Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Farelerde Donör-Spesifik Bağışıklık Toleransını Değerlendirmek İçin İkincil Heterotopik Kalp Nakli için Manşetsiz Dikiş Tabanlı Servikal Model

463 görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/69966

⸱

13 Mart 2026

 ,  ,  , 
1Center for Transplantation Sciences, Massachusetts General Hospital

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Bu protokol, farelerde manşetsiz, dikiş bazlı servikal heterotopik kalp nakli tekniği sunar; bu teknik, donör-spesifik bağışıklık toleransını fizyolojik koşullarda minimum yabancı madde müdahalesiyle değerlendirmek için ikinci heterotopik kalp greftinin güvenilir şekilde yerleştirilmesini sağlamaktadır.

Özet

Molin heterotopik kalp nakli, allogreft reddi ve bağışıklık toleransını araştırmak için iyi kurulmuş bir modeldir. Tolerans çalışmalarında, donör spesifikliğini değerlendirmek için genellikle ikinci bir heterotopik kardiyak greftin yerleştirilmesi gerekir ve servikal bölge ideal anatomik bir alan sağlar. Manşet tabanlı teknikler damar anastomozlarını basitleştirirken, bu yöntemler peri-anastomoz iltihabını teşvik edebilen, hemodinamiği değiştirebilen ve immünolojik analizleri karıştırabilen yapay malzemeler getirir. Ayrıca, genetik modifikasyonlar, immünosupresif tedavi, ileri alıcı yaşı veya kronik deneysel durumlar nedeniyle damar daralması, küçük kalibreli damarlarda manşet yerleştirmeyi teknik olarak zorlaştırabilir. Burada, farelerde servikal heterotopik kalp nakli için manşetsiz, dikiş tabanlı bir teknik sunuyoruz. Bu yöntem, intraluminal polimerlerin kullanımından kaçınır, fizyolojik kan akışını korur ve değişen akış dinamikleriyle ilgili komplikasyonları azaltır. Protokol, hem donör hem de alıcı damarların titizlikle hazırlanmasını, karotis arter ve dış juguler venin uçtan uca mikro-anastomozlarını, ameliyat içi açıklık değerlendirmelerini ve ameliyat sonrası izleme stratejilerini içerir. Yapay malzemelerin kullanımını en aza indirerek ve küçük kalibreli damarlara uyum sağlayarak, bu manşetsiz teknik, ikincil kalp nakli için fizyolojik ve tekrarlanabilir bir platform oluşturur. Bu yaklaşım, fare kalp nakli modellerinde donör-spesifik toleransın titiz mekanik çalışmalarını mümkün kılar.

Giriş

Kalp nakli, son evre kalp yetmezliği olan hastalar için hayat kurtaran birmüdahaledir 1. Kardiyak allogreft alanlar, reddetmeyi önlemek için ömür boyu immünosupresif tedaviye ihtiyaçduyarlar 2. İmmünosupresyona rağmen, uzun vadeli greft sağlıkları akut ve kronik ret nedeniyle, özellikle antikor aracılı reddetme (AMR) ve kardiyak allogreft vaskülopati (CAV)3 nedeniyle zayıflamaya devam etmektedir. Ayrıca, bu rejimler hem greft hem de hasta sağlıklarını azaltan nefrotoksisite, metabolik sendrom, enfeksiyonlar ve maligniteler gibi önemli yan etkilertaşır. 2,4. Bu zorluklar, alıcının bağışıklık sisteminin donör greftini ömür boyu bağışıklık baskısı gerektirmeden kabul ettiği acil bağışıklık toleransının gerekliliğinivurgulamaktadır 5. Toleransın sağlanması, ilaçla ilgili toksisiteleri ortadan kaldırır, enfeksiyon ve malignite riskini azaltır, kronik alloimmün hasarı önler ve steroid yoksunluğunu sağlar, böylece metabolik kontrolü iyileştirir ve greft fonksiyonunu korur. Karma kimerizm, kostimulyatör blokaya, düzenleyici hücre infüzyonları ve gen hedefli yaklaşımlar dahil olmak üzere hayvan modellerinde birden fazla tolerans stratejisi umut vaat etmiştir; ancak klinik çeviri sınırlı kalır 6,7,8,9. Önemli bir engel, donör-spesifik toleransı titizlikle test eden güvenilir in vivo modellere olanihtiyaçtır 5.

