Method Article

Tipik Yağlı Pankreas ile Obez Sıçan Modelleri Oluşturmak için Bir Metodolojinin Geliştirilmesi ve Doğrulanması

DOI:

10.3791/69553

⸱

November 11th, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Key Laboratory of Acupuncture and Medicine Research of Ministry of Education, Nanjing University of Chinese Medicine, 2Department of Acupuncture and Moxibustion, Yangzhou TCM Hospital Affiliated to Nanjing University of Chinese Medicine, 3Department of Specialty Medicine, Ohio University, 4Research Department, Swiss University of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, genellikle yağlı pankreas ile karakterize edilen basit obezite sergileyen obez sıçan modelleri oluşturmak için tekrarlanabilir ve standartlaştırılmış bir yöntem sunmaktadır. Ayrıca pankreas dokusu örneklemesi ve immünohistokimya için ayrıntılı protokoller içerir.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Obezite, dünya nüfusunun neredeyse yarısının artık aşırı kilolu veya obez olarak sınıflandırıldığı, baskın bir küresel sağlık salgını olarak ortaya çıktı. Obez bireylerde önemli bir patolojik özellik, pankreas da dahil olmak üzere yağ dışı dokularda ektopik lipid birikimidir - pankreas yağlanması veya yağlı pankreas olarak adlandırılan bir durum. Yüksek yağlı diyet (HFD) kaynaklı kemirgen modellerinde, pankreas steatozu sürekli olarak hepatik steatozdan önce gelir ve pankreasın lipid birikimine karşı özel duyarlılığının altını çizer. Bu erken tutulum, pankreası obezitede metabolik düzensizliği anlamak için kritik bir organ olarak konumlandırır. Diyete bağlı obez (DIO) sıçanlar, insan hastalığının ilerlemesinin temel yönlerini özetlese de, bu pankreas fenotipini güvenilir bir şekilde sergileyen iyi karakterize edilmiş hayvan modelleri literatürde kıt kalmaktadır.

İnsan obezitesinin modellenmesinde önemli bir metodolojik husus, HFD'ye girişin zamanlamasıdır. Mevcut birçok model, sütten kesme döneminde HFD'yi başlatır ve bu, öncelikle gelişim sonrası gelişen insan obezitesini tam olarak yansıtmayan kafa karıştırıcı gelişimsel metabolik programlama etkilerine neden olabilir. Buna karşılık, bu çalışma, HFD'nin sütten kesildikten sonra tanıtıldığı standart bir protokol oluşturmaktadır. Bu yaklaşım, yetişkinlikte obezite başlangıcının ortak insan yörüngesini daha doğru bir şekilde taklit eder, erken yaşam metabolik adaptasyonlarından kaçınır ve pankreas yağlanmasına doğru fizyolojik olarak daha anlamlı bir ilerleme ile sonuçlanır.

Bu araştırma, belirgin yağlı pankreas patolojisi ile karakterize bir sıçan obezite modeli oluşturmak için ayrıntılı ve tekrarlanabilir bir çerçeve sağlar. Metodoloji, 1 haftalık bir iklimlendirme aşaması, sütten kesmeden sonra başlayan 14 haftalık bir HFD indüksiyon dönemi ve sistematik doku toplamayı içerir. İki doku işleme yolu tanımlanmıştır: moleküler analizler için ani dondurma (örneğin, Western blotlama) ve morfolojik değerlendirmeler için paraformaldehit perfüzyon fiksasyonu (örneğin, IHC, H&E). Bu model, obezite ile ilişkili pankreas metabolik fonksiyon bozukluğuna ilişkin mekanik araştırmalar için sağlam bir platform sunmaktadır.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Basit obezite, öncelikle uygunsuz beslenme kalıpları ve yetersiz fiziksel aktivite gibi sağlıksız yaşam tarzlarından kaynaklanan enerji dengesizliğine atfedilen, başka komorbiditeler olmaksızın bağımsız olarak var olan obezite olarak tanımlanır1. Obezite, yüksek yaygınlık oranları, erken başlangıçlı ve çoklu sistem komplikasyonları ile karakterize edilen, genç popülasyonlar arasında bulaşıcı olmayan hastalıkların görülme sıklığının artmasına önemli ölçüde katkıda bulunmakta ve onu kritik bir küresel halk sağlığı sorunu olarak konumlandırmaktadır2. Yağlı pankreas, metabolik düzensizlik sırasında bu yağ dışı organda ektopik lipid birikimi ile kendini gösteren bir durumdur. Yağlı pankreas, yağ dokusu ve pankreas patofizyolojisi arasındaki kritik etkileşimi yansıtır. Aşırı pankreas yağ birikimi, normal asiner ve adacık dokularının yerini alarak hem ekzokrin hem de endokrin kapasitelerde ikili fonksiyonel bozukluklara neden olur 3,4. Bu patolojik süreç, α/β hücre oranlarını bozar, β hücre farklılaşmasını ve ardından insülin salgılama fonksiyonunun5 kaybını teşvik eder ve β hücrelere6 doğrudan lipotoksik hasara aracılık eder. Aynı zamanda, α hücre proliferasyonu ve düzensiz insülin salınımı, glisemik instabiliteyi şiddetlendirerek tip 2 diabetes mellitusa (T2DM) ve bununla ilişkili komplikasyonlara ilerlemeyi hızlandırır7.

Yağlı pankreas patogenezinin araştırılması, metabolik hastalık ilerlemesinin altında yatan yeni mekanizmaları ortaya koymaktadır8. Önceki obezite araştırmaları hepatik steatozu vurgularken, ortaya çıkan kanıtlar pankreas lipid birikimini metabolik düzensizlikte daha erken bir olay olarak tanımlamaktadır9. Bu paradigma kayması, pankreas ve hepatik steatozu entegre eden basit obezite için çift organlı bir patoloji modelinin oluşturulmasını sağlar10. Çapraz konuşmalarını incelemek, lipid metabolizması bozukluğu, obezite, insülin direnci ve diyabeti kapsayan hastalık spektrumundaki kritik yolları aydınlatabilir ve hastalık mekanizmalarına yeni bakış açıları sunabilir11. Pankreasın patolojik sürecinde, ilk tezahür, pankreas adipositlerinin önemli ölçüde genişlemesinin eşlik ettiği pankreas yağının önemli ölçüde birikmesidir. Bu durum ağırlıklı olarak pankreas baş, boyun ve vücut bölgelerinin ventral tarafında görülür ve esas olarak asiner ve adacık hücreleri arasındaki interstisyel alanlarda bulunur. Aynı zamanda, pankreasın kronik düşük dereceli inflamasyonu mevcutken, hem endokrin hem de ekzokrin fonksiyonlar bu aşamada büyük ölçüde bozulmadan kalır12,13. Kapsamlı yağ infiltrasyonu, lipotoksisite yoluyla pankreas β hücre fonksiyonunu daha da bozar ve insülin aktivitesini baskılar. Bu aşamada, asiner hücreler aşamalı olarak adipositlerle değiştirilir ve böylece T2DM 14,15'in gelişimine katkıda bulunur. Diabetes mellitus pankreas kanseri için bağımsız bir risk faktörü olmasa da, akut pankreatit ve diyabet öyküsü olan hastalarda pankreas kanseri gelişme riski önemli ölçüde yüksektir16.

