Yöntem makalesi

Memelilerde Kütlesel Ovulasyon: Lagostomus maximus'ta Doğal Spontan Poyovulasyon ve İndüklenmiş Polyovulasyonun Analiz Teknikleri

DOI:

10.3791/69653

⸱

6 Şubat 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1Centro de Estudios Biomédicos Básicos, Aplicados y Desarrollo (CEBBAD), Universidad Maimónides, 2Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET)

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, Lagostomus maximus'ta doğal ve indüklenmiş yumurtlamanın analiz edilmesi yöntemlerini açıklar; bunlara spontane, hormon kaynaklı veya seminal plazma kaynaklı yumurtlama sonrası oosit iyileşmesi de dahildir. Bu çalışma, yüksek poliovulatif bir memeli modelinde yumurtalık tepkisi ve üreme fizyolojisini incelemek için kapsamlı bir çerçeve sunar.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Güney Amerika ovalarındaki vizcacha, Lagostomus maximus, en yüksek yumurtlama oranına sahip memeli türü olarak kabul edilir ve bu oran 300'e kadar yumurtaya ulaşabilir. Bu olağanüstü poliovulasyon olgusu, kendine özgü üreme fizyolojisini yansıtan çeşitli metodolojik yaklaşımlarla incelenebilir. Doğal yumurtlama, üreme sezonunda yumurta salınımıyla değerlendirilir; bu da türün spontan yumurtlama mekanizmalarına dair içgörüler sağlar; yumurtalıklar yumurta kanalı ve rahim boynuzlarının yuyulmasıyla geri kazanılır. Ayrıca, gonadotropinler gibi dıştan hormonlarla yapılan deneysel yumurtlama indüksiyonu, yumurtalığın tepkisinin kontrollü değerlendirilmesine olanak tanır ve histrikognaat kemirgenlerde endokrin düzenlemesini anlamak için değerli bir model sunar. Üçüncü bir yaklaşım ise, ovulasyonun fizyolojik tetikleyicisi olarak otolog seminal plazmanın kullanılmasını içerir ve bu türde indüklenmiş ve spontan mekanizmaların birlikte var olduğunu vurgular. Bu teknikler birlikte, foliküler aboru ve oosit salınımının dinamiklerini aydınlatmakla kalmaz, aynı zamanda L. maximus'u üreme biyolojisi için karşılaştırmalı bir model olarak da ortaya koymakta ve memelilerde yumurtlama kontrolünü anlamada potansiyel translasyonel sonuçlar doğurmaktadır.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Güney Amerika ovaları vizcacha (Lagostomus maximus), olağanüstü üreme fizyolojisiyle seçilen bir hystricognath kemirgendir ve olağanüstü yumurtlama oranıyla bir döngüde 300 oosiaşabilen 1,2. Bu ayırt edici özellik, L. maximus'u memelilerde yumurtalık fonksiyonu ve yumurtlama kontrolünü inceleyen doğal bir model olarakkonumlandırmıştır. 3,4,5,6,7,8,9,10,11.

Tipik spontan yumurtlamaların aksine, L. maximus hem spontan hem de indüklenmiş yumurtlamamekanizmaları gösterir 2. Bu ikilik, büyük foliküler büyüme ve asenkron yumurtlama ile birleşince, yalnızca endokrin veya histolojik sonnoktalara dayanan geleneksel yaklaşımları zorlaştırır 4,12,13,14. Bu nedenle, oosit salınımının zamanlamasını ve büyüklüğünü doğru şekilde belirlemek için doğrudan, nicel tekniklerin kullanılması önemlidir.

Yetişkin dişi vizcachalar, Arjantin, Buenos Aires Eyaleti, Berazategui, Pereyra Iraola, Parque de Pereyra Silvestres (ECAS) bölgesinde (34°49′57" G, 58°06′12" B) tutulan doğal yerleşik popülasyondan elde edilmiştir. Doğal kaynaklar üzerindeki egemen hakların Buenos Aires Eyaleti'nin münhasır mülkiyeti olduğunu kabul ediyoruz. Yakalanan hayvan sayısı Buenos Aires Eyaleti Tarım Bakanlığı tarafından onaylandı. Dişiler, yıl boyunca farklı zamanlarda yuva girişlerine yerleştirilen canlı tuzaklarla yakalanmıştır.

