlendi. Üst tabaka (şeffaf, soluk sarı üst katman) serum olarak toplandı ve sonraki ELISA testleri ile karaciğer/böbrek fonksiyonu testleri için -80 °C'de depolanmak üzere alikotlandı. Serum tabakasının kan hücresi tabakasından net şekilde ayrıldığı ve hemoliz veya bulanıklık belirtisi olmadığı gözlemlendi. Ölçülen hematolojik parametreler arasında WBC, RBC, PLT ve hemoglobin (Hb) seviyeleri bulunuyordu.

Karaciğer ve böbrek fonksiyonu değerlendirmesi
Serum karaciğer fonksiyon belirteçleri — alanin aminotransferaz (ALT) ve aspartat aminotransferaz (AST) — ile böbrek fonksiyonu belirteçleri - kan üre azotu (BUN) ve kreatinin (Cre) olmak için tam otomatik bir biyokimyasal analizör kullanıldı. Tüm prosedürler, enstrümanın standart çalışma protokolünü takip ediyordu. Özellikle, 100 μL serum, ilgili test kitleriyle (ALT, AST, BUN ve Cre) karıştırıldı ve 37 °C'de 5 dakika kuluçka edildi. Soğurma 340 nm olarak ölçüldü. Her örnek ikili olarak test edildi ve analiz için ortalama değer kullanıldı.

Org indeks hesaplaması
JPSXD'nin son gaaj uygulamasından 24 saat sonra, fareler kademeli doldurma karbondioksit (CO2) soluması (akış hızı: %20 odalık hacm/dakika) ile ötenazi edildi ve ardından ikincil yöntem olarak servikal dislokasyonuygulandı. Ötenazi sonrası hemen karaciğer, böbrekler, dalak ve timus ventral orta hat kesisinden aseptik olarak alındı. Organlar çevredeki bağ dokuları ve yağdan nazikçe ayrıldı, ardından buz gibi soğuk normal salinle (NS) durulandı ve kalan kan alındı. Organlar, standart basınç altında (3 hafif pres) önceden tartılmış filtre kağıdıyla kurutulmuş ve oda sıcaklığında (22 ± 1°C) kalibre edilmiş elektronik tartıda (doğruluk: ±0,1 mg) hemen tartılırdı.

Tüm işlemler, otolizi en aza indirmek için önceden soğutulmuş paslanmaz çelik bir tepsi üzerinde gerçekleştirildi. Organ indeksi, JPSXD'nin büyük organlar üzerindeki etkilerini değerlendirmek için organ ağırlığının (mg) vücut ağırlığına (g) bölünmesi olarak hesaplandı. Her dokunun bazı bölümleri Western blot analizi için ayrıldı, kalan örnekler ise sonraki histolojik değerlendirme için %4 PFA ile sabitlendi.

ELISA
TPO, EPO ve GM-CSF serum konsantrasyonları, üreticilerin talimatlarına göre ELISA kitleri kullanılarak ölçüldü. Tüm santrifüj adımları, örnek yıkama ve reaktif yeniden yapılandırma dahil, oda sıcaklığında 1.000 x g sıcaklıkta 5 dakika boyunca gerçekleştirildi. Yıkama adımları PBST tamponu (PBS %0,05 Tween-20 içerir) kullanılarak gerçekleştirildi; her kuyu başına 300 μL yıkama çözeltisi eklendi ve 3 kez tekrarlandı. Yıkamadan sonra, kuyuların dibinde kalıntı sıvı kalmamıştır. Renk gelişiminin ardından, belirgin bir mavi çökelti göründü. Reaksiyon sonlandırıldıktan sonra mikroplaka okuyucu kullanılarak absorbans 450 nm olarak ölçüldü.

