Yöntem makalesi

Tıbbi Bitkilerde Tropan Alkaloidlerin Nicelenmesi İçin Verimli ve Hızlı Bir HPLC-QQQ-MS yöntemi

DOI:

10.3791/70510

⸱

12 Haziran 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Anisodus tanguticus'ta tropan alkaloidleri (hyoscyamin, aniisodamin, skopolamin) tanımlamak ve nicelendirmek için üçlü quadrupol kütle spektrometrisi (HPLC-QQQ-MS) yöntemiyle birleşen yüksek performanslı sıvı kromatografi geliştirmiştir. Yöntem, tıbbi bitkilerin yüksek verimli analizinde hızlı, doğru ve güvenilir olduğunu kanıtladı.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Anisodus tanguticus , önemli bir Tibet tıbbi bitkisidir. Hyosciamin, anizodamin ve skopolamin gibi tropan alkaloidler (TA'lar) önemli analjezik ve sedatif farmakolojik aktiviteler sergiler; bu da bu türü bu biyoaktif bileşiklerin çıkarılması için değerli bir doğal kaynak haline getirir. Ancak, A. tanguticus'un kimyasal bileşimi son derece karmaşıktır. Açıklanmış yapıları olmayan çok sayıda bileşik içerir, bu da aktif bileşenlerinin sistematik tanımlaması ve yapısal karakterizasyonunu özellikle önemli kılar. Yüksek performanslı sıvı kromatografi (HPLC) bu tesisten ekstraktların ayrılmasında yaygın olarak kullanılsa da, spektral veritabanı eşleştirmesi olsa bile, birçok bilinmeyen bileşeni doğru şekilde tanımlamak zordur.

Bu çalışma, A. tanguticus'ta tropan alkaloidlerin belirlenmesi için yüksek performanslı sıvı kromatografi ile üçlü quadrupol kütle spektrometrisi (HPLC-QQQ-MS) temelli analitik bir yöntem oluşturmuştur. Yöntem, standartlaştırılmış örnek hazırlama, kütle spektrometrik parametre konfigürasyonu, LC ön dengeleme, yöntem oluşturma, MS verilerinin toplanması, çok aşamalı kütle spektrometrisi (MSⁿ) taraması ve manuel veri yorumu gibi bir dizi sistematik prosedürü kapsar. Bu stratejiyi kullanarak A. tanguticus'ta üç temsilci tropan alkaloidi başarıyla tespit ettik: hyoscyamine, anisodamin ve skopolamin. Ayrıca, yerleşik HPLC-QQQ-MS yönteminin hassasiyetini doğrularak, yöntemin hızlı, duyarlı, uygulanabilir ve A. tanguticus'ta tropan alkaloidlerinin (TA) nicel olarak belirlenmesi için doğru olduğunu doğrular. Yerleşik yaklaşım, iyi bir yönlülük ve güvenilirlik gösterir ve A. tanguticus ile diğer tıbbi bitkilerde tropan alkaloidlerinin yüksek verimli tanımlanması ve nicelenmesi için uygundur.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Geleneksel Çin tıbbının (TCM) terapötik etkinliği büyük ölçüde alkaloidler, flavonoidler, terpenoidler ve diğer aktif bileşenler gibi ikincil metabolitlerinebağlıdır 1,2,3. Sonuç olarak, bu karmaşık karışımlarda belirli hedef metabolitlerin hassas ve hassas nitel ve nicel analizi, TCM'nin kalitesini sağlamak, etkinliğinin maddi temelini açıklamak ve modern araştırmaları ilerletmek için önemli biradımdır. Ancak, TCM bileşenlerinin çeşitliliği ve karmaşıklığı, birçok önemli aktif bileşenin son derece düşük konsantrasyonlarıyla birleşince, verimli ve doğru tespit elde etmek için önemli zorluklar yaratmaktadır.

