Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Mamokür Testi, tümör olmayan meme epitel hücre hatlarında Api5 kaynaklı kök konumunu ortaya koydu

742 görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/69999

⸱

24 Şubat 2026

 , 
1Biology Department, Indian Institute of Science Education and Research

Bu makalede

Özet

Bu protokol, tümör olmayan meme epitel hücrelerinde Apoptoz İnhibörü 5 (Api5) tarafından indüklenen kanser kök noktasını incelemek için mamosfer oluşum testinin oluşturulma yöntemini açıklar. Birincil nesil mamutsferlerden toplanan lizatlar, kök hücre benzeri özelliklerin indüksiyonunu değerlendirmek amacıyla farklı kök belirteçleri için analiz edilir.

Özet

Meme kanseri, dünya genelinde kadınlar arasında en yaygın kanser olmaya devam ediyor ve yaş standartlaştırılmış insidans ve ölüm oranlarına sahip olup. Meme kanserini hedefleyen tedavilerdeki ilerlemelere rağmen, hastaların %20'si hastalığın nüksü göstermektedir; bu durum, tedaviye dirençli kanser kök hücreleri (CSC) popülasyonuna bağlanabilir. Bu CSC'ler, tümör kütlesinin eksik rezeksiyonu nedeniyle geleneksel tedavilerden sağ çıkabilir veya tümör kitlesinin eksik rezeksiyonu nedeniyle devam edebilir; bu da daha sonraki aşamada tekrar etmesine yol açar. Bu nedenle, son araştırmalar bu dirençli hücre popülasyonunu tanımlamak, izole etmek ve hedeflemeye odaklanmıştır. In vitro, mamokür oluşumu testi, meme epitelyal popülasyonlarında kök benzeri hücreleri zenginleştirmek ve çoğaltmak için sağlam üç boyutlu bir süspansiyon kültür sistemi olarak hizmet verir. Burada, apoptoz İnhibörü 5'in (Api5) aşırı ekspresyonuyla tümör olmayan meme epitel hücrelerinde mümkün olan kanser kök hücresi benzeri fenotipi değerlendirmek için mamosfer testini kullanan bir yaklaşım sunuyoruz. Protokol, mamutsferlerin seri geçişler aracılığıyla yayılmasını ve mamoküre oluşum verimliliğini ve kendini yenileme kapasitesini değerlendirmeyi içerir. Ayrıca, mamukürlerden toplanan protein lizatları, immünoblotlama yoluyla belirlenmiş kök belirteçleri için incelenir. Bu test, meme epitelyal hücre popülasyonlarında kanser kök hücresi benzeri özelliklerin Api5 gibi yeni düzenleyicilerin araştırılmasına olanak tanır. Tanımlanan yaklaşım, moleküler müdahalelerin karşılaştırmalı çalışmaları veya CSC'leri hedef alan terapötik ajanların in vitro taraması için uyarlanabilir.

Giriş

Kemoterapiye dirençli meme kanserlerinin artması, tedavi direncinin ve nüks etmenin temel nedeni olan kanser kök hücreleri olarak bilinen bir kanser hücresi popülasyonunun belirlenmesi ve hedeflenmesine giderek daha fazla vurgu yapılmasına yol açmıştır. Bu hücreler, farklılaşmadan kaçınma ve hareketsiz kalma yetenekleriyle karakterize edilir; bu da farklı kanser tedavi yöntemlerine karşı dirençgösterebilmelerini sağlar 1,2. Meme kanseri kök hücrelerini tanımlamak için mamosfer oluşumu testi 3,4,5, hücre yüzey belirteçleri 6,7'ye dayalı hücre sıralaması, efflux özelliklerine göre izolasyon, in vivo tümörjenliktestleri 7 ve Oct48, Nanog9, Sox210 ve BMI11 gibi kök hücre nükleer modülatörlerinin değerlendirilmesi gibi çeşitli yöntemler kullanılabilir. Genellikle, kanser kök hücrelerinin tanımlanması ve izole edilmesi, bu yaklaşımlardan birinin veya birkaçının kombinasyonunu içerir.