H&E boyama
Ötenazi sonrası timus ve uyluk kemiği hasat edildi. Timus, timus indeksi hesaplanmak için tartıldı (timus ağırlığı [mg]/vücut ağırlığı [g]). Tartımdan sonra timusun bir kısmı Western blot analizi için kullanıldı, kalan kısmı ise femur ile birlikte %4 PFA ile sabitlendi. Femur örnekleri dereceli etanol dehidrasyonuna maruz kaldı (%70, %80, %95 ve %100, her biri 1 saat boyunca). Düzgün susuzluk, yumuşamadan veya deformasyon olmadan eşit beyaz bir görünümle gösterilirdi. Parafinle gömülü doku blokları, yüksek hassasiyetli tungsten-karbid bıçaklarla (Tip H31) donatılmış döner mikrotom kullanılarak 4 μm kalınlıkta kesitlendi. Bölümler, kırışıklıkları ortadan kaldırmak için %0,5 jelatin çözeltisi içeren 40 °C su banyosu üzerinde yüzdürüldü ve ardından mikroskop slaytlarına monte edildi. Tüm bölümler ışık mikroskopisi altında sağlam morfoloji, düzgün kenarlar ve uniform saydamlık sergileyerek optimal kesitleme kalitesini doğruladı. H&E boyama işlemi yapıldı, ardından sulu montajortamı 28 ile montaj yapıldı. Boyamadan sonra çekirdekler mavi ve sitoplazma pembe görünüyordu; ters mikroskop kullanılarak mikroskobik gözlem altında iyi tanımlanmış hücresel mimari oluştu. Histomorfolojik analiz yazılım kullanılarak yapılmıştır. Her H&E boyalı bölüm için, 200x büyütmede üç rastgele alan seçildi. Yazılım, ilgi alanının manuel olarak belirlenmesinden sonra birim alan başına çekirdeklenmiş hücre sayısını otomatik olarak nicelemiş ve sonuçlar ortalama ± standart sapma (x̄ ± s) olarak ifade edilmiştir.

Western Blot
Timus dokuları (50 ± 2 mg/örnek) 1 mL tampon başına 100 mg doku oranında, RNase içermeyen havalarla donatılmış motorlu pellet tokojenizici kullanılarak 1 mL tampon başına 100 mg doku içeren buz soğukluğu RIPA tamponu içinde homojenleştirildi. Homojenleştirme, buz üzerinde 15 darbe (1 saniye darbe/2 saniye duraklama) yapıldı, ardından her 10 dakikada bir girdap ile 30 dakikalık inkubasyon yapıldı. Homojenat, 4 °C'de 20 dakika boyunca 12.000 x g ile santrifüjlendi ve ortaya çıkan üst yüzey protein ölçüsü için toplandı. Üst yüzey şeffaf ve şeffaf görünüyordu, çökelti veya lipid tabakalarından arınmıştı. Protein konsantrasyonu, 0-2000 μg/mL standart eğri aralığı olan bir BCA protein test kiti kullanılarak ölçüldü. Western blot, timus dokusunda AKT1, JAK2 ve EGFR ekspresyon seviyelerini değerlendirmek için GAPDH'yi iç kontrol olarak kullandı. Elektroforez ve membran transferinden sonra, protein belirteci (10-200 kDa) net bantlar gösterir ve hedef bantlar beklenen moleküler ağırlıklarla hizalanmıştır (AKT1: 60 kDa, JAK2: 130 kDa, EGFR: 170 kDa ve GAPDH: 37 kDa).

Western blot bantlarının densitometrik analizi yazılım kullanılarak gerçekleştirildi. Analiz öncesi, bantlar görsel olarak incelenerek yayılma veya yayılma yokluğu doğrulandı. Analiz prosedürü şunları içeriyordu: Görüntü içe aktarmadan sonra hedef bant bölgelerinin manuel olarak seçilmesi, yazılım tarafından otomatik kenar algılanması ve ardından bantlara bitişik bölgelerle yerel arka plan çıkarılması ile gri değerleri düzeltildi. Daha sonra, hedef protein ile iç kontrol arasındaki gri değer oranı hesaplanarak göreli nicelik için yapıldı. Kullanılan normalizasyon formülü şuydu:

Hedef proteinin göreli ifadesi = (hedef bandın gri değeri −lokal arka plan) / (iç kontrolün gri değeri −yerel arka plan)