Makroskopik anatomik analizler pankreas steatoz şiddetini ve infiltrasyon paternlerini ölçerken, mikroskobik düzeydeki IHC değerlendirmeleri asiner hücre morfolojisini, nükleer konumlandırmayı, vakuolizasyon sıklığını ve hücresel popülasyon dinamiklerini karakterize eder17. Brüt anatomik gözlemden hücresel çözünürlüklü IHC'ye kadar uzanan bu multimodal yaklaşım, hastalığın ilerlemesi boyunca pankreas patolojisinin kapsamlı bir şekilde evrelendirilmesini sağlar. Bu çalışma, 1 haftalık iklimlendirmeyi, yetişkin sıçanlarda 14 haftalık obezite indüksiyonunu ve morfolojik analiz için optimize edilmiş pankreas dokusu işlemeyi kapsayan standart bir protokolü detaylandırmakta ve yağlanmayla ilişkili metabolik düzensizlikleri araştırmak için sağlam bir çerçeve oluşturmaktadır.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hayvan tedavi prosedürü, Nanjing Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Hayvan Etik Kurulu (202006A016) tarafından onaylanmıştır ve ARRIVE (Hayvan Araştırmaları: İn Vivo Deneylerin Raporlanması) yönergelerine, etik yönergelere, 1986 tarihli Hayvanlar (Bilimsel Prosedürler) Yasası'nın işleyişine ilişkin kılavuza ve ilgili kılavuzlara, bilimsel amaçlarla kullanılan hayvanların korunmasına ilişkin 2010/63 sayılı AB Direktifi'ne uygundur. Tüm deney hayvanları, diseksiyon öncesi onaylanmış kemirgen anestezi prosedürlerine uygun olarak uyuşturuldu. Prosedür üç ayrı bileşen halinde düzenlenmiştir.

1. Obez bir sıçan modeli oluşturun

  1. Deney hayvanları ve grupları
    1. Yüksek yağlı diyete (HFD) duyarlı bir suştan 4 haftalık (80-120 g) erkek Sprague-Dawley (SD) sıçanlarını seçin.
    2. Tüm fareleri bir hafta boyunca bir bakım diyetine alıştırın, ardından rastgele iki gruba ayırın: kontrol grubu ve model grubu.
    3. Kontrol grubunu orijinal diyette tutarken, bir hafta sonra model grubu için idame diyetini HFD ile değiştirin. Her iki grubu da 14 hafta boyunca diyetlerinde tutun. HFD bileşimi Tablo 1'de detaylandırılmıştır ve standart bakım yemi formülasyonu Tablo 2'de verilmiştir.
  2. Besleme koşulları ve deneysel parametreler
    1. Çevresel parametreler: sıcaklık 22 ± 2 °C, nem %50 ± %10, 12 saat aydınlık/karanlık döngüsü ve suya ve yiyeceğe serbest erişim.
  3. İzleme göstergeleri
    1. Vücut ağırlığını ve yiyecek alımını haftalık olarak sabit bir zamanda kaydedin.
      NOT: Akşamları yapmak stresi en aza indirebilir ve gündüz/gece aktivite kalıplarıyla uyumlu hale getirebilir18.
    2. Kaydedilen verileri kullanarak bir vücut ağırlığı büyüme eğrisi çizin.
    3. Başarılı obezite modellemesini, vücut ağırlığının aynı yaştaki kontrol grubunun %20'sini aşması olarak tanımlayın.
Malzemeİçerik (g/kg)Sağlanan başlıca besinler
Sıradan toz yem365Karbonhidratların, Bitkisel proteinlerin, Yağların, Vitamin komplekslerinin, Minerallerin vb. temel besin kaynağı
Domuz yağı310Doymuş yağ asitleri, Doymamış yağ asitleri
Kazein250Esansiyel amino asitler
Kolesterol10Kolesterol
Selüloz ve mineral karışımı60Lif, Kalsiyum, Fosfor, Sodyum vb.
DL-Metiyonin Metiyonin/Metiyonin Amino Asitleri3Esansiyel amino asitler
Maya1B vitaminleri, β-glukan vb.
NaCl1NaCl

Tablo 1: Sıçan modellerinde DIO oluşturmak için özel HFD formülasyonu. Tablo, alışma süresinin sonundan doku toplanmasına kadar uygulanan model grubu için bu çalışmada kullanılan HFD'nin spesifik bileşimini detaylandırmaktadır.

MalzemeİçerikBirim
Rutubet12.196%
Ham Protein (%CP)18.272%
Sindirilebilir Enerji (DE)3.186Mcal/kg
Metabolize Edilebilir Enerji (ME)2.939Mcal/kg
Net Enerji (NE)2.228Mcal/kg
Eter Ekstraktı (%EE)4.417%
Ham Elyaf (%CF)3.677%
Kalsiyum (%Ca)0.991%
Toplam Fosfor0.681%
(Toplam P%)
Fitat Olmayan Fosfor0.19%
Tuz0.407%
Lizin1.118%
Sindirilebilir Lizin0.813%
Metiyonin0.53%
Treonin0.779%
Triptofan0.221%
Bakır (Cu)22.06mg/kg
Demir (Fe)173.69mg/kg
Manganez (Mn)102.1176mg/kg
Çinko (Zn)60.3687mg/kg

Tablo 2: Sıçanlarda standart idame yemi formülü. Tablo, iklimlendirme aşamasında tüm sıçanlara ve tüm çalışma süresi boyunca kontrol grubuna sağlanan standart idame yeminin formülasyonunu sunmaktadır.