Anisodus tanguticus (Maxim.) Pascher, farmakolojik olarak aktif tropan tipi bileşiklerin zengin içeriğiyle bilinen tropan alkaloidlerinin (TA)4 önemli bir botanik kaynağınıtemsil eder 5. Temel karakteristik alkaloidler arasında anisodamin, skopolamin ve hiosyamin bulunur; bunlar ortak tropan çekirdeği paylaşır ancak belirgin fonksiyonel grup ikameleri gösterir (Şekil 1), bu da farklı farmakolojikprofillere yol açar 6,7,8. Yapısal benzerlikleri kromatografik çözünürlüğü karmaşıklaştırsa da, karşılaştırmalı fitokimyasal ve metabolik araştırmalar için değerli bir model de sunarlar. Son çalışmalar, metabolomik ve ağ farmakolojisiyaklaşımları 9,10 kullanılarak A. tanguticus'un kimyasal bileşimi ve coğrafi varyasyonlarını incelemiştir. A. tanguticus metabolitleri için mevcut analitik yaklaşımlar ağırlıklı olarak yüksek performanslı sıvı kromatografiye (HPLC)11 dayanmaktadır. Buna rağmen, fide aşaması A. tanguticus'ta tropan alkaloid seviyeleri %0,01 kadar düşük (on binde bir parça) olabilir ve geleneksel HPLC yöntemleri genellikle sınırlı çözünürlük, hassasiyet ve analitik verimlilikle sınırlanır. Bu sınırlamalar, yapısal olarak benzer alkaloid homologların tamamen ayrılmasını engeller ve iz bileşenlerinin tespit edilmesini engeller; böylece analitik doğruluk zayıflamış ve daha gelişmiş araştırma uygulamalarına desteği sınırlar. Son yıllarda, HPLC'deki gelişmeler ve tandem kütle spektrometrisi bu analitik darboğazları ele almak için güçlü araçlar sağlamıştır. Özellikle yüksek performanslı sıvı kromatografi-üçlü quadrupol kütle spektrometrisi (HPLC-QQQ-MS), belirgin şekilde geliştirilmiş kromatografik çözünürlük, ayrım verimliliği ve olağanüstü hassasiyetsunar 12,13,14. Bu teknoloji, TCM'de ikincil metabolitlerin araştırılması için son teknoloji bir platform olarak ortaya çıkmıştır ve karmaşık biyolojikmatrisler 11,15,16,17 içinde iz hedef analizlerinin verimli ve doğru nitelendirilmesini ve nicelendirilmesini sağlamıştır. Bu nedenle, A. tanguticus gibi tıbbi bitkilerin kapsamlı kimyasal profillenmesi ve kalite değerlendirmesi için sağlam bir teknik temel sağlar. Bu çalışmada, A. tanguticus'ta tropan alkaloidlerinin tespit edilmesindeki kalıcı zorlukları ele alıyoruz ve özellikle iz seviyesindeki bileşenlerin doğru tanımlanması ve nicelendirilmesine odaklanıyoruz. Kromatografik ve kütle spektrometrik koşulları sistematik olarak optimize ederek, birden fazla ana tropan alkaloidinin eşzamanlı olarak belirlenmesi için yeni bir HPLC-QQQ-MS yöntemi geliştirdik ve doğruladık. Optimize edilmiş yaklaşım, hassasiyeti, seçiciliği ve metodolojik dayanıklılığı önemli ölçüde artırır; böylece iz alkaloid bileşiklerin analizi sırasında sıklıkla karşılaşılan yetersiz hassasiyet, matris etkileri ve birlikte elüsyon girişimi gibi geleneksel kütle spektrometrisi tabanlı testlerle ilişkili yaygın sınırlamaları aşmaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Numune hazırlama