İmmünohistokimya
İmmünohistokimyasal boyama femur kesitlerinde gerçekleştirildi. Dilimler %0,1 Triton X-100 ile 10 dakika boyunca permeabilize edildi, ardından 30 dakika bloklandı. Birincil antikorlar gece boyunca 4 °C'de kuluçka, ikincil antikorlar ise oda sıcaklığında 1 saat kuluçka edildi. Boyamadan sonra, düşük arka plana sahip ve spesifik olmayan boyama olmayan belirgin pozitif sinyaller ışık mikroskobu altında gözlemlendi. Slaytlar, çekirdekleri maviye boyayan DAPI içeren bir anti-fade ortamı kullanılarak monte edildi. CD34+, TPO, EPO ve GM-CSF ekspresyonları daha sonra değerlendirildi. İmmünohistokimya görüntüleri, dijital patoloji yazılımı (Sürüm 2.1.0) kullanılarak analiz edildi. Analiz öncesinde, görüntülerin aşırı pozlama veya sinyal bozulması olmadığı doğrulandı. Analizprosedürü 32şunları içeriyordu:

Model Seçimi: Önceden eğitilmiş bir kemik iliği segmentasyon modeli (U-Net tabanlı) dokubölgelerini otomatik olarak tanımlamak için kullanıldı 33.
Eşik Ayarlaması: Pozitif sinyal eşikleri negatif kontrol grubuna göre tanımlandı. Kromojenik yoğunluğu arka plan ortalamasını üç standart sapma ile aşan bölgeler pozitif olarak sınıflandırıldı.
ROI Tanımı: Yazılım her alanı otomatik olarak 500 × 500 μm ızgara bölgesine ayırdı ve birim alan başına pozitif hücre sayısını hesapladı (pozitif hücre sayısı/alan alanı).
Veri İhracatı: Pozitif hücre yoğunluğuna dair istatistiksel bir rapor otomatik olarak üretildi.

İstatistiksel analiz
İstatistiksel analiz SPSS yazılımı (Sürüm 22.0) kullanılarak gerçekleştirildi. Veriler x̄ ± s olarak ifade edildi. Gruplar arası karşılaştırmalardan önce, normallik Shapiro-Wilk testi kullanılarak değerlendirildi ve varyansların homojenliği Levene testiyle değerlendirildi. Normal dağılım (p > 0.05) ve varyans homojenliği (p > 0.05) doğrulandıysa, grup karşılaştırmaları için tek yönlü ANOVA kullanıldı. Sonradan çoklu karşılaştırmalar En Az Anlamlı Fark (LSD) yöntemiyle yapıldı; Tip I hatasını kontrol etmek için, tüm sonradan P değerleri Bonferroni düzeltmesi kullanılarak ayarlandı ve ayarlanmış p < 0.05 istatistiksel olarak anlamlı olarak kabul edildi.

Eğer veriler normallik veya varyans homojenliği varsayımlarını karşılamazsa (her iki testte de p ≤0.05), Kruskal-Wallis testi uygulandı, ardından Bonferroni düzeltmesiyle sonradan analiz için Dunn testi uygulandı. Tüm istatistiksel grafikler ve görselleştirmeler GraphPad Prism (Sürüm 9.0) kullanılarak oluşturuldu. Anlamlılık seviyesi α = 0.05 olarak belirlendi. Bildirilen tüm p-değerleri ayarlanmış değerlerdi. Istisnalar Grubbs testi kullanılarak (α = 0.05) tanımlandı ve yalnızca açıkça deneysel hataya atfedilebilirse dışlandı. Kalan tüm veriler nihai analizde yer aldı. Sonuçlar x ± s olarak sunulur.

Ağ farmakolojisi metodolojisi
Bu çalışma, JPSXD'nin kemoterapi kaynaklı miyelosupresyonu hafiflettiği potansiyel mekanizmaları incelemek için ağ farmakolojisi yaklaşımı kullandı. İlk olarak, JPSXD'nin kimyasal bileşenleri ve ilgili hedefleri Geleneksel Çin Tıp Sistemleri Farmakoloji Veritabanı ve Analiz Platformu'ndan (TCMSP, https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php) alındı. Tarama kriterleri şu şekilde belirlendi: oral biyoerişilebilirlik (OB) %30 ≥ ve ilaç benzerliği (DL) ≥0,18. TCMSP veritabanına dahil olmayan bileşikler için hedef tahmini SwissTargetPrediction platformu (https://www.swisstargetprediction.ch/) kullanılarak gerçekleştirildi.