2. Doku toplama

  1. Ameliyat öncesi hazırlık
    1. Açlık tedavisi: Biyokimyasal analizlerle bağırsak içeriği etkileşimini en aza indirmek için ötenaziden önce 12 saat gıda kısıtlaması.
    2. Anestezi: Derin anestezi için inhalasyon yoluyla izofluran uygulayın (indüksiyon konsantrasyonu %4, idame konsantrasyonu %1,5-2). Anestezi makinesi izofluran için bir buharlaştırıcı ile donatıldı ve anestezik konsantrasyonu 1.5-2'de tutuldu. Hazırlık için bir referans olarak, sıvı izofluranın fiziksel tüketimi, tüm prosedür için sıçan başına yaklaşık 0.5 mL-0.8 mL idi.
    3. Anestezi derinliğini izleyin: Solunum hızını ve kornea reflekslerini sürekli olarak izleyin. Postmortem pankreas otolizini önlemek için prosedür boyunca sürekli bir anestezik durumu koruyun.
    4. Yetersiz anesteziyi yönetin: Anestezi derinliği yetersizse veya bilinç tekrarlarsa, ek anestezi (50 mg/kg) için derhal intraperitoneal olarak %20 üretan uygulayın ve devam etmeden önce yaşamsal belirtileri yeniden kontrol edin. Üretan tozunu tuzlu suda çözerek %20'lik bir üretan çözeltisi hazırlayın.
      NOT: İzofluran anestezisi, Nanjing Çin Tıbbı Üniversitesi Deney Hayvanları Merkezi'nin etik gerekliliklerine uygun bir yöntemdir. Bu terminal prosedür için, kabul edilebilir bir alternatif olarak %20 üretanın intraperitoneal enjeksiyonu kullanılabilir. Bununla birlikte, mevcut kanıtlar, izofluranın kemirgenlerde ketaminden daha yüksek bir güvenlik profili sunabileceğini düşündürmektedir19.
  2. Taze doku toplama
    1. Cilt dezenfeksiyonu: Karın organlarının kıl kontaminasyonunu önlemek için %75 etanolü tüm vücuda (1-2 s) hızla püskürtün.
    2. Pozisyon sabitleme: Sıçanı diseksiyon masasına sırtüstü yatırın ve dört uzvu da büyük başlı pimlerle güvenli bir şekilde sabitleyin.
    3. Karın derisini sol elinizde forseps ile kavrayın ve sağ elinizde makas kullanarak orta hat boyunca (ksifoidden pubise kadar) cildi kesin. Bağ dokusunu ayırmak için deri altı fasyayı küt bir şekilde parçalara ayırın ve aynı orta hat boyunca rektus abdominis kası ve peritonu kesin.
    4. Pankreas tanımlaması: Mide, dalak ve onikiparmak bağırsağını görselleştirmek için bağırsağı yavaşça sola kaydırın. Dalak pankreasın kuyruğuna bağlıdır ve mide pankreasa yakındır.
    5. Hızlı diseksiyon: Dalağı forseps ile nazikçe kaldırın ve dalak, mide ve duodenum mezenterine olan bağlantılarını aşamalı olarak keserek pankreası izole edin. Kırılgan dokusu nedeniyle, pankreas parankiminin doğrudan klemplenmesinden kaçının ve doku yırtılmasını önlemek için pankreas kanallarını/kan damarlarını koruyun.
    6. Doku koruma: Diseke edilmiş pankreası buz gibi soğuk PBS (1× Fosfat tamponlu salin, PH 7.4) veya kalan kanı çıkarmak için salin ile hızla durulayın. Pankreası hemen 2 mL'lik bir dondurma tüpüne aktarın, 30 saniye içinde sıvı nitrojene daldırın ve -80 °C'de uzun süre saklayın.
    7. Ötenazi ve karkas imhası Doku toplandıktan sonra, tüm deney sıçanlarına servikal çıkık ile ötenazi yapın. Nanjing Çin Tıbbı Üniversitesi Deney Hayvanları Merkezi'nin düzenlemelerine göre, hayvan karkasları patolojik biyomedikal atık olarak sınıflandırılmaktadır (Atık Kodu: 831-003-01). Tüm hayvan karkaslarını yönetmeliklere uygun olarak hava geçirmez torbalarda kapatın ve belirlenmiş dondurucularda eşit şekilde saklayın. Merkezi, çevreye duyarlı bertaraf üniversite tarafından gerçekleştirilecektir. Karkaslar hiçbir koşulda keyfi olarak atılmamalıdır.
      NOT: Biyomoleküllerin20,21 enzimatik bozunmasını önlemek için oda sıcaklığına maruz kalmaktan kaçının.
  3. Perfüzyon doku toplama (geri kalan adımlar aynıdır)
    1. Kalbi açığa çıkarın: Sol elinizle sıçanın deri dokusunu kaldırın ve kalbi tamamen ortaya çıkarmak için sağ elinizle göğüs boşluğunu açın.
    2. Sol ventrikülü perfüzyon için hazırlayın: Sol ventrikülde küçük bir kesi yapın (perfüzyon iğnesi çapına uygun boyutta) ve kan çıkışına izin vermek için sağ kulak kepçesini kesin.
    3. Perfüzyon salini: Perfüzyon iğnesini nazikçe sol ventriküle sokun ve sağ atriyal çıkış netleşene kadar 10 mL/dak akış hızında 100 mL salini yavaşça perfüze edin.
    4. Perfüz fiksatif: 200 mL %4 paraformaldehit fiksatife geçin, akış hızı: 5 mL/dak. Her sıçanı 100 mL salin, ardından 200 mL %4 paraformaldehit ile perfüze edin. Bu çalışmada ticari olarak hazırlanmış bir PFA çözeltisi kullanılmıştır. PFA'nın çözeltideki kararsızlığı nedeniyle, hazırlama ve tazeliğe bağlı olarak önemli değişkenlik potansiyeli nedeniyle, sıvı çözelti ışıktan korunmalı ve 4 °C'de saklanmalıdır. Etkinliği sağlamak için hemen açılmış bir alan kullanın. Tozdan hazırlanmışsa, çözelti kullanımdan hemen önce taze olarak yapılmalıdır.
      NOT: Eldiven, gözlük ve laboratuvar önlüğü giyin; Paraformaldehit zehirli olduğu için çeker ocakta performans sergileyin. Nanjing Çin Tıbbı Üniversitesi Deney Hayvanları Merkezi'nin düzenlemelerine göre paraformaldehit atıkları kimyasal biyomedikal atık olarak sınıflandırılmaktadır (Atık Kodu: 831-004-01). Kullanımdan sonra, biyolojik tehlike sembolü ile etiketlenmiş özel bir atık kabında saklanmalıdır. Merkezi imha üniversite tarafından gerçekleştirilir. Hiçbir koşulda uygunsuz bir şekilde atılamaz.
    5. Perfüzyon başarısını doğrulayın: Etkili fiksasyonu gösteren uzuv sertliğini kontrol edin.
    6. Pankreası 30 mL% 4 paraformaldehit çözeltisi içeren 50 mL'lik bir santrifüj tüpüne yerleştirin. Tüpü karanlıkta 2-4 saat sabit tutarak dokuyu sabitleyin.
    7. Pankreası 30 mL %70 etanol çözeltisi içeren 50 mL'lik yeni bir santrifüj tüpüne aktarın. Tüpü yaklaşık 20-24 saat sabit tutun ve ışıktan koruyun22.
    8. Parafin gömme: Dokuları parafin mumuna gömün. Gömülü mendilleri 4 °C veya -20 °C'de saklayın.
      NOT: Bu çalışmada parafin kesitleri kullanılmıştır. Dondurulmuş kesitler geçerli bir alternatiftir, ancak en iyi sonuçları elde etmek için antikor performansının belirli kesit tipi için önceden doğrulanması gerekir.