Molin heterotopik kalp nakli, allogreft reddi ve tolerans mekanizmalarını incelemek için güçlü ve yaygın kullanılan deneyselbir modeldir. 10,11,12,13,14. Genetik olarak tanımlanmış fare suşlarının ve transgenik modellerin bulunabilirliği, greft hasarı ve regülasyonunda yer alan bağışıklıkyollarının titiz bir şekilde incelenmesini sağlar 9,15,16. Tolerans çalışmalarında, bağışıklık regülasyonunun donör özgüllüğünü değerlendirmek için genellikle ikinci heterotopik kalp nakli, ister donör eşleştirilmiş ister üçüncü taraf olsun, gereklidir. Servikal bölge, bu ikinci nakil için ideal bir anatomik alan sağlar; doğrudan cerrahi erişim, palpasyon veya görüntüleme yoluyla güvenilir greft izleme ve dokuların verimli şekilde alınmasını sağlar; sonraki immünolojik ve histolojik analizler 8,19. Bu özellikler, servikal modeli, çok çeşitli nakil ortamlarında tolerans indüksiyonu ve reddetme mekanizmalarını araştırmak için özellikle değerli kılar.

Son otuz yıl içinde dikiş kullanarak birkaç servikal heterotopik kalp nakli tekniği tanımlanmıştır. Erken çalışmalar, bağışçının damarları ile alıcının karotis ve juguler sistemi 20 arasında dikiş bazlı uçtan uca anastomozlar kullanılarak greft implantasyonu ve doğrudan fonksiyonel izleme için uygulanabilir bir yer olduğunu ortayakoymuştur. Diğer gruplar ise bağışçı akciğer arter veya aortayı servikal damar damarlarına bağlamanın alternatif yolu olarak manşetsiz kol konfigürasyonlarırapor etmiştir 21. Doğal karotis sürekliliğini korumak ve standart karın uçtan yana anastomoz22'nin geometrisini daha yakınlaştırmak için yeni bir uçtan yana dikiş tabanlı servikal model önerilmiştir. Bu yaklaşımlar birlikte, servikal bölgenin çok yönlülüğünü vurgular ve teknik karmaşıklık, hemodinamik ve anastomozik arayüzdeki yabancı madde miktarı arasındaki gerekli ödünleşmeleri gösterir.

Sare servikal kalp naklininde yaygın olarak uygulanan damarlı anastomotik tekniklerden biri, intraluminal manşettekniği 23,24,25,26'dır. Manşet bazlı servikal teknikler, mikrovasküler anastomozları basitleştirmek ve teknik başarı oranlarını artırmak için intraluminal stentler kullanır; özellikle daha az deneyimlimikrocerrahlar için 24,25,26. Manşet tabanlı yaklaşımlar damarları bağlama teknik zorluğunu kolaylaştırırken, bu teknik anastomozik bölgeye yabancı madde girer. Polimerlerin varlığı peri-anastomozik iltihabı teşvik edebilir, yerel hemodinamiği değiştirebilir ve bağışıklık analizlerini potansiyel olarakkarıştırabilir 27,28. Ayrıca, alıcı damarların daralması, genetik olarak modifiye fare suşları, immünosupresif tedavi, ileri alıcı yaş veya kronik deneysel durumlar nedeniyle küçük kalibreli damarlarda manşet yerleştirmeyi teknik olarak zorlaştırabilir29.

