Method Article

Terfezia claveryi'nin In vitro biyoaktivite profilleri üzerindeki farklı ekstraksiyon yöntemlerinin etkisi

DOI:

10.3791/69950

⸱

March 20th, 2026

 ,  ,  ,  , 
1Department of Biophysics, Department of Basic Medical Sciences, Faculty of Medicine, Kirsehir Ahi Evran University, 2Department of Genetics and Bioengineering, Faculty of Engineering and Architecture, Kirsehir Ahi Evran University, 3Department of Physiology, Gulhane Faculty of Medicine, University of Health Sciences, 4Department of Medical Services and Techniques, Medical Laboratory Techniques Program, Vocational School of Health Services, Kirsehir Ahi Evran University, 5Department of Field Crops, Faculty of Agriculture, Kirsehir Ahi Evran University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Terfezia claveryi ekstraktlarının in vitro biyoaktivitesi, biyofiziksel çıkarma yöntemi ve çözücü polaritesine bağlıydı. Macerasasyon destekli ekstraksiyondan (MAE) elde edilen su ekstraktı en güçlü antioksidan aktiviteye sahipken, Soxhlet ekstraksiyonu (SE) ekstraktı SH-SY5Y hücrelerinde daha yüksek sitotoksisite indükte olmuştur. Bu sonuçlar, Terfezia claveryi özlerinin in vitro biyoaktivitesinde yönteme bağlı açık farklılıkları göstermektedir.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Terfezia claveryi, geleneksel olarak kurak bölgelerde tüketilen yenilebilir bir çöl trüfüdür. Son yıllarda, potansiyel antioksidan, antimikrobiyal ve terapötik özellikleri nedeniyle giderek artan bilimsel ilgi çekici olup, gıda ve sağlıkla ilgili alanlarda olası uygulamaları önermektedir. Ancak, biyolojik potansiyeline dair artan kanıtlara rağmen, farklı ekstraksiyon stratejilerinin biyoaktif bileşiklerin geri kazanımı üzerindeki etkisi ve Terfezia claveryi'nin in vitro biyoaktivite profili literatürde henüz netleşmemiştir. Bu çalışmada, farklı ekstraksiyon yöntemleri ve farklı polaritedeki çözücülerle elde edilen Terfezia claveryi özlerinin in vitro biyoaktivitesi değerlendirildi. Ekstraksiyon verimi belirlendi ve elde edilen ekstraktlar, yerleşik test sistemleri kullanılarak antioksidan, antimikrobiyal, antibiyofilm ve sitotoksik aktiviteler açısından değerlendirildi. Antioksidan kapasitesi 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH), 2,2′-azino-bis (3-etilbenzotiazolin-6-sülfonik asit) (ABTS) ve ferrik indirgenci antioksidan güç (FRAP) testleriyle ölçüldü; sitotoksik etkiler ise SH-SY5Y nöroblastom hücrelerinde araştırıldı. Ekstraksiyon verimi hem yönteme hem de çözücü polaritesine bağlı olarak değişiyordu; en yüksek verim, ultrason destekli ekstraksiyon (BAE) yöntemiyle hazırlanan sulu ekstrakttan elde edildi (%18,40). Antioksidan aktivitenin ekstraksiyon yöntemine bağlı olarak önemli farklılıklar gösterdiği belirlendi ve maserasyon destekli ekstraksiyon (MAE) yöntemiyle elde edilen sulu ekstraktlar, fenolik bileşikler açısından zengin bir profil ve en güçlü radikal temizlik kapasitesine sahipti. Bu ekstraktın LC-MS/MS analizi dokuz fenolik bileşiğin varlığını ortaya koydu; Baskın bileşenler olarak kinik asit ve klorojenik asit tespit edildi. Buna karşılık, Soxhlet kaynaklı ekstraktlar SH-SY5Y hücrelerinde daha fazla sitotoksik etki yaratmıştır. Antimikrobiyal ve antibiyofilm yanıtları, ekstraksiyon yöntemleri arasında nispeten sınırlı bir varyasyon gösterdi ve bu da bu aktiviteler için ekstraksiyon stratejisine daha zayıf bir bağımlılık gösterdi. Genel olarak, bu bulgular biyofiziksel ekstraksiyon yöntemi ve çözücü seçiminin Terfezia claveryi özlerinin in vitro biyoaktivite profilinin kritik belirleyicileri olduğunu, antioksidan ve sitotoksik aktivitelerde belirgin etkiler gözlemlediğini göstermektedir.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sağlığı iyileştirmek ve hastalıkları önlemek ve tedavi etmek için çeşitli mantar türlerinin kullanımı 1,2,3 tarihlerine kadar uzanır. Makromantarlar genellikle iki gruba ayrılır: Epigeous (mantarlar) ve hipogeous (trüfler)4. Çöl trüfü olarak bilinen Terfezia claveryi (T. claveryi), Terfezia5 cinsine ait dünya çapında tanınan ve yenilebilir bir trüf türüdür. T. claveryi, Helianthemum türlerinin yaygın olduğu kurak ve yarı kurakbölgelerde yaygın olarak bulunur 6,7,8,9,10,11. Son yıllarda, kanser ve nörodejeneratif bozukluklar gibi kronik hastalıkların küresel yükü önemli ölçüde artmış ve bu da yeni, güvenli ve etkili tedavi ajanlarına acil ihtiyacı ortaya koymaktadır. Küresel sağlık raporlarına göre, kanser dünya çapında ölüm nedenlerinden biri olmaya devam ederken, yaşlanan nüfusla birlikte nörodejeneratif hastalıklar da artmaya devam ediyor. Bu artan halk sağlığı sorunu göz önüne alındığında, mantarlardan ve tıbbi bitkilerden elde edilen doğal ürünlerin biyoaktif bileşiklerin potansiyel kaynakları olarak araştırılması önemli bir araştırma önceliğihaline gelmiştir 12.