3. Pankreasın immünohistokimyası (IHC) boyaması

  1. Kesit alma ve montaj protokolü
    1. Parafin kesitleri: Bir mikrotom kullanarak doku kesitlerini 6 μm kalınlığında kesin ve cam slaytlara monte edin.
    2. Yüzdürme yöntemi: Kırışıklıkları düzeltmek için bölümleri 40 °C'lik bir doku yüzdürme banyosunda yüzdürün.
    3. Doku toplama: Bölümleri yapışkan kaplı slaytlara (slayt başına 2-3) monte edin ve 80 °C'lik bir slayt ısıtıcısında kurutun.
    4. Slayt kurutma: Bölümlere ayrılmış slaytları kesitlemeden sonra gece boyunca 60 °C'lik bir fırına aktarın.
  2. Deparafinizasyon ve rehidrasyon protokolü
    1. Slaytları bir slayt rafına yerleştirin ve aşağıdaki gibi sırayla daldırın: ksilen I, 7 dk; ksilen II, 7 dk; susuz etanol, 5 dakika; %90 etanol, 5 dakika; %85 etanol, 5 dakika; %75 etanol, 5 dakika; damıtılmış su, 5 dakika; PBS, 5 dakika (üç kez).
      NOT: Eldiven ve gözlüklerle çeker ocakta ksilen adımlarını gerçekleştirin. Ksilen atıklarını, adım 2.3.4'te paraformaldehit için belirtilen aynı protokolü izleyerek bertaraf edin.
  3. Antijen alma protokolü
    1. Sodyum sitrat çözeltisinin hazırlanması: Sodyum sitrat tamponu (pH 6.0) hazırlayın. Bir paket tozu 1 L suda çözerek kendi hazırladığımız bir sodyum sitrat tampon çözeltisi kullandık.
    2. Sırayla mikrodalga: Slaytları, slaytları örtmek için sodyum sitrat tampon çözeltisiyle dolu bir cam boyama kavanozuna yerleştirin, ardından kavanozu mikrodalgaya yerleştirin. Numuneler şu sırayla mikrodalga işlemine tabi tutuldu: 8 dakika orta ısı (600 W), ardından 8 dakika ısıtmadan bekletildi ve son olarak 7 dakika düşük ısı (300 W).
    3. Doğal olarak oda sıcaklığına soğutun: Kabın doğal olarak oda sıcaklığına soğumasını bekleyin.
    4. PBS: Slaytları PBS'de iki kez 5 dakika durulayın.
  4. Fırın inkübasyonu
    1. H2O2 : Endojen peroksidaz aktivitesini bloke etmek için doku bölümlerine 10 dakika boyunca% 3 H2O2 uygulayın . Her slayta yaklaşık 50 - 80 μL H2O2 uygulayın.
    2. PBS: Slaytları PBS'de üç kez 5 dakika yıkayın.
    3. Strept-Avidin-Biotin-Peroksidaz Kompleksi (SABC): SABC'yi dokuya damla damla uygulayın ve 37 °C'lik bir inkübatörde 30 dakika boyayın. Her slayta yaklaşık 50 - 80 μL SABC uygulayın.
    4. PBS: Slaytları PBS'de üç kez 5 dakika yıkayın.
  5. Renk oluşturma
    1. 3,3'-diaminobenzidin (DAB): DAB kromojenik solüsyonunu doku kesitlerine uygulayın ve kahverengimsi sarı renklenme gelişene kadar izleyin. Bölümleri yaklaşık 1-5 dakika boyayın. Boyama süresini doku özgüllüğüne ve ortam sıcaklığına göre ayarlayın. Pankreas dokusu için 22 °C'de 2 dakikalık bir boyama süresi önerilir.
    2. Durulama: Reaksiyonu durdurmak için slaytları hemen hafif bir damıtılmış su akışı altında durulayın.
    3. Daldırma: Kalan reaktifleri çıkarmak için slaytları 5 dakika boyunca damıtılmış suya batırın.
  6. Hematoksilen boyama
    1. Hematoksilen: Slaytları 1 dakika boyunca hematoksilin içine daldırın. Hematoksilen çözeltisi 56 mg/mL oranında saf su kullanılarak hazırlanır.
    2. Durulama: Slaytları damıtılmış suda iki kez durulayın (durulama başına 5 s).
    3. Hidroklorik Asit-Alkol Farklılaşması: Hidroklorik asit-alkol farklılaştırma çözeltisindeki slaytları 1 saniye boyunca farklılaştırın.
    4. Daldırma: Kararlı mavi nükleer boyama oluşturmak için slaytları 10 dakika boyunca musluk suyuna batırın.
  7. Dehidrasyon: Slaytları aşağıdaki çözeltilerle sırayla kurutun: her çözeltide sırasıyla %70 etanol, %80 etanol, %90 etanol, susuz etanol, ksilen I ve ksilen II.
    NOT: Eldiven ve gözlüklerle çeker ocakta ksilen adımlarını gerçekleştirin.
  8. Mühürleme
    1. Bölümleri nötr balsamla monte edin: Kauçuk bir ampul damlalığı kullanarak slayta nötr balsam uygulayın. Bir lamel ile örtün. Kabarcık oluşumunu önlemek için ampulü kuvvetli bir şekilde sıkıştırmaktan kaçının. Her slayta yaklaşık 50 μL nötr balsam uygulayın.
    2. Havayla kurutma: Nötr reçinenin tamamen kurumasını sağlamak için slaytları gece boyunca çeker ocakta yerleştirin.