Seçilen bileşiklerin JPSXD'nin ana biyoaktif bileşenlerini kapsadığından emin olmak için, Çin Halk Cumhuriyeti Farmakopeisi34'e referans verildi. Özellikle, ginsenozidler, astragalosid IV, ikariin ve salvianolik asitler gibi işaretleyici bileşikleri her bitkinin Tanımlama ve Analiz bölümlerini gözden geçirerek tespit ettik. Bu bileşikler, genellikle kalite kontrol belirtisiolarak 35 kullanılır ve kimyasal yapılar ile nicel gereksinimler tanımlanmıştır. Doğruluk için, Farmakope'nin Genel Bildirimleri ve Eklerine çapraz referans vererek adlandırma kurallarını ve analitik yöntemleri (örneğin, yüksek performanslı sıvı kromatografisi, HPLC) doğruladık. Analiz, tarama kriterlerinin (OB ≥30%, DL ≥0.18) formül36'nın temel bileşiklerini, bunlar arasında ginsenozidler Rg1 ve Rb1 ( Panax ginsenginden), astragaloside IV ( Astragalus membranaceus'tan) ve ikariin ( Epimedium brevicornum'dan) gibi temel farmakopey bileşenleri etkili şekilde yakaladığını doğruladı; bu da seçilen bileşiklerin temsilci olduğunu ve JPSXD'nin qi- ve kan tonlamasından sorumlu birincil aktif bileşenleri kapsadığını gösteriyor etkiler.

Daha sonra, miyelosupresyonla ilişkili gen hedefleri GeneCards veritabanından (https://www.genecards.org/) alındı ve sonuçlar bir tabloya indirildi. ≥44 alaka puanına sahip genler daha ileri analiz için seçildi. İlaç hedefleri ile hastalıkla ilgili genlerin kesişimi Venn diyagramı kullanılarak görselleştirildi ve örtüşen genler STRING veritabanına aktarıldı (https://string-db.org/). Organizma insan olarak ayarlanmıştı ve etkileşim kaynakları minimum gerekli etkileşim puanı > 0.7 olan Deneyler ve Veritabanları ile sınırlıydı. Ortaya çıkan protein-protein etkileşimi (PPI) ağı, topolojik özellikler açısından analiz edilip çekirdek hedefleri belirlendi ve Cytoscape 3.10.2 kullanılarak görselleştirildi.

Belirlenen temel hedeflere dayanarak, Gen Ontolojisi (GO) ve Kyoto Genler ve Genomlar Ansiklopedisi (KEGG) zenginleştirme analizleri DAVID veritabanı kullanılarak yapıldı (https://david.ncifcrf.gov/). Parametreler şu şekilde ayarlandı: Sayı ≥5, EASE puanı ≥0.05 ve p-değeri < 0.01. Zenginleştirme sonuçları Microbiological Letter platformu (http://www.bioinfo-cloud.org/) aracılığıyla görselleştirildi. Yol analizi, temel sinyal yollarını ve düzenleyici belirteçleri daha da netleştirerek, JPSXD'nin kemoterapi kaynaklı miyelosupresyonu azaltma potansiyeli mekanizmalarını ortaya koydu.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Ağ farmakolojisi analizi
Aktif bileşiklerin ve hedeflerin tanımlanması
Kapsamlı bir seçim için literatüre dayanarak JPSXD'deki her bitkinin birincil işaretleyici bileşiklerini ilk olarak tespitettik. Özellikle, ilgili bitkilerin (örneğin Panax ginseng, Astragalus membranaceus, Angelica sinensis) farmakopi kayıtlarına bakarak, formüldeki tüm 15 bitkisel bileşen için resmi işaretleyici bileşenlerinin bir listesini hazırladı...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Küresel kanser vakalarının artması arasında, tıp camiası çift zorlukla karşı karşıyadır: sadece kanserin tedavisi değil, aynı zamanda ilgili yan etkilerin yönetimi; bunlar arasında miyelosupresyon özellikle yaygın ve şiddetli bir yanreaksiyondur 43. Bu çalışma, JPSXD'nin CTX kaynaklı miyelosupresyonu hafifletmedeki rolü ve potansiyel mekanizmalarını, ağ farmakolojisi ve hayvan deneylerinin birleşimiyle sistematik olarak incelemiştir. Sonuçlar, JPSXD'nin çoklu hede...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar, çıkar çatışmaları olmadığını belirtirler.

