Method Article

Huoxiang Zhengqi Ağız Sıvısında Bilinmeyen Bir Bileşiğin Yapısal Analizi için Doğrusal İyon Kapanı Kütle Spektrometrisine Dayalı Teknik Yaklaşım

DOI:

10.3791/70672

⸱

April 3rd, 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1General Surgery, Chongqing Traditional Chinese Medicine Hospital, The First Affiliated Hospital of Chongqing College of Traditional Chinese Medicine, 2Department of Cardiology, Chongqing Traditional Chinese Medicine Hospital, The First Affiliated Hospital of Chongqing College of Traditional Chinese Medicine, 3Chongqing Taiji Industry, 4Chongqing Clinical Research Center for Dermatology, Department of Dermatology, Chongqing Traditional Chinese Medicine Hospital, The First Affiliated Hospital of Chongqing College of Traditional Chinese Medicine

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, çok aşamalı kütle spektrometrisi ağaçlarını Huoxiang Zhengqi ağız sıvısına dayalı bir parçalanma süreciyle birleştiren standart bir protokolü gösteriyoruz.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Çin bitkisel bileşikleri (CHC'ler) Çin tıbbında vazgeçilmez bir rol oynar ve karmaşık bileşenlerinin belirlenmesi son yıllarda önemli bir araştırma odağı olmuştur. Huoxiang Zhengqi ağız sıvısı, kimyasal bileşimi moleküler düzeyde daha fazla araştırılması gerektiren klasik bir Çin patent ilkidir. Uçuş zamanı ve Orbitrap gibi geleneksel kütle spektrometreleri genellikle sadece ikincil parçalanma bilgisi sağlar. Doğrusal bir iyon tuzağı kütle spektrometresine dayanarak, bileşikler daha derinlemesine parçalanarak daha derin parça bilgisi elde edilebilir. Bu makale, CHC'lerde bilinmeyen bileşikler için yapısal bir keşif tekniği geliştirir; bu teknik, örnek ön işleme, ultra performanslı sıvı kromatografi hazırlığı, kütle spektrometrisi hazırlığı, tam spektrum testleri, ikincil kütle spektrometrisi testi, çok seviyeli kütle spektrometrisi testi ve sonuç analizini kapsamaktadır. Temsilci sonuçlar, bileşik yapının türetim sürecini göstermektedir. Deneysel tekniği etkileyen izomerler, polihidroksi bileşikler ve cihaz çözünürlüğü gibi faktörleri tartışıyoruz. Bilinmeyen bileşiklerin mikroskobik moleküler yapısının çok aşamalı kütle spektrometrisi parçalanması yoluyla türetilmesine dayanan bu yerleşik deneysel yöntem, geleneksel Çin tıbbında biyoaktif küçük moleküllerin yapısal karakterizasyonu ve bunların farmakolojik mekanizmalarla bağlantısı için çok yönlü ve uygulanabilirdir.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Çin bitkisel bileşikleri (CHC), geleneksel Çin tıbbının (TCM) paha biçilmez varlıkları olarak, binlerce yıl boyunca doğrulanmış klinik deneyimbiriktirmiştir 1. Hastalık önleme, terapötik müdahale ve rehabilitasyonda vazgeçilmez bir roloynarlar. Çok bitkisel sinerjizm aracılığıyla, CHC'ler insan vücudunu bütünsel olarak tedavi eder ve holizmin temel ilkelerini ve sendroma farklılaştırma temelliterapiyi uygular 3. Günümüz tıbbi çerçevelerinde, CHC'ler, sindirim bozuklukları, solunum enfeksiyonları ve immünomodülasyon gibi geniş uygulamalara sahip çoklu hedefli yolları4 kapsayan polifarmakolojik mekanizmalarıyla küreseltanınırlık kazanır. Huoxiang Zhengqi ağız sıvısı (HXZQ), klasik CHC formülasyonlarınıözetlemektedir 6. Bileşimi, paçuli, perilla yaprağı, angelica dahurica, atractylodes, poria ve kurutulmuş mandalina kabuğu gibi birçok tıbbi bitkiyi birleştirir. Terleme, ısı temizleme, nemi çözücü ve dalak midesini tonlaştırma özellikleriyletanınır. HXZQ, nemliliğe bağlı grip benzeri sendromlar, epigastrik şişme, kusma ve ishal hastalıklarına karşı klinik olarakuygulanmaktadır 8. Teknolojik gelişmeler, CHC araştırmalarını fenomenolojik gözlemden moleküler, mekanik ve bileşik düzeydearaştırmalara kaydırmıştır9; örneğin, aktif bileşenleri tanımlamak için proteomik ve metabolomik tekniklerinin kullanılması ve böylece TCM küreselleşmesi için bilimsel temellerin oluşturulması gibi. Sonuç olarak, HXZQ'nun kimyasal bileşenlerinin ve farmakodinamikinin titiz analizi, sadece CHC standartlaştırmasını ilerletmekle kalmaz, aynı zamanda yenilikçi ilaç keşfini de tetikler.