Apoptoz inhibitörü 5 (Api5), memekanseri 12,13,14, rahim ağzıkanseri 15,16,17, B hücreli kronik lenfoid lösemi 18 ve küçük hücreli olmayan akciğerkanseri 19 dahil olmak üzere birçok kanserde regülasyona uğradığı tespit edilen anti-apoptotik bir proteindir. Yüksek Api5 seviyelerinin servikal16 ve üç negatif meme kanserinde kemoterapi direnciyle ilişkiliolduğu bulunmuştur. Tedavi direnci ve nüks sıkça kanser kök hücreleri tarafından yönlendirildiğine dair giderek artankanıtlar vardır 20,21. Song ve ark.22 tarafından yapılan ilginç bir çalışma, rahim ağılı kanser hücrelerinde Api5'in aşırı ekspresyonunun Nanog seviyelerinin yükselmesine yol açtığını ve bunun da kanser kök seviyesinin artmasına katkıda bulunduğunu ortaya koydu. Laboratuvarımızdan önceki çalışmalar, Api5'in aşırı ekspresyonunun Matrigel destekli 3D kültürlerde yetiştirilen tümör olmayan meme epitelyal hücrelerinin dönüşümüne yol açtığını göstermiştir. Bu dönüştürülmüş hücreler, bozulmuş polarite, artan proliferasyon, sabitlenmeden bağımsız büyüme ve kısmi epitelyalden mezenkimal geçişe (EMT) benzer bir fenotip sergiler. 3D kültürlerde Api5'in aşırı ekspresyonunda gözlemlenen fenotipik değişiklikler, sferoidlerin tek katmanlı kültürlere ayrılmasından sonrakorunmuştur 14. Api5'in kemoterapiye dirençli üçlü negatif meme kanserlerinde yukarı regülasyonlu olduğu göz önüne alındığında, Api5'in meme epitel hücrelerinde kanser kök özelliklerini de düzenleyebileceğini düşünüyoruz.

Bu bağlamda, Api5'in aşırı ekspresyonuyla dönüştürülmüş 3D dissosiyalı, tümörgen olmayan meme epitel hücrelerinden kanser kök hücrelerini tespit etmek için mamosfer oluşum testini ve ardından bu hücrelerin kimliğini doğrulamak için kök hücre belirteçleri için western blotlama uygulanmasını tanımlıyoruz. Mamokür testi, meme epitel hücrelerinin yapışmayan, farklılaşmayan koşullarda kültürlenmesini içerir; bu da kök benzeri/progenitör hücrelerin mamuküre olarak bilinen üç boyutlu yapılarda zenginleşmesini sağlar. Kök benzeri özelliklere sahip olmayan meme epitelyal hücreleri genellikle anoiki geçirir; ancak kök benzeri özelliklere sahip hücrelermamuküre 4,5'e yol açar. Bu yöntem ilk olarak Dontu vearkadaşları tarafından geliştirilmiştir ve sinirsel kök hücreleri ile öncüleri incelemek ve tanımlamak için kullanılan nörosfertestinden ilham almıştır 23. Burada tarif edilen mamosfer testi, vitamin A ve rekombinant insan epidermal büyüme faktörü (EGF) içermeyen B27 ile takviye edilmiş minimal ortamda kök hücre aktivitesi ve kendini yenileme kapasitesinin değerlendirilmesine olanak tanır. Api5'in aşırı ekspresyona sahip 3D ayrışmış hücreleri, Poly(2-hidroksietil metakrilat) (pHEMA) kaplı plakalarda seyrek tohumlanır. Bu, hücrelerin yapışmayan koşullarda büyümesini sağlar; böylece sonraki her mamusfer klonal kökenlidir. Mamutkürelerin yedinci güne kadar büyümesine izin verilir, ardından mamutkür oluşum verimliliği hesaplanır. Gerçek kök hücreleri, zamanla çoğaltma kapasitesini kaybeden kök olmayan hücrelerden ayırt etmek için, mamutkür oluşumunun sonraki nesilleri yapılır. Mamutsferlerin seri olarak geçişi, birincil nesildən toplanan kürelerin ayrılmasını ve tek hücrelerin yeniden kaplamasını içerir; böylece ikincil (ve sonraki) nesil mamukürler oluşturulur. Bu, hücrelerin küre oluşumunu tekrar tekrar başlatıp başlatamayacağını belirler vehücrelerin 5 kendini yenileme kapasitesi olarak nicel edilir.

