Yöntem makalesi

Dioscorea bulbifera L'de potansiyel hepatotoksik furan içeren bileşiklerin taraması için entegre UHPLC-MS/MS ve HRMS stratejisi.

DOI:

10.3791/70865

⸱

19 Mayıs 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1The First Affiliated Hospital of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine, 2School of Pharmacy, Guizhou University of Traditional Chinese Medicine, 3School of Medicine and Health Management, Guizhou Medical University, 4Guizhou Provincial Engineering Research Center for the Development and Application of Ethnic Medicine and TCM, Guizhou Medical University

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Dioscorea bulbifera L'de potansiyel hepatotoksik furan içeren bileşikleri taramak için UHPLC–MS/MS ve HRMS'yi birleştiren entegre bir strateji geliştirdi.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tiroid bozuklukları ve tümörleri tedavi etmek için kullanılan geleneksel bitkisel ilaç olan Dioscorea bulbifera L. (DBL), hepatotoksik potansiyel etkileri nedeniyle önemli güvenlik endişelerine yol açmıştır. Önceki araştırmalar, bu karaciğer hasarının DBL'de bulunan furan içeren bileşiklerin (FCC) metabolik aktivasyonuyla ilişkili olabileceğini göstermektedir. Burada, ultra yüksek performanslı sıvı kromatografi ile tandem kütle spektrometrisi (UHPLC-MS/MS) ve ultra yüksek performanslı sıvı kromatografi ile tandem yüksek çözünürlüklü kütle spektrometrisi (UHPLC-HRMS) birleştirilen entegre analitik yaklaşımla DBL ekstraktındaki FCC'leri ve reaktif metabolitlerini sistematik olarak karakterize ettik. Hem hedefli hem de hedefsiz kütle spektrometrik analizleri kullanarak, DBL'nin sulu ekstraktında toplam 849 bileşen tespit ettik; bunların arasında 10 furanoditerpenoid ve 17 ek FCC bulundu. Metabolik aktivasyon yollarını aydınlatmak için, fare karaciğeri mikrozomal (MLM) kuluçka sisteminde çift tuzak ajanları olarak glutatyon (GSH) ve 4-bromobenzilamin (BBA) kullandık. P450 aracılı metabolizma sayesinde, diosbulbin B (DSB), C (DSC), D (DSD), E (DSE), L (DSL), N (DSN) ve 2-pentilfurandan türetilen yedi karşılık gelen addukt başarılı bir şekilde tuzaklanmış ve karakterize edilmiştir. Bu çalışma, DBL'de potansiyel hepatotoksik furan bileşiklerinin kapsamlı profillenmesi için hassas ve özgül bir yaklaşım oluşturur ve furan içeren bitkisel ilaçlarla ilgili reaktif metabolitlerin oluşumu ve toksisite mekanizmaları hakkında değerli bilgiler sunar.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Geleneksel Çin tıbbı (TCM) ile ilgili güvenlik endişeleri, özellikle ilaç kaynaklı karaciğer hasarı (DILI), yaygın klinik kullanım ve modernizasyonuengellemektedir 1,2,3. Artan kanıtlar, TCM'nin çoğu bileşeninin doğası gereği toksik olmadığını gösteriyor; Bunun yerine, hepatotoksisiteleri in vivo 1,4,5 metabolik aktivasyondan kaynaklanır. Furan içeren bileşikler (FCC'ler), P450 aracılı metabolik aktivasyondan geçerek, karaciğer toksisitesini başlatmada kritik olan yüksek reaktif elektrofilik aramaddeler üreten P450 aracı metabolik aktivasyondan geçerler. Bu elektrofilik metabolitler, sistein tiolleri ve temel proteinlerin amino gruplarıyla birlikte kovalent adduktlar oluşturur; böylece toksik etkilerinilerlemesini kolaylaştırır 6,7,8.