Paralel olarak, antimikrobiyal direncin hızlı ortaya çıkışı küresel sağlık için başka büyük bir tehdit oluşturmaktadır. İlaç direnci, geleneksel antibiyotiklerin etkinliğini önemli ölçüde azaltmış ve alternatif antimikrobiyal stratejilere acil bir ihtiyaçyaratmıştır 13. Doğal kaynaklardan elde edilen ikincil metabolitler, özellikle fenolik ve polifenolik bileşikler, çeşitli antimikrobiyal mekanizmaları ve direnç geliştirme eğilimlerinin düşük olması nedeniyle giderek artan ilgiçekmektedir 14. Oksidatif stres, kanser, nörodejeneratif bozukluklar ve metabolik sendromlar dahil olmak üzere birçok kronik hastalığın temelinde yatan temel bir mekanik faktördür. Reaktif oksijen türlerinin (ROS) aşırı üretimi, DNA hasarı, lipid peroksidasyonu ve protein oksidasyonuna yol açarak hücresel homeostazı bozabilir. Bu bağlamda, serbest radikalleri toplayan ve redoks dengesini düzenleyebilen doğal antioksidanlar, oksidatif hasarı ve hastalık ilerlemesini azaltmak için umut vadeden ajanlar olarakkabul edilir 15.

Trüfler, doymamış yağ asitleri, proteinler, mineraller, vitaminler, amino asitler, fenolikler ve polifenoller açısından zengindir; bu bileşenler antimikrobiyal, antioksidan ve antikanser özellikleriyleilişkilendirilmiştir 16,17,18,19,20,21,22,23,24. Antioksidan kapasiteleri, serbest radikalleri toplamadakietkinlikleriyle ilişkilendirilmiştir 25,26,27. Trüf türleri arasında T. claveryi, yenilebilir yapısı, bölgesel ekonomik değeri ve bildirilen fenolik bileşikler açısından özellikle dikkatçekicidir 23. Geleneksel tüketimi ve biyolojik etkinliğiyle ilgili ortaya çıkan kanıtlara rağmen, ekstraksiyon stratejilerinin kimyasal bileşimini ve biyolojik etkilerini nasıl etkilediğini inceleyen kapsamlı çalışmalar sınırlı kalmaktadır.

Trüflerden biyolojik olarak aktif bileşiklerin geri kazanılması, ekstraksiyon parametreleri, uygulamalı ekstraksiyon tekniği ve çözücü polaritesi dahil olmak üzere, güçlü şekilde etkilenir. Ultrason destekli ekstraksiyon (BAE), maserasyon destekli ekstraksiyon (MAE) ve Soxhlet ekstraksiyonu (SE) gibi biyofiziksel ekstraksiyon yöntemleri, polar bileşikler için enerji girdisi, ekstraksiyon verimliliği ve seçicilik açısından önemli farklılıklargösterir 28. Ancak, çoğu araştırma tek bir ekstraksiyon yöntemine veya sınırlı çözücü sistemlerine dayanmış ve bu yöntemlerin T. claveryi'nin in vitro biyolojik aktivite profili üzerindeki etkilerini karşılaştırmalı şekilde ele alan çalışmalar sınırlıdır. Bu nedenle, bu çalışma, T. claveryi özlerinin in vitro biyolojik aktivitelerini değerlendirmek için farklı polaritedeki çözücüler kullanılarak birden fazla biyofiziksel ekstraksiyon yöntemini sistematik olarak karşılaştırmaktadır. Ekstraksiyon yöntemi ve çözücü polaritesinin biyolojik aktivitelerde yönteme bağlı farklılıklara yol açacağı varsayımlıydı. Buna göre, çalışmanın amaçları şunlardır: (i) farklı yöntemler ve çözücüler arasındaki ekstraksiyon verimlerini karşılaştırmak, (ii) antioksidan ve sitotoksik aktivitelerdeki yönteme bağlı varyasyonları değerlendirmek ve (iii) antimikrobiyal ve antibiyofilm yanıtlarını, ekstraksiyon stratejisine duyarlılıklarını dikkate alarak incelemek.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NOT: T. claveryi ekstraktlarının hazırlanması ve analizi için genel deneysel iş akışı Şekil 1'de şematik olarak özetlenmiştir. Çalışmada kullanılan tüm materyaller, Materyaller Tablosu'nda açıklanmıştır.

1. Mantar materyali doğrulama ve hazırlanması

  1. Materyalin toplanması ve işlenmesi
    NOT: Mayıs 2023'te Türkiye'nin Orta Anadolu, Kırşehir Eyaleti'nde bozkır ve kumlu, tarım amaçlı olmayan topraklardan taze T.claveryi trüfleri toplanmıştır. Örnekleme üç farklı konumda gerçekleştirildi: Dedeli Köyü (38°54′15.8" K, 34°06′40.3" D; ~1050 m deniz seviyesinden yüksek), Buyukkayapa Köyü (38°53′45.1" K, 34°19′37.5" D; ~1020 m deniz seviyesinden yüksek) ve Akcaagıl Köyü (39°01′39.9" K, 34°12′39.8" D; ~1100 m deniz seviyesinden yüksek). Toplama alanları, soğuk kışlar, sıcak ve kuru yazlar ve yıllık ortalama yağış miktarı yaklaşık 380–420 mm olan yarı kurak kıtasal iklimle karakterizedir. Tüm örnekler, doğal meyve mevsiminde, potansiyel insan kaynaklı kirlenme potansiyelini en aza indirmek için yakın zamanda tarımsal faaliyetin olmadığı alanlardan toplanmıştır.
    1. Temiz ve zarar görmemiş trüfleri seçin, soyun ve damıtılmış suyla üç kez yıkayın.
    2. Örnekleri küçük parçalara ayırın ve sabit bir ağırlık elde edilene kadar (yaklaşık 20 gün) kölgede kurutulun.
    3. Kurumuş malzemeyi mekanik bir öğütücüyle ezin ve 328 mikron (50 ağ) elek üzerinden geçirin.
    4. İşlenen örnekler, daha fazla analiz yapılana kadar serin, kuru ve karanlık bir ortamda, oda sıcaklığında zip-lock poşetlerde saklanır.
  2. T. claveryi'nin moleküler tanımlanması
    1. Moleküler tanımlama için kurutulmuş T. claveryi örneklerinden genomik DNA izole edin.
    2. DNA miktarını ve saflık spektrofotometrik olarak değerlendirin.
    3. Evrensel primerler ITS1 (5′-TCCGTAGGTGAACCTGGG-3′) ve ITS4 (5′-TCCTCCGCTTATTGATATTGATATGC-3′) kullanılarak iç transkripsiyonlu aralı (ITS) bölgesini amplifikasyonlayarak tür tanımlama polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) gerçekleştirin.
    4. PCR amplifikasyon ürünlerini, 1x TAE tamponunda hazırlanmış ve etidyum bromid boyama ile UV aydınlatması altında görselleştirilen %1,5 agaroz jel üzerinde elektroforez ile çözebilir.
    5. Tek bantlı PCR ürünlerini üreticinin talimatlarınagöre arındırın 29. Sanger dizileme için arındırılmış amplikonları konu edin.
    6. İleri ve geri dizileri, contig assembly program (CAP) algoritması kullanılarak uzlaşma dizilerine birleştirin.
    7. Tür kimliği, kamuya açık veri tabanlarında bulunan referans dizileriyle uzlaşı ITS dizisi karşılaştırılmasıyla doğrulandı.
      NOT: T. claveryi'nin bir kupon örneği laboratuvar koleksiyonunda gelecekte referans için tutulmuştur. Tür tanımlama, ITS tabanlı moleküler analizle doğrulandı (Ek Dosya 1).