Bu yöntem, tümörjenik veya transforme edilmiş meme epitel hücrelerinde meme kanseri kök hücrelerini tanımlamak için kullanılabilir. Yöntem, hasta örneklerinden meme kanseri kök hücrelerinin izole edilmesi için de uyarlanabilir. Sistem, kemoterapi direnciyle ilişkili olabilecek meme kanseri kök hücrelerine karşı yeni hedefleri belirlemeye yardımcı olabilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

1. Doku kültür plakalarının Poli(2-hidroksietil metakrilat), pHEMA ile kaplanması

  1. 1,2 g pHEMA (molekül ağırlığı ̴ 300.000) %95 etanolden oluşan 100 mL'de sürekli karıştırarak 65 °C'de çözülerek %1,2 pHEMA çözeltisi hazırlanır ( bkz. Malzemeler Tablosu).
  2. Standart doku kültür plakalarını, 6 kuyruklu bir plakanın başına 1 mL uygulanarak pHEMA ile kaplayın. PHEMA çözeltisinin hacmi, doku kültür damarının boyutuna göre ayarlanabilir.
  3. Tabakları steril koşullarda 40 °C sıcaklıkta fırında kurumasına izin verin.
  4. Plakaları 15 dakika UV ışığına maruz bırakın, ardından Dulbecco'nun fosfatla tamponlanmış tuzlu suyu (DPBS) ile üç yıkama yapın ve ardından mamokür oluşumu testi için kullanın.

2. Birincil nesil mamutsferlerin tohumlanması

  1. Kültür 3D,büyüme ortamında 16. gün 3D kültürlerin dissosiyasyonu ile elde edilen MCF10A hücrelerini (Kontrol ve Api5 aşırı ekspresyonu) dissosiyasyon yaptı.
    NOT: Büyüme ortamının bileşimi: %5 at serumu takviyesi ile sodyum piruvat içermeyen yüksek glikozlu DMEM, 10 μg/mL insülin, 0,5 μg/mL hidrokortizon, 20 ng/mL rekombinant insan epidermal büyüme faktörü (EGF), 100 ng/mL kolera toksini ve 200 birim/mL penisillin-streptomisin takviyesi (bkz. Materyaller Tablosu).
  2. Kullanılan ortamı çıkarın, hücreleri 1 mL DPBS ile yıkayınız, ardından %0,05 tripsin-EDTA 500 μL eklenin ve 37 °C'de nemlendirilmiş %5CO2 kuluçka makinesinde 12-15 dakika boyunca kuluçka yapın, tüm hücreler tripsizize olana kadar.
  3. Tüm hücreler yerinden çıkarıldıktan sonra, tripsin aktivitesini nötralize etmek için 2 mL yeniden süspansiyon ortamı eklenin ve hücre süspansiyonunu 112 × g ile oda sıcaklığında 10 dakika boyunca döndürün.
    NOT: Yeniden süspansiyon malzemesinin bileşimi: Yüksek glikozlu DMEM, sodyum piruvat içermeden %20 at serumu ve 200 birim/mL penisillin-streptomisin takviyesi.
  4. Süpernatantı aspire edin ve hücre pelletini 1 mL mamoküre ortamında yeniden süspansiyona salın. Hücre süspansiyonunu 25 G'lik bir iğneden geçirerek tek hücreli süspansiyon elde edin.
    NOT: Mamosfer ortamının bileşimi: DMEM/F12, 20 ng/mL epidermal büyüme faktörü (EGF) takviyesi, 1 × B27 takviyesi A vitamini içermeyen ve 200 birim/mL penisillin-streptomisin (bkz. Materyaller Tablosu).
  5. Hemositometre kullanarak, her kuyu başına 0,2 ×10-4 hücre tohumlamak için gereken hücre sayısını sayın ve hücre süspansiyon hacmini hesaplayın.
    NOT: Mamutfer oluşum verimliliğini doğru şekilde belirlemek için düşük tohumlama yoğunluğunu koruyun, böylece hücre agregasyonunun etkisini en aza indirin. İmmünoblotasyon için protein lizatları toplanırken, hücre yoğunluğu her kuyu başına 2,5 ×10-5 hücreye kadar yükseltilebilir.
  6. Gerekli hücre süspansiyon hacmini 2 mL mamoküre ortamında seyreltin ve tohumu 6 kuyruklu bir plakanın her kuyusunda incelendirin. Her durum için tohum hücreleri üçlük.
  7. 37 °C'de nemlendirilmiş %5CO2 kuluçka makinesinde 7 gün boyunca kuluçka yapın.
  8. Yedi gün kültür geçirdikten sonra, her kuyunun çapı 50 μm'den büyük olan mamutküre sayısını manuel olarak saymak için ya gratikül takılı mikroskop ile ya da ışık mikroskobu altında bir dörtre ızgara kullanılarak sayılır.
  9. Mamutkürleri, ışık mikroskobuna takılmış dijital kamera ile 20x büyütmede görüntüleyin.
  10. Mamukür oluşum verimliliğini (MFE) aşağıdaki formül5 kullanarak hesaplayın
     Denklem 1