HXZQ, doğal kimyasal karmaşıklığı bileşik botanik bileşenlerinden kaynaklanan çok bitkili birformülasyondur 11. Uçucu yağlar, kumarinler, lignanlar, polisakkaritler ve alkaloidler dahil olmak üzere çeşitli fitokimyasal sınıflarla karakterize edilen HXZQ, hem iyi karakterize edilmiş biyoaktif bileşikler hem de yapısal olarak notlanmamış önemli bir bileşenhavuzu içerir 12. Temel bileşenlerde (örneğin, uçucu yağlar, flavonoidler, alkaloidler) dinamik dalgalanmalar, ekstraksiyon protokolleri ve depolama koşullarındaki değişiklikler nedeniyle meydana gelebilir ve bu da sistematik kimyasal profilleme ihtiyacınıvurgular. Geleneksel Çin tıbbı (TCM) modernizasyonu çerçevesinde, HXZQ gibi klasik formülasyonların derinlemesine bileşimsel analizi, sadece terapötik etkinliğinin maddi temelini aydınlatmakla kalmaz, aynı zamanda kalite kontrol, standartlaştırılmış üretim ve advers etki izleme için ampirik destek sağlar. HXZQ'deki yüksek bolluklu bileşikler kapsamlı şekilde belgelenmiş olsa da, kimyasal bileşeninin önemli bir kısmı hâlâ tanımlanmamıştır13. Bileşenlerinin yapısal çeşitliliği ve birçok potansiyel biyoaktif molekülün düşük bolluğu, kromatografi ve spektroskopi gibi geleneksel analitik tekniklerle kapsamlı tanımlama için büyük zorluklaryaratmaktadır 14. Özellikle, izomerizm HXZQ'da kumarinler, lignanlar ve polisakkaritler dahil olmak üzere birden fazla fitokimyasal sınıfta yaygındır ve yapısal farklılaşmayı daha dakarmaşıklaştırır15. Doğru bileşik açıklamasının önündeki ek engeller arasında düşük analiz bolluğu ve matris girişim etkileri bulunur. Bu faktörler topluca, HXZQ araştırmalarında önemli bir sınırı vurgular: tam kimyasal komplementinin kesin ve yüksek kapsama kapsamında tanımlanmasını sağlamak için sağlam analitik stratejilerin geliştirilmesi.