  1. Standart çözelti hazırlanma
    1. Her biri 10,0 mg hyoscyamine, anizodamine hidrobromid ve skopolamin hidrobromid referans standardlarını on binlik analitik bir teraziyle doğru şekilde tartın ve sırasıyla ayrı 10 mL hacimsel şişelere yerleştirin.
    2. İşaretlenen hatta kromatografik kalitede metanol ekleyin ve ultrason işlemiyle standartları iyice çözerek 1,0 mg/mL konsantrasyonda tek standart stok çözeltileri hazırlanır.
    3. Stok çözeltilerini kahverengi reaktif şişelerine aktarın, karanlıkta 4 °C sıcaklıkta saklayın.
      NOT: Kullanılan alkaloidler son derece toksiktir. Standart örnekleri tutarken güvenlik önlemleri alın. Tüm çözeltiler analiz öncesinde taze hazırlanmış ve bozulmayı önlemek için karanlıkta 4 °C sıcaklıkta saklanmıştır.
  2. Karma çalışma çözeltilerinin hazırlanması
    1. Bahsedilen her stok çözeltisinden 100 μL pipetle 10 mL'lik hacimsel bir şişeye alın ve kromatografik kalitede metanol ile işaretlenen çizgiye kadar seyreltilerek 10 μg/mL karışık standart ara çözelti hazırlanır.
    2. Doğrusal aralık gereksinimlerine göre, ara çözeltiyi metanolle adım adım daha seyreltirerek bir dizi karışık çalışma çözeltisi elde edilir.
    3. Sırasıyla 50 μL, 200 μL ve 500 μL alın. 0,5 μg/mL, 2 μg/mL, 5 μg/mL ve 10 μg/mL konsantrasyonları elde edin. Kullanmadan önce taze hazırlayın.
    4. 10 μg/mL ara çözeltinin 100 μL'sini 1 mL hacimli bir şişeye aktararak 1 μg/mL seyreltilmiş bir çözelti hazırlanır.
    5. Sonra, 1 μg/mL çözeltinin 100 μL'sini başka bir 1 mL hacimsel şişeye aktarın ve hacmi metanol ile seyreltin.
  3. Örnek ön işleme
    1. Sophora flavescens'in taze malzemelerinin dondurularak kurutulmasını gerçekleştirin ve ardından yüksek hızlı öğütücüyle homojen bir toz haline getirilin.
    2. Tozu 0,25 mm standart test elek ile geçirin. Bu tozun 20 mg'ını doğru şekilde tartın, 100 mL'lik hacimsel bir şişeye aktarın ve neredeyse işaretlenen çizgiye kromatografik kalitede metanol ekleyin.
    3. Oda sıcaklığında 30 dakika boyunca ultrasonik ekstraksiyon yapın. Ekstraksiyondan sonra, hacimsel şöleyi çıkarın, oda sıcaklığında 25 °C'ye kadar soğumasına izin verin, kromatografik kalitede metanolu 100 mL işaretli çizgiye yenileyin ve 2 dakika vortex karışımı yapın.
    4. Yukarıdaki ekstrakttan 1 mL pipetle 100 mL'lik hacimsel bir şişe alın ve işaretlenen çizgiye kadar metanol ile (100 kat seyreltme) seyreltin. İyi çalkalandıktan sonra, HPLC enjeksiyonu için ana çözelti olarak hizmet eder (Şekil 2).
      NOT: Yüksek hızlı öğütme makinesini çalıştırırken, koruyucu gözlük ve toz maskesi takmak şarttır; aşırı ısınmayı önlemek için öğütme miktarını ve süresini kontrol edin.
  4. Numune filtreleme ve depolama
    1. 1 mL tek kullanımlık iğnesiz bir şırınga (kromatografiye uzmanlaşmış, adsorpsiyonsuz) ve 0,22 μm organik faz mikrogözenekli bir membran hazırlayın.
    2. Enjeksiyon için ana çözeltinin 1.2 mL'sini aspire edin ve filtrasyon için yavaşça itin.
    3. Sonraki filtratı iç bir iç iç kaplama ile 2 mL'lik bir örnek şişesine toplayın ve bir kapakla sıkıca kapatın.
      NOT: Ultrasonik temizleyicinin frekansı 40 kHz'de sabittir. Çözücü buharlaşmasını önlemek için ekstraksiyon sırasında hacimsel şişe kapağının gevşemeginden kaçının. Hedef zirve alanının standart eğrinin doğrusal aralığına girdiğinden emin olmak için seyreltme faktörünü ön deneydeki numune tepe yanıtına göre ayarlayın. Tüm örnekler hemen 4 °C sıcaklıkta buzdolabında saklanmalıdır.