Yakalama dönemleri, Llanos & Crespo15 tarafından belirlenen türdeki doğal üreme döngüsüne göre seçildi ve saha çalışmalarımız 7,8,10,14 temelinde geliştirildi. Tür, ana üreme sezonu yaz sonundan (Mart) başlayıp16, 17, 18 Eylül sonlarında bahar başına kadar uzanır ve özellikleyavrusunu kaybetmiş dişilerde Ekim ayında gerçekleşen ikincil üreme dönemi sunar. Buna uygun olarak, aşağıdaki çalışma grupları belirlendi: a) Grup I (N= 27): Şubat sonu - Nisan başı (hamile olmayan, ana üreme sezonunun başlangıcı); b) Grup II (N= 26): Eylül ortası-Ekim sonu (hamile olmayan, laktasyon sonrası ötürgen); Grup III (N=35): Aralık-Ocak (hamile olmayan, hormon kaynaklı yumurtlama); IV grup (N=7): Aralık-Ocak (hamile olmayan, seminal plazma kaynaklı yumurtlama).

Bu çalışma, L. maximus'ta yumurtlama analizi için çeşitli metodolojik yaklaşımları sunar ve doğrular: (1) doğrudan yumurta iyileşmesi yoluyla doğal yumurtlamanın değerlendirilmesi; (2) dış gonadotropinlerle yumurtlama indüksiyonu; ve (3) otolog seminal plazma ile yumurtlama indüklenmesi. Her teknik, foliküler dinamikler, oosit olgunlaşması ve yumurtlamayı yöneten düzenleyici mekanizmalar hakkında tamamlayıcı bilgiler sağlar.

Yumurta kanallarının ve rahim boynuzlarının yıkaması, oositlerin doğrudan iyileşmesini ve yumurtlamanın doğru nicelendirilmesini sağlar; bu da foliküler gelişim ve oosit morfolojisi ile korelasyonsağlar 19,20,21. Laboratuvar kemirgenlerindekullanılan protokollerden uyarlanan dış gonadotropinlerle hormonal uyarım, yumurtalık tepkisinin kontrollü değerlendirilmesini ve oosit salınımının zamanlamasını sağlar. Bu arada, ovulasyonun fizyolojik tetikleyicisi olarak otolog seminal plazmanın kullanımı - daha önce tavşanlar ve kövüler gibi indüklenmiş yumurtlamalarda(23,24,25) tanımlanmıştır - yumurtlamada yer alan endokrin ve parakrin faktörleri keşfetmek için yenilikçi bir yöntem sunmaktadır.

Bu tamamlayıcı metodolojileri entegre ederek, mevcut çalışma L. maximus'ta yumurtlama mekanizmalarının araştırılması için tekrarlanabilir bir çerçeve sağlar. Doğal ve indüklenmiş modellerin birleşimi, spontan foliküler alım, yumurtlama etkinliği ve seminal plazma aracılı yanıtlar arasında ayrım yapılmasına olanak tanır. Ayrıca, bu yaklaşımlar spontan partenogenetik oosit aktivasyonu ve "kusurlu" ile "öovülatörü" oositlerin birlikte var olması gibi fenomenleri ortaya koyarak foliküler seçilim ve oosit yeterliliğinin anlaşılmasına katkıdabulunur 2.

Türe özgü etkilerinin ötesinde, vizcacha modeli karşılaştırmalı üreme biyolojisi için daha geniş bir önem sunar. Karma yumurtlama stratejisi, indüklenmiş ve spontan yumurtlamaların özelliklerini birleştirir ve evcil türler ve insanlar dahil olmak üzere diğer memelilerdeki üreme süreçlerine değerliparalellikler sunar 7,14,26,27.