4. Western blotlama (WB) analizi

  1. Dokuların ayrışması
    1. 200 mg sıçan pankreas dokusu alın, 1 mL lizis tamponu ve 3 küçük çelik bilye içeren 2 mL'lik bir öğütme tüpüne yerleştirin. Lizis tamponu, tam Proteaz İnhibitör Kokteyli ve RIPA lizis tamponundan oluşur. Karışım oranı 1 tablet proteaz inhibitörüdür: 50 mL RIPA lizis tamponu.
    2. Öğütme, aşağıdaki parametrelere sahip bir bilyalı değirmen kullanılarak gerçekleştirildi: frekans: 30/s; süre: 30 sn; 10-15 kez. Çıplak gözle hiçbir beyaz parçacık görünmeyene kadar.
    3. Üst protein süpernatanını 1,5 mL'lik bir mikro santrifüj tüpüne aktarın, köpük almayın. 16900 x g 30dk, 4 °C ile santrifüjleyin.
      NOT: Western blotlama analizi için homojenatlar tüm pankreastan hazırlandı.
  2. Protein ölçümü: Üreticinin talimatlarına göre Pierce BCA Protein Test Kitini kullanarak protein konsantrasyonunu ölçün. BCA çalışma çözeltisi için karışım oranı Çözüm A'dır: Çözüm B = 50:1.
  3. Protein elektroforezi:
    1. Hazırlanan pankreas protein örneklerini (her şeride 6 μL'lik bir hacim yüklendi) elektroforez için sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jel-Young PAGE, Bis-Tirs, 10 × 8'e ekleyin.
    2. 70 V'ta 0,5 saat çalıştırın, ardından Mini-PROTEAN Tetra Sistemini kullanarak 1 saat boyunca 110 V'ta çalıştırın. MOPS elektroforezi Running Buffer sıvısını 20× saf su ile 1× konsantrasyona kadar seyreltin.
  4. Membran transferi
    1. Transfer konsantresi eBlot L2'yi saf su kullanarak çalışma konsantrasyonunun ×5 ila 1× seyreltin. Bu 1 × aktarım tamponu 3 defaya kadar yeniden kullanılabilir. Denge konsantresi eBlot L2'yi saf su kullanarak çalışma konsantrasyonunun ×5 ila 1× oranında seyreltin.
    2. Bir PVDF membranını (Immobilon-P Transfer Membranı) uygun boyutta kesin (örn. 7,5 cm × 5,5 cm). Gözenek boyutu 0.45 um'dir.
    3. Yaklaşık 30 mL metanolü 90 × 60 × 32 mm'lik bir inkübasyon kutusuna dökün. PVDF membranını etkinleştirmek için 5 saniye boyunca Metanol'e daldırın.
    4. Hazırlanan 1x denge çözeltisinin yaklaşık 30 mL'sini başka bir temiz inkübasyon kutusuna dökün. Jeli elektroforez plakalarından dikkatlice çıkarın ve terazi solüsyonuna yerleştirin.
    5. Aktifleştirilmiş PVDF membranını metanolden aktarın ve ayrıca denge solüsyonunu içeren inkübasyon kutusuna yerleştirin. Doğru temas için membranın jelin altına yerleştirildiğinden emin olun. Her ikisinin de dengelenmesine izin verin.
    6. Kurutma aparatı üreticisinin talimatlarını izleyerek, transfer "sandviçini" yukarıdan aşağıya doğru şu sırayla yerleştirin: sünger, jel, PVDF membran, sünger. Katmanlar arasında hava kabarcığı kalmadığından emin olun. Monte edilmiş transfer yığınını kurutma aparatı haznesine doğru şekilde yerleştirin. Güç kaynağını bağlayın ve aktarımı 15 dakika boyunca standart modda çalıştırın.
  5. Blok
    1. Biri yaklaşık 15 mL TBST (Tris tamponlu salin-Tween20) ve diğeri yaklaşık 15 mL% 5 BSA bloke edici çözelti içeren iki inkübasyon kutusu hazırlayın.
    2. TBST çözeltisinin hazırlanması: Bir poşet Tris Tamponlu Salin Tozunu 2 L saf suda çözün, ardından 2 mL Tween 20 ekleyin.
    3. PVDF membranını, jel ile temas eden tarafın yukarı bakmasını sağlayacak şekilde TBST çözeltisine yerleştirin.
    4. PVDF membranını bir çalkalayıcıda 40 rpm'de oda sıcaklığında 3-5 dakika yıkayın.
    5. PVDF membranını engelleme tamponuna aktarın. 20 rpm'de, oda sıcaklığında 1 saat çalkalayıcıda bloke edin.
  6. Birincil antikor inkübasyonu
    1. PVDF membranını TBST içeren bir inkübasyon kutusunda yıkayın, membranı oda sıcaklığında 40 rpm'de bir çalkalayıcıda her biri 5 dakika boyunca üç kez yıkayın.
    2. Birincil antikor ile gece boyunca (14-18 saat) 4 °C'de (1:40000, Vinculin Poliklonal antikor) başka bir antikor inkübasyon kutusunda 20 rpm'de bir çalkalayıcı üzerinde inkübe edin.
    3. Antikorun, bölümde belirtilen orana göre hazırlanan %5'lik BSA bloke edici solüsyon ile seyreltildiğinden emin olun.
  7. İkincil antikor inkübasyonu
    1. PVDF membranını 15 mL TBST çözeltisi içeren bir inkübasyon kutusuna yerleştirin. Membranı oda sıcaklığında bir çalkalayıcıda 5 dakika boyunca üç kez yıkayın ve 40 rpm'de çalkalayın.
    2. Anti-tavşan IgG, HRP'ye bağlı Antikoru 1:2000'de %5 BSA bloke edici tampon içinde seyrelterek ikincil antikoru hazırlayın.
    3. Oda sıcaklığında 1 saat çalkalayıcıda 20 rpm'de23 saat inkübe edin.
    4. PVDF membranını, yukarıda açıklanan yöntemi izleyerek her biri 5 dakika boyunca TBST çözeltisi ile üç kez yıkayın.
  8. Algılama
    1. AccuWest ECL Plus, Raegent A ve AccuWest ECL Plus, Raegent B'yi doğrudan bir inkübasyon kutusunda 1:1 hacim oranında karıştırarak çalışma substratı çözeltisini hazırlayın. Sonraki tüm adımları ışıktan koruyarak gerçekleştirin.
    2. PVDF membranını çözelti içinde 5-10 saniye inkübe edin, ardından gelişmiş kemilüminesans (ECL) reaktifleri-Vilber Fusion FX6 MINI kullanarak immünoreaktif bantları hemen tespit edin. Tipik maruz kalma süresi 5 ila 10 s arasında değişir.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yağlı pankreası güvenilir bir şekilde sergileyen basit bir obezite modeli oluşturmak için tekrarlanabilir bir protokol tanımlıyoruz (Şekil 1). Hayvan besleme ve doku toplamadan sonraki moleküler doğrulamaya kadar tüm süreç şematik olarak Şekil 1'de özetlenmiştir. Model grubunun (n = 5) ve kontrol grubunun (n = 5) haftalık ağırlık değişimleri kaydedildi ve HFD ile beslenmeden önce iki grubun ağırlığında anlamlı bir fark yoktu. HF...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Metabolik sendromun birincil itici gücü olan komplike olmayan obezite, sistemik lipid metabolizması düzensizliğinin ilk tezahürünü temsil eder. Müdahale edilmezse, T2DM'ye ve ciddi diyabetik komplikasyonlara ilerleyebilir, bu da erken metabolik düzeltmenin gerekliliğinin altını çizer30. Obezitede ektopik lipid birikiminin erken bir belirteci olan pankreas yağlanması (yağlı pankreas), pankreası klasik olmayan bir yağ organı olarak yeniden tanımlayarak geleneksel ad...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Ulusal Tanınmış Geleneksel Çin Tıbbı Uzmanlarının Yedinci Grubunun Akademik Deneyim Mirası için Mirasçılar ve Eğitmenler Projesi tarafından desteklenmiştir; Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı, Genç Bilim İnsanları Fonu Projesi [hibe numarası 82305376]; 2024 Yılında Jiangsu Eyaletindeki Genç Bilim ve Teknoloji Yeteneklerini Destekleme Projesi [hibe numarası JSTJ-2024-380].