Bu sınırlamaları gidermek için, servikal heterotopik kalp nakli için tamamen manşetsiz, dikiş tabanlı bir teknik geliştirdik. Bu konfigürasyonda, alıcı karotis arter donör yükselen aortaya uç baştan ana anastomoz edilir ve alıcı dış juguler ven uçtan uca donor akciğer gövdesine anastomoz edilir; böylece koroner perfüzyon için doğrudan giriş ve çıkış sağlanır (Şekil 1A). İntraluminal sentetik malzeme kullanımını en aza indirerek, bu yaklaşım anastomozik bölgede doğrudan polimer-kan temasını önler ve lokal bağışıklık ve iltihap yanıtlarına odaklanan çalışmalar için kavramsal olarak caziptir. Bu yöntem, hem donör hem de alıcı damarların titizlikle hazırlanmasını ve karotis arteri ile dış juguler venin uçtan uca mikro-anastomozlarını içerir. Ayrıca, ameliyat dışı açıklık değerlendirmesi ve ameliyat sonrası izleme yapılır. Pratikte, bu manşetsiz servikal model, uzun süreli hayatta kalmaya sahip bir karın grefti sonrası donör-spesifik toleransı test etmek için ikincil kalp grefti gerektiğinde uygulanır; özellikle küçük kalibreli damarlara sahip transgenik veya immünosuprüte farelerde. Ancak bu teknik, ileri mikrocerrahi uzmanlık ve ameliyat mikroskobuna erişim gerektirir; Karotis ligasyonu ve alıcı seçimiyle ilgili ek sınırlamalar aşağıda tartışılmaktadır. Tekrarlanabilir bir platform sağlayarak bu teknik, hem ikincil nakil modellerinin güvenilirliğini artırır hem de fare sistemlerinde donör-spesifik toleransın mekanik çalışmalarını destekler. Bu protokol, alıcı karotis arterini donör yükselen aortaya ve alıcı dış juguler venini donor akciğer gövdesine bağlayarak uçtan uca anastomozlar kullanır; böylece greftin güçlü koroner perfüzyonu sağlanır (Şekil 1B). Uçtan uca anastomozlar, bu modelde koroner perfüzyonu güvenilir şekilde destekleyen doğrudan bir giriş-çıkış deseni oluşturur.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Fareler Jackson Laboratuvarı'ndan satın alındı. İlk abdominal kalp nakli sırasında 6 - 10 haftalık ve 20 - 30 g ağırlığında hem erkek hem dişi fareler bu çalışmaya dahil edilmiştir. Donörler ve alıcılar, Massachusetts General Hospital'ın kemirgen tesisinde belirli patojensiz (SPF) koşullar altında barındırıldı. Tüm prosedürler, laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı için NIH yönergelerine uygun olarak insancıl bir şekilde gerçekleştirildi. Tüm hayvan deneyleri, Massachusetts Genel Hastanesi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmış ve denetimi altında gerçekleştirilmiştir (protokol numarası 2020N000125). Malzeme Tablosu , bu protokolde kullanılan tüm reaktifler, aletler ve ekipmanları listeler. Deneylere başlamadan önce IACUC onayı gereklidir. Tüm fareleri kurumsal yönergeler ve geçerli düzenleyici standartlar doğrultusunda barındırır ve bakıma devam eder.

1. Hayvan ve aletlerin hazırlanması

  1. Ameliyattan önce, tüm aletleri 20 dakika boyunca 250 °F (121 °C) sıcaklıkta basınç altında doymuş buhara maruz bırakarak sterilize edin. Gerekli mikrocerrahi aletler Şekil 2'de gösterilmiştir. Mikrocerrahi aletlerin uçlarını koruyarak hasarı önleyin. Kırık veya deforme olmuş aletleri hemen değiştirerek optimal cerrahi başarı oranlarını koruyun.
  2. Alıcı öncesi bakım
    1. Bu protokol, daha önce abdominal heterotopik kalpgrefti 10,11,12 ile implante edilmiş alıcı fareleri kullanır. Alıcıların sağlıklı olduğunu, birincil kesinin tamamen iyileştiğini ve enfeksiyondan arınmış olduğunu, karın greftinin atmaya devam ettiğini doğrulayın. Bu ikincil servikal nakli, abdominal greftin ardından ameliyat sonrası gün (POD) 50 - 100 arasında gerçekleştirilir. Sadece işlevsel karın grefti olan alıcıları kullanın, çünkü bu bir toleransprotokolü 8,17'dir.
    2. Alıcı fareleri işlem öncesinde 1-2 saat hızlı tutarak aspirasyon riskini en aza indirin. Analjezi için Ethiqa XR (uzatılmış salınımlı buprenorfin, 3,25 mg/kg) ve meloksikam (5 mg/kg) deri altı yoluyla uygulanır. Ethiqa XR, 72saat 30'a kadar süreli ağrı aljezi sağlar.
  3. Bağışçı hazırlığı
    1. Çalışma tasarımına göre uygun suştan cinsiyet ve yaş eşliğinde donör fareleri seçin. Kardiyak allogreft bağışıklık toleransı çalışmaları için, donör grupları sinjenik (alıcıyla aynı suş), allojenik donör (birincil abdominal kalp nakli donörüyle aynı suş) ve allogenik üçüncü taraf (hem birincil bağışçı hem de alıcıdan farklı suş) içerebilir.
    2. Anestezi öncesi tüm donör ve alıcı farelerin sağlık durumunu ve uygun uyum süresini doğrulayın.