Teşekkürler

Bu araştırma, Gastrointestinal Malignite Yaşlı Hastalarda Ameliyat Sonrası Enfeksiyonların Önlenmesi için Bütünleştirici Batı ve Geleneksel Çin Tıbbı Odak-DCA Yöntemi Müdahalesi projesi tarafından maddi destek olarak sağlanmıştır; proje numarası A2023053 ve Hunan Eyalet Geleneksel Çin Tıbbı İdaresi tarafından finanse edilmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
%4 Paraformaldehit (PFA)Sigma-AldrichP6148
AKT (pan) Tavşan mAbHücre Sinyal Teknolojisi#4691
Otomatik Mikroplaka YıkayıcıBioTek (Agilent)ELx405
BC-2800vet Otohematoloji AnalizörüMindrayBC-2800vet
Kriyostat MikrotomuThermo Fisher ScientificCryoStar NX50
Siklofosfamid EnjeksiyonuBaxter Oncology GmbHYok (Parti: HJ20160467)
E100 MikroskobuNikonE100
EGFR Antikor (A-10)Santa Cruz BiyoteknolojisiSC-373746
Gömüleme MakinesiLeicaEG1150
EPO (fare) ELISA KitiR& D SistemleriMEP00B
GAPDH Tavşan Poliklonal AntikorProteintech10494-1-AP
GM-CSF (Fare) ELISA KitiR& D SistemleriMMC00B
Keçi Anti-Tavşan IgG HRP ile konjuge edilmişJackson ImmunoResearch111-035-003
H& E Boyama KitiSigma-AldrichHT10
Yüksek Hızlı Soğutmalı SantrifüjThermo Fisher ScientificSorvall ST 16R
Yüksek verimli doku öğütücüsüServicebioKZ-II
İmmünohistokimya KalemiVektör LaboratuvarlarıH-4000
JAK2 Tavşan mAbAbcamAB108596
Jianpi Shengxue Karışımı (JPSXD)Hunan Kanser Hastanesi EczanesiÖzel formülasyon
Microplate ReaderBioTek (Agilent)Synergy H1
Normal SalinBaxter2B1324X
Döner MikrotomLeicaRM2016
Doku İşlemciLeicaASP300S
TPO (Fare) ELISA KitiR& D SistemleriMTP00B
Vortex MikserServicebioMX-F