Burada detaylandırılan metodolojik protokoller, tekrarlanabilirliği sağlamak ve folliküler dinamikler, yumurtlama düzenlemesi ve hormonal manipülasyon gibi çeşitli deneysel bağlamlara uyum sağlamalarını kolaylaştırmak için tasarlanmıştır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada açıklanan deneysel protokoller, Deneysel Hayvanların Kullanımı ve Bakımı Kurumsal Komitesi (CICUAE, Universidad Maimónides, protokol numarası #6184) tarafından incelenip onaylanmıştır. Tuzaklama, taşıma ve ötenazi, laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımını düzenleyen tüm yerel, eyalet ve federal düzenlemelere uygun olarak eğitimli teknik personel tarafından gerçekleştirildi. Hayvancılık, Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH) Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve KullanımıYönergeleri 28 ve Amerikan Memeliler Derneği'nin (ASM) yabani memelilerin araştırma amaçlı kullanım yönergelerinitakip etti 29. Tüm deneyler ARRIVE 2.0 yönergelerineuygun 30. Kullanılan hayvan sayısını en aza indirmek için her türlü çaba gösterildi. Güney Amerika ovaları vizcacha (Lagostomus maximus), nesli tehlike altındaki bir tür olarak kabuledilmez.

1. Hormonal yumurtlama indüksiyonu

NOT: Bu bölüm, yakalanan vizcachas'ın hamile olmayan dişilerinde hormonal yumurtlama indükasyonunu sunmaktadır. Üç farklı protokol seçeneği tartışılır.

  1. Protokol A:
    1. 0 saat ve 24 saat içinde kas içi olarak 200 IU at koriyonik gonadotropini (eCG) verilsin, ardından 48 saatte 500 IU insan korionik gonadotropini (hCG) uygulanır.
    2. Dişileri ötenazi ile dinlendirin.
    3. Kadınları hCG uygulamasından 60-132 saat sonra ötenazi yapın (bkz. bölüm 3).
  2. Protokol B:
    1. 0 saat ve 24 saat içinde 200 IU eCG'yi kas içi olarak, ardından 72 saatte 1.000 IU hCG uygulanır.
    2. Dişileri ötenazi ile dinlendirin.
    3. Kadınları hCG uygulamasından 60-132 saat sonra ötenazi yapın (bkz. bölüm 3).
  3. Protokol C:
    1. 0 saat, 24 saat ve 48 saat içinde 250 IU eCG'yi kas içi uygulayın, ardından 72 saat içinde 2 mg domuz luteinizasyon hormonu (pLH) verin.
    2. Dişileri ötenazi ile dinlendirin.
    3. Kadınları pLH uygulamasından 60-132 saat sonra ötenazi yapın (bkz. bölüm 3 ve Tablo 1).
      NOT: Her gruptaki hayvanlar farklı zaman noktalarında (hCG uygulamasından sonra 60 saat ile 132 saat arasında değişen) ötenaziler edildi. Bu zamansal dağılım, bu türde yumurtlama döneminin uzun olduğunu doğrulamak için hayati öneme sahipti. Özellikle, olgun oositlerin özel koleksiyonunu hedefleyen deneyler için, ötenazi hCG sonrası 120 saat içinde tutarlı şekilde gerçekleştirildi.

2. Yumurtlamanın seminal plazma ile indüklenmesi

NOT: Hormon olarak hazırlanmış kadınlarda seminal plazmanın intrakas yoluyla yumurtlamaya indükleme kapasitesi test edilmektedir.

  1. Sperm toplama ve hazırlanma
    1. Giacchino32 tarafından tanımlandığı gibi, üreme aktif erkeklerden elektroejakülasyon yoluyla menini toplayın.
    2. Oda sıcaklığında 200 × g boyunca santrifüj ederek sperm hücreleri ve hücre kalıntıları pellet edilir.
    3. Süpernatantları (seminal plazma) penisilin ve streptomisin ile takviye edin ve kullanıma kadar -20 °C'de saklanın.
  2. Hamile olmayan kadınlarda seminal plazma ile yumurtlama indükasyonu
    1. Her dişi için 0 saatte 200 IU eCG intramusküler olarak ve 24 saat uygulanır.
    2. Son eCG dozundan 48 saat sonra kas içi seminal plazma enjekte edin.
    3. Dişileri ötenazi ile dinlendirin.
    4. Hayvanları seminal plazma enjeksiyonundan 72 saat sonra ötenazi yapın (bkz. bölüm 3).
      NOT: Kontrol kadınlarına seminal plazma yerine tuzlu çözelti enjekte edilen.