2. Anestezi

  1. Anestezi indüksiyonu ve destek
    1. Hassas bir buharlaştırıcı kullanılarak indüksiyon odasında %1 - %2,5 izofluran (1 - 2 L/dakika akış) ile anestezi indüksiyonu yapın. Aesteziyi burun konusi veya endotrakeal tüp aracılığıyla sürdürün. Anestezi altında korneanın kurumamasını önlemek için veteriner göz kayganlaştırıcısını farenin her iki gözüne uygulayın.
    2. Pedal çekilme refleksinin olmaması nedeniyle anestezi derinliğini doğrulayın. İşlem boyunca vücut sıcaklığını korumak için hayvanı bir ısıtma pedine koyun.

3. Donör kalp hasadı

  1. Bağışçı maruziyeti
    1. Donör fareyi sırtüstü pozisyona yerleştirin ve uzuvları bantla sabitleyin. Saçları çıkarın ve cildi %70 izopropil alkol sürüntüsüyle 3 kez dezenfekte edin.
    2. Orta hat laparotomi ve ardından ince makasla karın ve toraks boşluğunu açığa çıkarmak için orta hat sternotomisi yapın. Nemli gazlı bezle bağırsakları sol tarafa nazikçe hareket ettirin. Su suyunu korumak için bağırsakların altına tuzlu bir gazlı bez yerleştirin.
  2. Perfüzyon ve donör kalp hasadı
    1. Soğuk heparinli salin (125 IU/mL) hazırlayın ve 0,2 - 0,3 mL 0,5 mL enşırıngaya yükleyin.
    2. Alt vena kava 26 - 30G iğne veya kateterle nazikçe kanüllenin. 30 saniye boyunca 2 - 3 mL soğuk heparinizlenmiş salinini yavaşça perfüze edin. Heparinizasyonu optimize etmek için en az 1-2 dakika bekleyin.
    3. Maksimum görsellikle kalbi açığa çıkarmak için iki taraflı torakotomi yapın. Ön torasik kafesi dorsal taraftan ayırın ve yukarıya doğru yansıtarak iğne veya kelepçe ile sabitleyin.
    4. Yükselen aorta (AA) ile akciğer gövdesi arasındaki bağ dokusunu kesin (PT; Şekil 3A).
    5. Alt ve üst venae cavae'yi kalbe yakın 8 - 0 naylon dikişlerle bağlayın ve ligatürlerin distalindeki ligasyonlu damarları kesin. PT'yi mümkün olduğunca distik olarak inceleyin.
    6. Sol ve sağ akciğer damarlarını 6 - 0 naylon dikiş ile birleştirin ve bağlı damarları bondatüre distal olarak kesin.
    7. Kalbi kesin, brakiosefal arter ve PT başlangıcından keserek AA'nın yeterli uzunluğunu koruyun. PT'nin ön duvarını mümkün olduğunca uzun süre koruyun. Güvenli bir anastomoz sağlamak için AA ve PT trim edin (Şekil 3B).
    8. Kalbi, soğutulmuş normal salin ile doldurulmuş 60 mm hücre kültürü kabına yerleştirin ve donör kalbi AA veya PT üzerinden ekstra 1 mL soğuk heparinizlenmiş tuzlu suyla (125 IU/mL) nazikçe yeniden perfüze ederek kalan kanı boşaltın. Miyokard ödemini veya damar yaralanmasını önlemek için yüksek basınçlı enjeksiyonlardan kaçının. Soğutucu plakadaki kapları gerektiğinde düzeltin.
    9. Kalbi soğuk Ringer laktat solüsyonuna buzun üzerinde yerleştirin ve implantasyon yapılana kadar. Donör kalbe en iyi şekilde soğuk iskemi sonrası 90 dakika içinde implante edilir ve 120 dakikadan fazla korunmamalıdır.