3. İkincil nesil mamutkürlerin tohumlanması

  1. Birinci nesilde oluşan mamutsferleri 15 mL'lik bir tüpte toplayın ve oda sıcaklığında 300 × g boyunca 10 dakika boyunca santrifüj yapın.
  2. Süpernatantı aspire edin, mamosfer pelletini geride bırakın.
  3. Pelleti DPBS ile yıka.
  4. Mamokür pelletine 200 μL %0,05 tripsin-EDTA ekleyin ve nemlendirilmiş %5CO2 kuluçka makinesinde 37 °C'de 2-3 dakika kuluçka yapın. Tripsin çözeltisindeki mamutkürleri 25 G'lik bir iğneden üç kez geçirerek tek hücreli bir süspansiyon elde edin.
  5. Tripsin aktivitesini nötralize etmek için 0,5 mL resüspansiyon ortamı ekleyin ve hücre süspansiyonunu oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 112 × g boyunca döndürün.
  6. Süpernatantı aspire edin ve hücre pelletini 0,5 mL mamokür ortamında yeniden süspansiyona alın.
  7. Bir hemositometre kullanarak, her kuyu başına 0,2 ×10-4 hücre tohumlamak için gereken hücre sayısını sayın ve hücre süspansiyon hacmini hesaplayın.
    NOT: Kendi kendini yenileme kapasitesini değerlendirmek için düşük hücre yoğunluğunu koruyun, böylece hücre toplama etkisini en aza indirin.
  8. Gerekli hücre süspansiyon hacmini 2 mL mamoküre ortamında seyreltin ve tohumu 6 kuyruklu bir plakanın her kuyusunda incelendirin. Her durum için tohum hücreleri üçlük.
  9. 37 °C'de nemlendirilmiş %5CO2 kuluçka makinesinde 7 gün boyunca kuluçka yapın.
  10. 7 gün kültürde geçirildikten sonra, her plakada çapı 50 μm'den büyük olan mamutküre sayısını, ya graticul ile takılı bir mikroskop ya da bir dörtgen ızgara ile sayın.
  11. Mamutkürleri, ışık mikroskobuna takılmış dijital kamera ile 20x büyütmede görüntüleyin.
  12. Kendi kendini yenileme kapasitesini aşağıdaki formül5 kullanarak hesaplayın
    Denklem 2