2. Mantar malzemesinin hazırlanması ve çıkarılması

  1. T. Claveryi özlerinin hazırlanması
    1. Yaklaşık 30 g kurutulmuş T. claveryi tozu ağırlığını koyun.
    2. Tüm ekstraksiyon yöntemlerinde sabit katı sıvı oranını korumak için 150 mL çözücü (metanol, aseton, n-heksan, etil asetat veya damıtılmış su) ekleyin.
    3. Tüm ekstraksiyon prosedürleri için analitik kalitede çözücüler kullanın.
    4. Her ekstraktı azaltılmış basınç altında nitelikli filtre kağıdı ile filtreleyin.
    5. Filtreleri 30–45 °C sıcaklıkta azaltılmış basınç altında döner bir evaporatör kullanarak yoğunlaştırın.
    6. Konsantre ekstraktları dondurarak kurutarak (liyofilize) ve tam çözücü çıkarımı sağlanana kadar.
    7. Kurutulmuş ham özleri daha fazla analiz yapılana kadar −20 °C'de saklanın.
      NOT: Tüm örneklerde aynı ekstraksiyon sonrası işlem adımlarını uygulayarak metodolojik tutarlılık ve karşılaştırılabilirlik sağlanır.
  2. Biyofiziksel çıkarma yöntemleri
    1. Maserasyon destekli ekstraksiyon (MAE)
      1. Toz halindeki T. claveryi örneğini kapalı bir ekstraksiyon kabına yerleştirin.
      2. Seçilen çözücüyü sabit bir çözücü-katı oranı koruyarak ekleyin.
      3. Karışımı oda sıcaklığında, karanlık koşullarda 72 saat kuluçka edin.
      4. Çözücü buharlaşmasını önlemek için kapları kapalı tutun.
      5. Maserasyon döneminde harici ajitasyon uygulamayın.
      6. Karışımın ekstraksiyon süresinin sonunda çökmesine izin verin.
      7. Daha fazla işlemeden önce ekstraktı filtreleyin.
    2. Soxhlet çıkarımı (SE)
      NOT: Doğru kondansatör suyu dolaşımını sağlayın ve reflü sırasında kuru ısınmadan kaçının.
      1. Toz halindeki örneği selüloz ekstraksiyon tırtığına yerleştirin.
      2. Thible'ı, yuvarlak tabanlı bir şişeye bağlı Soxhlet çıkarma odasının içine yerleştirin.
      3. Seçilen çözücüyü masaya katı ile sabit bir çözücü-katı oranını koruyarak ekleyin.
      4. Solventi termostat kontrollü bir ısıtma mantosu kullanarak reflüye ısıtın.
      5. 24 saat boyunca sürekli ekstraksiyonu sürdürün.
      6. Her çözücünün kaynama noktasında ekstraksiyon sıcaklığını korumak (n-heksan: 68,7 °C; etil asetat: 77,1 °C; metanol: 64,7 °C; aseton: 56 °C; damıtılmış su: 100 °C).
    3. Ultrason destekli ekstraksiyon (BAE)
      NOT: Sonikasyon sırasında aşırı ısınmayı önlemek için sıcaklığı sürekli izleyin.
      1. Toz halindeki T. claveryi örneğini ekstraksiyon kabına yerleştirin.
      2. Seçilen çözücüyü sabit bir çözücü-katı oranı koruyarak ekleyin.
      3. Karışımı sabit 35 kHz frekansta ve 520 W çıkış gücünde 25 dakika boyunca sonikle geçirin.
      4. Ekstraksiyon sıcaklığını yaklaşık 30 °C olarak tutun.
      5. Sonikasyon sırasında sıcaklığı 25–28 °C arasında tutmak için 5 dakikalık aralıklarla buz ekleyin.
  3. Çıkarma verimliliği
    1. Kurutulmuş mantar maddesini (Wp) ekstraksiyondan önce tartın.
    2. Tamamen çözücü çıkarıldıktan sonra kurutulmuş ham ekstraktı (Wext) tartın.
    3. Çıkarma verimliliğini Denklem (1) kullanarak hesaplayın.
      figure-protocol-1(1)
    4. Her kurutulmuş ham ekstraktı ilgili çözücüde tekrar çözerek standart 10 mg/mL konsantrasyonda stok çözeltisi hazırlanır.
    5. Her in vitro biyoaktivite deneyinden önce stok çözeltilerini taze hazırlayın.
      NOT: Tüm ekstrakt konsantrasyonlarını standartlaştırarak sonraki biyoaktivite testlerinde karşılaştırılabilir doz sağlanmasını sağlayın.