3. Anestezi, ötenazi ve üreme yolu toplama

NOT: Anestezi ve insancıl ötenazi yöntemleri kullanarak oosit ve histolojik analizler için sağlam üreme yolları elde edin.

  1. Üreticinin önerilerine ve yerleşik kurumsal protokollere uygun olarak uygulanan 13,5 mg/kg ketamin klorhidrat ve 0,6 mg/kg ksilazin klorhidrattan oluşan tek ve hesaplanmış intramusküler enjeksiyonla ötenazi başlatın.
  2. Derin anestezi, ağrıya yanıt vermemesiyle doğrulayın (pedal refleksleri).
  3. Hayvanı sırtüstü pozisyona getirin ve karın bölgesini sterilize edin.
  4. Karın boşluğunu cerrahi olarak açarak tüm karın organlarını tamamen açığa çıkar.
  5. Hayvanın genel durumunu belirlemek ve yumurtlama stigmalarının varlığıyla doğal veya hormon kaynaklı yumurtlama olduğunu doğrulamak için genel bir inceleme yapın.
  6. Serolojik test için üst vena kavanın doğrudan açılmasıyla kan örneği alın.
  7. Hayvana intrakardiyal olarak 0,5 mL/kg sodyum pentobarbital uygulanarak ötenazi yapın.
  8. Yumurtalıkları, yumurtalıkları ve rahim boynuzlarını dikkatlice disek ve çıkarın, yapılarına zarar vermemeye özen gösterin.
  9. Dokuları işlemeye kadar buz gibi soğuk fosfatla tamponlanmış tuzlu (PBS) içinde tutun (≤15 dakika).

4. Oosit iyileşmesi

NOT: Yumurtalıktan ve rahim boynuzundan yumurtaları nazikçe yıkama ile geri alın, böylece salınan gametlerin tam toplanmasını ve doku hasarını en aza indirin.

  1. Yıkama cihazını, %0,9 NaCl ile doldurulmuş 1 mL enşırıngaya sıkıştırılmış 26-G iğne, 4 mg/mL BSA, 100 μg/mL penisilin G ve 100 IU/mL streptomisin takviyesi ile takılarak hazırlayın.
  2. İğneyi her bir yumurtalığın infundibulumuna nazikçe sokun ve yavaşça yıkama çözeltisini enjekte edin.
  3. Distal yumurta kanalı ve rahim boynuzundan atık suyu steril Petri kaplarına toplayın.
  4. Yıkaymayı tekrarlayın, ta ki toplanan sıvı berrak ve görünür oositler veya hücresel kalıntılardan arınmış görünene kadar.
  5. Oositleri, mineral yağ altında 4 mg/mL BSA ve antibiyotik içeren 100 μL M2 ortam damlalarına aktarın.
  6. Damlaları stereomikroskop altında inceleyerek başarılı kurtarımı doğrulamak; sıvı içinde dağılmış kümülüs hücreleri olmayan serbest oositleri gözlemlemeyi bekleyin.
  7. Atık sıvı temiz görünene ve stereomikroskop altında ek yumurta gözlemlenmeyene kadar (genellikle her yumurtalık kanalı başına 3-5 yıkama) yıkamaya devam edin.
    NOT: Kurtarılan oositler düşük büyütme altında küresel ve saydam görünmelidir.
  8. Oositleri, bölüm 6'da tanımlandığı gibi morfolojik bütünlüğe göre sınıflandırın.

5. Oosit morfolojik değerlendirmesi

NOT: Kurtarılan oositlerin kalitesini sitoplazmik görünüm, zona pellucida uniformitesi ve nükleer olgunlaşma aşamasına göre değerlendirin.

