Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Akciğer Adenokarsinom Hücre Hattından Tümör Organoid Kültürleri Üretimi

299 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/70387

⸱

12 Haziran 2026

 ,  ,  , 
1State Key Laboratory of Genetics and Development of Complex Phenotypes, School of Life Sciences, Fudan University, 2Shanghai Key Laboratory of Lung Inflammation and Injury, Department of Pulmonary Medicine, Zhongshan Hospital, 3National Demonstration Center for Experimental Biology Education, School of Life Sciences, Fudan University

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Burada, A549 hücre hattından tümör organoidlerinin oluşturulması için hızlı, saf ve maliyet etkin bir yöntem sunuyoruz; bu yöntem ön testler ve eğitim amaçlı amaçlarla uygundur.

Özet

Burada, A549 insan akciğer adenokarsinom hücre hattından Hücre Hattı Tümör Organoidleri (CDTO) üretmek için bir protokolü tanımlıyoruz. Protokol, 2D genişletilmiş A549 hücrelerinin Matrigel'e gömülmesini ve uzun süreli kültür için 3D kültür ortamında tutulmasını içeriyor. Önerilen tohumlama yoğunluğu 500 hücre/μL olarak belirlendi, tutarlı organoid oluşumunu desteklemek için belirlendi. Ortaya çıkan CDTO'lar, hematoksilin ve eozin (H&E) boyama ile immünoflüoresans (IF) ile karakterize edildi. Organoidler, akciğer adenokarsinom belirteçleri Tiroid Transkripsiyon Faktörü 1 (TTF-1), yapışma proteini E-Cadherin (ECAD) ve sitoskelet proteini Keratin 7 (KRT7) yüksek ekspresyonu korudu. Ayrıca, sıkı birleşim proteini Zona Occludens 1 (ZO-1) ekspresyonu, tümör organoidlerinin polaritesini düzensiz gösterdi. Bu protokol, akciğer adenokarsinomu araştırmaları için teknik olarak basit, maliyet etkin ve tamamen tümörlü bir organoid platform sunar. Basitliği ve tekrarlanabilirliği, öğrencilerin sınırlı bir laboratuvar programı içinde temel 3D tümör organoid kültür tekniklerini edinmelerine yardımcı olan lisans laboratuvar eğitimi için de uygun hale getirir.

Giriş

Organoidler, kök hücrelerden kaynaklanan ve gerçek organların biyolojik karmaşıklıklarını önemli ölçüde tekrarlayabilen in vitro. kendi kendini organize eden üç boyutlu (3D)yapılardır 1. Organoidleri oluşturan hücreler, indüklenmiş pluripotent kök hücrelerden veya normal kök/progenitör hücreler, farklılaşmış hücreler ve tümör hücreleri içeren doku kök hücrelerinden türemişolabilir 2. Geleneksel iki boyutlu kültür sistemleri ve hayvan modelleriyle karşılaştırıldığında, organoidler insan vücudunun fizyolojik özelliklerini daha yakından taklit edebilir ve daha fazla deneysel esneklik sunabilir. Sonuç olarak, organoid teknolojisi ilaçgeliştirme 3, kişiselleştirilmiştıpta 4 ve hastalıkmodellemesinde yaygın olarak uygulanmıştır 5.

Kolorektal6, prostat7, pankreas8, mide9, hepatik10, safra11, meme12 ve nöroendokrin tümörler dahil olmak üzere geniş bir kanser yelpazesi için çok sayıda çalışma organoid modelleri oluşturmuştur. Ancak, tümör organoid araştırmalarındaki en büyük zorluklardan biri saflığı korumaktır. Örneğin, küçük hücreli olmayan akciğer kanseri üzerine yapılan bir çalışma, tümör örneklerinin genellikle normal ve kötü huylu hücrelerin karışımını içerdiği ve kültür13'ten önce tamamen ayrılması zor olan organoidlerin yalnızca %17'sinin tamamen tümör olduğunu ortaya koydu. Bu kirlilik sorunu, tümör hücrelerinin tümü dışı hücrelerin dışa çıkmasıyla eliminasyonuna neden olabilir, ilaç hassasiyet testlerinin okumalarını engelleyebilir ve tümör hücrelerinden gelen RNA'lar ve proteinlerin, kontrolsüz oranlarda kontamine hücreler tarafından seyreltildiği RT-qPCR veya Western Blot gibi yanlış moleküler analizlere yol açabilir.