Kaynaklar

  1. Wang, D. H., et al. Validated herbal extracts for alleviating chemotherapy-induced myelosuppression: A systematic review and meta-analysis. Phytomedicine. 141, 156659(2025).
  2. Goldschmidt, J., et al. Burden of chemotherapy-induced myelosuppression among patients with ES-SCLC in US community oncology settings. Future Onco. 18 (35), 3881-3894 (2022).
  3. Jia, W., Li, X., Zhang, T., Wang, C., Zhen, M. Efficiently normalizing leukopoiesis by gadofullerene nanoparticles to ameliorate radiation-triggered myelosuppression. J Mater Chem. B. 11 (31), 7401-7409 (2023).
  4. Hart, L., et al. Burden of chemotherapy-induced myelosuppression among patients with extensive-stage small cell lung cancer: A retrospective study from community oncology practices. Cancer med. 12 (8), 10020-10030 (2023).
  5. Pan, L., Zhang, T., Cao, H., Sun, H., Liu, G. Ginsenoside Rg3 for Chemotherapy-Induced Myelosuppression: A Meta-Analysis and Systematic Review. Front Pharmacol. 11, 649(2020).
  6. Schneider, A., Kuhn, H. -G., Schäbitz, W. R. A role for G-CSF (granulocyte-colony stimulating factor) in the central nervous system. Cell Cycle. 4 (12), 1753-1757 (2005).
  7. Hart, C., Grassinger, J., Andreesen, R., Hennemann, B. EPO in combination with G-CSF improves mobilization effectiveness after chemotherapy with ifosfamide, epirubicin and etoposide and reduces costs during mobilization and transplantation of autologous hematopoietic progenitor cells. Bone Marrow Transpl. 43 (3), 197-206 (2008).
  8. Miao, K., Liu, W., Xu, J., Qian, Z., Zhang, Q. Harnessing the power of traditional Chinese medicine monomers and compound prescriptions to boost cancer immunotherapy. Front Immunol. 14, 1277243(2023).
  9. Li, S., et al. Tailoring traditional Chinese medicine in cancer therapy. Mol Cancer. 24 (1), 27(2025).
  10. Ma, L. X., Ai, P., Li, H., Vardy, J. The prophylactic use of Chinese herbal medicine for chemotherapy-induced leucopenia in oncology patients: a systematic review and meta-analysis of randomized clinical trials. Support Care Cancer. 23 (2), 561-579 (2015).
  11. Han, J., et al. Study of the Effects and Mechanisms of Ginsenoside Compound K on Myelosuppression. J Agr Food Chem. 67 (5), 1402-1408 (2019).
  12. Shang, L., et al. Mechanism of Sijunzi Decoction in the treatment of colorectal cancer based on network pharmacology and experimental validation. J Ethnopharmacol. 302, 115876(2023).
  13. Zhao, N., et al. Jianpi-Yangxue-Jiedu decoction improves the energy metabolism of psoriasis mice by regulating the electron transfer of oxidative phosphorylation. J Ethnopharmacol. 324, 117714(2024).
  14. Zhang, S., et al. Jianpi Huayu Jiedu Decoction prevents the progression of H. pylori and MNU-induced gastric precancerous lesions by inhibiting ferroptosis and remodeling linoleic acid metabolism. J Ethnopharmacol. 352, 120217(2025).
  15. Gao, B., Wang, R., Peng, Y., Li, X. Effects of a homogeneous polysaccharide from Sijunzi decoction on human intestinal microbes and short chain fatty acids in vitro. J Ethnopharmacol. 224, 465-473 (2018).
  16. Luo, X., et al. STAT3 as a critical target of Sijunzi Decoction in the treatment of gastric cancer: evidence from integrated network pharmacology and experimental validation. Front Mol Biosci. 12, 1683806(2025).
  17. Zhang, L., et al. Danggui buxue decoction attenuates doxorubicin-induced cardiotoxicity by inhibiting ZBP1-mediated PANoptosis in vivo and in vitro. Phytomedicine. 145, 157037(2025).
  18. Mei, Z. G., et al. Fermented Chinese formula Shuan-Tong-Ling attenuates ischemic stroke by inhibiting inflammation and apoptosis. Neural Regen Res. 12 (3), 425-432 (2017).
  19. Huang, Q., et al. Jian-Pi-Bu-Xue-Formula Alleviates Cyclophosphamide-Induced Myelosuppression via Up-Regulating NRF2/HO1/NQO1 Signaling. Front Pharmacol. 11, 1302(2020).