2. HPLC ön çalışması, yöntem oluşturma ve MS edinimi

  1. Mobil aşamaların hazırlanması
    1. Mobil faz A hazırlayın: 1000 mL ultrasaf su ölçün, 1,0 mL kromatografik kalitede formik asit ekleyin (hacim fraksiyonu: %0,1 v/v) ve manyetik karıştırıcı ile 10 dakika boyunca eşit şekilde karıştırın.
    2. Mobil faz B hazırlayın: Kromatografik kalitede metanol doğrudan ek işlem olmadan kullanın.
    3. Mobil fazlar A ve B'yi sırasıyla ultrasonik gazdan çıkarma cihazlarına dökün ve 40 kHz'de 15 dakika boyunca ultrasonik gazdan gazlama işlemi gerçekleştirin.
    4. Gazdan çıkarıldıktan sonra hemen gazdan çıkarılan mobil fazları çözücü şişelerine aktarın, mühürleyin ve HPLC sisteminin ilgili A ve B çözücü hatlarına bağlayın.
      NOT: Tüm çözücüler kromatografik kalitededir ve kullanımdan önce 0,45 μm organik faz mikrogözenekli bir membrandan filtrelenmelidir. Sistem basıncını düzenli olarak izleyin. Basınç dalgalanması %±±5'i aşarsa, boru hattında potansiyel kolon tıkanması veya hava kabarcıkları olup olmadığını kontrol edin.
  2. HPLC koşullarının ayarlanması
    1. Kromatografik ayrım için C₁₈ kolonu (2.1 mm × 100 mm, 2.7 μm) kullanın. Kolon, kullanımdan önce 30 dakika boyunca metanol:su = 80:20 (v/v) ile dengelenin, dengeleme sırasında 0,3 mL/dakika akış oranı sağlanır. Sütun fırın sıcaklığını 30 °C'ye ayarlayın ve 10 dakika önceden ısıtmaya başlayın.
    2. Bir gradyan elüsyon programını aşağıdaki şekilde optimize edin: 0–10,0 dakika, %5 ila %10 B; 10,0–15,0 dakika, %10'dan %35'e kadar B; 15,0–20,0 dakika, %35 ile %60 B; 20,0–25,0 dakika, %60 ila %95 B. Akış hızını 0,60 mL/dakika, enjeksiyon hacmini 2 μL ve tespit dalga boyunluğunu 210 nm olarak ayarlayın.
  3. Kütle spektrometrik koşullar
    1. Pozitif iyonizasyon modunda (ESI+) çalışan elektrosprey iyonizasyon (ESI) kaynağına sahip üçlü quadrupol (QQQ) kütle spektrometresi kullanılarak kütle spektrometri (MS) tespit edilmesi.
    2. Çalışma parametrelerini şu şekilde ayarlayın: nebulizator basıncı: 15 psi; kapiler voltaj: 4000 V; gaz sıcaklığı: 300 °C; ve gaz akışı: 11 L/d.
    3. Her analit için MS/MS parametrelerini sistematik olarak optimize edin.
      1. İlk olarak, MS2 SCAN modunda bireysel standart çözümler doğrudan infüze ederek öncü iyonları tanımlayın.
      2. MS2 SIM modunu kullanarak her öncü iyonun Fragmentor voltajını maksimum sinyal yoğunluğuna optimize edin.
      3. Daha sonra, karakteristik ürün iyonları belirlemek için Ürün İyonu tarama modunu kullanın. Öncü iyon için çarpışma enerjisini (CE) sistematik olarak optimize ederek ürün-iyon sinyal yoğunluğunu en üst düzeye çıkarır.
      4. Nicel için en yoğun ürün iyonunu seçin ve nitel doğrulama için en yoğun ikinci iyonu kullanın.
        NOT: MS2 TARAMA modunda bireysel standart çözeltilerin doğrudan infüzyonuyla öncü iyonları tanımlayın. Sinyal doygunluğunu önlemek için standart çözelti konsantrasyonu uygun olduğundan emin olun. Parametre kaymasını önlemek için cihazı düzenli olarak kalibre edin.
  4. Yöntem doğrulaması
    1. Özgüllük
      1. Boş çözücü (metanol), karışık standart çalışma çözeltisi ve örnek ekstraktı ayrı ayrı enjekte edin ve kromatogramları karşılaştırın.
      2. Aşağıdaki gereksinimlerin karşılandığından emin olun: Boş çözücüde karıştırıcı zirveler yok; örnekteki hedef bileşenlerin tutma süresi standardınkiyle tutarlıdır (sapma ≤ ±±0,1 dakika); Quantifier ion ile niteleyici iyonun tepe alan oranı standardınkiyle uyumludur (sapma ≤ ±±%10).
    2. Doğrusal
      1. Adım 1.1'de hazırlanan karışık çalışma çözeltileri serisini (0.1, 0.5, 2, 5, 10 μg/mL) yukarıda belirtilen HPLC-MS koşullarında, her konsantrasyon başına 3 enjeksiyon ile sıralı olarak enjekte edin.
      2. Standart eğrisi, her bileşenin konsantrasyonu (x, μg/mL) absissa olarak ve nicelikçi iyonun ortalama zirve alanı (y) koordinat olarak çizin. Doğrusal regresyon analizi yapın, bu da korelasyon katsayısı (R2) ≥ 0.995 gerektirir.
    3. Hassasiyet ve hassasiyet
      1. Gün içi hassasiyet (tekrarlanabilirlik): Bir gün içinde üç konsantrasyon seviyesinde (2 μg/mL, 5 μg/mL ve 10 μg/mL) kalite kontrol (QC) örneklerinin 6 kopyasını analiz edin ve göreli standart sapmayı (RSD%) hesaplayın.
      2. Interday hassasiyeti (ara hassasiyet): Aynı kurutulmuş bitki hammaddesi partisinden bağımsız olarak kalite kalitesi örnekleri hazırlanır ve farklı operatörler tarafından üç gün ardışık analiz edilir. ve RSD hesaplayın. Her iki durumda da RSD% ≤ %10 olduğundan emin olun.
      3. Doğruluğu bir spike-recovery testi ile değerlendirin ve iyileşme oranı (%) olarak ifade edin. Düşük, orta ve yüksek konsantrasyonların ortalama iyileşme oranının %85 ile %115 arasında, RSD% ≤ %5 arasında olmasını sağlamak.
        NOT: Doğrusal aralık, pratik uygulanabilirliği yansıtmak için gerçek örneklerdeki hedef bileşenlerin (düşük, orta ve yüksek seviyeler dahil) beklenen konsantrasyon aralığını kapsamalıdır. Tüm doğrulama deneyleri üçlü olarak gerçekleştirildi ve sonuçlar ortalama değer olarak ifade edildi.