TCM'de Dioscorea bulbifera L. (DBL), tiroid bozuklukları, tümörler ve cilt hastalıklarının tedavisinde yaygın olarakkullanılmıştır 9,10. DBL'den toplam 152 kimyasal bileşen izole edilip karakterize edilmiştir; bunların 41'i furanoditerpenoidler11 bulunmaktadır. Bunlar arasında, önemli biyoaktif bileşen olan diosbulbin B (DSB) fare modellerinde karaciğer hasarına neden olduğu gösterilmiştir; bu etki DSB kaynaklı cis-enedial (DDE)12,13 oluşumuyla yakından bağlantılıdır. Analitik enstrümantasyondaki gelişmelerle desteklenen kütle spektrometrisi, TCM 14,15'in karmaşık kimyasal bileşenleri ve metabolitlerini analiz etmek için önemli bir araç haline gelmiştir. Geleneksel olarak, DSB metabolizmasıyla üretilen cis-enediallar, N-asetil-L-lizin ile elektrofilik türlerin glutatyon veya N-asetil-L-sistein kombinasyonuyla yakalanmasıyla ve ardından ortaya çıkan kimyasal olarak stabil pirol türevlerinin LC-MS/MSanalizi ile tespit edilir 16,17. Bu yaklaşıma dayanarak, GSH ve BBA ile furan kökeni metabolik ara maddelerin eşzamanlı tutulmasını ve 129 Da'lık nötr kayıp taraması ile ve GSH adduktları için m/z 272'nin öncü iyon taramasını içeren LC-MS/MS analizini ve pirrol tespiti için BBA kısmından türetilen m/z 169 ve 171'in öncü iyon taramasını içeren geliştirilmiş bir strateji geliştirdik (Şekil 1)18, 19. Bilinen furanoidler için etkili olmasına rağmen, bu yaklaşım, özellikle önceden yapısal bilgiye sahip olmayan FCC'ler için karmaşık karışımlara uygulandığında belirgin sınırlamalar sergiler. Bu nedenle, TCM'nin karmaşık matrislerinin kapsamlı kimyasal karakterizasyonunu sağlayabilen ve aynı zamanda hepatotoksik öncüllerin verimli taramasını destekleyebilecek kapsamlı bir analitik stratejiye acil ihtiyaç vardır.

Burada, DBL'de potansiyel hepatotoksik FCC'lerin sistematik karakterizasyonu için entegre bir strateji rapor ediyoruz (Şekil 2). Strateji üç önemli adımı içerir: (i) UHPLC–MS/MS temelli yaygın hedefli metabolomikler (WTM) kullanılarak DBL'nin sulu ekstraktının kapsamlı kimyasal profillenmesi; (ii) GSH ve BBA ile FCC'lerden üretilen reaktif ara maddelerin tuzaklanması; ve (iii) HPLC–MS/MS ve UHPLC–MS/MS kullanılarak potansiyel toksik bileşenlerin metabolik aktivasyonu yoluyla oluşan GSH/BBA adduktlarının tespit edilmesi ve yapısal aydınlatılması. Bu entegre yaklaşım, karmaşık TCM matrislerinden DBL kaynaklı hepatotoksisiteden sorumlu önemli toksik öncüllerin kesin olarak tanımlanmasını sağlar ve TCM'nin güvenlik değerlendirmesi için son derece hassas ve spesifik bir çerçeve sağlar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NOT: Bu çalışmada kullanılan reaktifler ve ekipmanlar Malzeme Tablosu'nda listelenmiştir.

1. DBL test çözümünün hazırlanması

  1. Dioscorea bulbifera L'nin üç parti yumru köklerini toplayıp doğrulayın. TCM İşleme Ulusal Spesifikasyonu'na uygun olarak, yumru köklerden lifli kökleri çıkarın, kirden temiz olacak şekilde yıkayın, taze halde 1 cm kalınlığında dairesel dilimlere kesin, dilimleri 60 °C'de zorunlu hava fırınında kurutun, ardından çıkarıp odasıcaklığında 20 sıcaklığa soğutun.
  2. Her partiden 200 g DBL tartın ve yüksek hızlı kırıcı kullanarak kaba bir toz haline getirin (parçacık boyutu 250-850 μm).
  3. 20 g ham tozu 200 mL deyonize suda (1:10, w/v) 30 dakika bekletin. Eş zamanlı olarak, 1.2. adımda hazırlanan üç iri toz partisinin karışımını (1:1:1, w/w oranında karıştırılır) işleyin.
  4. Islanmış malzemeyi reflü altında 60 dakika ısıtarak çıkarın. Ekstraktı gazlı bez veya elek ile filtreleyerek çözünmeyen kalıntıları çıkarın. Kalan kalıntıya 200 mL deiyonize su ekleyin ve reflü ekstraksiyonunu 2 kez, her biri 60 dakika boyunca tekrarlayın. Üç filtreyi birleştirin ve biriktirilen ekstraktı kaynatarak 100 mL nihai hacme kadar yoğunlaştırın.
  5. Konsantre ekstraktı vakum dondurucu kurutucuya aktarın ve toz elde etmek için liyofilizasyon yapın.
  6. Her parti ekstrakt tozundan 18 mg doğru şekilde tartın. Her birini %50 asetonitril içeren 1,5 mL içinde çözün ve homojenliği sağlamak için karışımı 30 saniye vorteks ile yapın.
  7. Çözeltiyi 13.800 x g sıcaklığında 4°C'de 10 dakika boyunca santrifüj edin ve üst önümü MLM kuluçka stok çözeltisi olarak toplayın.
  8. Stok çözeltisinden 20 μL pipet, %50 asetonitrile 1:50 derecesine seyreldin ve 30 saniye girdabla yapın. Daha sonra çözeltiyi 0,22 μm mikrogözenekli bir zardan geçirerek örnek çözeltiyi kütle spektrometrik analizine hazır hale getirin.