  1. Küresel bir şekil, uniform zona pellucida, homojen saydam sitoplazma ve görünür germinal vezikül veya birinci kutup cisimi gösteriyorlarsa oositleri normal olarak tanımlayın.
  2. Sitoplazma koyu, granül veya parçalı görünüyorsa veya zona pellucida düzensizse oositleri anormal olarak tanımlayın.
  3. Nükleer olgunlaşma aşamasını germinal vezikül (GV), germinal vezikül parçalanması (GVBD) veya metafaz II (MII) olarak kaydet.

6. Oosit nükleer olgunlaşmasının ve meyotik iğren bütünlüğünün değerlendirilmesi

NOT: Nükleer olgunlaşma ve iğren morfolojisi, α-tubulinin immünoflüoresans boyaması ve kromatin karşı boyama ile değerlendirin.

  1. Oositleri %2 paraformaldehit (PFA) ile 20 dakika sabitle.
  2. PBS'de %0,2 Triton X-100 ile 40 dakika geçirin.
  3. Sonradan 20 dakika boyunca %2 PFA ile tamir edin ve PBS'de üç kez yıkayın (her biri 30 dakika).
  4. PBS'de %2 keçi serumu, %2 BSA, %2 süt tozu, 0,1 M glisin ve %0,01 Triton X-100 ile ≥ 1 saat bloklayın.
  5. Oositleri fare anti-α-tubulin antikoru ile gece boyunca 4 °C'de kuluçka yapın (1:200).
  6. PBS'de 30 dakika yıkayın ve florescein izotiosiyanat (FITC) ile konjuge edilmiş keçi anti-fare IgG (1/1000) ile karanlıkta 1 saat kuluçka yapın.
  7. 10 μg/mL Hoechst 33324 ile 10 dakika boyunca karşı boyama yapın ve %2 BSA içeren PBS ile yıkayın.
  8. Oositleri antifade ortamına monte edin ve konfokal mikroskop kullanarak görüntü alın.
  9. EZ-C1 yazılımı kullanarak görüntü yakalama ve işleme (EZ-C1 sürüm 3.90); Görüntü işleme yazılımında kontrast ve parlaklığı gerektiği gibi ayarlayın.
    NOT: Başarılı boyama, meiotik iğrenin (FITC) net yeşil floresan deseni ve Hoechst 33324 ile mavi nükleer karşı boyama ile gösterilir.

7. İstatistiksel analiz

NOT: Deneysel gruplar arasında ovulasyon yanıtlarını ve oosit kalitesini karşılaştırmak için nicel verileri analiz edin.

  1. Veriyi ortalama ± SD olarak ifade et.
  2. İki grup karşılaştırması için Student's t-testini kullanın.
  3. Tek yönlü ANOVA uygulayın, ardından Bonferroni'nin sonradan yapılan testini birden fazla karşılaştırma için yapın.
  4. P < 0.05 istatistiksel olarak anlamlı olarak değerlendirin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Doğal yumurtlama