3. Veri toplama

  1. Çoklu reaksiyon izleme (MRM) modunda veri toplama işlemi yapılabilir. Her analit için optimize edilmiş MRM parametreleri için Tablo 1'e bakınız—öncü iyyon, ürün iyon geçişleri, fragmentor voltajı ve çarpışma enerjisi (CE) dahil.
  2. Her geçiş için her kromatografik zirve boyunca yeterli sayıda veri noktası sağlanmasını sağlamak için dwell süresini hesaplayın ve uygun bir döngü süresini koruyun.

4. Veri analizi

  1. Nitel analiz yazılımını başlatın, Dosya > Veriyi İtçe Aktar'a tıklayın ve toplanan tüm veri dosyalarını (.d formatında) içe aktarın.
  2. Çıkarılmış iyon kromatogramlarının (EIC) çıkarılması: Quantitation modülünde, MRM Geçişi'ni seçin, her bileşenin öncü iyon-ürün iyon çiftlerini girin ve ilgili EIC'leri çıkarın.
  3. Zirve doğrulama ve entegrasyon: Her EIC'de hedef zirvelerin zirve simetrisini ve tutma süresi tutarlılığını (sapma ≤ ±±standart ile karşılaştırıldığında 0,1 dakika) kontrol edin.
  4. Yazılım varsayılan olarak otomatik entegrasyon gerçekleştirir; Eğer temel kayma veya müdahaleci zirve varsa, doğru entegrasyon için entegrasyon parametrelerini (entegrasyon başlangıç ve bitiş noktaları) manuel olarak ayarlayın.
  5. Standart eğri kullanılarak bilinmeyen örneklerdeki her bileşenin konsantrasyonunu hesaplayın. Rapor > Rapor Oluştur seçeneğine tıklayın, raporu dışa aktarmak için Excel formatını seçin. Raporda bileşik adı, tutma süresi, zirve alanı, konsantrasyon, RSD% vb. yer alır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