4. Alıcının servikal bölgesine maruz kalması

  1. İnsüzyon ve gemi izolasyonu
    1. Hassas bir buharlaştırıcı kullanılarak indüksiyon odasında %1 - %2,5 izofluran (1 - 2 L/dakika akış) ile anestezi indüksiyonu yapın. Anestezi burun konisi veya endotrakeal tüp ile sürdürün. Pedal çekilme refleksinin olmaması nedeniyle anestezi derinliğinin yeterli olduğunu doğrulayın. Sıvı yenilenmesi için alıcının dorsal bölgesine deri altına 0,5 mL sıcak normal tuzlu su enjekte edin.
    2. Alıcıyı vücut sıcaklığını korumak için bir ısıtma pedinin üzerine yerleştirin. Tüm servikal bölgeyi tıraş edin. Fareyi sırtüstü pozisyona getirin, kuyruk operatöre bakacak şekilde konumlandırın. Başı, uzuvları ve kuyruğu bantla hareketsiz hale getirin, böylece aşırı gerilmeden güvenli bir sabitleme sağlanır. Her göze bir damla göz kayganlaştırıcı uygulayarak kurumayı önleyin. Servikal cildi %70 izopropil alkol sürüntleriyle 3 kez dezenfekte edin.
    3. Boynun üzerinde sternumdan sağ mandibular açıya ters T şekliyle boyuna bir deri kesisi yapın (Ek Şekil 1A).
    4. Sağ dış juguler ven (EJV) sağ medial köprücük köprücüğünden ana birleşimine kadar kesin bir şekilde harekete geçirilir. EJV'nin küçük dallarını koterize edin ve kesin (Şekil 4B).
    5. Tiroid bezinin sağ lobunu izole edin ve koterizasyon yoluyla kesin. Sternomastoid kası koterizasyon yoluyla keserek sağ karotis arteri (CA) açığa çıkar.
    6. Sağ CA'yı karotis bifurkasyonunun üzerinden mümkün olduğunca yukarıya doğru harekete geçirin (Şekil 4C).
    7. CA'nın proksimal kısmına küçük bir damar kelepçesi uygulayın. Karotis bifurkasyon seviyesinde, distal kısmın etrafına 10 - 0 naylon bir ligatür yerleştirerek kan akışını kapatın.
    8. EJV'nin proksimal kısmına, CA kelepçesi seviyesinde 10 - 0 naylon ligatür uygulayın. EJV şiştikten sonra, önceden koterize edilmiş ve kesilmiş küçük dal bölgelerinden kanamayı durdurun. EJV distilt ederken retromandibular ve posterior auriküler damarların birleşimini tespit edin ve bu birleşime küçük bir damar kelepçesi uygulayarak tıkanma akışı yapın.
  2. Damar anastomoz hazırlığı
    1. EJV ve CA'yı ince makasla ligatür ve kelepçe arasında transekt yapın.
    2. Damar açıklıklarını normal salinle yıkayarak kan ve pıhtıları temizleyin. Greft implantasyonu işlemi boyunca ameliyat alanını nemli tutun.

5. Greft implantasyonu

  1. Greft yerleştirme
    1. Donör kalp greftini alıcı servikal bölgeye ters yerleştirilin; fizyoterapi lateral ve yükselen aort (AA) medial olarak konumlandırılır.
    2. Grefti nemli bir gazlı bezle örtün, böylece fizyoterapi ve AA açıkta kalsın. Gazlı bez, grefti korur ve stabilize eder, görselleştirmeyi iyileştirir.
  2. Kan damarı anastomozu
    1. Donörü AA ile baştan uca AA ile anastomoz yapın; 11 - 0 naylon dikişler kullanarak sleeve tekniği ile donörün AA yüzeysel ısırıkları alıcının CA'sına uygulanır. Aşırı gerilimden kaçının (Şekil 4D).
    2. Donörü ana suçtan uca 11 - 0 naylon dikişler kullanarak EJV ile anostomoz yapar, donörün PT yüzeysel ısırıkları alıcının EJV'sine uygulanır. Aşırı gerilimden kaçının (Şekil 4E).
    3. Distal EJV kelepçesini çıkarın. Kan akışını yeniden sağlamak için proksimal CA kelepçesini çıkarın (Şekil 4F). Greft hemen kanla dolmalı, kızarmalı ve 1-2 dakika içinde kasılmalıdır (Ek Video 1). Greftin içine birkaç damla 37 °C sıcak normal salin uygulayarak kasılmayı geri kazandırmaya yardımcı olur.
    4. Hemostaz için pamuk uçlarıyla anastomozik bölgeleri nazikçe sıkıştırın.
  3. Cep kapanması
    1. Grefti servikal cebe güvenli bir şekilde yerleştirin, damarları ve trakeayı burup sıkıştırmadan veya bükülmeden.
    2. Servikal kesiyi basit kesilmiş dikişle 6 - 0 emilebilir dikişle kapatın (Ek Şekil 1B). Ameliyat bölgesini bandajla kapatmayın; Alanı havaya açık bırakın.