Şubat sonundan Nisan ortasına kadar, birincil çiftleşme sezonuna denk gelen 27 dişiden (grup I) on ikisinin yumurtlamada olduğu gözlemlenirken, ikincil çiftleşme sezonunda (Eylül/Ekim) (grup II) yakalanan 26 dişiden 10'u yumurtlama gösterdi. Her iki yakalama döneminde de yaklaşık %40'lık yumurtlayan dişilerin benzer başarı oranı gözlemlendi. Yumurtalığın ampüller bölgesinde hiçbir durumda şişlik gözlemlenmedi ve ovulatif stigmata varlığına rağmen dişilerden oo...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada sunulan ovulasyonun vizcacha ovasında incelenmesi için sunulan protokol, hem doğal hem de deneysel olarak indüklenen yumurtlama olaylarını değerlendirmek için tekrarlanabilir bir çerçeve sağlar. Bu protokolün önemli avantajlarından biri, ova vizcacha'nın serbest bıraktığı olağanüstü yüksek sayıda oosi doğrudan niceliklendirme ve karakterize etme kapasitesidir; bu, diğer memeli modellerinde eşi benzeri görülmemiş bir özelliktir. Hormonal profillere veya histolojik kesitlere dayalı ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, raporlanan araştırmanın tarafsızlığına zarar verecek bir çıkar çatışması olmadığını belirtiyor.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Arjantin'deki Universidad Maimónides ve Arjantin'deki FONCYT-AMPCYT ajansının (PICT-2018-04619, NPL'ye verilen) iç mali yardımıyla desteklendi. Yazarlar, hayvanların yakalanmasına izin verdiği için Arjantin Buenos Aires Eyalet Hükümeti Tarım Bakanlığı'na özellikle minnettardır; hayvanların tuzaklanması ve ele alınmasında paha biçilmez yardımları nedeniyle Buenos Aires Eyaleti, Arjantin, Hayvanlar Hastanesi (ECAS) personeline; ve anestezi ve cerrahi işlemler sırasında yardımları için CCV-Universidad Maimónides'ten DVM Sergio Ferraris ve DVM Fernando Lange'ye.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Adobe PhotoshopAdobe Systems Inc., ABDYokGörüntü işleme
Sığır Serum Albümini (BSA)Sigma-Aldrich, ABDA9647Yıkama ortamında ve bloklama tamponu için kullanılır
Santrifüj (sperm işleme için)Eppendorf, Almanya5417RSeminal plazma hazırlığı
Konfokal Mikroskop (C1 Tutulma E800)Nikon Ltd., JaponyaYokOosit görüntüleme
Elektro-ejakülatörLaboratuvarda tasarlandı; evcil memelilerden caviomorf kemirgenlerde kullanılmak üzere uyarlanmıştırYokSperm koleksiyonu
Ötanil (sodyum pentobarbital, sodyum difenilhidantoin)Brouwer S.A., ArjantinYokÖtenazi
FITC ile bağlanmış keçi anti-fare IgG (AP124F)Chemicon, ABDAP124Fİkincil antikor
Hematoksilin-Eosin boyama kitiSigma-Aldrich, ABDÇeşitliHistoloji
Hoechst 33324Thermo Fisher Scientific, ABDH3570Nükleer boyama
Ketamin klorhidratHolliday Scott S.A., ArjantinYokAnestezi
Laminar akış başlığıThermo Scientific, ABDYokAseptik taşıma
Işık mikroskobuOlimpos, JaponyaBX51Histoloji
Lutropin-V (pLH)Bioniche Hayvan Sağlığı Bakımı, KanadaYokHormonal indüksiyon
M2 ortamıSigma-Aldrich, ABDM7167Oosit iyileşmesi
Mineral yağSigma-Aldrich, ABDM8410Oosit kültürü
Novormon 5000 (eCG)Syntex S.A., ArjantinYokHormonal indüksiyon
Ovusyn (hCG)Syntex S.A., ArjantinYokHormonal indüksiyon
Paraformaldehit (PFA, %2 ve %4)Sigma-Aldrich, ABD158127Takıntı
Penisilin GSigma-Aldrich, ABDP3032Medya için antibiyotikler
StereomikroskopLeica Microsystems, AlmanyaM80Oosit tanımı
StreptomisinGibco, Thermo Fisher Scientific, ABD11860038Medya için antibiyotikler
Kör uçlu şırınga (1 mL)BD Biosciences, ABD305219Yumurtalıklar/rahm yuyulması
Triton X-100Sigma-Aldrich, ABDT8787Permeabilizasyon
VectaShield montaj ortamıVector Laboratuvarları, ABDH-1000Floresans için montaj
Ksilazin klorhidratRichmond Laboratuvarları, ArjantinYokAnestezi
KsilenSigma-Aldrich, ABD534056Parafin bölümlerinin mumu giderilmesi
α-tubulin monoklonal antikor (fare anti-α-tubulin, sc-5286 B7)Santa Cruz Biyoteknoloji, ABDSC-5286 B7Meiotik iğne immünboyama için