Bu sorunu ele almak için, araştırmacılar, tümör hücrelerinin belirli büyüme faktörlerine olan azalmış bağımlılığını kullanarak, normal hücre büyümesini engelleyen ve tümör hücre genişlemesini teşvik eden seçici kültür ortamlarının tasarımınıaraştırmıştır 14. Ayrıca, saf tümör organoidleri oluşturmak için hücre ayırma veya monoklonal tanımlama gibi stratejiler geliştirilmektedir.

Bu protokol, kısmen kanser kök hücresi benzeri özellikler sergilediği, ayrıca in vitro üzerinde artırılmış klonojenlik, proliferatif potansiyel ve tümörjenlik gösterdiği bildirilen A549 insan akciğer adenokarsinom hücre hattı kullanılarak Hücre Hattı Tümör Organoidlerinin (CDTO) üretimini tanımlar.15. Ortaya çıkan CDTO'lar, törenle özgü biyobelirteçler Tiroid Transkripsiyon Faktörü 1 (TTF-1)16, yapışma proteini E-Cadherin (ECAD)17 ve sitoskelet proteini Keratin 7 (KRT7)16 ifadesini sürdürmüş ve tümör organoidlerine özgü fizyolojik özellikler sergilemiştir. Bu model kolayca kurulabilir ve tanımlanmış kanser hücresi bileşenleri içerir; bu da tümör organoid alanına yeni başlayanlar veya birincil tümör organoid kültürlerinde tümör kimliğinin kaybı nedeniyle zorlananlar için uygundur. Potansiyel uygulamalar arasında ön ilaç hassasiyet testi18, tümör mikroçevreçalışmaları 19 ve 3D kültür teknikleri konusunda eğitim yer almaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Laboratuvarda oda sıcaklığı 22–24 °C olup RT olarak adlandırılır. Salıncak kovalı santrifüj kullanımı önerilir. Reaktifler ve kullanılan ekipmanlar Malzeme Tablosu'nda listelenmiştir.