Çağdaş kütle spektrometrisi (MS) platformları, karmaşık matrisleri karakterize ederken iyon ortak ülüsyon artefaktları ve eksik spektral veritabanı kapsaması gibi doğal sınırlamalarlakarşılaşır. 16. Bu bağlamda, tandem kütle spektrometrisi (MS/MS) ve çok aşamalı kütle spektrometrisi (MSn), bilinmeyen bileşiklerin de novo yapısal aydınlatılması için vazgeçilmez analitik stratejiler olarak ortayaçıkmıştır 17. Quadrupol uçuş zamanı (Q-TOF) MS ve Orbitrap MS gibi geleneksel yüksek çözünürlüklü MS sistemleri yüksek kaliteli MS/MS parça verileri üretirken, bu işlevler tek aşamalı parçalanma olaylarıyla sınırlıdır. Bu sınırlamaya rağmen, bu platformlar özellikle karmaşık karışımları analiz ederken olağanüstü hassasiyet ve çözünürlükle zengin yapısal içgörülersunar 18. Buna karşılık, lineer iyon kapanı (LIT) MS, moleküler iyonların ardışık, yinelemeli parçalanmasını mümkün kılan çok aşamalı çarpışma kaynaklı ayrışma (CID) modunu kullanır. Bu benzersiz yetenek, bileşik iskeletlerin ve fonksiyonel grupların adım adım diseksiyon edilmesine olanak tanır ve yapısal olarak çeşitli bilinmeyen analizlerin kesin niteliksel tanımlanmasınıkolaylaştırır 19. Karmaşık CHC matrislerinin kapsamlı karakterizasyonuna yönelik karşılanmamış ihtiyacı karşılamak amacıyla, bu çalışma bilinmeyen bileşik tanımlaması için özel olarak tasarlanmış LIT-MS tabanlı analitik bir iş akışı sunmaktadır. LIT'in yüksek iyon yakalama verimliliği ve hızlı tarama hızından yararlanarak, bu yaklaşım de novo yapısal açıklamanın verimliliğini ve doğruluğunu artırır. Bu iş akışının HXZQ'ya uygulanması, (1) HXZQ'da karakterize edilmemiş kimyasal bileşenlerin profillenmesi için mevcut metodolojileri tamamlamayı; (2) diğer CHC formülasyonları için standartlaştırma araştırmalarını destekleyecek teknik bir çerçeve oluşturmak; ve (3) TCM'nin ampirik uygulamadan kanıta dayalı, hassas tıbba geçişini hızlandırmak.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Örnek ön işleme

  1. Ticari HXZQ'nun ambalajını açın. 0.1 mL HXZQ'yu 2 mL'lik numune şişesine doğru şekilde aktarın, ardından 0,9 mL su ekleyin. Çözeltiyi iyice karışana kadar çalkalayın.
  2. Enjeksiyon şırıngası (1 mL) ve mikrogözenekli membran filtresi (0,22 μm) hazırlayın. Çözeltiyi yeni bir 2 mL numune şişesine filtreleyin.
    NOT: Deneysel işlemler sırasında uygun kişisel önlemleri alın.

2. Ultra performanslı sıvı kromatografi (UPLC) hazırlama

  1. Xcalibur yazılımına çift tıklayın. İndirmeye Hazır hale tıklayın, ardından Direct Control butonuna tıklayın. Açılır penceredeki Pompa Modülü sütununa tıklayın, %B'yi 50'ye, %C'yi 0'a, %D'yi 0'a ve %D'yi 0'a ayarlayın (Şekil 1).
  2. Motor düğmesine tıklayarak Açık durumuna geçirin. Daha Fazla Seçenek butonuna tıklayın, açılır pencerede Akışı 5 [mL/dakika] ve Saati 180 [s] olarak ayarlayın. Temizleme butonuna tıklayın, ardından açılır penceredeki OK butonuna tıklayın.
    NOT: Kromatografik kolon yoksa, hareketli faz, kolon sıcaklığı olmadan %50 A (%0,1 formik asit çözeltisi) ve %50 B (asetonitril) ile 0,3 mL/dakika sabit olur. Varsayılan enjeksiyon hacmi genellikle 1 μL'dir.