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Weir, B. J. The reproductive physiology of the plains viscacha, Lagostomus maximus. J Reprod Fertil. 25, 355-363 (1971).
  2. Leopardo, N. P., Inserra, P. I. F., Giacchino, M., Caram, D. A., Willis, M. A., Vitullo, A. D. Polyovulation in the South American plains vizcacha, revisited: coexistence of spontaneous and induced ovulation. J Exp Zool A Ecol Integr Physiol. 343 (6), 724-739 (2025).
  3. Caram, D. A., Inserra, P. I. F., Vitullo, A. D., Leopardo, N. P. Autophagy favors survival of corpora lutea during the long-lasting pregnancy of the South American plains vizcacha, Lagostomus maximus (Rodentia Caviomorpha). Sci Rep. 14 (1), 11220(2024).
  4. Cortasa, S. A., et al. Achieving full-term pregnancy in the vizcacha relies on a reboot of luteal steroidogenesis in mid-gestation (Lagostomus maximus, Rodentia). PLoS One. 17, e0271067(2022).
  5. Flamini, M. A., Barbeito, C. G., Gimeno, E. J., Portiansky, E. L. Histology, histochemistry and morphometry of the ovary of the adult plains viscacha (Lagostomus maximus) in different reproductive stages. Acta Zool (Stockh). 90, 390-400 (2009).
  6. Fraunhoffer, N. A., et al. Hormonal behavior correlates with follicular recruitment at mid-gestation in the South American plains vizcacha, Lagostomus maximus (Rodentia, Caviomorpha). Gen Comp Endocrinol. 250, 162-174 (2017).
  7. Jensen, F., Willis, M. A., Albamonte, M. S., Espinosa, M. B., Vitullo, A. D. Naturally suppressed apoptosis prevents follicular atresia and oocyte reserve decline in the adult ovary of Lagostomus maximus (Rodentia, Caviomorpha). Reproduction. 132, 301-308 (2006).
  8. Jensen, F., Willis, M. A., Leopardo, N. P., Espinosa, M. B., Vitullo, A. D. The ovary of the gestating South American plains vizcacha (Lagostomus maximus): suppressed apoptosis and corpora lutea persistence. Biol Reprod. 79, 240-246 (2008).
  9. Leopardo, N. P., Jensen, F., Willis, M. A., Espinosa, M. B., Vitullo, A. D. The developing ovary of the South American plains vizcacha, Lagostomus maximus (Mammalia, Rodentia): massive proliferation with no sign of apoptosis-mediated germ cell attrition. Reproduction. 141, 633-641 (2011).
  10. Leopardo, N. P., Vitullo, A. D. Early embryonic development and spatiotemporal localization of mammalian primordial germ cell-associated proteins in the basal rodent Lagostomus maximus. Sci Rep. 7 (1), 594(2017).
  11. Leopardo, N. P., Velazquez, M. E., Cortasa, S., González, C. R., Vitullo, A. D. A dual death/survival role of autophagy in the adult ovary of Lagostomus maximus (Mammalia-Rodentia). PLoS One. 15 (5), e0232819(2020).
  12. Weir, B. J. Reproductive Characteristics of Hystricogmorph Rodents. The Biology of Hystricomorph Rodents. , Symposia of the Zoological Society of London. London, UK. (1974).
  13. Dorfman, V. B., et al. Variation in progesterone receptors and GnRH expression in the hypothalamus of the pregnant South American plains vizcacha Lagostomus maximus (Mammalia, Rodentia). Biol Reprod. 89 (5), 115(2013).
  14. Inserra, P. I. F., Leopardo, N. P., Willis, M. A., Freysselinard, A. L., Vitullo, A. D. Quantification of healthy and atretic germ cells and follicles in the developing and postnatal ovary of the South American plains vizcacha, Lagostomus maximus: evidence of continuous rise of the germinal reserve. Reproduction. 147, 199-209 (2014).
  15. Llanos, A. C., Crespo, J. A. Ecología de la vizcacha (Lagostomus maximus maximus Blainv.) en el nordeste de la provincia de Entre Ríos. Rev Investig Agríc. 6, 289-378 (1952).
  16. Weir, B. J. The management and breeding of some more hystricomorph rodents. Lab Anim. 4 (1), 83-97 (1970).