3. Antioksidan aktivite belirleme

  1. DPPH, ABTS ve FRAP testleri kullanarak antioksidan aktivite analizi yapın.
  2. Taze hazırlanmış stok çözeltilerinden 0,25 ila 1,0 mg/mL arasında beş farklı özet konsantrasyonu hazırlayın.
  3. Tüm ölçümleri üç adet olarak tekrarlanabilirliği sağlamak için yapın.
  4. Mikroplaka okuyucu kullanarak soğurma değerlerini spektrofotometrik olarak kaydedin.
    NOT: Tüm testleri küçük değişikliklerle yerleşik literatür protokollerine uygun olarak gerçekleştirin.
  5. DPPH radikal temizlik aktivitesi
    NOT: T. claveryi ekstraktlarının DPPH radikal temizlik aktivitesi, literatürde tanımlanan yönteme uygun olarak değerlendirildi ve küçükdeğişikliklerle 30. DPPH çözeltisi ve reaksiyon karışımlarını ışığa maruz kalmadan koruyun.
    1. %70 metanol içeren bir DPPH çözeltisi hazırlayın.
    2. DPPH çözümünü 517 nm'de 1.00 ± 0.02 emilimle ayarlayın.
    3. 50 μL ekstraktı farklı konsantrasyonlarda mikroplaka kuyusuna pipet yapın.
    4. Her kuyuya 250 μL DPPH çözeltisi ekleyin.
    5. Reaksiyon karışımını oda sıcaklığında karanlıkta 30 dakika kuluçka yapın.
    6. Mikroplaka spektrofotometresi kullanarak 517 nm'de absorbansı ölçün.
    7. Metanolü negatif kontrol olarak, askorbik asit ise pozitif kontrol olarak kullanın.
    8. Doz-yanıt eğrileri oluşturun ve radikal toplama aktivitesini nicelikle ölçemek için IC₅₀ değerlerini hesaplayın.
  6. ABTS katyon radikal temizlik aktivitesi
    NOT: ABTS radikal temizlik testini, literatürde tarif edilen yönteme uygun olarak, küçük değişikliklerlegerçekleştirin 31. ABTS⁺ radikal çözeltisini en az 16 saat önce hazırlayın ve ışığa karşı koruyun.
    1. ABTS radikal çözeltisini, reaksiyon karışımını oda sıcaklığında karanlıkta 16 saat kuluçka haline getirerek üretin.
    2. Analiz öncesi 1 mL ABTS çözeltisi 80 mL etanol ile seyreltin.
    3. Sulandırılmış ABTS çözeltisinin emilimini 734 nm'de 0.80 ± 0.02'ye ayarlayın.
    4. 50 μL ekstraktı farklı konsantrasyonlarda mikroplaka kuyusuna pipet yapın.
    5. Her kuyuya 250 μL ABTS çözeltisi ekleyin.
    6. Karışımı oda sıcaklığında 10 dakika kuluçka yapın.
    7. 734 nm'de mikroplaka spektrofotometre kullanarak absorbansı ölçün.
    8. Doz-yanıt eğrileri oluşturun ve IC₅₀ değerlerini hesaplayın.
  7. Ferrik indirgenç antioksidan gücü (FRAP) testi
    NOT: FRAP testi, literatürde önerilen yönteme uygun olarak, küçükdeğişikliklerle 32 yapılacaktır. FRAP reaktifini kullanımdan önce taze hazırlayın ve reaksiyon karışımını ışıktan koruyun.
    1. FRAP reaktifini referans edilen protokole göre hazırlayın.
    2. Farklı konsantrasyonlarda 20 μL ekstraktı mikroplaka kuyusuna pipetleyin.
    3. 280 μL taze hazırlanmış FRAP reaktifi ekleyin.
    4. Reaksiyon karışımını oda sıcaklığında karanlıkta 45 dakika kuluçka edin.
    5. Mikroplaka spektrofotometresi kullanarak 593 nm'de absorbansı ölçün.
    6. Trolox'u standart olarak kullanarak bir kalibrasyon eğrisi oluşturun.
    7. Ekstrakt başına mg Trolox eşdeğeri (TE) olarak antioksidan kapasitesini ifade edin.

4. Toplam fenolik içerik (TPC) analizi

NOT: Literatürde açıklandığı gibi Folin–Ciocalteu yöntemiyle T. claveryi ekstraktlarının toplam fenolik içeriğini (TPC) küçük değişikliklerlebelirleyin 33. Kuluçka sırasında reaksiyon karışımlarını ışıktan koruyun. Sodyum karbonat çözeltisini taze olarak hazırlayın.

  1. Taze hazırlanmış stok çözeltilerinden 1 mg/mL konsantrasyonda ekstrakt çözeltileri hazırlayın.
  2. 25 μL ekstraktı mikroplaka kuyusuna pipetleyin, 75 μL damıtılmış su ekleyin ve ardından 25 μL Folin–Ciocalteu reaktifi ekleyin.
  3. Karışımı oda sıcaklığında 6 dakika kuluçka edin.
  4. Her kuyuya 100 μL %7 (w/v) sodyum karbonat çözeltisi ekleyin.
  5. Reaksiyon karışımını oda sıcaklığında karanlıkta 90 dakika kuluçka edin.
  6. 665 nm'de mikroplaka spektrofotometresi kullanarak absorbansı ölçin.
  7. Gallik asit kullanarak bir kalibrasyon eğrisi hazırlayın ve toplam fenolik içeriği hesaplayın; sonuçları mg gallik asit eşdeğerleri (GAE) olarak ifade ederek.

5. LC-MS/MS kullanılarak fitokimyasal analiz

NOT: Daha önce yayımlanmış kromatografik yöntemlere uygun olarak küçük değişikliklerle LC-MS/MSanalizi yapılmalıdır 34. Tüm örnekleri ve mobil fazları 0,22 μm membran filtrelerinden geçirin ve analiz öncesi mobil fazları dezenfeksiyonla temizleyin.

  1. Nicel fitokimyasal profilleme için en yüksek toplam fenolik içeriği gösteren ekstraktı seçin.
  2. 30°C'de tutulan ters faz C18 kolonu kullanılarak kromatografik ayrım yapılacaktır.
  3. (A) %0,1 formik asit deiyonize suda ve (B) %0,1 formik asit asetonitrile göre hareketli faza hazırlanın, akış hızını 0,4 mL/da'ya ayarlayın, enjeksiyon hacmini 5 μL'ye ayarlayın ve toplam çalışma süresini 17 dakikaya ayarlayın.
  4. Elektrosprey iyonizasyon (ESI) koşullarında azotu kurutma, kılıf ve nebulizasyon gazı olarak kullanarak kütle spektrometrik tespiti gerçekleştirin.
  5. Kurutma gazı sıcaklığını 12 L/dakika akış hızıyla 350 °C'ye ayarlayın, kılıf gazı sıcaklığını 250 °C'ye ayarlayın ve 5 L/dakika akış hızını ayarlayın ve nebulizör basıncını 55 psi'ye ayarlayın.
  6. Her fenolik standart için harici kalibrasyon eğrileri hazırlayın ve ilgili kalibrasyon eğrileriyle analizleri nicelikle ölçün.