4. Api5 aşırı ifadesinde pluripotensi belirteçlerindeki değişiklikleri tespit etmek için Western blotlama

  1. Birinci nesilde oluşan mamutsferleri 15 mL'lik bir tüpte toplayın ve oda sıcaklığında 300 × g boyunca 10 dakika boyunca santrifüj yapın.
  2. Süpernatantı aspire edin, mamosfer pelletini geride bırakın.
  3. Pelleti DPBS ile yıka.
  4. Pelleti buz gibi soğuk RIPA tamponunda toplayarak protein lizat elde edin ve standartprotokol 24'e göre immünoblotlama gerçekleştirin.
    NOT: RIPA tamponunun bileşimi: 50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, %1 Triton X-100, %0.5 Sodyum deoksikolat, %0.1 sodyum dodesil sülfat (SDS), 1 mM etilenediamintetraasetik asit (EDTA), 1 mM fenilmetisülfonil florür (PMSF), 10 mM sodyum florür, 1 mM sodyum ortovanat.
  5. Kök belirteçleri için prob - Oct3/4, Nanog, Sox2 ve BMI1 ve yükleme kontrol GAPDH (bkz. Antikor seyreltmeleri için Malzeme Tablosu ).
  6. ImageJ üzerinde densitometrik analiz kullanarak protein seviyelerini nicelikle ölçemek. Western blot görsellerinde ilgi alanını seçin ve her şerit için bir yoğunluk profili oluşturun.
  7. İlgi duyulan proteinin göreceli yoğunluklarını her bir kanal için GAPDH'nin yoğunluklarına normalleştirin. Her protein için katlama değişimini hesaplayın.
  8. Protein seviyelerindeki fold değişimini herhangi bir grafik yazılımıyla çizin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Yapışmayan koşullarda mamosfer oluşum verimliliğini değerlendirmek için, protokole göre kontrol ve Api5 aşırı ekspresyonlu 3D dissosiyasyon MCF10A hücreleri, poliHEMA kaplı plakalara yerleştirildi. Api5 aşırı eksprese hücreleri, kontrollere göre ortalama mamokür oluşum verimliliğinde 1,58 kat artış göstermiştir (Şekil 1B,C). Bu artış, Api5'in daha yüksek ekspresyonunun, yapışmayan, serum yoksunluğu koşullarında hayatta kalıp çoğalan kök hücre benzeri öncüllerin oranını artır...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Yerleşik kanser hücre hatlarının veya tümör köken hücrelerin tek katmanlı kültürleri, kanser fenotiplerini düzenleyen çeşitli moleküler yollar hakkında içgörüler sağlarken, kanser kök hücrelerine odaklanan araştırmalar iki boyutlu kültürlerde yapılamaz. Kanser kök hücrelerinin mevcut tedavi stratejilerinden sonra nüks için önemli bir katkı faktörü olduğuna inanıldığından, bu hücreleri incelemek için sağlam testler oluşturmakgereklidir ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar potansiyel bir çıkar çatışması olmadığını belirtmektedir.