1. Birincil A549 organoidlerinin kurulması

  1. Hazırlık ve A549 hücre hasadı
    1. %70 birleşimde A549 hücreleri içeren 6 cm uzunluğunda bir tabak hazırlayın. TrypLE ve PBS'yi 37 °C'ye kadar önceden ısıtın. Hücre miktarını ve Matrigel hacmini deneysel tasarım ve Tablo 1'e göre hesaplayın.
      1. Erime, en az iki buz kuyu için en az 60 dakika boyunca Matrigel aliquotları gerekti. Kubelerin yarımküre şeklinde kalmasını sağlamak için polistiren ve TC ile işlenmiş plakalar hazırlayın.
      2. Taze hazırlanmış 2D ortam (Dulbecco'nun %10 fetal sığır serumu içeren Modified Eagle's Medium) ve 3D ortam (İnsan Akciğer Adenokarsinomi Organoid Ortamı). 3D ortam, ticari kitlerden veya Sachs, N. ve diğerlerinin Hans Clever'ınlaboratuvarından çalışmalarına göre üretilebilir 20.
        NOT: Bir 6 cm'lik tabak genellikle sindirimden sonra yaklaşık 5.000.000 hücre verebilir. Deneysel tasarım için giriş hücre sayısını azaltın. Cam taban kullanarak konfokal görüntüleme için tasarlanmış plakalar, Matrigel'in doğru bir 3D şekil oluşturması için uygun değildir.
    2. Kullanılan 2D ortamı aspire edin ve hücreleri bir kez 1 mL PBS ile yıkayarak kalan serumu çıkarın. PBS aspirasyonu, 1 mL önceden ısıtılmış TrypLE ekleyin ve plakayı 37 °C'de 4 dakika kuluçka yapın.
    3. Hücreleri mikroskop altında gözlemleyin. Sitoplazma geri çekildiğinde ve hücreler hücreler arası bağlantılarını kaybettiğinde, enzimatik reaksiyonu sonlandırmak için eşit hacimde (1 mL) yeni 2D ortam ekleyin.
    4. Yapışkan hücreleri kültür yüzeyinden ayırmak ve yeniden askıya almak için nazikçe pipet yapın. Hücre süspansiyonunu 1,5 mL santrifüj tüplerine aktarın ve 300 × g. seviyesinde RT'de 3 dakika boyunca santrifüj yapın ve hücreler pelletlendirin.
    5. Süpernatantı atın ve hücre pelletini 1 mL 2D ortamda yeniden askıya alın. 10 μL hücre süspansiyonunu 100 μL'ye seyreldin ve hücre numaralarını hemositometre ile sayın. Gerekli hacmi 1.1.1. adıma göre hesaplayın ve önceden durulanmış uçlu 1,5 mL'lik santrifüj tüpüne aspirasyon yapın.
  2. Hasat edilen hücrelerin Matrigel'e tohumlanması
    1. Buz ve pipet uçlarını -20 °C soğutucuda 1 dakika boyunca hazırlayın ve mümkünse düşük tutma uçları kullanın. Matrigel aliquotlarında kristal kalmadığından ve uç çözeltiye girdiğinde baloncukların oluşmadığından emin olun.
    2. RT'de 300 × g. hassasiyetinde toplanan hücreleri içeren tüpü santrifüjle edin ve üst kısımları atın. Tüpü buzun üzerine koyun. Önceden soğutulmuş pipet uçlarını kullanarak gerekli hacmi yavaşça üfleyin ve buzun üzerindeki pellete ekleyin. Pipetin sadece ilk durağını buzun üzerinde yavaşça tekrar askıya alın. Gözlem gerekiyorsa lütfen buzu 10 saniyeden fazla bırakmayın.
    3. Önceden soğutmuş pipet uçları kullanın ve karışımı buz üzerinde tutun. Her kuyunun ortasına karışımdan bir aliquot dağıtın. Pipeti yavaşça çekin, sadece ilk durağı kullanarak baloncuk oluşumunu önleyin.
      NOT: Karışımın ortasında kubbe şeklinde bir 3D yapı oluşturması gerekir. Karışımı tekrar askıya alın ve sonraki kuyuya geçin. Mümkünse, kenar kuyularını kullanmaktan kaçının ve bu kuyruklara PBS ekleyin.
    4. Plakayı 37 °C'de %5 CO₂ inkübatörde 40 dakika boyunca inkübe yapın, böylece jel polimerizasyonu sağlanır. Matrigel katılaştıktan sonra, kuyu duvarı boyunca dikkatlice 3D ortam ekleyin ve 37 °C'de kültüre devam edin.
      NOT: Dağıtım sırasında baloncuklar oluşturmaktan kaçının. Baloncuklar oluşursa, karışımın o kısmını kullanmaktan kaçının.
    5. Kültür sırasında, 3D ortamı her 3 günde bir veya renk değişikliği (pembeden sarıya) gözlemlendiğinde değiştirin. Her ortam değişiminde organoid büyümesini ters mikroskop altında inceleyin ve yapısal gelişimi izlemek için morfolojiyi fotoğrafik olarak belgeleyin.
      NOT: Organoidler, 5000 hücre/μL ile belirtildiği gibi parçalanmış veya parçalanmış değil, çapları 30 μm'den uzun çaplı yoğun ve karmaşık olmalıdır (Şekil 1D).