6. Antimikrobiyal aktivite testi

NOT: Yerleşik mikrobiyolojik protokollere uygun olarak agar kuyu difüzyon yöntemiyle antibakteriyel aktiviteyi değerlendirin. Tüm mikrobiyolojik işlemleri aseptik koşullarda bir biyogüvenlik kabinde gerçekleştirin. Kullanımdan önce ve sonra tüm malzemeleri sterilize edin.

  1. Antimikrobiyal test için aşağıdaki tip suşları seçin: Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212, Bacillus cereus ATCC 14579, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Listeria monocytogenes ATCC 19115, Acinetobacter baumannii ATCC 17978, Shigella dysenteriae ATCC 13313, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 ve Enterobacter aerogenes ATCC 13048.
  2. Her bakteri suşunu tripton soya suyu (TSB) içine aşılayın ve optimal büyüme sıcaklığında OD₆₀₀ = 0.7 optik yoğunluğa ulaşana kadar kuluçka yapın.
  3. Bakteri kültürlerini steril bir sampon ile tripton soya agar (TSA) plakalarına eşit şekilde yayın.
  4. Kuyrukları steril mantar delici kullanarak agar'a aseptik olarak delikleyin.
  5. Her ekstrakttan 100 μL (100 μg/mL) ilgili kuyular eklenin.
  6. Plakaları 37 °C'de 18 saat kuluçka yapın.
  7. Her kuyuyu çevreleyen inhibisyon bölgelerinin çaplarını ölçün ve antimikrobiyal aktiviteyi değerlendirin.
  8. Tüm deneyleri üçlü olarak yapın ve sonuçları ortalama değerler olarak ifade edin.

7. Biyofilm inhibisyonu

NOT: Referans bakteri suşlarına karşı kristal violet boyama testi kullanarak anti-biyofilm aktivitesini değerlendirin. Tüm işlemleri aseptik koşullarda gerçekleştirin ve yıkama aşamalarında yapışkan biyofilmleri rahatsız etmekten kaçının.

  1. Referans suşları olarak Escherichia coli ATCC 25922 ve Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 seçilip TSB'de 37 °C'de logaritmik büyüme evresine ulaşana kadar kültürlenmelidir.
  2. Bakteriyel süspansiyonları OD₆₀₀ = 0.132 optik yoğunluğuna ayarlayın.
  3. 100 μL ekstrakt çözeltisi (0.625–10 mg/mL) steril 96 delikli polistiren mikrotiter plakalarına pipetleyin, her kuyuya 100 μL bakteriyel süspansiyon ekleyin ve nazikçe karıştırın.
  4. Plakaları 37 °C'de 24 saat kuluçka edin. Sadece TSB içeren kuyuları boşluk olarak ve ekstraktsız bakteri süspansiyon içeren kuyuları kontrol olarak kullanın.
  5. Yapışmayan hücreleri dikkatlice çıkarın, kuyuları iki kez damıtılmış suyla yıkayın ve plakaların hava kurumasına izin verin.
  6. Her kuyuya %0,4 (w/v) kristal mor çözeltisi 200 μL ekleyin ve 30 dakika kuluçka yapın.
  7. Fazla lekeni çıkarın, kuyuları iki kez damıtılmış suyla durulayın ve tabakların tamamen kurumasına izin verin.
  8. Bağlı boya çözünürlüğünü sağlamak için etanol ekleyin ve mikroplaka okuyucu kullanarak 595 nm soğurgunlukta emilimi ölçün.
  9. Denklem (2) kullanılarak antibiyofilm aktivitesini hesaplayın.
    figure-protocol-2(2)

8. Hücre kültürü ve sitotoksik aktivite analizi (MTT testi)

NOT: Standart hücre canlılık protokollerine göre MTT testi kullanılarak sitotoksik etkileri değerlendirin. Tüm işlemleri steril koşullarda bir biyogüvenlik dolabında gerçekleştirin ve kullanımdan önce ortam ile reaktifleri 37 °C'ye kadar önceden ısıtın.

  1. Akredite bir hücre deposundan insan nöroblastoma hücre hattı SH-SY5Y'yi alın ve Dulbecco'nun modifiye Eagle ortamındaki (DMEM) hücreleri, %10 fetal sığır serumu (FBS), %1 penisilin/streptomisin ve %1 L-glutamin ile takviye edilmiş 25 cm2 kültür termoslarında kültürleyin.
  2. Kültürleri %5CO2 içeren nemli bir atmosferde 37 °C'de tutun ve hücreleri yaklaşık %80 birleşime kadar büyütün.
  3. Hücreleri tripsizasyon yoluyla ayırın, kuyu başına 2 × 10-4 hücre yoğunluğunda 96 kuyu tabaklı plakalara tohumlayın ve tutunması için 24 saat kuluçka yapın.
  4. Hücreleri 150, 300, 600, 1200 ve 2000 μg/mL konsantrasyonlarda T. claveryi ekstraktlarıyla tedavi edin ve 24 saat kuluçka yapın.
  5. Kültür ortamı çıkarılır, her kuyuya 100 μL MTT çözeltisi içeren 100 μL taze ortam eklenir ve 37 °C'de 4 saat kuluçka yapın.
  6. Ortamı aspire edin, formazan kristallerini her kuyuya 100 μL dimetil sülfoksit (DMSO) ekleyerek çözün ve mikroplaka spektrofotometresi kullanarak 570 nm soğurgunlukla ölçün.
  7. Tüm deneyleri üçlü olarak yapın.

figure-protocol-3
Şekil 1: Deneysel iş akışının şematik özeti. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

9. İstatistiksel analiz

  1. Uygun istatistiksel yazılım paketleriyle istatistiksel analizler yapmak ve uygun olduğunda Student's t-testi veya iki yönlü varyans analizi (ANOVA) kullanarak kontrol ve tedavi gruplarını karşılaştırmak.
  2. Tüm veriyi ortalama ± ortalama standart hatası (SEM) olarak ifade edin.
  3. İstitiksel anlamlılığı p < 0.05'te tanımlayın.
  4. Yıldız işaretleriyle şekillerde istatistiksel anlamlılığı şu şekilde belirtin: p < 0.0001 için ***, p için *** < 0.001, ** p < 0.01 ve * < 0.05 için ve anlamsızlığı belirtmek için "ns" kullanın.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

T. claveryi'nin moleküler tanımlanması
ITS bölgesinin PCR amplifikasyonu, T. claveryi'nin moleküler tanımlanması için evrensel primerler ITS1 ve ITS4 kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Ortaya çıkan diziler, BLAST algoritması kullanılarak NCBI veritabanındaki referans dizileriyle analiz edilip karşılaştırıldı ve kesin tür tanımlamasına olanak sağladı (Ek dosya 1).