6. Ameliyat sonrası bakım ve izleme

  1. Acil izleme
    1. Hayvanı en az 1 saat boyunca sıcak bir iyileşme odasına yerleştirin. Yön dönümlüğü, titreme veya yürüyememe gibi anormal davranışları gözlemleyin.
    2. Sıvı değişimi için deri altına 0,3 mL sıcak normal salin enjekte edin. Alıcıyı besin jeli ile sağlanan sterilize edilmiş yeni bir kafese aktarın. Bireysel olarak ev sahibi hayvanlar ve tam iyileşme ile birlikte grup barınmasına geri gönderilmezler; bu normal hareket ve davranış ile gösterilir.
    3. Ameliyattan sonra 72 saat boyunca her 12 saatte bir Meloksikam (5 mg/kg, deri altına girer) uygulanır. Cerrah ve veteriner, iyileşme sürecinde hayvanları düzenli olarak muayene eder.
    4. Hayvanda %20 vücut ağırlığı kaybı, cerrahi bölgede şiddetli şişlik, enfeksiyon belirtileri, halsizlik veya diğer sıkıntı >belirtileri varsa, kurumsal yönergelere uygun olarak CO₂ soluması kullanılarak, insancıl bir şekilde ötenazi.

7. Deneysel uç noktaları

  1. Doku koleksiyonu
    1. Histopatoloji veya immünolojik analiz için önceden belirlenmiş zaman noktalarında greftleri toplamak. Akış sitometrisi ve histopatoloji için, greft pulsasyonunun beklenen durmasından 2-3 gün önce dokular toplanır; bu da ön deneylere dayanır.
    2. Çalışma tasarımının gerektirdiği şekilde greft, dalak, lenf düğümleri ve kan örnekleri alın.
  2. Hayatta kalma analizi
    1. Greftin hayatta kalma süresini kaydet, bu gün elle tutulur nabızın durduğu gün olarak tanımlanır. İkincil servikal kalp nakilinde uzun vadeli sağkalma (tolerans), nakil sonrası 50 gün sonra kalıcı donör greft nabızları olarak tanımlanır ve histopatoloji büyük nekroz alanlarının yokluğunu doğrular.
    2. Kaplan-Meier analiziyle greft hayatta kalma eğrilerini çizin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Manşetsiz servikal heterotopik kalp nakli prosedürünün şematik bir özeti Şekil 1'de gösterilmiştir. Vasküler anastomozların mikroskobik görünümü, Şekil 1A'da gösterilmiştir; burada donör yükselen aort alıcı karotis arterine uç anastomoz edilir ve donör akciğer gövdesi alıcı dış juguler venin ucundan ucuna anastomoz edilir. Şekil 1B , greftten geçen kan akışını göstermektedir. Kan, alıcı karotis arte...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Fare kalp nakli modelleri, nakil immünolojisi anlayışımızı ilerletmede kritik bir rol oynamıştır. Orijinal heterotopik karın modelinin geliştirilmesinden bu yana, bu sistemler hücresel ve moleküler reddetme mekanizmalarını karakterize etmek, yeni immünosupresif rejimleri test etmek ve hem donor hem de alıcısuş 8,17,31'de genetik modifikasyonları değerlendirmek için kullanılmıştır. Inbred ve tran...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar rekabet eden çıkarlar belirtmemektedir.