HPLC-QQQ-MS kromatografik ayrımı ve TA'ların tanımlanması
Standart bir karışım ve A.tanguticus kök ekstraktının analizinden elde edilen tipik bir MRM kromatogramı, Şekil 3 ve Şekil 4'te sunulmaktadır. Optimize edilmiş HPLC koşullarında, üç hedef tropan alkaloidi olan hyoscyamin, anisodamin ve skopolamin 20 dakika içinde başarıyla ayrıldı ve geliştirilen yöntemin yüksek verimliliğini gösterdi. Skopola...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bitki ikincil metabolitlerine artan ilgiyle birlikte, alkaloid tespiti için analitik teknikler önemli ilgi gördü. Tropan alkaloidlerin (TA) analizi için temel bir kromatografik sistemkurulmuş olsa da, kapiller elektroforezin (CE) benimsenmesi, GC–MS ve HPLC–MS'de gelişmiş enstrümantal performans ve konvolvin ile tropinon benzeri toksinler dahil yeni yapısal bileşiklerin tanımlanması gibi son gelişmeler, bu alkaloidler için mevcut kromatografik metodolojilerin sist...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklamak zorunda kalacak bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Sichuan Eyalet Geleneksel Çin Tıbbı İdaresi (No. 2024MS562) ve Chengdu Üniversitesi TCM Xinglin Yetenek Programı (No. MPRC2022035). Chengdu Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi'nin Yenilikçi Çin Tıbbı ve Eczacılık Enstitüsü'nün desteğini gerçekten takdir ettik.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Agilent MassHunter yazılımıAgilent Technologies
Agilent ZORBAX SB-C18 kolonAgilent Technologies880975-902C18 ters faz kolon, 4.6 × 250 mm, 5 μm
Anizodamin hidrobromürChengdu glip Biotechnology Co., Ltd101-31-5HPLC>98%
Formik AsitSigma-Aldrich5.33002
dondurucu kurutucuEYELA, Tokyo, JaponyaFDU-2110
Yüksek hızlı evrensel öğütücüTaisite Instrument Co., Ltd., Tianjin, Çin6010210100FW-100,24,000 rpm, 100 g kapasite, 80 mesh
HiosiyaminChengdu glip Biotechnology Co., Ltd55449-49-5HPLC>98%
MetanolThermo Fisher Scientific022909.K2
Mikro gözenekli Membran 0.22μmMilliporeSLGV033RB
Milli-Q Direct 8 su sistemiMilliporeSigma, Burlington, MA, ABDZRQSVP0JP
Skopolamin hidrobromürChengdu glip Biotechnology Co., Ltd114-49-8HPLC>98%