Çıkarma verimliliği
Ek...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mevcut çalışma, T. claveryi için karşılaştırmalı ve standartlaştırılmış bir ekstraksiyon-biyoaktivite platformu oluşturmakta olup, ekstraksiyon stratejisinin hem kimyasal bileşim hem de biyolojik işlevsellik açısından belirleyici bir belirleyici olduğunu göstermektedir. Bu protokolün temel metodolojik gücü, özellikle sabit katı–sıvı oranının, standartlaştırılmış çözücü hacminin, aynı ekstraksiyon sonrası işlemin ve biyotestlerden önce tekiz stok çözelti hazırlığının sıkı kontrol...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar rekabet eden çıkarlar belirtmemektedir. Bu çalışmanın bulgularını destekleyen tüm veriler ana makale ve ek bilgi dosyalarında mevcuttur. Mevcut çalışma sırasında oluşturulan ve analiz edilen veri setleri, makul talep üzerine ilgili yazardan temin edilebilir.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, bu çalışmanın maddi destek almadığını belirttiler.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
96 kuyuklu polistiren mikrotiter plakalarıNest Scientific701001Hücre kültürü / test plakaları
ABTS (2,2'-azino-bis (3-etilbenzotiazolin-6-sülfonik asit))Sigma-AldrichA3219Katyon radikal toplama testi
Aseton (Analitik derece)Sigma-Aldrich179124Ekstraksiyon çözücüsü
Asetonitril (LC-MS derecesi)Sigma-Aldrich34851Organik mobil faz
Acinetobacter baumanniiATCCManassas, VA, ABDATCC 17978
1290 Infinity UPLC sistemli Üçlü Quad LC-MS/MSAgilent Teknolojileri6460Nicel analiz
Analitik sütun (C18, 4.6 & times; 100 mm, 3.5 μ m)Agilent Technologies (Zorbax)959990-902Ters faz sütunu
Antioksidan standartları (Askorbin asit / Trolox)Sigma-AldrichA7506 / 238813Pozitif kontroller
Applied Biosystems 3730xl DNA AnalizörleriApplied Biosystems 3730xl DNA AnalizörleriDNA Dizileme Sistemi
Uygulamalı Biyosistemler ve ticaret; BigDye™ Terminator v3.1 Çevrim Dizileme KitiApplied Biosystems 4337455Sanger Dizileme Kiti
Bacillus cereusATCCManassas, VA, ABDATCC 14579
Biyoinformatik Analiz, BioEdit yazılımı, Kullanılan algoritma: CAP contig assemblyIbis BiosciencesNASequence Assembly Software
Selüloz ekstraksiyon cırtağıFisherbrand™  11724043Soxhlet çıkarımı için Kullanılan
Dimetilsülfoksit (DMSO)Merck102952Çözücü
DNA izolasyon kiti (Bitki & Bitki Mantar DNA izolasyon kiti (Polonya)EurX GeneMATRIXE3595DNA izolasyonu 
DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil)Sigma-AldrichD9132Radikal temizlik testi
Dulbecco'nun Modifiye Kartal Orta ModeliOğlak,  DMEM-HA
Enterobacter aerogenleriATCCManassas, VA, ABDATCC 13048
Enterococcus faecalisATCCManassas, VA, ABDATCC 29212
Escherichia coliATCCManassas, VA, ABDATCC 25922
EtanolMerck100983Çözücü
Etil asetatMerck109623Ekstraksiyon Çözücüsü
Fetal Sığır Serumu (FBS)Oğlak BilimselFBS-16A
BigDyeTerminator v3.1 Döngü Dizileme KitiThermoFisher4337455Dizileme Kiti
Folin-Ciocalteu reaktifiSigma-Aldrich 47641Toplam fenolik içerik
Formik asitSigma-Aldrich 33015Mobil faz eklemesi
Gallik asitCarlo Erba406335Kalibrasyon eğrisi
Gene MATRIX Plant& Mantar DNA izolasyon kitiEurX E3595DNA izolasyon kiti
GraphPad Prizması (v9)Veri görselleştirme ve istatistiksel analizYokİstatistiksel analiz
Isıtıcı mantoElektrotermal EME30500Çözücü reflüsünü korumak için kullanılır
HighPrep™ PCR Temizlik SistemiMAGBIOAC-60005
BuzLaboratuvar derecesi—BAE'de sıcaklık kontrolü
Klebsiella pneumoniaeATCCManassas, VA, ABDATCC 13883
L-glutaminOğlak BilimselAlmanya
Listeria monocytogenesATCCManassas, VA, ABDATCC 19115
LiyofilizatorScientzYokEkstraktların dondurularak kurutulması
Manyetik boncuk– PCR tabanlı temizlik sistemiMAGBIOAC-60005PCR
MetanolMerck106009Ekstraksiyon çözücüsü
n-HexaneMerck103701Ekstraksiyon çözücüsü
Penisilin/StreptomisinOğlak BilimselAlmanya
Pseudomonas aeruginosaATCCManassas, VA, ABDATCC 27853
Filtre kağıdı (No. 541)Cytiva1541-125 VEkstra filtrasyon sürecinde
Döner evaporatörBuchi R10011100V101Çözücü çıkarımı
Shigella dysenteriaeATCCManassas, VA, ABDATCC 13313
Sodyum karbonatMerck106392Toplam fenolik analiz
SPECTROstar Nano Mikroplaka Okuyucu BMG LabtechSoğurma ölçümleri
Staphylococcus aureusATCCManassas, VA, ABDATCC 25923
Staphylococcus epidermidisATCCManassas, VA, ABDATCC 12228
İstatistiksel analiz yazılımı (SPSS, v23)Veri analiziNA
Thermo Scientific Nanodrop 2000 Thermo Fisher ScientificND-2000
Tripton Soya Agar (TSA)MerckAlmanya—
Tripton Soya Suyu (TSB)MerckAlmanya—
Ultrasonik homojenizerScientzSCIENTZ-650LUltrason destekli ekstraksiyon