Akış şemaları FigDraw, Biorender kullanılarak üretildi.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Malzeme
1.5 mL mikro-santrifüj tüpüBiosharp Biyomühendislik Şirketi LtdBS-15-MWB
2ml dondurma tüpüLABSELECTCV-002-200-EXWB
2ml öğütme tüpüWuhan Servicebio Technology Co., LtdHT-200-MWB
%3 H2O2Booster Electronics Technology Co.,Ltd.20A23CIHC
%4 paraformaldehitBiosharp Biyomühendislik Şirketi LtdBL539APerfüzyon pankreas diseksiyon operasyonu
%5 BSA çözümüBiofroxx4240GR100IHC
50 mL santrifüj tüpü Biosharp Biyomühendislik Şirketi LtdBS-500-Mdoku koruma
AccuWest ECL Plus, Raegent ANanjing Gene Easy Biotechnology Co., Ltd.Q201220WB
AccuWest ECL Plus, Raegent BNanjing Gene Easy Biotechnology Co., Ltd.Q201220WB
susuz etanolŞanghay SCR-Biyoteknoloji Şirketi, Ltd.10009257IHC
Anti-tavşan IgG, HRP ile bağlantılı AntikorCell Signaling Technology.Inc,7074WB
cOmplete Proteaz İnhibörü KokteyliHoffmann-La Roche Ltd 82256300WB
Kapak KayışıCITOTEST LABWARE ÜRETIM ŞIRKETI, Ltd10212450CIHC
DAB kromojenik çözeltisiBooster Electronics Technology Co.,Ltd.AR2017-1IHC
ForsepsShenzhen RWD Yaşam Bilimleri Şirketi, Ltd.SP0007-MSD sıçanının diseksiyonu
cam slaytlar CITOTEST LABWARE ÜRETIM ŞIRKETI, Ltd188105IHC
cam boyama kavanozuŞanghay Beyotime Biyoteknoloji Şirketi, Ltd.FG010IHC
HematoksilinŞanghay Beyotime Biyoteknoloji Şirketi, Ltd.ST2067-20gIHC
Yüksek yağlı diyetSuzhou Shuangshi Laboratuvarı Hayvan Yemi Teknolojisi A., Ltd.Tablo1Deneysel hayvanlarla beslenmek
Hidroklorik asit alkolüŞanghay Beyotime Biyoteknoloji Şirketi, Ltd.C0163MIHC
izofluranShenzhen RWD Yaşam Bilimleri Şirketi, Ltd.R510-22-10Anestezi Altındaki Fareler
metanol Biofroxx67-56-1WB
MOPS Running Buffer sıvısı 20 kez ve daha fazla kullanılır;Nanjing Genscript Biotechnology Co., Ltd. C36842504WB
Nötr BalsamPekin Solarbio Bilim & Technology Co., Ltd.G8590IHC
Nötr reçineŞanghay SCR-Biyoteknoloji Şirketi, Ltd.G8590IHC
PBS çözümüJiangsu Keygen Biyoteknoloji Şirketi, Ltd.KGL2206-500doku koruma
Pierce BCA Protein Testi Kiti  Thermo Fisher Scientific Inc, Waltham, ABD.ZB382867
Pierce BCA Protein Testi Kiti  hermo Fisher Scientific Inc, Waltham, ABDZB382867WB
Proteaz İnhibitörü KokteyliHoffmann-La Roche Ltd 82256300
PVDF membranı (Immobilon-P Transfer Membranı, Millipore, 0000380346) Merck Millipore0000380346WB
RIPA liz tamponuBiosharp Biyomühendislik Şirketi LtdBL504A, 70096436WB
SABCBooster Electronics Technology Co.,Ltd.20C03AIHC
SalinSHANXI SHENGAO HAYVAN ILAÇ ŞIRKETI, LTD. 270071460doku koruma
SD erkek FarelerJiangsu GemPharmatech Co., Ltd. D000017Fareler
Sodyum sitratMerck Yaşam BilimiS1804IHC
Standart bakım beslemesiSuzhou Shuangshi Laboratuvarı Hayvan Yemi Teknolojisi A., Ltd.Tablo 2Deneysel hayvanlarla beslenmek
denge yoğunlaştırıcısı eBlot L2 5& kez;Nanjing Genscript Biotechnology Co., Ltd. C97212410 WB
transfer yoğunlaştırıcısı eBlot L2 5& kez;Nanjing Genscript Biotechnology Co., Ltd. C97211504WB
Tris Tamponlu Salin, Toz ve S.Nbsp;Biosharp Biyomühendislik Şirketi LtdBL602AWB
Tween 20BiofroxxEZ681A3EA8WB
ÜretanSigma-Aldrich Co., Ltd.U2500-100GAnestezi Altındaki Fareler
Vinculin Poliklonal AntikorProteintech Group, Inc.26520-1-APWB
ksilenNanjing Reaktif ŞirketiC0430530223IHC
Genç PAGE, Bis-Tirs, 10 kez; 8Nanjing Genscript Biotechnology Co., Ltd. C33152505WB
Ekipman
anestezi makinesiShenzhen RWD Yaşam Bilimleri Şirketi, Ltd.Model R5805Anestezi Altındaki Fareler
Ball Mill Retsch Technology GmbH - MicrotracMM400WB
SantrifüjlerEppendorf SE5418RWB
Bilgisayarlı biyolojik doku kurutucuZhejiang Jinhua Kedi Enstrüman Şirketi.SC2013-G-KITIHC
geliştirilmiş kemimilüminesans (ECL) reaktifleri VILBER BIYOGRAFI GÖRÜNTÜLEME00170961WB
microtome Thermo Fisher Scientific Inc, Waltham, ABD.HM325IHC
MikrodalgaŞanghay Boxun Endüstri Şirketi, Ltd. 97000IHC
Mini-PROTEAN Tetra SistemiBio-Rad Laboratuvarları, Inc.1658004WB
fırınŞanghay Jinghong Bilimsel Şirketi, Ltd.DNP-9082IHC
saf suSichuan UPT Ultra-Saf Teknoloji A., Ltd.ULUP-TEZIHC