2. Organoid türlerin fiksasyonu, gömülmesi ve kesitlenmesi

  1. 6–9. günlerde organoid kültürleri hazırlayın. Kültür ortamını hücre kültür plakasından çıkarın. Organoidleri 1 mL soğuk PBS ile pipetleyerek nazikçe ayırın ve yapışmayı önlemek için %5 BSA ile önceden durulanmış 1,5 mL tüpe aktarın. Organoidlerin yerçekimiyle doğal olarak buz üzerinde yerleşmesine izin verin ve süpernatantı dikkatlice çıkarın.
  2. Pelleti yeniden süzülmek için 1 mL soğuk PBS ekleyin. Organoidlerin yerçekimiyle doğal olarak yerleşmesini en az 5 dakika boyunca bırakın ve süpernatantı dikkatlice çıkarın. Bazı organoidler tortu birikmezse, 200 × g. sıcaklıkta 4 °C'de 1 dakika boyunca kısa bir süreliğine santrifüj yapın. Bu adım birden fazla kez yapılacak ve 'küçük yıkama' olarak adlandırılacaktır.
  3. Kalan Matrigel'i çıkarmak için küçük yıkamayı iki kez yapın. Kalıntı Matrigel devam ederse, yıkama sırasında soğuk PBS'ye son 10 mM EDTA konsantrasyon ekleyin.
    DIKKAT: Örnekleri duman kapüşonuna aktarın. Organoidleri kapatacak kadar %4 paraformaldehit (PFA) ekleyin ve buharlı bir kaputuda 1 saat buzda sabitlenin. Fiksasyonu atıp küçük yıkamayı iki kez yapın. IF boyama için 4.1. adıma devam edin.
  4. Organoidler tüpün dibine yerleştikten sonra, üst maddeyi atıp örnekleri 70–75 °C sıcaklığında metal banyosunda 5 dakika boyunca ısıtarak hızlı agaroz katılaşımını önlemek için 2.7. adımda önderin.
  5. %3 (w/v) agarozu 1× PBS içinde hazırlayın ve karışımı mikrodalga su banyosunda tamamen çözünüp şeffaf hale getirene kadar ısıtın. Hacmi kaybını veya agaroz konsantrasyonundaki değişiklikleri önlemek için kaynatmaktan kaçının.
  6. Sabit organoidleri %30–50 μL agarozda hızla yeniden süzülerek eşit dağılımdan emin olun ve 20–30 dakika boyunca buzda soğutun, böylece kabarcıklar oluşmasını önleyin.
  7. Agaroz-organoid karışımı katılaştıktan sonra, agaroz bloğunu tüpten dikkatlice bir iğne ile çıkarın ve etiketli bir doku göme kaseta aktarın.
  8. Agaroz bloğunu içeren kaseti sıralı olarak derecelendirilmiş etanol çözeltilerine (%30, %50, %70 [gece boyunca 4 °C'de saklanabilir], %80, 90%, %95, %100 ve %100 sıcaklıkta susuz bırakmak için daldırın. Her adımı 20 rpm'de sallama platformunda 30 dakika boyunca kuluçka yapın.
  9. Parafin mumu bloklarını fırında önceden eritin ve 65 °C'de kullanın. Dehidratlanmış agaroz gömülü organoidleri temizlemek için ksilene aktarın. Geri kalan etanol çıkarmak için her biri 15–20 dakika boyunca iki kez batırın.
  10. Doku kasetlerini sıralı olarak parafin banyosu 1'e 45 dakika aktarın, ardından parafin banyo 2'ye 45 dakika daha koyun.
  11. Doku kasetlerini ve metal kalıpları gömüme istasyonunun erimiş parafin odasına yerleştirin. Organoid veya doku örneğini kasetten çıkarıp metal kalıbın ortasına yerleştirin. Kalıpı soğuk bir plakaya yerleştirerek numune yönünü sabitleyin.
  12. Doku kaseti metal kalıbın üzerine yerleştirin, içine ek erimiş parafin ekleyin ve soğuk plakada en az 60 dakika soğumaya bırakın. Parafin bloğu tamamen katılaştıktan sonra, metal kalıp çıkarılır ve parafinli organoid bloğu 4 °C'de saklayarak kesitlenene kadar saklayın.
  13. Parafinle gömülü organoid blokları mikrotom kullanarak kesimleyin. Her bölümün kalınlığının eşit olduğundan emin olun, böylece sonraki boyama ve görüntüleme yapılmasını kolaylaştırın.
  14. Kesilen bölümlerin, parafin kurdelelerinin tam genleşmesi için 40 °C sıcaklıkta tutulan bir su banyosunda yüzmesine izin verin. Her bölümün tek, kırışıksız bir katman olarak yayıldığından emin olun; katlanmış veya üst üste binen bölümleri at.
  15. Genişletilmiş bölümleri, slaytı bölümün altına hafif bir açıyla daldırarak ve dikey olarak kaldırarak dokuyu yakalayarak yapışkan mikroskop slaytlarına monte edin. Sonraki işleme sırasında numune tanımını korumak için slaytları kalemle etiketleyin.