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wasser, S. P., Weis, A. L. Medicinal properties of substances occurring in higher basidiomycetes mushrooms: current perspectives (Review). Int. J. Med. Mushrooms. 1 (1), 31-62 (1999).
  2. Wasser, S. P. Current findings, future trends, and unsolved problems in studies of medicinal mushrooms. Appl. Microbiol. Biotechnol. 89 (5), 1323-1332 (2011).
  3. Badalyan, S. Medicinal aspects of edible ectomycorrhizal mushrooms. Edible Ectomycorrhizal Mushrooms: Current Knowledge and Future Prospects. Zambonelli, A., Bonito, G. M. , Springer. Berlin, Heidelberg. 317-334 (2012).
  4. El Enshasy, H. A., Hatti-Kaul, R. Mushroom immunomodulators: unique molecules with unlimited applications. Trends Biotechnol. 31 (12), 668-677 (2013).
  5. Morte, A., Kagan-Zur, V., Navarro-Ródenas, A., Sitrit, Y. Cultivation of desert truffles—A crop suitable for arid and semi-arid zones. Agronomy. 11 (8), 1462(2021).
  6. Gutiérrez, A., Morte, A., Honrubia, M. Morphological characterization of the mycorrhiza formed by Helianthemum almeriense Pau with Terfezia claveryi Chatin and Picoa lefebvrei (Pat.) Maire. Mycorrhiza. 13 (6), 299-307 (2003).
  7. Loizides, M., Hobart, C., Konstandinides, G., Yiangou, Y. Desert truffles: the mysterious jewels of antiquity. Field Mycology. 13 (1), 17-21 (2012).
  8. Atila, F., Kazankaya, A. Terfezia species natural distributed in Türkiye and their ecologies. Mantar Dergisi. 13 (3), 119-130 (2022).
  9. Türkoğlu, A., Castellano, M., Trappe, J., Yaratanakul Güngör, M. Turkish truffles I: 18 new records for Turkey. Turkish J. Bot. 39, 359-376 (2015).
  10. Doğan, H., Kurt, F. New macrofungi records from Turkey and macrofungal diversity of Pozantı-Adana. Turkish J. Bot. 40, 209-217 (2016).
  11. İnci, Ş, Kırbağ, S. Nutritional content, antioxidant and antimicrobial activity of Terfezia claveryi Chatin. Artvin Çoruh Univ. J. For. Fac. 19 (2), 138-143 (2018).
  12. Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J. Clin. 71 (3), 209-249 (2021).
  13. Ventola, C. L. The antibiotic resistance crisis: part 1: causes and threats. P T. 40 (4), 277-283 (2015).
  14. Cushnie, T. P. T., Lamb, A. J. Antimicrobial activity of flavonoids. Int. J. Antimicrob. Agents. 26 (5), 343-356 (2005).
  15. Valko, M., et al. Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease. Int. J. Biochem. Cell Biol. 39 (1), 44-84 (2007).
  16. Morte, A., Honrubia, M., Gutiérrez, A. Biotechnology and cultivation of desert truffles. Mycorrhiza: State of the Art. Varma, A. , 467-483 (2008).
  17. Corrêa, R. C. G., et al. Biotechnological, nutritional and therapeutic uses of Pleurotus spp. related with its chemical composition: a review. Trends Food Sci Technol. 50, 103-117 (2016).
  18. Ma, G., et al. A critical review on the health promoting effects of mushrooms nutraceuticals. Food Sci. Hum. Wellness. 7 (2), 125-133 (2018).
  19. Reis, F. S., et al. Functional foods based on extracts or compounds derived from mushrooms. Trends Food Sci. Technol. 66, 48-62 (2017).
  20. Mandeel, Q. A., Al-Laith, A. A. Ethnomycological aspects of the desert truffle among native Bahraini and non-Bahraini peoples. J. Ethnopharmacol. 110 (1), 118-129 (2007).
  21. Patel, S. Food, health and agricultural importance of truffles: a review. Curr. Trends Biotechnol. Pharm. 6, 15-27 (2012).
  22. Janakat, S., Nassar, M. Hepatoprotective activity of desert truffle (Terfezia claveryi) compared with Nigella sativa in rats. Pak. J. Nutr. 9, 52-56 (2010).
  23. Al-Laith, A. A. A. Antioxidant components and activities of desert truffle (Tirmania nivea). J. Food Compos. Anal. 23 (1), 15-22 (2010).
  24. Shavit, E., Shavit, E. The medicinal value of desert truffles. Desert Truffles. Kagan-Zur, V., Roth-Bejerano, N., Sitrit, Y., Morte, A. 38, 323-340 (2014).
  25. Patel, S., et al. Potential health benefits of natural products derived from truffles. Trends Food Sci. Technol. 70, 1-8 (2017).
  26. Beara, I. N., et al. Phenolic profile, antioxidant, anti-inflammatory and cytotoxic activities of truffles. Food Chem. 165, 460-466 (2014).
  27. Dahham, S. S., et al. Antioxidant, anticancer and apoptosis properties of Terfezia claveryi. Saudi J. Biol. Sci. 25 (8), 1524-1534 (2018).
  28. Azmir, J., et al. Techniques for extraction of bioactive compounds: a review. J. Food Eng. 117 (4), 426-436 (2013).
  29. Kumar, M., Shukla, P. K. PCR targeting of ITS regions for rapid diagnosis of mycotic keratitis. J. Clin. Microbiol. 43 (2), 662-668 (2005).
  30. Bondet, V., Brand-Williams, W., Berset, C. Kinetics and mechanisms of antioxidant activity using the DPPH method. LWT Food Sci. Technol. 30, 609-615 (1997).
  31. Re, R., et al. Antioxidant activity applying an improved ABTS assay. Free Radic. Biol. Med. 26 (9-10), 1231-1237 (1999).
  32. Đorđević, T. M., et al. Effect of fermentation on antioxidant properties of cereals. Food Chem. 119 (3), 957-963 (2010).
  33. Herald, T. J., et al. High-throughput micro plate assays for screening flavonoid content and DPPH-scavenging activity in sorghum bran and flour. Sci. Food Agric. 92 (11), 2326-2331 (2012).