3. MS hazırlığı

  1. Yazılımın ana penceresine dönün, Sequence Setup View butonuna tıklayın. Zaten düzenlenmiş şablonu içe aktarmak için Aç butonuna tıklayın, Yöntem Adı'na sağ tıklayın ve Dosyayı Aç butonuna tıklayarak metod dosyasını açın.
  2. Açılır Enstrüman Kurulumu penceresinde İlk Ayini (m/z) 100, Son Ayini (m/z) ise 1200 olarak ayarlayın. Yöntemi kaydetmek için Kaydet butonuna tıklayın.
    NOT: Varsayılan MS koşulları arasında iyon kaynağı sıcaklığı 350 °C, başlangıç MS aralığı 80 – 1200 Da arasında, çarpışma kaynaklı ayrışma modunda çarpışma modu (CID) ve çarpışma enerjisi 35 idi.

4. Tam MS testi

  1. Ardıcıl Çalıştır butonuna tıklayın, ardından açılır penceredeki OK butonuna tıklayın. Örnek enjeksiyonunun tamamlanmasını bekleyin (Şekil 2).
    NOT: Testten önce, lütfen 2 mL'lik numune şişesini aletin numune tepsisine yerleştirin.
  2. Yol Haritası Görünümü butonuna tıklayın ve Qual Tarayıcı penceresini açmak için Qual Tarayıcı simgesine tıklayın. Aç butonuna tıklayın, klasördeki .raw formatlı Veri Dosyası'nı seçin ve dosyayı açmak için üzerine çift tıklayın.
  3. Kromatom Penceresi'ne sağ tıklayın, ardından Aralıklar butonuna tıklayın. Tarama filtresi bölümünde ESI Full MS seçin. Plot type bölümünde TIC'i seçin. OK tuşuna tıklayın, ardından pencere numunenin toplam iyon kromatogramını gösterir.
  4. Kütle spektrumu penceresinin sağ üst köşesindeki Pushpin düğmesine tıklayın.
  5. Kromatom penceresinde, en güçlü göreceli bolluğa sahip bir Zaman Bölgesi'ni seçmek için tıklayın ve kaydırın. Kütle spektrumu penceresi, ilgili kütle spektrumu iyonları gösterilecektir. Kütle spektrometrisinin bir sonraki seviyesi için m/z değerlerini kaydedin.

5. MS/MS testi

  1. Enstrüman Kurulumu penceresine geri dön. n=2 satırının Ebeveyn Kütle sütununa, önceki adımda kaydedilen bileşiğin m/z değerini girin. Yöntemi kaydetmek için Kaydet butonuna tıklayın.
  2. Yazılım penceresine geri dön. Sequence Setup View butonuna tıklayın, Dosya adını değiştirin ve ardından kaydet butonuna tıklayarak diziyi kaydedin.
  3. Ardıcıl Çalıştır butonuna tıklayın, ardından açılır penceredeki OK butonuna tıklayın. Numune enjeksiyonunun tamamlanmasını bekleyin.
  4. Qual Tarayıcı penceresine geri dön. Aç butonuna tıklayın, klasördeki .raw formatlı Veri Dosyası'nı seçin ve dosyayı açmak için üzerine çift tıklayın
  5. Kromatom Penceresi'ne sağ tıklayın, ardından Aralıklar butonuna tıklayın. Tarama filtresi bölümünde ESI Full MS seçin. Plot type bölümünde TIC'i seçin. OK tuşuna tıklayın, ardından pencere numunenin toplam iyon kromatogramını gösterir.
  6. Kütle spektrumu penceresinin sağ üst köşesindeki Pushpin düğmesine tıklayın.
  7. Kromatom penceresinde, en güçlü göreceli bolluğa sahip bir Zaman Bölgesi'ni seçmek için tıklayın ve kaydırın. Kütle spektrumu penceresi, ilgili kütle spektrumu iyonları gösterilecektir. Kütle spektrometrisinin bir sonraki seviyesi için m/z değerlerini kaydedin.