3. Hematoksilin ve Eozin (H&E) boyama

  1. Doku veya organoid kesitler içeren slaytları 60 °C fırında 1–2 saat pişirin; böylece düzgün yapışma sağlanır ve kalıntı parafin çıkarılır.
  2. Bölümleri sıralı olarak 15 dakika ksilen I, 15 dakika ksilen II'ye batırarak mumdan arındırın ve ardından 5 dakika boyunca 100%, 100%, 95%, 90%, %80 ve %70 dereceli etanol serileriyle yeniden nemlendirin. Sonra slaytları çift damıtılmış suda (ddH₂O) iki kez, her biri 5 dakika boyunca durulayın.
  3. Bölümleri hematoksilinle 5 dakika boyayın, akan musluk suyunda 1–2 dakika durulayın ve ardından %1 asit alkolle 2 saniye diferensiya yapın. Musluk suyunda tekrar 1–2 dakika yıkayacak, ardından çekirdekleri %1 amonyaklı suda 5 saniye ağartacak, ardından musluk suyunda 1–2 dakika boyunca son durulama işlemi yapılacak.
  4. Bölümleri 3 dakika boyunca 70%, 80%, %90 ve %95 dereceli etanol serileriyle kurutun, ardından 10 dakika boyunca alkol bazlı eosin çözeltisinde eosin ile karşı boyama yapın.
  5. Bölümleri mutlak etanolle iki kez durulayın, her biri 5 dakika boyunca.
    NOT: Alkol bazlı eozin için, boyamadan önce %95 etanol'e kadar dehidrasyonun sağlanmasını sağlayın. Suda çözünen eozin için, kurutmadan önce boyama işlemi yapılabilir.
  6. Bölümleri iki kez ksilen içine batırarak temizleyin, her biri 5 dakika boyunca ve montaja kadar ksilen içinde tutun.
  7. Ksilenden çıkarıldıktan hemen sonra kaydırmaları nötr reçine montaj ortamı ile takın ve hava kabarcıklarından dikkatlice kaçının.
  8. Monte edilmiş slaytları RT rejiminde 30–60 dakika hava ile kurutun, ardından ışık mikroskobu altında gözlemleyin.
    NOT: Ksilen temizlemesinden hemen sonra montaj, oksidasyonu önler ve optik berraklık sağlar.

4. Tam montajlı immünoflüoresans boyama

  1. 2.4. adımdan devam edin. Pellete 1 mL bloklama ve geçirimlilik çözeltisi (%5 BSA + %0,3 Triton X-100) ekleyin ve RT'de 60 dakika veya 4 °C'de 1–2 gün boyunca durma noktası olarak kuluçka yapın.
  2. Birincil ve ikincil antikorları, üreticinin önerdiği orana göre bloklama ve permeabilizasyon çözeltisinde seyreltirin. Küçük bir kez yıkayın ve pellete 200 μL seyreltilmiş birincil antikor ekleyin. Gece boyunca 4 °C'de kuluçka yapın.
  3. Küçük yıkamayı 3 kez yapın ve pellete 200 μL seyreltilmiş ikincil antikor ekleyin. RT'de 60 dakika kuluçka yapın.
  4. Sonra, küçük yıkamayı 3 kez yapın. Pelleti yeniden süspansiyona almak için 15 μL montaj ortamı ekleyin ve organoidleri içeren ortamı cam bir sürgüye bırakın. Yavaşça bir örtü sürürün ve kaplamayı oje ile kapatın. Kapak kaymasını elle sıkıştırmayın ve montaj ortamının yüzey gerilimiyle yayılmasına izin verin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Bu protokolün genel süreci, 2D A549 hücrelerinin üstel aşamaya genişletilmesini (Ek Şekil 1A) ve organoidler oluşturmak için 3D Matrigel'e geçişi içerir (Şekil 1A). Matrigel'de kapsüllendiğinde, hücreler çoğaldı ve kendiliğinden toplanarak ağırlıklı olarak monoklonal organoidler oluşturdu (Şekil 1B). Yoğun ve karmaşık morfolojisi geçiş boyunca tekdüzeydi (Ek Şekil 1C). Karşılaştırma olarak, bu yapıların çoğu küresel ve kültür de...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu protokol, teknik basitlik, tekrarlanabilirlik ve eğitimsel kullanım için optimize edilmiş A549 akciğer adenokarsinomu Hücre hattı Tümör Organoidleri üretme yöntemini tanımlar. Başarıyı kritik olarak üç parametre belirler: başlangıç hücre durumu, ortam formülasyonu ve matris bileşimi. Ayrıca, kültür süresinin 14 günü aşması önerilmez. Aşağıda temel parametreler ve sorun giderme yer almaktadır.