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Ji, P., Yang, X., Zhao, X. Application of metabolomics in quality control of traditional Chinese medicines: a review. Front Plant Sci. 15, 1463666(2024).
  2. Li, S. -S., et al. Phytochemical variation among the traditional Chinese medicine mu dan pi from Paeonia suffruticosa (tree peony). Phytochemistry. 146, 16-24 (2018).
  3. Wang, N., et al. Pinelliae rhizoma alleviated acute lung injury induced by lipopolysaccharide via suppressing endoplasmic reticulum stress-mediated NLRP3 inflammasome. Front Pharmacol. 13, 883865(2022).
  4. Pughaih, T., et al. Tropane Alkaloids: Sources, Chemistry, Pharmacology and Biotechnology. , Nature, Springer. Singapore. (2025).
  5. Chen, C., Wang, B., Xiao, Y., Xiong, F., Zhou, G. Geographical origin discrimination of Anisodus tanguticus (Maxim.): chemometrics methods applied to ICP-OES analysis. Arab J Chem. 17 (5), 105730(2024).
  6. Cardillo, R., et al. Scopolamine, anisodamine and hyoscyamine production by Brugmansia candida hairy root cultures in bioreactors. Process Biochem. 45 (9), 1577-1581 (2010).
  7. Yuan, B., Zheng, C., Teng, H., You, T. Simultaneous determination of atropine, anisodamine, and scopolamine in plant extract by nonaqueous capillary electrophoresis coupled with electrochemiluminescence and electrochemistry dual detection. J Chromatogr A. 1217 (1), 171-174 (2010).
  8. Zhang, P., et al. Simultaneous determination of atropine, scopolamine, and anisodamine from Hyoscyamus niger L. in rat plasma by high-performance liquid chromatography with tandem mass spectrometry and its application to a pharmacokinetics study: liquid chromatography. J Sep Sci. 37 (19), 2664-2674 (2014).
  9. Chen, C., Wang, B., Li, J., Xiong, F., Zhou, G. Multivariate statistical analysis of metabolites in Anisodus tanguticus (Maxim.) Pascher to determine geographical origins and network pharmacology. Front Plant Sci. 13, 927336(2022).
  10. Chen, C., et al. Multivariate statistical analysis of tropane alkaloids in Anisodus tanguticus (Maxim.) Pascher from different regions to trace geographical origins. Acta Chromatogr. 34 (4), 422-429 (2022).
  11. Sawabe, Y., et al. Rapid determination of atropine and scopolamine content in Scopolia extract powder by HPLC. J Nat Med. 65 (2), 395-399 (2011).
  12. Baj, J., et al. Application of HPLC-QQQ-MS/MS and new RP-HPLC-DAD system utilizing the chaotropic effect for determination of nicotine and its major metabolites cotinine,and trans-3′-hydroxycotinine in human plasma samples. Molecules. 27 (3), 682(2022).
  13. Chen, D., et al. Qualitative and quantitative analysis of the major constituents in Shexiang tongxin dropping pill by HPLC-Q-TOF-MS/MS and UPLC-QqQ-MS/MS. Molecules. 20 (10), 18597-18619 (2015).
  14. Huang, Y. -F., et al. Simultaneous determination of twenty-nine active compounds in Fuzhengjiedu granules by HPLC-QQQ-MS/MS. Heliyon. 9 (2), e13675(2023).
  15. Zhang, K. -X., et al. Improved quality control method for prescriptions of Polygonum capitatum through simultaneous determination of nine major constituents by HPLC coupled with triple quadruple mass spectrometry. Molecules. 18 (10), 11824-11835 (2013).
  16. Ding, M., et al. Comprehensive chemical profiling and quantification of Shexiang xintongning tablets by integrating liquid chromatography-mass spectrometry and gas chromatography-mass spectrometry. Arab J Chem. 16 (3), 104527(2023).
  17. Zhu, L., et al. The QuEChERS method coupled to HPLC-QQQ-MS/MS for the determination of 25 banned pesticide residues in ethnic medicines. Res Sq. , (2022).
  18. Cinelli, M. A., Cline, J., Watson, T. Applications of liquid chromatography-tandem mass spectrometry in natural products research: Tropane alkaloids as a case study. J Vis Exp. (205), e66620(2024).
  19. Pang, Y., Huang, Y. -K., Li, F., Yang, F. -Q., Xia, Z. -N. Rapid screening and evaluation of antioxidants in alkaloid natural products by capillary electrophoresis with chemiluminescence detection. Anal Methods. 8 (35), 6545-6553 (2016).