Teşekkürler

Bu çalışma, Amerikan Kalp Derneği 23CDA1049388 numaralı hibe tarafından T.J.B.'ye ve Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından L.V.R.'R01AI143887 desteklendi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
0.5ml insülin şırıngaCovidien8881600350Deri altı enjeksiyon
%0,9 Sodyum klorür enjeksiyonuBD1727170103Damarlara enjeksiyon
10-0 naylon dikişAROSurgical InstrumentsT04A10N07-13Fare mikroskobik cerrahisi için
11-0 naylon dikişETIK DEĞER9016GFare mikroskobik cerrahisi için
1ml ŞırıngeBD309659Damarlara enjeksiyon
30G X 1/2 İğneBD305106Damarlara enjeksiyon
3ml ŞırıngeBD309657Damarlara enjeksiyon
6-0 naylon dikişETIK DEĞERJ212HFare mikroskobik cerrahisi için
60mm hücre kültür plakasıFALCON353002Aşı koruma için
Renkli Alüminyum KasalarGüzel Bilim Araçları20330-04Fare için mikroskobik cerrahi aletleri dezenfeksiyon
Pamuk UçlarıFisherbrand14-960-3MKanamayı durdur
Dumont #5 PensetlerGüzel Bilim Araçları11251-20Fare mikroskobik cerrahisi için
Ethiqa XR Buprofenor (CIII) VIRX JENERİKLER86084010030Analjezi 
İyi ablarGüzel Bilim Araçları15400-12Fare mikroskobik cerrahisi için
Gazlı Bez SüngerleriMEDLINENON25334Greft ve interstine korun
Tabanlı Isı LambasıBraintree ScientficHL-1BAmeliyat sonrası bakım
Heparin SodyumNorthstar Rxllc.72603-412-01 Damarlara enjeksiyon
İzofluranBaxter Anestezi & Kritik Bakım1001936060Anestezi ve nbsp için;
İzopropil alkol sürüntleriBD326895Ameliyattan önce cildi dezenfekte etmek
MikroskopCarl Zeiss303294-9903Fare mikroskobik cerrahisi için
Mini TrimmerBraintree ScientficCLP-88Fare tüy alma için
Optixcare Göz Kayganlaştırıcı PlusAVENTIXOPX-4252Ameliyat sırasında göz koruması için göz yağlayıcısı
Pivetal Alloksat (Meloksikam)PIVETAL21294589Analjezi 
Taşınabilir Yakıcılaştırıcı Enstrümanlar KitiMcKesson Argent42295143Fare mikroskobik cerrahisi için
Ringer' s laktat tamponlu çözeltiTermo BilimselAAJ67572APAşı koruma için
Küçük Hayvan Isıtılan PadK& H HM10Fare ameliyatı için
Transpore Beyaz Cerrahi Bant3M7100115870İşlem sırasında farelerin uzv, başı ve kuyruğunu düzeltin
Damar kelepçesiGüzel Bilim Araçları00398-02Fare mikroskobik cerrahisi için