6. MSn testi

  1. Enstrüman kurulum penceresine geri dön. n=3 satırının Ebeveyn Kütle sütununa, önceki adımda kaydedilen bileşiğin m/z değerini girin. Yöntemi kaydetmek için Kaydet butonuna tıklayın.
  2. Örnek enjeksiyonu ve veri görüntülemesini tamamlamak için 4.2'den 4.5'e kadar olan adımları tekrarlayın. Stabil parça iyonları gözlemlenmediğinde MSn analizini durdurun.

7. Parametre optimizasyonu

  1. Enstrüman kurulum penceresine geri dön. Eylem tipi sütununda, çarpışma modunu değiştirmek için CID'ye tıklayın ve ardından PQD veya ETD seçin.
  2. Normalleştirilmiş çarpışma enerjisi sütununda, 35'e tıklayın ve çarpışma enerjisini değiştirmek için 20 veya 50'ye ayarlayın.
    NOT: Tüm kimyasal kalıntıları ve çözücüleri organik atık konteynerine karıştırın.

8. Sonuç analizi

  1. Ebeveyn iyon ve parçalanma iyonunu çizim yazılımında manuel olarak çizin; ana iyon yapısı, bileşik adı ve kütle-yük oranı (m/z) değeri dahil olmak üzere.
  2. Örneğin, m/z=623.21 olan bilinmeyen bileşik için, ortaya çıkan parçalanmaya gözlem yapın. Burada, parça ara kısmı MS/MS'de m/z=461.15 değerine sahipti. Kütle farkı 162,06 Da olup, heksoz bir yapıya karşılık gelir.
  3. Bunu daha yakından analiz edersek, m/z=461.15 ile ara parça tekrar parçalanarak MS3'te m/z=315.09 ile neobyakangelicol oluşturdu. Kütle farkı 146,06 Da olup, deoksiheksametiloz yapısına karşılık gelmektedir. Yani, m/z=461.15 olan ara seviyede neobyakangelicol'den bir daha fazla deoksiheksametiloz birimi bulunuyordu.
  4. Neobyakangelicol'un yapısında, bağlanma pozisyonunu analiz edin. Burada, maruz kalan hidroksil grubu, deoksiheksametiloza bağlı olma olasılığı en yüksek konumuydu. Benzer şekilde, deoksiheksmetiloz ünitesindeki C1'deki hidroksil grubu, bir heksoza bağlı olma olasılığı en yüksek olanıydı. Son olarak, bilinmeyen bileşiğin yapısını m/z=623.21 ile elde edin.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm m/z bilgisinin önce toplanması gerektiğini, ardından ana iyon ile parça iyon arasındaki kütle farkının hesaplanmasını önerdik. Veritabanında veya literatürde bildirilen bileşiği buldum ve sonra bu bilinen yapıya dayanarak bilinmeyen bileşik yapısını tersine çıkardım.

Tespit edilen tüm bileşikler ve ilgili parça iyonları m/z değerleriyle sunuldu. Bu parça iyonların bir alt kümesi, doğrulanmış referansstandartları 20 ile eşleştirilebilir. Bilinmeyen hedef bileşik yapı...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

LIT-MS ile MSn parçalanma teknolojisinin birleşimi, CHC'lerde bilinmeyen bileşiklerin tanımlanması için bir yöntem sağlar. Orbitrap ve Q-TOF MS'deki geleneksel tandem MS modlarının aksine, doğrusal iyon tuzağı hedef iyonları özel olarak yakalayabilir ve birlikte elüasyon yapaniyonlar 23'ten kaynaklanan paraziti etkili bir şekilde önler. Bu yöntem, moleküler düzeyde hassasiyet sağlar ve nispeten doğru kimyasal yapısal bilgi sağlar ve böylece veritabanı b...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, rekabet eden finansal çıkarlar belirtmemektedir.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Chongqing Bilimsel Araştırma Enstitüsü'nün performans teşvikleri ve rehberliği için özel bir projesi tarafından finanse edilmiştir (cstc2022jxjl120005). Chongqing Belediye Eğitim Komisyonu'nun (KJZD-K202315102) bilim ve teknoloji araştırma projesi. Chongqing Tıbbi Bilimsel Araştırma Projesi (Chongqing Sağlık Komisyonu ile Bilim ve Teknoloji Bürosu'nun ortak projesi (2022DBXM007). Chengdu Üniversitesi TCM Xinglin Özel Hastane Bursiyeri (YYZX202160).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
AsetonitrilThermo ScientificCAS 75-05-8Sıvı hali
Formik asitThermo ScientificCAS 64-18-6Sıvı hali
Huoxiang Zhengqi Oral SıvıChongqing Taiji Industry (Group) Co., Ltd.Devlet İlaç Standardı Kodu Z50020409Çalışma nesnesi
Doğrusal iyon tuzağı kütle spektrometresiThermo ScientificLTQ XLIT-MS aracı
Sıvı kromatografThermo ScientificU3000UPLC aracı
XcaliburThermo Scientificsürüm 2.0UPLC-IT-MS işletim yazılımı