  20. Voeten, R. L. C., Ventouri, I. K., Haselberg, R., Somsen, G. W. Capillary electrophoresis:trends and recent advances. Anal Chem. 90 (3), 1464-1481 (2018).
  21. Pellati, F., Benvenuti, S. Chromatographic and electrophoretic methods for the analysis of phenetylamine alkaloids in Citrus aurantium. J Chromatogr A. 1161 (1), 71-88 (2007).
  22. Cirlini, M., et al. A sensitive UHPLC-ESI-MS/MS method for the determination of tropane alkaloids in herbal teas and extracts. Food Control. 105, 285-291 (2019).
  23. Wojakowska, A., et al. Structural analysis and profiling of phenolic secondary metabolites of Mexican lupine species using LC-MS techniques. Phytochemistry. 92, 71-86 (2013).
  24. Shimizu, T., Watanabe, M., Fernie, A. R., Tohge, T. Targeted LC-MS analysis for plant secondary metabolites. Methods Mol Biol. 1778, 171-181 (2018).
  25. Mennickent, S., De Diego, M. Analytical Method Validation as the First Step in Drug Quality Control. Quality Management and Quality Control - New Trends and Developments. , IntechOpen. London, UK. (2019).
  26. Yang, S. H., Wang, J., Zhang, K. Validation of a two-dimensional liquid chromatography method for quality control testing of pharmaceutical materials. J Chromatogr A. 1492, 89-97 (2017).
  27. Zhang, X., et al. HPLC with chiral stationary phase for separation and kinetics study of aspartic acid epimerization in peroxiredoxin 2 active site peptide. J Pharm Biomed Anal. 247, 116247(2024).
  28. Lu, W., et al. Metabolite measurement: pittfalls to avoid and practices to follow. Annu Rev Biochem. 86, 277-304 (2017).
  29. Leopold, J., Popkova, Y., Engel, K. M., Schiller, J. Recent developments of useful MALDI matrices for the mass spectrometric characterization of lipids. Biomolecules. 8 (4), 173(2018).
  30. Parasuraman, S., et al. An overview of liquid chromatography-mass spectroscopy instrumentation. Pharm Methods. 5 (2), 47-55 (2014).
  31. Alanazi, S. Recent advances in liquid chromatography–mass spectrometry (LC–MS) applications in biological and applied sciences. Anal Sci Adv. 6 (1), e70024(2025).
  32. Cortese, M., et al. Compensate for or minimize matrix effects? Strategies for overcoming matrix effects in liquid chromatography-mass spectrometry technique: A tutorial review. Molecules. 25 (13), 30-47 (2020).
  33. Wang, L., et al. The interplay between herbal medicines and gut microbiota in metabolic diseases. Front Pharmacol. 14, 1105405(2023).
  34. Musharraf, S. G., et al. Screening of inhibitors of angiotensin-converting enzyme (ACE) employing high performance liquid chromatography-electrospray ionization triple quadrupole mass spectrometry (HPLC-ESI-QqQ-MS). Eur J Pharm Sci. 101, 182-188 (2017).
  35. Liu, H., et al. Integrating qualitative and quantitative assessments of Yougui pill, an effective traditional Chinese medicine, by HPLC-LTQ-orbitrap-MSn and UPLC-QqQ-MS/MS. Anal Methods. 9 (23), 3485-3496 (2017).
  36. Parks, H. M., et al. Redirecting tropane alkaloid metabolism reveals pyrrolidine alkaloid diversity in Atropa belladonna. New Phytol. 237 (5), 1810-1825 (2023).
  37. Yan, Z., et al. Triterpenoid saponins profiling by adducts-targeted neutral loss triggered enhanced resolution and product ion scanning using triple quadrupole linear ion trap mass spectrometry. Anal Chim Acta. 819, 56-64 (2014).
  38. Sosa-Ferrera, Z., Mahugo-Santana, C., Santana-Rodríguez, J. J. Analytical methodologies for the determination of endocrine disrupting compounds in biological and environmental samples. Biomed Res Int. 2013, 674838(2013).
  39. Heyde, B. J., Barthel, A., Siemens, J., Mulder, I. A fast and robust method for the extraction and analysis of quaternary alkyl ammonium compounds from soil and sewage sludge. PLoS One. 15 (8), e0237020(2020).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Anisodus TanguticusHyoscyamine Miktar TayiniAnisodamin TespitiSkopolamin AnaliziNumune Haz rlamal Kuadrupol K tle Spektrometrisioklu Reaksiyon zleme

İlgili makaleler