  17. Branch, L. C., Villarreal, D., Fowler, G. S. Recruitment, dispersal, and group fusion in a declining population of the plains viscacha (Lagostomus maximus; Mammalia, Chinchillidae) in scrub habitat of central Argentina. J Mammal. 74 (1), 9-20 (1993).
  18. Spotorno, A. E., Patton, J. L. Superfamily Chinchilloidea Bennett 1833. Mammals of South America. , University of Chicago Press. Chicago, IL, USA. (2015).
  19. Baker, T. G. A quantitative and cytological study of germ cells in human ovaries. Proc R Soc Lond B Biol Sci. 158 (972), 417-433 (1963).
  20. Forabosco, A., Sforza, C., De Pol, A., Vizzotto, L., Marzona, L., Ferrario, V. F. Morphometric study of the human neonatal ovary. Anat Rec. 231, 201-208 (1991).
  21. Hirshfield, A. N. Development of follicles in the mammalian ovary. Int Rev Cytol. 124, 43-101 (1991).
  22. Suzuki, O. Sequence comparison of gonadotropin subunits in laboratory animals for improvement of superovulation techniques. Kansai J Lab Anim. 27, 72-75 (2006).
  23. Chen, B. X., Yuen, Z. X., Pan, G. W. Semen-induced ovulation in the Bactrian camel (Camelus bactrianus). J Reprod Fertil. 73, 335-339 (1985).
  24. El Allali, K., El Bousmaki, N., Ainani, H., Simonneaux, V. Effect of the camelid's seminal plasma ovulation-inducing factor/β-NGF: a Kisspeptin target hypothesis. Front Vet Sci. 4, 99(2017).
  25. García-García, R. M., et al. β-Nerve growth factor identification in male rabbit genital tract and seminal plasma and its role in ovulation induction in rabbit does. Ital J Anim Sci. 17, 442-453 (2017).
  26. Weir, B. J. The reproductive organs of the female plains viscacha, Lagostomus maximus. J Reprod Fertil. 25, 365-373 (1971).
  27. Vitullo, A. D., Inserra, P. I. F., Leopardo, N. P., Halperin, J., Dorfman, V. B. The Plains Vizcacha. Assisted Reproduction in Wild Animals of South America. , CRC Press. Boca Raton, FL, USA. (2023).
  28. National Research Council Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , 8th edn, National Academies Press. Washington, DC, USA. (2011).
  29. Sikies, R. S., et al. Guidelines of the American Society of Mammalogists for the use of wild mammals in research. J Mammal. 92 (1), 235-253 (2011).
  30. Percie du Sert, N., et al. The ARRIVE guidelines 2.0: updated guidelines for reporting animal research. PLoS Biol. 18 (7), e3000410(2020).
  31. Roach, N. Lagostomus maximus. The IUCN Red List of Threatened Species. , (2016).
  32. Giacchino, M. Caracterización del proceso de implantación en Lagostomus maximus: un mamífero con poliovulación y reabsorción embrionaria selectiva. [Doctoral thesis]. , Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad de Buenos Aires. Argentina. (2017).
  33. Kershaw-Young, C. M., Druart, X., Vaughan, J., Maxwell, W. M. C. β-Nerve growth factor is a major component of alpaca seminal plasma and induces ovulation in female alpacas. Reprod Fertil Dev. 24, 1093-1097 (2012).
  34. Kubiak, J. Z. Mouse oocytes gradually develop the capacity for activation during the metaphase II arrest. Dev Biol. 136, 537-545 (1989).
  35. Soede, N. M., Noordhuizen, J. P. T. M., Kemp, B. The duration of ovulation in pigs, studied by transrectal ultrasonography, is not related to early embryonic diversity. Theriogenology. 38 (4), 653-666 (1992).
  36. Nicoll, M. E., Racey, P. A. Follicular development, ovulation, fertilization and foetal development in tenrecs (Tenrec eucaudatus). J Reprod Fertil. 74, 47-55 (1985).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Poliovulasyon AnaliziDo al Ovulasyonnd klenmi OvulasyonOosit Geri Kazan mGonadotropin Stim lasyonuSeminal Plazma TetiklemesiFolik ler Rekr tmanreme FizyolojisiMemeli Ovulasyonu
Video yakında

İlgili makaleler