Teşekkürler

Bu çalışma, SERB-POWER (SPG/2021/002661-G) tarafından verilen bir hibe ve kısmen IISER, Pune Core fonları tarafından desteklendi. S.B., UGC-SRF bursu tarafından finanse edilmiştir. MCF10A hücrelerini cömertçe sağladığı için Prof. Raymond C. Stevens'a (Scripps Araştırma Enstitüsü, ABD) ve Dr. Abhijith K'ye (Ahammune Biosciences Pvt. Ltd.) makale üzerindeki değerli katkıları için teşekkür etmek isteriz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
0.05% Trypsin EDTA  Invitrogen25300062
37 °C humidifiye inkübatörNew BrunswickGalaxy 170 R
Anti-Bmi1 Tavşan pAbABclonalA134721:1000 seyreltik, 4 °C'de gece boyu inkübasyon
Anti-GAPDH antikoruSigmaG9545-200UL1:10000 seyreltik, oda sıcaklığında 1 saatlik inkübasyon
Anti-Nanog Tavşan mAbABclonalA226251:5000 seyreltik, 4 °C'de gece boyu inkübasyon
Anti-Oct3/4 Antikoru (C-10)Santa Cruzsc-52791:300 seyreltik, 4 °C'de gece boyu inkübasyon
Anti-Sox2 Antikoru (E-4)Santa Cruzsc-3658231:300 seyreltik, 4 °C'de gece boyu inkübasyon
B-27 Takviyesi (50x), vitamin A içermeyenInvitrogen12587010
SantrifüjBeckman CoulterAllegra X-15R
Kolera toksini Sigma C8052-1MG dH2O içinde 1 mg/mL stoğu
DMEM/F12Thermo11330032
Dulbecco'nun fosfat tamponlu salin (DPBS)Invitrogen14190-144
Epidermal büyüme faktörü (EGF) Sigma E9644-0.2MG dH2O içinde 100 mg/mL stoğu
Etanolü mutlak 99.9%Jebsen & Jessen GmbH & Co. Almanya58051 L05
Etilendiamintetraasetik asit disodyum tuzu dihidrat (EDTA)SRL43272
Yüksek glikozlu DMEM, sodyum pirüvatsızInvitrogen11965126
Ateş atı serumu  Invitrogen16050122
Hydroklorik asit (HCl)QualigensQ29145Tris-HCl'in (pH 8.0) pH'ını ayarlamak için kullanılır
Hidrokortizon Sigma  H0888Etanol içinde 1 mg/mL stoğu
ImageJ Görüntü işleme yazılımı
ImageQuant LAS 4000 Cytiva
Immobilon Western kimilüminisan HRP substratıMerckWBKLS0500
İnsülin Sigma I1882 %1 glasiyal asetik asit içinde 10 mg/mL stoğu
Nikon Eclipse TS-100 mikroskopuNikonBM-1919
MCF10A hücreleriProf. Raymond C. Stevens'tan (Scripps Research Institute, ABD) hediye
Penisilin-Streptomisin Lonza 17-602E
Fenilmetil sülfonil florür (PMSF)Sigma78830-5G
Grafik yazılımı GraphPad Prism 10
Poli(2-hidroksietil metakrilat) (pHEMA)Santacruzsc-253284%95 etanol içinde %1.2 pHEMA
Sodyum klorür (NaCl)SRL41721
Sodyum desoksikolatAmresco0613-100G
Sodyum dodesil sülfat (SDS)SRL54468
Sodyum florür (NaF)HiMediaRM1081-500G
Sodyum ortovanadatSigma-AldrichS6508-10G
Tris tamponuSRL71033
Triton X-100SigmaT8787-250ML