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wang, G., et al. Comparative effectiveness of massage combined with lifestyle intervention and lifestyle intervention alone for simple obesity: a systematic review and meta-analysis. Medicine. 104 (2), e41074(2025).
  2. World Obesity Federation. World Obesity Atlas 2024. , World Obesity Federation. London. (2024).
  3. Kromrey, M. L., et al. Pancreatic steatosis is associated with impaired exocrine pancreatic function. Invest Radiol. 54 (7), 403(2019).
  4. Miyake, H., et al. Association of fatty pancreas with pancreatic endocrine and exocrine function. PLoS One. 13 (12), e0209448(2018).
  5. López-Bermudo, L., et al. Contribution of liver and pancreatic islet crosstalk to β-cell function/dysfunction in the presence of fatty liver. Front Endocrinol (Lausanne). 13, 892672(2022).
  6. Vilas-Boas, E. A., Almeida, D. C., Roma, L. P., Ortis, F., Carpinelli, A. R. Lipotoxicity and β-cell failure in type 2 diabetes: oxidative stress linked to NADPH oxidase and ER stress. Cells. 10 (12), 3328(2021).
  7. Martínez, M. S., et al. The role of the α cell in the pathogenesis of diabetes: a world beyond the mirror. Int J Mol Sci. 22 (17), 9504(2021).
  8. Catanzaro, R., Cuffari, B., Italia, A., Marotta, F. Exploring the metabolic syndrome: nonalcoholic fatty pancreas disease. World J Gastroenterol. 22 (34), 7660-7675 (2016).
  9. Pinnick, K. E., et al. Pancreatic ectopic fat is characterized by adipocyte infiltration and altered lipid composition. Obesity. 16 (3), 522-530 (2008).
  10. Wang, Y. D., et al. New insight of obesity-associated NAFLD: dysregulated "crosstalk" between multi-organ and the liver. Genes Dis. 10 (3), 799-812 (2023).
  11. Savage, D. B., Petersen, K. F., Shulman, G. I. Disordered lipid metabolism and the pathogenesis of insulin resistance. Physiol Rev. 87 (2), 507-520 (2007).
  12. Shah, N., Rocha, J. P., Bhutiani, N., Omer, E. Nonalcoholic fatty pancreas disease. Nutr Clin Pract. 34 (S1), S49-S56 (2019).
  13. Chang, M. L. Fatty pancreas-centered metabolic basis of pancreatic adenocarcinoma: from obesity, diabetes and pancreatitis to oncogenesis. Biomedicines. 10 (3), 692(2022).
  14. Ou, H. Y., Wang, C. Y., Yang, Y. C., Chen, M. F., Chang, C. J. The association between nonalcoholic fatty pancreas disease and diabetes. PLoS One. 8 (5), e62561(2013).
  15. Yu, T. Y., Wang, C. Y. Impact of non-alcoholic fatty pancreas disease on glucose metabolism. J Diabetes Investig. 8 (6), 735-747 (2017).
  16. Petrov, M. S. Post-pancreatitis diabetes mellitus and excess intra-pancreatic fat deposition as harbingers of pancreatic cancer. World J Gastroenterol. 27 (17), 1936-1942 (2021).
  17. Mihoc, T., et al. Pancreatic morphology, immunology, and the pathogenesis of acute pancreatitis. Biomedicines. 12 (11), 2627(2024).
  18. Robinson-Junker, A. L., O'Hara, B. F., Gaskill, B. N. Out like a light? the effects of a diurnal husbandry schedule on mouse sleep and behavior. J Am Assoc Lab Anim Sci. 57 (2), 124-133 (2018).
  19. Virgilio, T., et al. Impact of prolonged isoflurane or ketamine-xylazine anesthesia with or without buprenorphine and oxygen on mouse vitals and immune responses. Lab Anim. 54, 1-8 (2025).
  20. Oh, S., Ahn, B., Lee, B. J., Nam, S. Y. Effect of humidity on postmortem changes in rats. J Vet Sci. 25 (3), e24(2024).
  21. Wu, C. T., et al. SARS-CoV-2 infects human pancreatic β cells and elicits β cell impairment. Cell Metab. 33 (8), 1565-1576.e5 (2021).
  22. Tremblay, C., Moullé, V., Zarrouki, B., Ghislain, J., Poitout, V. Immunofluorescent staining of pancreatic sections. protocols.io. , (2022).
  23. Liu, Y., et al. Electroacupuncture at ST25 mediated glial cells pruning of pancreatic TRPV1 neural synapse responds to neuropathy-associated beta cell dysfunction. Chin Med. 20 (1), 65(2025).
  24. Lu, M., et al. Electroacupuncture stimulation regulates adipose lipolysis via catecholamine signaling mediated by NLRP3 suppression in obese rats. Front Endocrinol. 12, 773127(2022).
  25. Lu, M., et al. Remodelling the inguinal adipose sensory system to switch on the furnace: electroacupuncture stimulation induces brown adipose thermogenesis. Diabetes Obes Metab. 26 (4), 1430-1442 (2024).
  26. Otsuka, N., Shimizu, K., Taniai, M., Tokushige, K. Risk factors for fatty pancreas and effects of fatty infiltration on pancreatic cancer. Front Physiol. 14, 1243983(2023).
  27. Zhang, X., Cui, Y., Fang, L., Li, F. Chronic high-fat diets induce oxide injuries and fibrogenesis of pancreatic cells in rats. Pancreas. 37 (3), e31(2008).
  28. Liu, Y., et al. Electroacupuncture at ST25 mediated glial cells pruning of pancreatic TRPV1 neural synapse responds to neuropathy-associated beta cell dysfunction. Chin Med. 20 (1), 65(2025).
  29. Liu, Y., et al. Neurophysiological mechanisms of electroacupuncture in regulating pancreatic function and adipose tissue expansion. World J Diabetes. 16 (5), 101354(2025).
  30. Jirawat, N., Srisuk, A. Obesity, metabolic syndrome, and cardiovascular disease: pathophysiological connections. Sci Acad J. 7 (1), 1-12 (2024).
  31. Fan, Y. H., et al. Inter-organ metabolic interaction networks in non-alcoholic fatty liver disease. Front Endocrinol. 15, 1494560(2025).
  32. Wang, Y. D., et al. New insight of obesity-associated NAFLD: dysregulated "crosstalk" between multi-organ and the liver. Genes Dis. 10 (3), 799-812 (2023).
  33. Zhang, X., Ji, X., Wang, Q., Li, J. Z. New insight into inter-organ crosstalk contributing to the pathogenesis of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). Protein Cell. 9 (2), 164-177 (2018).
  34. Zhang, C. L., Wang, J. J., Li, J. N., Yang, Y. Nonalcoholic fatty pancreas disease: an emerging clinical challenge. World J Clin Cases. 9 (23), 6624-6638 (2021).
  35. Corte, C. D., et al. Nonalcoholic fatty pancreas disease and nonalcoholic fatty liver disease: more than ectopic fat. Clin Endocrinol. 83 (5), 656-662 (2015).
  36. Saloman, J. L., et al. Animal models: challenges and opportunities to determine optimal experimental models of pancreatitis and pancreatic cancer. Pancreas. 48 (6), 759(2019).
  37. Hariri, N., Thibault, L. High-fat diet-induced obesity in animal models. Nutr Res Rev. 23 (2), 270-299 (2010).