  34. Kısa, D., et al. Evaluation of Biological Potency of two Endemic Species Integrated with in vitro and in silico Approches: LC-MS/MS Analysis of the Plants. Chem. Biodivers. 21 (3), e202301351(2024).
  35. Kumoro, A., Singh Hasan, Effects of solvent properties on the soxhlet extraction of diterpenoid lactones from andrographis paniculata leaves. ScienceAsia. 35, 306-309 (2009).
  36. Ng, Z. X., Samsuri, S. N., Yong, P. H. The antioxidant index and chemometric analysis of tannin, flavonoid, and total phenolic extracted from medicinal plant foods with the solvents of different polarities. Food Process. Preserv. 44 (9), e14680(2020).
  37. Kıvrak, İ Analytical methods applied to assess chemical composition, nutritional value and ın vitro bioactivities of Terfezia olbiensis and Terfezia claveryi from Turkey. Food Anal. Methods. 8 (5), 1279-1293 (2015).
  38. Neggaz, S., et al. In vitro evaluation of antioxidant, antibacterial and antifungal activities of Terfezia claveryi Chatin. Phytothérapie. 13, 1-7 (2015).
  39. Monteiro, M., et al. Effect of extraction method and solvent system on the phenolic content and antioxidant activity of selected macro- and microalgae extracts. J. Appl. Phycol. 32 (1), 349-362 (2020).
  40. Pingret, D., et al. Degradation during application of ultrasound in food processing: A review. Food Control. 31, 593-606 (2013).
  41. Şahin, A., et al. Total phenol, antioxidant activity, fatty acid composition and mineral contents of the species of fungi known as domalan. J. Agroalimentary Process. Technol. 26 (3), 149-154 (2020).
  42. Fidan, M., et al. cytotoxic and protective effects of truffles. Anal. Biochem. 641, 114566(2022).
  43. Awika, J. M., et al. Screening methods to measure antioxidant activity of sorghum (sorghum bicolor) and sorghum products. J. Agric. Food Chem. 51 (23), 6657-6662 (2003).
  44. Gursoy, N., et al. Antioxidant activities, metal contents, total phenolics and flavonoids of seven Morchella species. Food Chem. Toxicol. 47 (9), 2381-2388 (2009).
  45. Elsayed, E., et al. Truffles: A potential source of bioactive compounds. Bioactive Compounds in Food. , CRC Press. 163-174 (2021).
  46. Elsayed, E. A., et al. Mushrooms: a potential natural source of anti-inflammatory compounds for medical applications. Mediators Inflamm. 2014, 805841(2014).
  47. Stanikunaite, R., et al. Cyclooxygenase-2 inhibitory and antioxidant compounds from the truffle Elaphomyces granulatus. Phytother. Res. 23 (4), 575-578 (2009).
  48. Doğan, H. H., Aydın, S. Determination of antimicrobial effect, antioxidant activity and phenolic contents of desert truffle in Turkey. Afr. J. Tradit. Complement. Altern. Med. 10 (4), 52-58 (2013).
  49. Abu-Odeh, A., et al. In vitro and In vivo Antidiabetic Activity, phenolic content and microscopical characterization of Terfezia claveryi. Molecules. 27 (15), 4843(2022).
  50. Nguyen, V., et al. Chlorogenic Acid: A systematic review on the biological functions, mechanistic actions, and therapeutic potentials. Nutrients. 16 (7), 924(2024).
  51. Suhag, R., et al. Mapping antioxidant mechanisms in plant extracts via reactivity kinetics inhibiting oil autoxidation. Appl. Food Res. 5 (2), 101476(2025).
  52. Harir, M., et al. Evaluation of antimicrobial activity of Terfezia arenaria extracts collected from Saharan desert against bacteria and filamentous fungi. 3 Biotech. 9 (7), 281(2019).
  53. Hamza, A., et al. Nutraceutical potential, antioxidant and antibacterial activities of Terfezia boudieri Chatin, a wild edible desert truffle from Tunisia arid zone. Arab. J. Chem. 9 (3), 383-389 (2016).
  54. Neggaz, S., et al. In vitro evaluation of antioxidant, antibacterial and antifungal activities of Terfezia claveryi Chatin. Phytothérapie. 13, 1-7 (2020).
  55. Dib, S., Fortas, Z. Antimicrobial activities of desert truffle extracts and their chemical ıdentification. J. Pharm. Pharmacol. 7, 1-7 (2019).
  56. Gargano, M. B., et al. Antimicrobial activity of the extracts of Terfezia Claveryi and Tirmania Pinoyi against gram-positive and gram-negative bacteria causal agent of diseases in tomato. Chem. Eng. Trans. 58, 73-78 (2017).
  57. Khojah, H. M. J., et al. Antimicrobial efficacy of extracts of Saudi Arabian desert Terfezia claveryi truffles. Saudi J. Biol. Sci. 29 (11), 103462(2022).
  58. Akyüz, M., et al. Cytotoxicity and DNA protective effects of the Terfezia and Picoa species from the eastern region of Turkey. Istanbul J. Pharm. 51 (2), 198-203 (2021).
  59. Al Obaydi, M. F., et al. Terfezia boudieri: A Desert Truffle With Anticancer and Immunomodulatory Activities. Front. Nutr. 7, 38(2020).
  60. Pakrashi, S., et al. Quercetin alleviates 6-OHDA-caused apoptosis in SH-SY5Y cells. Toxicol. Res. 13 (4), tfae117(2024).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Terfezia ClaveryiExtraction MethodsIn Vitro BioactivityAntioxidant ActivityAntimicrobial ActivityCytotoxic ActivityUltrasound Assisted ExtractionMaceration Assisted ExtractionPhenolic CompoundsLC MS MS Analysis

Related Articles