Başlangıç hücre durumu
Hücreler, genetik sürü...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklamak zorunda kalacak bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

Bu çalışma, Fudan İyi Uygulama Öğretim ve Öğrenme Programı, Ulusal Öğretim Materyalleri Araştırma Enstitüsü ve Temel Disiplinlerde Yetenek Eğitimi Ulusal Programı (No. J1210012) ile Eğitim Bakanlığı'nın Temel Disiplinlerde Üst Düzey Öğrenciler Yetiştirme Programı (No. 20211021) tarafından desteklendi. Şekil 1A , BioRender'da oluşturuldu (Joe, Z. (2026) https://BioRender.com/0qi2gmd).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
1.5 mL Micro Centrifuge tubeBiofilCFT003015
A549 [A-549]human non-small cell lung cancer cellsZQXZbioZQ0003STR: Amelogenin: X,Y; CSF1PO: 10,12; D13S317: 11; D16S539: 11,12; D5S818: 11; D7S820: 8,11; TH01: 8,9.3; TPOX: 8,11; vWA: 14. Mycoplasma was negetive when purchased was tested every 2 weeks. Passage number within 10 passages from the P1 aliquots of the purchased batch was used.
Advanced DMEM/F12Gibco12634010
Anti-E Cadherin antibodyAbcam ab231303
Anti-Fade Mounting MediumYEASEN 36307ES08
Anti-HIF-1 alpha antibodyAbcam ab51608
Biological Safety CabinetNuaire LABGARDNU-540
Biological Tissue Embedding MachineKEDEEKD-BM
BSASigma A1933
Cell-Grade BSASigma A1933-100G
CentrifugeEppendorfCentrifuge 5702 RSwing bucket; Mild to low speed.
Centrifuge tubeBiofilCFT920150
Citrate Antigen Retrieval Solution (pH 6.0)ZSGB-BIO ZLI-9065
CryostageKEDEEKD-BL
Cytation 5 Cell Imaging Multimode
 Reader		BiotekCytation 5
Cytokeratin 7 (KRT7) Rabbit mAbAbclonal A4357
DMEMGibco11965092
DMSOSolarbio D8371
Donkey SerumSolarbioSL050
Dulbecco's Modified Eagle MediumGibco11965118
Eclipse Ts2 Inverted MicroscopeNikon Eclipse Ts2
Eosin Staining Solution (Alcohol-Soluble)Servicebio G1001
FBSNobimpexB118-500
Forma Steri-Cycle i160 CO2 IncubatorThermo Scientifici60
Hematoxylin Bluing SolutionServicebio G1040
Hematoxylin Differentiation SolutionServicebio G1040
Hematoxylin Staining SolutionServicebio G1004
HemocytometerSolarbioYA0810
Human Lung Adenocarcinoma Organoid Medium (3D medium)PMO Bio HC1001
Immunohistochemistry (IHC) PenZSGB-BIO ZLI-9305Store in 4°C
Laser Confocal Microscope  FV3000OlympusFV3000Usual parameter range: PMT Voltage: 500 ± 200 V; Laser Transmissivity: 5 ± 3%; Offset: 3 %
Manual Rotary MicrotomeLeicaRM2235
Metal BathALLSHENGMK-3000
Microwave OvenGalanz
Nail PolishLete
Neutral Balsam (Mounting Medium for Microscopy)BeyotimeC0173
Organoid-Specific Extracellular Matrix GelPMO Bio BM1001
PBSWISENT 311-010-CL
Peroxidase Blocking SolutionBeyotime P0100A
PipettesEppendorf312300063/312300020/312400083
Pipettes tipsAxygen14-222-692/14-222-723/14-222-869Consider using low retention tips if possible.
Three-Dimensional ShakerSCILOGEXSK-D3309-ProLow speed.
Tissue Flotation Water BathKEDEEKD-P
Triton X-100VWR92046-34-9
Trypan BlueGibco 15250061
TryPLEGibco12605028
TTF1 Recombinant Monoclonal AntibodyHUABIO HA720067