2. DBL'nin kimyasal karakterizasyonu

  1. Kromatografik koşullar
    1. C18 sütunu (2,1 mm x 100 mm, 1,8 μm) kullanın ve sütun fırın sıcaklığını 40 °C'ye ayarlayın. Mobil faz A'yı suda %0,1 (v/v) formik asit olarak, hareketli faz B ise asetonitril olarak hazırlayın.
    2. Gradyent elüsyonunu şu şekilde programlayın: 0–10 dakika, %2–%50 B; 10–11 dk, %50–%95 B; ve 11–13 dakika, %95 B. Akış hızını 0,4 mL/da'ya ayarlayın ve numuneden 2 μL enjekte edin.
  2. Aşağıdaki parametrelerle kütle spektrometrik analizi yapın: İyon kaynağı: İyonDrive Turbo V elektrosprey iyonizasyon (ESI); Alım modu: Pozitif ve negatif iyon modlarında eşzamanlı alımla çoklu reaksiyon izleme (MRM); İyon püskürtme voltajı: +5,5 kV (pozitif) / −4,5 kV (negatif); Perde gazı: 35 psi; Kaynak sıcaklığı: 400 °C; İyon kaynağı gazı 1: 60 psi; İyon kaynaklı gaz 2: 60 psi; Deküme potansiyeli (DP): ±100 V.
  3. Veri işleme
    1. SCIEX Analist Yazılımı (v1.6.3) kullanarak MRM verilerini edinin ve işleyin. MSConvert kullanarak ham veri dosyalarını (.wiff) TXT formatına dönüştürün. Tespit edilen bileşikleri, özel BiotreeDB (V2.1) MS kütüphanesini sorgulaarak not edin. Açıklama, tutma sürelerinin (RT), kütle-yük oranlarının (m/z) ve parçalanma desenlerinin otantik standartlarla eşleşmesine dayanıyordu.