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chao, J., et al. Major achievements of evidence-based traditional Chinese medicine in treating major diseases. Biochem Pharmacol. 139, 94-104 (2017).
  2. Zou, Q., et al. The role and mechanism of TCM in the prevention and treatment of infectious diseases. Front Microbiol. 14, 1286364(2023).
  3. Zhou, X., et al. Synergistic effects of Chinese herbal medicine: a comprehensive review of methodology and current research. Front Pharmacol. 7, 201(2016).
  4. Li, X., et al. Advancing traditional Chinese medicine research through network pharmacology: strategies for target identification, mechanism elucidation, and innovative therapeutic applications. Am J Chinese Med. 53 (07), 2021-2042 (2025).
  5. Li, B. H., Li, Z. Y., Liu, M. M., Tian, J. Z., Cui, Q. H. Progress in traditional Chinese medicine against respiratory viruses: a review. Front Pharmacol. 12, 743623(2021).
  6. Xu, Q., et al. An evaluation strategy of high-quality traditional Chinese patent medicines with consistency as the core: A case study of Huoxiang Zhengqi Shui. Arabian J Chem. 18, 1302024(2025).
  7. Li, L., et al. Huoxiang Zhengqi dropping pills alleviate exertional heat stroke–induced multiple organ injury through sustaining intestinal homeostasis via regulating MAPK/NF-κB pathway and gut microbiota in rats. Front Pharmacol. 15, 1534713(2025).
  8. Wu, Y., et al. Unlocking the therapeutic potential of Huoxiang Zhengqi San in cold and high humidity-induced diarrhea: Insights into intestinal microbiota modulation and digestive enzyme activity. Heliyon. 10 (12), e32789(2024).
  9. Hua, H., et al. From traditional medicine to modern medicine: the importance of TCM regulatory science (TCMRS) as an emerging discipline. Chinese Med. 20 (1), 92(2025).
  10. Zhang, C., et al. Multi-component Chinese medicine formulas for drug discovery: state of the art and future perspectives. Acta Mater Med. 2 (1), 106-125 (2023).
  11. Li, X., et al. Integration of non-targeted multicomponent profiling, targeted characteristic chromatograms and quantitative to accomplish systematic quality evaluation strategy of Huo-Xiang-Zheng-Qi oral liquid. J Pharma Biomed Anal. 236, 115715(2023).
  12. Chen, Y., et al. Identification and quality control of isomers in Huo-Xiang-Zheng-Qi Mixture using ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry and inductive effects analysis. J Pharma Biomed Anal. 255, 116646(2025).
  13. Guo, H., Pang, X., Zhang, W., Jiang, W., Pang, X. Dissolution determination of five components in Huoxiang Zhengqi tablets using partitioned dispersive liquid-liquid microextraction combined with HPLC-UV. Anal Meth. 5 (11), 2674-2678 (2013).
  14. Bhadange, Y. A., Carpenter, J., Saharan, V. K. A comprehensive review on advanced extraction techniques for retrieving bioactive components from natural sources. ACS Omega. 9 (29), 31274-31297 (2024).
  15. Silva, A. S., et al. Evaluation of the status quo of polyphenols analysis: Part I—phytochemistry, bioactivity, interactions, and industrial uses. Comp Rev Food Sc Food Safety. 19 (6), 3191-3218 (2020).