  20. Yang, J., et al. Effect of Jianpi Shengxue Tablet on Iron Metabolism and Nutritional Status in Patients with Renal Anemia: A Prospective, Randomized, Open, Parallel Controlled and Multicenter Clinical Study. Curr Med Sci. 44 (3), 603-610 (2024).
  21. Hou, B., et al. Oral Chinese Herbal Medicine as an Adjuvant Treatment for Chemotherapy, or Radiotherapy, Induced Myelosuppression: A Systematic Review and Meta-Analysis of Randomized Controlled Trials. Evid-Based Compl Alt. 2017, 3432750(2017).
  22. Han, J. Y., et al. Ameliorating effects of compounds derived from Salvia miltiorrhiza root extract on microcirculatory disturbance and target organ injury by ischemia and reperfusion. Pharmacol Therapeut. 117 (2), 280-295 (2007).
  23. Liu, Y., et al. Integration of Network Pharmacology and Experimental Validation to Explore Jixueteng - Yinyanghuo Herb Pair Alleviate Cisplatin-Induced Myelosuppression. Integr Cancer Ther. 23, 15347354241237969(2024).
  24. Liu, Y., et al. Anti-Alzheimers molecular mechanism of icariin: insights from gut microbiota, metabolomics, and network pharmacology. J Transl Med. 21 (1), 277(2023).
  25. Zhang, H., et al. Bioinformatics and Network Pharmacology Identify the Therapeutic Role and Potential Mechanism of Melatonin in AD and Rosacea. Front Immunol. 12, 756550(2021).
  26. Qu, W., et al. Effect of Jianpi Shengxue Granule on Fertility and Early Embryo Development Toxicity of Rats. Chin J Integr Med. 37 (3), 356-359 (2017).
  27. Ouyang, X., et al. Induction of anaplastic lymphoma kinase (ALK) as a novel mechanism of EGFR inhibitor resistance in head and neck squamous cell carcinoma patient-derived models. Cancer Biol Ther. 19 (10), 921-933 (2018).
  28. Cinque, L., et al. Novel association of MEN1 gene mutations with parathyroid carcinoma. Oncol Lett. 14 (1), 23-30 (2017).
  29. Huyan, X. H., Lin, Y. P., Gao, T., Chen, R. Y., Fan, Y. M. Immunosuppressive effect of cyclophosphamide on white blood cells and lymphocyte subpopulations from peripheral blood of Balb/c mice. Int Immunopharmacol. 11 (9), 1293-1297 (2011).
  30. He, Y., et al. Mesenchymal stem cells empower T cells in the lymph nodes via MCP-1/PD-L1 axis. Cell Death Dis. 13 (4), 365(2022).
  31. Recordati, C., et al. Repeated oral administration of low doses of silver in mice: tissue distribution and effects on central nervous system. Part Fibre Toxicol. 18 (1), 23(2021).
  32. Ram, S., et al. Pixelwise H-score: A novel digital image analysis-based metric to quantify membrane biomarker expression from immunohistochemistry images. Plos One. 16 (9), e0245638(2021).
  33. Woo, B., et al. Automated anomaly-aware 3D segmentation of bones and cartilages in knee MR images from the Osteoarthritis Initiative. Med Image Anal. 93, 103089(2024).
  34. Chinese Pharmacopoeia Commission. Pharmacopeia of the People's Republic of China. , People's Medical Publishing House. Beijing, China. (2005).
  35. Chen, Y., et al. Quality Control of Glehniae Radix, the Root of Glehnia Littoralis Fr. Schmidt ex Miq. Along its Value Chains. Front Pharmacol. 12, 729554(2021).
  36. Ru, J., et al. TCMSP: a database of systems pharmacology for drug discovery from herbal medicines. J Cheminformatics. 6, 13(2014).
  37. Matsuura, S., et al. Negative effects of GM-CSF signaling in a murine model of t(8;21)-induced leukemia. Blood. 119 (13), 3155-3163 (2012).
  38. Tsiftsoglou, A. S. Erythropoietin (EPO) as a Key Regulator of Erythropoiesis, Bone Remodeling and Endothelial Transdifferentiation of Multipotent Mesenchymal Stem Cells (MSCs): Implications in Regenerative Medicine. Cells. 10 (8), 2140(2021).
  39. Yu, L., Wei, J., Liu, P. Attacking the PI3K/Akt/mTOR signaling pathway for targeted therapeutic treatment in human cancer. Semin Cancer Biol. 85, 69-94 (2021).