3. MLM kuluçkalarında üretilen GSH/BBA konjugatlarının karakterizasyonu

  1. MLM kuluçka
    1. Fare karaciğeri mikrozomal süspansiyonunu buzda yavaşça eritin. Buz üzerinde, aşağıda listelenen bileşenleri sıralı olarak ekleyerek 2 mL'lik bir mikrosantrifüj tüpünde kuluçka karışımı hazırlanır. En son NADPH yenileyici sistemi ekleyin. Kontrol grubu için, NADPH rejeneratör sistemi eşit hacimde buz soğukluğu PBS ile değiştirilir. Kısa bir süreliğine Vortex karıştırıyor.
      1. Aşağıdaki bileşenlerden oluşan bir kuluçka karışımı hazırlayın: Fare karaciğeri mikrozomal süspansiyonu (MLM, 4 mg/mL protein): 125 μL; magnezyum klorür (MgCl₂) çözeltisi (32 mM): 10 μL; DBE (12 mg/mL) veya DSB standart çözeltisi (35 mM): 10 μL; Glutatyon (GSH) çözeltisi (50 mM): 100 μL; BBA çözeltisi (250 mM): 10 μL; PBS tamponu (pH 7.4, 1.0 mol/L EDTA ve 0.1 mol/L K2HPO4 içerir): 145 μL; NADPH rejeneratör sistem çözümü (5.0 mM): 100 μL.
    2. İnkubasyon tamamlanır tamamlanmaz tüm tüpleri kuluçka makinesinden çıkarın. Her tüpe 1 mL buz soğukluğu asetonitril (-20 °C) ekleyerek enzimatik reaksiyonu sonlandırın.
    3. Proteinleri çökeltmek için 3 dakika girdaba bırakın. 13.800 x g sıcaklıkta 4 °C'de 10 dakika boyunca santrifüj yapın.
    4. Süpernatantı toplayın, 0,22 μm bir membrandan filtreleyin ve filtratı bir otosampler şişesine aktarın.
  2. HPLC-MS/MS ile DBL ekstraktlarının MLM kuluçka inkubasyonunun ön taraması
    1. Kromatografik koşullar
      1. C18 kolonu (150 mm x 4,6 mm, 3 μm) kullanın ve sütun sıcaklığını 25 °C'ye ayarlayın. Mobil faz A'yı suda %0,1 (v/v) formik asit olarak, hareketli faz B ise asetonitril olarak hazırlayın.
      2. Aşağıdaki gradyanı koşun: 0–2 dakika, %10 B; 2–15 dakika, %10'dan %90'a doğrusal artış B. Akış hızını 0,8 mL/da'ya ayarlayın ve hazırlanan numuneden 5 μL enjekte edin.
    2. Kütle spektrometrik koşulları. Tam tarama aralığını m/z 500–1000 olarak ayarlayın. M/z 169 ve 171'de ön iyon (PI) taramaları, pozitif iyon modunda 129 Da nötr kayıp (NL) taraması ve negatif iyon modunda m/z 272'de PI taraması. Ana parametreleri şu şekilde ayarlayın: iyon püskürtme voltajı (IS), +5.500 V (pozitif) / −4.500 V (negatif); kümeleme çözme potansiyeli (DP), ±70 V; giriş potansiyeli (EP), ±10 V; çarpışma enerjisi (CE), +35 V (pozitif) / −40 V (negatif); çarpışma hücresi çıkış potansiyeli (CXP), ±10 V; iyon kaynaklı gaz 1 ve 2 (GS1/GS2), her biri 50 psi; perde gazı (CUR), 40 psi; ve kaynak sıcaklığı (TEM), 650 °C.
    3. SCIEX Analist Yazılımı (v1.6.3) kullanarak tüm kütle spektrometrik verilerini edinin ve işleyin.
  3. UHPLC-HRMS ile pirrol türevlerinin ve FCC'lerin tanımlanması
    1. Kromatografik koşullar
      1. C18 kolonu (2,1 mm x 100 mm, 1,9 μm) kullanın ve sütun fırınını 30 °C'ye ayarlayın. Mobil faz A'yı suda %0,1 (v/v) formik asit olarak, hareketli faz B ise asetonitril olarak hazırlayın.
      2. Eğimi şu şekilde programlayın: 0-20 dakika, %5-%95 B; 20-21 dakika, %95 B. Akış hızını 0,3 mL/da'ya ayarlayın ve 2 μL numune enjekte edin.
    2. Aşağıdaki parametrelerle kütle spektrometrik analizi yapın: İyon kaynağı: ESI; iyon püskürtme voltajı: +3,5 KV (pozitif iyon)/-2,5 KV (negatif iyon); kapiller sıcaklığı: 320 °C; prob ısıtıcısı sıcaklığı: 350 °C; kılıf gazı: 10 arb; maksimum püskürtme akımı: 100 μA; S-lens RF seviyesi: %50; çarpışma enerjisi: 35 V (pozitif iyonlar) ve 40 V (negatif iyyonlar); tarama aralığı: 100-1000 m/z.
    3. Veri ön işleme
      1. DBL'den belirlenen FCC'ler ve tuzak mekanizmasına (Şekil 1) dayanarak, tahmin edilen GSH/BBA eşliklerini ChemBioDraw Ultra 14.0 ile çizin (Ek Şekil 1).
      2. Alınan HRMS ham dosyalarını (.raw) Xcalibur'un Qual Browser modülüne (V4.1) aktarın. GSH/BBA-eşlenimlerini taramak için yazılımda bir tanımlama iş akışı oluşturun.
      3. Deneysel MS1 ve MS2 spektrumlarını, bilinen addüksiyon mekanizmalarına dayanarak FCC'lerden (ChemBioDraw Ultra 14.0 kullanılarak öngörülen) türetilen GSH/BBA eşlenimlerinin tahmin edilen yapılarıyla karşılaştırın (Şekil 1 ve Ek Şekil 1). İzlenen tüm iyonlar için minimum 1 x 105 zirve yoğunluk eşiği ve 10 ppm ± kütle doğruluk toleransı kullanın. MS1 ve MS2 spektrumlarında gözlemlenen karakteristik brom izotop desenine (yaklaşık 1:1) dayalı konjugatları doğrulayın; bunlar m/z 169 ve 171'deki tanısal iyonlar da dahildir.
      4. Gözlemlenen moleküler iyonlardan GSH/BBA etiketinin kütlesi çıkararak ana FCC'lerin moleküler ağırlıklarını belirleyin. Çıkarma için 472/474 Da (C17H21O5N4BrS) kullanın.
      5. Yukarıdaki sonuçlara dayanarak DBL'deki ana FCC'leri UHPLC–HRMS ile karakterize edin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