Kaynaklar

  1. Johnson, M., et al. Heart transplantation in the United States, 1999-2008. Am J Transplantat. 10 (4), 1035-1046 (2010).
  2. Nelson, J., et al. Consensus recommendations for use of maintenance immunosuppression in solid organ transplantation: Endorsed by the American College of Clinical Pharmacy, American Society of Transplantation, and the International Society for Heart and Lung Transplantation. Pharmacother J Human Pharmacol Drug Ther. 42 (8), 599-633 (2022).
  3. Colvin, M. M., et al. Antibody-mediated rejection in cardiac transplantation: Emerging knowledge in diagnosis and management: A scientific statement from the American Heart Association. Circulation. 131 (18), 1608-1639 (2015).
  4. Neuberger, J. M., et al. Practical recommendations for long-term management of modifiable risks in kidney and liver transplant recipients: A guidance report and clinical checklist by the consensus on managing modifiable risk in transplantation (commit) group. Transplantation. 101 (4S), S1-S56 (2017).
  5. Ezekian, B., et al. Contemporary strategies and barriers to transplantation tolerance. Transplantation. 102 (8), 1213-1222 (2018).
  6. Lee, K. M., et al. Tgf-β-producing regulatory b cells induce regulatory t cells and promote transplantation tolerance. Eur J Immunol. 44 (6), 1728-1736 (2014).
  7. Kawai, T., et al. Cd154 blockade for induction of mixed chimerism and prolonged renal allograft survival in nonhuman primates. Am J Transplantat. 4 (9), 1391-1398 (2004).
  8. Borges, T. J., et al. Overexpression of pd-1 on t cells promotes tolerance in cardiac transplantation via icos-dependent mechanisms. JCI Insight. 6 (24), e142909(2021).
  9. Liao, M., et al. Pd-l1 on ex-vivo expanded toll-like-receptor-bregs prevents allograft rejection by breg viability promotion, cd4(+)t effector cell suppression, and tregs induction. Am J Transplant. , (2025).
  10. Liu, F., Kang, S. M. Heterotopic heart transplantation in mice. J Vis Exp. (6), e238(2007).
  11. Plenter, R. J., Grazia, T. J. Murine Heterotop Heart Transplant Tech. J Vis Exp. (89), e51511(2014).
  12. Wang, C., Wang, Z., Allen, R., Bishop, G. A., Sharland, A. F. A modified method for heterotopic mouse heart transplantion. J Vis Exp. (88), e51423(2014).
  13. Yang, C., et al. Kidney-induced systemic tolerance of heart allografts in mice. JCI Insight. 5 (18), e139331(2020).
  14. Yin, D., et al. A half-century of heterotopic heart transplantation in mice: The spearhead of immunology research. Transplantology. 5 (4), 298-311 (2024).
  15. Lee, K. M., et al. Suppression of allograft rejection by regulatory B cells induced via TLR signaling. JCI Insight. 7 (17), e152213(2022).
  16. Liao, M., et al. Marchf1 deficiency attenuates antibody-mediated rejection by modulating b cell responses. Am J Transplantat. 25 (8), S312(2025).
  17. Borges, T. J., et al. The inhibitory receptor siglec-e controls antigen-presenting cell activation and t cell-mediated transplant rejection. Sci Translat Med. 17 (797), eads2694(2025).
  18. Efe, O., et al. A humanized il-2 mutein expands tregs and prolongs transplant survival in preclinical models. J Clin Investigat. 134 (5), e173107(2024).
  19. Mendiola Pla, M., Milano, C. A., Glass, C., Bowles, D. E., Wendell, D. C. Cardiac magnetic resonance imaging characterization of acute rejection in a porcine heterotopic heart transplantation model. Plos one. 19 (6), e0304588(2024).
  20. Chen, Z. H. A technique of cervical heterotopic heart transplantation in mice. Transplantation. 52 (6), 1099-1101 (1991).
  21. Fang, J., et al. A simplified two-stitch sleeve technique for arterial anastomosis of cervical heterotopic cardiac transplantation in mice. Am J Translat Res. 5 (5), 521(2013).
  22. Dun, H., et al. Cervical heterotopic heart transplantation in mice using a novel suture technique. JHLT open. 7, 100164(2025).
  23. Ratschiller, T., et al. Heterotopic cervical heart transplantation in mice. J Vis Exp. (102), e52907(2015).
  24. Mao, X., Xian, P., You, H., Huang, G., Li, J. A modified cuff technique for mouse cervical heterotopic heart transplantation model. J Vis Exp. (180), e63504(2022).
  25. Li, W., et al. Mouse heterotopic cervical cardiac transplantation utilizing vascular cuffs. J Vis Exp. (184), e64089(2022).
  26. Yasuura, K. Simplified mouse cervical heart transplantation using a cuff technique. Transplantation. 51 (4), 896-897 (1991).
  27. Rosendorf, J., et al. Experimental fortification of intestinal anastomoses with nanofibrous materials in a large animal model. Sci Rep. 10 (1), 1134(2020).
  28. Lazar, K. M., Shetty, S., Chilkoti, A., Collier, J. H. Immune-active polymeric materials for the treatment of inflammatory diseases. Curr Opin Colloid Interf Sci. 67, 101726(2023).
  29. Elezaby, A., Dexheimer, R., Sallam, K. Cardiovascular effects of immunosuppression agents. Front Cardiovasc Med. 9, 981838(2022).
  30. Chan, G., Si, C., Nichols, M. R., Kennedy, L. Assessment of the safety and efficacy of pre-emptive use of extended-release buprenorphine for mouse laparotomy. J Am Assoc Lab Animal Sci. 61 (4), 381-387 (2022).
  31. Mendes, D. M., Borges, T., Riella, L. Oral tributyrate promotes treg-mediated immune modulation and prolongs allograft survival in murine transplant models. Am J Transplantat. 25 (8), S243-S244 (2025).
  32. Miller, C. L., Madsen, J. C. Targeting il-6 to prevent cardiac allograft rejection. Am J Transplantat. 22, 12-17 (2022).
  33. Schmitz, R., et al. B cells in transplant tolerance and rejection: Friends or foes. Transpl Int. 33 (1), 30-40 (2020).
  34. Fillinger, M. F., Kerns, D. B., Bruch, D., Reinitz, E. R., Schwartz, R. A. Does the end-to-end venous anastomosis offer a functional advantage over the end-to-side venous anastomosis in high-output arteriovenous grafts. J Vasc Surg. 12 (6), 676-690 (1990).
  35. Ribaudo, J. G., et al. Sutureless vascular anastomotic approaches and their potential impacts. Bioact Mater. 38, 73-94 (2024).
  36. Alghoul, M. S., et al. From simple interrupted to complex spiral: A systematic review of various suture techniques for microvascular anastomoses. Microsurgery. 31 (1), 72-80 (2011).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Man etsiz Transplant ModeliS t r Tabanl TeknikDon r zg ToleransMurin Kardiyak TransplantasyonServikal TransplantasyonVask ler AnastomozK k Kalibreli Damarlarmm n Tolerans al malarSekonder Greft Modeli
Farelerde Donör-Spesifik Bağışıklık Toleransını Değerlendirmek İçin İkincil Heterotopik Kalp Nakli için Manşetsiz Dikiş Tabanlı Servikal Model
Bize ulaşın
Kütüphaneye tavsiye et

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.