Kaynaklar

  1. Huch, M., Koo, B. K. Modeling mouse and human development using organoid cultures. Development. , (2015).
  2. Hofer, M., Lutolf, M. P. Engineering organoids. Nat Rev Mater. , (2021).
  3. Kim, M., et al. Patient-derived lung cancer organoids as in vitro cancer models for therapeutic screening. Nat Commun. , (2019).
  4. Al Shihabi, A., et al. Personalized chordoma organoids for drug discovery studies. Sci Adv. , (2022).
  5. Clevers, H. Modeling development and disease with organoids. Cell. , (2016).
  6. Van de Wetering, M., et al. Prospective derivation of a living organoid biobank of colorectal cancer patients. Cell. , (2015).
  7. Gao, D., et al. Organoid cultures derived from patients with advanced prostate cancer. Cell. , (2014).
  8. Boj, S. F., et al. Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer. Cell. , (2015).
  9. Yan, H. H. N., et al. A comprehensive human gastric cancer organoid biobank captures tumor subtype heterogeneity and enables therapeutic screening. Cell Stem Cell. , (2018).
  10. Guan, Y., et al. A human multi-lineage hepatic organoid model for liver fibrosis. Nat Commun. , (2021).
  11. Roos, F. J. M., et al. Human branching cholangiocyte organoids recapitulate functional bile duct formation. Cell Stem Cell. , (2022).
  12. Guillen, K. P., et al. A human breast cancer-derived xenograft and organoid platform for drug discovery and precision oncology. Nat Cancer. , (2022).
  13. Dijkstra, K. K., et al. Challenges in establishing pure lung cancer organoids limit their utility for personalized medicine. Cell Rep. , (2020).
  14. Xu, Z., et al. Establishment of novel colorectal cancer organoid model based on tumor microenvironment analysis. Life Med. , (2024).
  15. Xia, H., et al. Identification and isolation of cancer stem cells from A549 cells. Zhongguo Fei Ai Za Zhi. , (2013).
  16. Nakata, J., Whittall, I., Russo, M. G., Su, S., Friedberg, J. Systematic review of lung cancer with breast metastasis. J Thorac Dis. , (2025).
  17. Kumari, P., Dash, S., Samanta, D. E-cadherin a potential biomarker in cancer and a therapeutic target. Biochim Biophys Acta Rev Cancer. , (2025).
  18. Yun, W., et al. Tumor organoids may be more suitable for clinical personalized chemotherapeutic drug screening in lung adenocarcinoma. Front Cell Dev Biol. , (2025).
  19. Monleón-Guinot, I., et al. Morphological characterization of human lung cancer organoids cultured in type I collagen hydrogels a histological approach. Int J Mol Sci. , (2023).
  20. Sachs, N., et al. Long-term expanding human airway organoids for disease modeling. EMBO J. , (2019).
  21. Liu, Y., et al. Modeling lung adenocarcinoma metastases using patient-derived organoids. Cell Rep Med. , (2024).
  22. Peng, K., et al. HIF-1α promotes kidney organoid vascularization and applications in disease modeling. Stem Cell Res Ther. , (2023).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

Hücre Hattı OrganoidleriA549 Hücreleri3D Hücre KültürüMatrigel GömmeOrganoid Oluşumuİmmünofloresan BoyamaHematoksilin Eozin BoyamaTümör Markörü Ekspresyonu
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.