Kaynaklar

  1. Li, X., et al. Intrinsic resistance of tumorigenic breast cancer cells to chemotherapy. J Natl Cancer Inst. 100 (9), 672-679 (2008).
  2. Creighton, C. J., et al. Residual breast cancers after conventional therapy display mesenchymal as well as tumor-initiating features. Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (33), 13820-13825 (2009).
  3. Dontu, G., et al. In vitro propagation and transcriptional profiling of human mammary stem/progenitor cells. Genes Dev. 17 (10), 1253-1270 (2003).
  4. Grimshaw, M. J., et al. Mammosphere culture of metastatic breast cancer cells enriches for tumorigenic breast cancer cells. Breast Cancer Res. 10 (3), R52(2008).
  5. Shaw, F. L., et al. A detailed mammosphere assay protocol for the quantification of breast stem cell activity. J Mammary Gland Biol Neoplasia. 17 (2), 111-117 (2012).
  6. Al-Hajj, M., Wicha, M. S., Benito-Hernandez, A., Morrison, S. J., Clarke, M. F. Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 100 (7), 3983-3988 (2003).
  7. Ponti, D., et al. Isolation and in vitro propagation of tumorigenic breast cancer cells with stem/progenitor cell properties. Cancer Res. 65 (13), 5506-5511 (2005).
  8. Kim, R. J., Nam, J. S. OCT4 expression enhances features of cancer stem cells in a mouse model of breast cancer. Lab Anim Res. 27 (2), 147-152 (2011).
  9. Lu, X., Mazur, S. J., Lin, T., Appella, E., Xu, Y. The pluripotency factor nanog promotes breast cancer tumorigenesis and metastasis. Oncogene. 33 (20), 2655-2664 (2014).
  10. Leis, O., et al. Sox2 expression in breast tumours and activation in breast cancer stem cells. Oncogene. 31 (11), 1354-1365 (2012).
  11. Paranjape, A. N., et al. Bmi1 regulates self-renewal and epithelial to mesenchymal transition in breast cancer cells through Nanog. BMC Cancer. 14 (1), 785(2014).
  12. Bousquet, G., et al. High expression of apoptosis protein (Api-5) in chemoresistant triple-negative breast cancers: an innovative target. Oncotarget. 10 (61), 6577-6588 (2019).
  13. Basset, C., et al. Api5 a new cofactor of estrogen receptor alpha involved in breast cancer outcome. Oncotarget. 8 (32), 52511-52526 (2017).
  14. Kuttanamkuzhi, A., Panda, D., Malaviya, R., Gaidhani, G., Lahiri, M. Altered expression of anti-apoptotic protein Api5 affects breast tumorigenesis. BMC Cancer. 23 (1), 374(2023).
  15. Cho, H., et al. Apoptosis inhibitor-5 overexpression is associated with tumor progression and poor prognosis in patients with cervical cancer. BMC Cancer. 14 (1), 545(2014).
  16. Jang, H. S., et al. API5 induces cisplatin resistance through FGFR signaling in human cancer cells. Exp Mol Med. 49 (9), e374(2017).
  17. Song, K. H., et al. Apoptosis inhibitor 5 increases metastasis via Erk-mediated MMP expression. BMB Rep. 48 (6), 330-335 (2015).
  18. Krejci, P., et al. The antiapoptotic protein Api5 and its partner, high molecular weight FGF2, are up-regulated in B cell chronic lymphoid leukemia. J Leukoc Biol. 82 (6), 1363-1364 (2007).
  19. Koci, L., et al. Apoptosis inhibitor 5 (API-5; AAC-11; FIF) is upregulated in human carcinomas in vivo. Oncol Lett. 3 (4), 913-916 (2012).
  20. Phi, L. T. H., et al. Cancer stem cells (CSCs) in drug resistance and their therapeutic implications in cancer treatment. Stem Cells Int. 2018 (1), 5416923(2018).
  21. Zhou, H. M., Zhang, J. G., Zhang, X., Li, Q. Targeting cancer stem cells for reversing therapy resistance: mechanism, signaling, and prospective agents. Signal Transduct Target Ther. 6 (1), 62(2021).
  22. Song, K. H., et al. API5 confers cancer stem cell-like properties through the FGF2-NANOG axis. Oncogenesis. 6 (1), e285(2017).
  23. Reynolds, B. A., Weiss, S. Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system. Science. 255 (5052), 1707-1710 (1992).
  24. Bodakuntla, S., Libi, A. V., Sural, S., Trivedi, P., Lahiri, M. N-nitroso-N-ethylurea activates DNA damage surveillance pathways and induces transformation in mammalian cells. BMC Cancer. 14 (1), 287(2014).
  25. Pastrana, E., Silva-Vargas, V., Doetsch, F. Eyes wide open:a critical review of sphere-formation as an assay for stem cells. Cell Stem Cell. 8 (5), 486-498 (2011).
  26. Eyre, R., et al. Patient-derived mammosphere and xenograft tumour initiation correlates with progression to metastasis. J Mammary Gland Biol Neoplasia. 21 (3-4), 99-109 (2016).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Api5 A r fadesiMeme Epitel H creleriKanser K k H creleriMammosfer Olu umuz Yenilenme KapasitesimmunoblotlamaK k H cre Belirte leriProtein LizatT m rijenik Olmayan H cre Hatlar
Mamokür Testi, tümör olmayan meme epitel hücre hatlarında Api5 kaynaklı kök konumunu ortaya koydu
Bize ulaşın
Kütüphaneye tavsiye et

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.