DBL'de Tanımlanan FCC'ler
DBL'nin kimyasal profilini karakterize etmek için, üçlü dörtlü tabanlı WTM ve HRMS profillemesinin bir kombinasyonu kullanılmıştır. Bu çift yaklaşım, çıkarılmış iyon çiftlerinin kapsamlı analizini mümkün kılarak son derece bilgilendirici çıkarılmış iyon kromatogramları (EIC'ler, Şekil 3A) ve toplam iyon kromatogramları (TIC'ler, Şekil 3B) üretti. Optimize edilmiş kromatografik ve tes...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

DBL'nin hepatotoksisitesi üzerine yapılan önceki araştırmalar, hedefli yakalama stratejileri kullanılarak bireysel FCC'lerin metabolik ara maddelerineodaklanmıştır 9,22. Bu yaklaşımlar değerli mekanik içgörüler sağlasa da, karmaşık bitkisel matrislerdeki etkinlikleri genellikle düşük bolluklu biyoaktive ara maddelerin kötü tespit edilebilirliği nedeniyle sınırlıdır. Mevcut çalışmada, DBL'de hepatotoksik FCC'lerin sistematik olara...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (No. 82360759), Guizhou Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı (No. ZK [2024]406, ZK [2024] 397, Doktora sonrası istasyonu [2021]007, BSH [2024]005) ve Guizhou Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi TD Hopes [2023]005.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
4-BromobenzilaminJiuding Kimya (Şanghay) Teknoloji A., LtdX114214A
AsetonitrilSigma-Aldrich (Şanghay) Ticaret Şirketi, Ltd1000294000
SantrifüjWuxi BaiTaKe Biyoteknoloji Şirketi, LtdCR3180
Kromatografik & nbsp; sample  ŞişelerZhejiang ALWSCI Teknoloji A.Ş., LtdC0000008
diosbulbin BChengdu PufeiDe Biotech Co., Ltd18022603
Dioscorea bulbifera L.-DBL-1; DBL-2; DBL-3Bitki materyalleri, Prof. Weike Jiang (Guizhou Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi, Guiyang, Çin) tarafından doğrulanmış, kupon örnekleri ise Guizhou Eyaleti Temel Farmakoloji Ana Laboratuvarı'na yerleştirilmiştir.
Elektronik DengeShanghai Anting Elektronik Enstrüman FabrikasıFA1004B
Formik asitThermo Fisher Scientific Co., Ltd195715
GlutatyonSigma-Aldrich (Şanghay) Ticaret Şirketi, LtdSLBX5462
Yüksek hız  EziciYongkang Biao Hardware Products Co., LtdXC-2000Y
Kunming fareleri Karaciğer Mikrozomları (erkek)Dalian Meilun Biyoteknoloji Şirketi, Ltd.MB12496-1
Magnezyum klorürPekin Solarbio Bilim & Technology Co., LtdM8161
MetanolSigma-Aldrich (Şanghay) Ticaret Şirketi, Ltd646377
millipore filtreTianjin Jinteng Deneysel Ekipman Şirketi, LtdNylon66
NADPH Na4Pekin Solarbio Bilim & Technology Co., Ltd102X022
FırınTianjin Laboratuvar Enstrümantı & Ekipman Şirketi, LtdGFL125
Fosfatla tamponlu tuzlu suBeyotime Biotechnology  Co., LtdC0221B
Termostatik  su  bath  osilatörŞanghay Zijia Enstrüman Şirketi, LtdTHZ-82A
Ultra-dondurucuThermo Fisher Scientific Co., LtdTDE60086FV-ULTS
Ultrasonik TemizleyiciŞanghay Zijia Enstrüman Şirketi, LtdL10-250A
Vortex MikserJiangsu Haimen Tıbbi Aletler FabrikasıVM-D