  16. Kaufmann, A., Teale, P. Capabilities and Limitations of High-Resolution Mass Spectrometry (HRMS): Time-of-flight and Orbitrap. Chem Anal Non-antimicrob Vet Drug Resid Food. , 93-139 (2016).
  17. Vaniya, A., Fiehn, O. Using fragmentation trees and mass spectral trees for identifying unknown compounds in metabolomics. TrAC Trends Anal Chem. 69, 52-61 (2015).
  18. Belov, M. E., et al. From protein complexes to subunit backbone fragments: a multi-stage approach to native mass spectrometry. Anal Chem. 85 (23), 11163-11173 (2013).
  19. Ma, X. Recent advances in mass spectrometry-based structural elucidation techniques. Molecules. 27 (19), 6466(2022).
  20. Ridder, L., et al. Substructure-based annotation of high-resolution multistage MSn spectral trees. Rapid Comm Mass Spectr. 26 (20), 2461-2471 (2012).
  21. Tao, Y., et al. Abelmoschus manihot (L.) medik. seeds alleviate rheumatoid arthritis by modulating JAK2/STAT3 signaling pathway. J Ethnopharmacol. 325, 117641(2024).
  22. Liu, J., et al. Qi-Sai-Er-Sang-Dang-Song decoction inhibits pyroptosis and inflammation in THP-1 cells and alleviates rheumatoid arthritis by inhibiting the NLRP3-pyroptosis signaling pathway. Phytomedicine. 148, 157481(2025).
  23. Jian, W. Modern liquid chromatography and mass spectrometry for targeted biomarker quantitation. Target Biomarker Quantitat LC–MS. , 45-63 (2017).
  24. Zeng, P., Li, J., Chen, Y., Zhang, L. The structures and biological functions of polysaccharides from traditional Chinese herbs. Progr Mol Biol Transl Sci. 163, 423-444 (2019).
  25. Abdel Tawab, M., et al. Electrospray mass spectrometry with consecutive fragmentation steps (ESI-MSn) as a tool for rapid and sensitive analysis of ginsenosides and their galactosyl derivatives. Helvetica Chim Acta. 83 (4), 739-747 (2000).
  26. Zhang, A., Sun, H., Yan, G., Wang, X. Recent developments and emerging trends of mass spectrometry for herbal ingredients analysis. TrAC Trends Anal Chem. 94, 70-76 (2017).
  27. Vukics, V., Guttman, A. Structural characterization of flavonoid glycosides by multi-stage mass spectrometry. Mass Spectr Rev. 29 (1), 1-16 (2010).
  28. Cortese, M., Gigliobianco, M. R., Magnoni, F., Censi, R., Di Martino, P. Compensate for or minimize matrix effects? Strategies for overcoming matrix effects in liquid chromatography-mass spectrometry technique: a tutorial review. Molecules. 25 (13), 3047(2020).
  29. Gerothanassis, I. P., Troganis, A., Exarchou, V., Barbarossou, K. Nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy: basic principles and phenomena, and their applications to chemistry, biology and medicine. Che Edu Res Pract. 3 (2), 229-252 (2002).
  30. Kumar, N., Jaitak, V. Recent advancement in NMR based plant metabolomics: techniques, tools, and analytical approaches. Crit Rev Anal Chem. 56 (1), 1-25 (2026).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Linear Ion TrapMass SpectrometryStructural AnalysisUnknown CompoundChinese Herbal CompoundsHuoxiang ZhengqiUltra Performance Liquid ChromatographyMultistage FragmentationMolecular Structure DerivationBioactive Small Molecules

Related Articles