  38. Lee, H. -Y., Min, K. -J. Dietary restriction and lipid metabolism: unveiling pathways to extended healthspan. Nutrients. 16 (24), 4424(2024).
  39. Rosini, T. C., Ramos da Silva, A. S., de Moraes, C. Diet-induced obesity: rodent model for the study of obesity-related disorders. Rev Assoc Med Bras (Engl Ed). 58 (3), 383-387 (2012).
  40. Uc, A., et al. Chronic pancreatitis in the 21st century - research challenges and opportunities: summary of a national institute of diabetes and digestive and kidney diseases workshop. Pancreas. 45 (10), 1365(2016).
  41. Fisher, W. E., et al. Standard operating procedures for biospecimen collection, processing, and storage: from the consortium for the study of chronic pancreatitis, diabetes, and pancreatic cancer. Pancreas. 47 (10), 1213(2018).
  42. Alexander, J., Chang, G. Q., Dourmashkin, J. T., Leibowitz, S. F. Distinct phenotypes of obesity-prone AKR/J, DBA2J and C57BL/6J mice compared to control strains. Int J Obes (Lond). 30 (1), 50-59 (2006).
  43. Nishikawa, S., Yasoshima, A., Doi, K., Nakayama, H., Uetsuka, K. Involvement of sex, strain and age factors in high-fat diet-induced obesity in C57BL/6J and BALB/cA mice. Exp Anim. 56 (4), 263-272 (2007).
  44. Levin, B. E., Dunn-Meynell, A. A., Balkan, B., Keesey, R. E. Selective breeding for diet-induced obesity and resistance in Sprague-Dawley rats. Am J Physiol. 273 (2 Pt 2), R725-R730 (1997).
  45. Kautzky-Willer, A., Harreiter, J., Pacini, G. Sex and gender differences in risk, pathophysiology and complications of type 2 diabetes mellitus. Endocr Rev. 37 (3), 278-316 (2016).
  46. Lee, M. J., Wu, Y., Fried, S. K. Adipose tissue heterogeneity: implication of depot differences in adipose tissue for obesity complications. Mol Aspects Med. 34 (1), 1-11 (2013).
  47. Geer, E. B., Shen, W. Gender differences in insulin resistance, body composition, and energy balance. Gender Med. 6 Suppl 1 (Suppl 1), 60-75 (2009).
  48. Nadal-Casellas, A., Proenza, A. M., Lladó, I., Gianotti, M. Sex-dependent differences in rat hepatic lipid accumulation and insulin sensitivity in response to diet-induced obesity. Biochem Cell Biol. 90 (2), 164-172 (2012).
  49. Stubbins, R. E., Holcomb, V. B., Hong, J., Núñez, N. P. Estrogen modulates abdominal adiposity and protects female mice from obesity and impaired glucose tolerance. Eur J Nutr. 51 (7), 861-870 (2012).
  50. Liu, Y., et al. Neuromechanical dimorphism of hypoglycemic effect of electroacupuncture. Neuroendocrinology. 113 (7), 679-691 (2023).
  51. Xu, T. C., Liu, Y., Yu, Z., Xu, B. Gut-targeted therapies for type 2 diabetes mellitus: a review. World J Clin Cases. 12 (1), 1-8 (2024).
  52. Xu, T., et al. Hypoglycemic effect of electroacupuncture at ST25 through neural regulation of the pancreatic intrinsic nervous system. Mol Neurobiol. 59 (1), 703-716 (2022).
  53. Feng, X., et al. Ferroptosis enhanced diabetic renal tubular injury via HIF-1α/HO-1 pathway in db/db mice. Front Endocrinol (Lausanne). 12, 626390(2021).
  54. Fang, X., et al. Beinaglutide shows significantly beneficial effects in diabetes/obesity-induced nonalcoholic steatohepatitis in ob/ob mouse model. Life Sci. 270, 118966(2021).
  55. Mao, T., et al. Semaglutide alters gut microbiota and improves NAFLD in db/db mice. Biochem Biophys Res Commun. 710, 149882(2024).
  56. Zeng, Z., et al. Bacillus amyloliquefaciens SC06 alleviates the obesity of ob/ob mice and improves their intestinal microbiota and bile acid metabolism. Food Funct. 13 (9), 5381-5395 (2022).
  57. Suriano, F., et al. Novel insights into the genetically obese (ob/ob) and diabetic (db/db) mice: two sides of the same coin. Microbiome. 9 (1), 147(2021).
  58. Owada, Y., et al. Novel non-alcoholic steatohepatitis model with histopathological and insulin-resistant features. Pathol Int. 68 (1), 12-22 (2018).
  59. Flessa, C. M., et al. Genetic and diet-induced animal models for non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) research. Int J Mol Sci. 23 (24), 15791(2022).
  60. Liu, Y., et al. Electroacupuncture at ST25 mediated glial cells pruning of pancreatic TRPV1 neural synapse responds to neuropathy-associated beta cell dysfunction. Chin Med. 20 (1), 65(2025).
  61. Xu, T., et al. Hypoglycemic effect of electroacupuncture at ST25 through neural regulation of the pancreatic intrinsic nervous system. Mol Neurobiol. 59 (1), 703-716 (2022).
  62. Vimaleswaran, K. S., et al. Causal relationship between obesity and vitamin D status: bi-directional Mendelian randomization analysis of multiple cohorts. PLoS Med. 10 (2), e1001383(2013).
  63. Alvheim, A. R., et al. Dietary linoleic acid elevates endogenous 2-AG and anandamide and induces obesity. Obesity (Silver Spring). 20 (10), 1984-1994 (2012).
  64. Hintze, K. J., Benninghoff, A. D., Cho, C. E., Ward, R. E. Modeling the Western diet for preclinical investigations. Adv Nutr. 9 (3), 263-271 (2018).
  65. D, L. Obesity due to a high-fat diet in the rat and mouse. Nutr Dieta Eur Rev Nutr Diet. 9 (1), 27-42 (1967).
  66. Lemonnier, D., Tremolieres, J. Experimental obesity induced by high-fat diets. Probl Actuels Endocrinol Nutr. 7, 77-85 (1963).
  67. Samuel, V. T., et al. Mechanism of hepatic insulin resistance in non-alcoholic fatty liver disease. J Biol Chem. 279 (31), 32345-32353 (2004).
  68. Hu, S., et al. Dietary fat, but not protein or carbohydrate, regulates energy intake and causes adiposity in mice. Cell Metab. 28 (3), 415-431.e4 (2018).
  69. Goh, S. K., et al. Perfusion-decellularized pancreas as a natural 3D scaffold for pancreatic tissue and whole organ engineering. Biomaterials. 34 (28), 6760-6772 (2013).
  70. Levin, B. E. Factors promoting and ameliorating the development of obesity. Physiol Behav. 86 (5), 633-639 (2005).
  71. Yuan, C. X., et al. Electroacupuncture alleviates diabetic peripheral neuropathy through modulating mitochondrial biogenesis and suppressing oxidative stress. World J Diabetes. 16 (2), 93130(2025).
  72. Liu, Y., et al. Neuromechanical dimorphism of hypoglycemic effect of electroacupuncture. Neuroendocrinology. 113 (7), 679-691 (2023).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Obese Rat ModelsFatty PancreasPancreatic SteatosisHigh Fat DietDiet Induced ObesityLipid DepositionTissue HarvestingWestern BlottingParaformaldehyde FixationMetabolic Dysfunction

Related Articles