  40. Alves, C. L., Ditzel, H. J. Drugging the PI3K/AKT/mTOR Pathway in ER+ Breast Cancer. Int J Mol Sci. 24 (5), 4522(2023).
  41. Guan, P., Cui, R., Wang, Q., Sun, Y. A 3D hydrogel loaded with exosomes derived from bone marrow stem cells promotes cartilage repair in rats by modulating immunological microenvironment. Nanfang Yike Daxue Xuebao. 42 (4), 528-537 (2022).
  42. Liu, Z., et al. Activating Angiogenesis and Immunoregulation to Propel Bone Regeneration via Deferoxamine-Laden Mg-Mediated Tantalum Oxide Nanoplatform. Acs Appl Mater Inter. 16 (19), 24384-24397 (2024).
  43. McCloskey, E. V., Guest, J. F., Kanis, J. A. The clinical and cost considerations of bisphosphonates in preventing bone complications in patients with metastatic breast cancer or multiple myeloma. Drugs. 61 (9), 1253-1274 (2001).
  44. Lin, L., et al. Characterization of Differences in Chemical Profiles and Antioxidant Activities of Schisandra chinensis and Schisandra sphenanthera Based on Multi-Technique Data Fusion. Molecules. 29 (20), 4865(2024).
  45. Dabeek, W. M., Marra, M. V. Dietary Quercetin and Kaempferol: Bioavailability and Potential Cardiovascular-Related Bioactivity in Humans. Nutrients. 11 (10), 2288(2019).
  46. Li, W., et al. Flavonoids from Glycyrrhiza pallidiflora hairy root cultures. Phytochemistry. 60 (4), 351-355 (2002).
  47. Nian, Q., Liu, R., Zeng, J. Unraveling the pathogenesis of myelosuppression and therapeutic potential of natural products. Phytomedicine. 132, 155810(2024).
  48. Kellogg, C., Equils, O. The role of the thymus in COVID-19 disease severity: implications for antibody treatment and immunization. Hum Vaccin Immunother. 17 (3), 638-643 (2020).
  49. Liu, X., et al. Critical role of niche S100A8 for acute myeloid leukemia progression and hematopoiesis regeneration. Blood Adv. 9 (24), 6575-6589 (2025).
  50. Jafari, M., Ghadami, E., Dadkhah, T., Akhavan-Niaki, H. PI3k/AKT signaling pathway: Erythropoiesis and beyond. J Cell Physiol. 234 (3), 2373-2385 (2018).
  51. Novoplansky, O., et al. Activation of the EGFR/PI3K/AKT pathway limits the efficacy of trametinib treatment in head and neck cancer. Mol Oncol. 17 (12), 2618-2636 (2023).
  52. Weidemann, A., Johnson, R. S. Nonrenal regulation of EPO synthesis. Kidney Int. 75 (7), 682-688 (2009).
  53. Pallard, C., et al. Thrombopoietin activates a STAT5-like factor in hematopoietic cells. Embo J. 14 (12), 2847-2856 (1995).
  54. Stasi, R., et al. Thrombopoietic agents. Blood Reviews. 24 (4-5), 179-190 (2010).
  55. He, K., et al. G-CSF/GM-CSF-induced hematopoietic dysregulation in the progression of solid tumors. FEBS Open Bio. 12 (7), 1268-1285 (2022).
  56. Patsoukis, N., et al. Immunometabolic Regulations Mediated by Coinhibitory Receptors and Their Impact on T Cell Immune Responses. Front Immunol. 8, 330(2017).
  57. Geraud, A., et al. Clinical Pharmacology and Interplay of Immune Checkpoint Agents: A Yin-Yang Balance. Annu Rev Pharmacol. 61, 85-112 (2020).
  58. Naveiras, O., et al. Bone-marrow adipocytes as negative regulators of the haematopoietic microenvironment. Nature. 460 (7252), 259-263 (2009).
  59. Ambrosi, T. H., et al. Adipocyte Accumulation in the Bone Marrow during Obesity and Aging Impairs Stem Cell-Based Hematopoietic and Bone Regeneration. Cell Stem Cell. 20 (6), 771-784 (2017).
  60. Zhang, L., et al. Qingjie Fuzheng Granule attenuates 5-fluorouracil-induced intestinal mucosal damage. Biomed Pharmacother. 118, 109223(2019).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Siklofosfamid MiyelosüpresyonuAğ FarmakolojisiProtein Etkileşim AğıKEGG ZenginleştirmeGen OntolojisiPI3K-Akt YolağıJAK-STAT YolağıCD34 Pozitif HücrelerKemoterapi Kaynaklı Lökopeni

Bu makale yayımlandı

Video yakında

Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.