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Ma, Z., Shi, Z., Xiao, X., Wang, J. New insights into herb-induced liver injury. Antioxid Redox Signal. 38 (16-18), 1138-1149 (2023).
  2. Yang, Y., et al. A review of herb-induced liver injury in mainland China. Front Pharmacol. 13, 813073(2022).
  3. Shen, T., et al. Incidence and etiology of drug-induced liver injury in mainland China. Gastroenterology. 156 (8), 2230-2241 (2019).
  4. Zhou, Y., et al. Mechanism of drug-induced liver injury and hepatoprotective effects of natural drugs. Chin Med. 16 (1), 135(2021).
  5. Wang, Y., et al. Metabolic activation of toxic natural products from herbal and dietary supplements leading to toxicities. Front Pharmacol. 12, 758468(2021).
  6. Pan, J., et al. Difference in hepatotoxicity of furan-containing components in Cortex Dictamni correlates with the efficiency of their metabolic activation. Phytomedicine. 114, 154778(2023).
  7. Liao, Y., et al. DNA damage and up-regulation of PARP-1 induced by columbin in vitro and in vivo. Toxicol Lett. 379, 20-34 (2023).
  8. Tian, M., Peng, Y., Zheng, J. Metabolic activation and hepatotoxicity of furan-containing compounds. Drug Metab Dispos. 50, 2458-2471 (2022).
  9. Hu, Z., et al. Development of a mechanism-based biomarker for Dioscorea bulbifera L. exposure and hepatotoxicity in rats. Phytomedicine. 102, 154172(2022).
  10. Narzary, C., Sarkar, D., Das, P., Papi, D. Ethnobotany phytochemistry, and pharmacological activity of Dioscorea bulbifera: A comprehensive review. Chem Biodivers. 22 (1), e202401408(2025).
  11. Guan, X., et al. Bioactivity,toxicity and detoxification assessment of Dioscorea bulbifera L.: A comprehensive review. Phytochem Rev. 16 (3), 573-601 (2017).
  12. Jiang, Y., et al. Disruption of acetyl-CoA acyltransferase 2 resulting from exposure to diosbulbin B. Chem Res Toxicol. 38 (7), 1203-1214 (2025).
  13. Yang, Y., et al. Histones H2B/H3 selectively modified by acis-enedial metabolite resulting from metabolic action of diosbulbin B: Potential target proteins for antitumor agent design. J Med Chem. 68 (13), 13408-13420 (2025).
  14. Shao, L., et al. Pharmacokinetics and UPLC–MS/MS analysis of delsoline in mouse whole blood. J Anal Methods Chem. 2018, 9412708(2018).
  15. Shi, H., et al. RefMetaPlant: A reference metabolome database for plants across five major phyla. Nucleic Acids Res. 52 (D1), D1614-D1628 (2024).
  16. Tan, R., et al. Diosbulbin B: An important component responsible for hepatotoxicity and protein covalent binding induced by Dioscorea bulbifera L. Phytomedicine. 102, 154174(2022).
  17. Li, W., et al. Metabolic activation of furan moiety makes diosbulbin B hepatotoxic. Arch Toxicol. 90 (4), 863-872 (2016).
  18. Wang, K., Li, W., Chen, J., Peng, Y., Zheng, J. Detection of cysteine- and lysine-based protein adductions by reactive metabolites of 2,5-dimethylfuran. Anal Chim Acta. 896, 93-101 (2015).
  19. Zhang, Z., et al. Sensitive bromine-based screening of potential toxic furanoids in Dioscorea bulbifera L. J Chromatogr B. 1057, 1-14 (2017).
  20. National Pharmacopoeia Committee. National standard for processing of traditional Chinese medicines. , People’s Medical Publishing House. , Beijing. (1988).
  21. Wang, K., et al. Chemical identity of interaction of protein with reactive metabolite of diosbulbin B. in vitro and in vivo. Toxins. 9 (8), 249(2017).
  22. Wang, K., et al. Selective and sensitive platform for function-based screening of potentially harmful furans. Anal Chem. 86 (21), 10755-10762 (2014).
  23. Sawada, Y., et al. Widely targeted metabolomics based on large-scale MS/MS data for elucidating metabolite accumulation patterns in plants. Plant Cell Physiol. 50 (1), 37-47 (2009).
  24. Zhang, Q., et al. Formation of furan from linoleic acid thermal oxidation: (E,E)-2,4-decadienal as a critical intermediate product. J Agric Food Chem. 72 (8), 4384-4392 (2024).
  25. Fan, X. Furan formation from fatty acids as a result of storage, gamma irradiation, UV-C and heat treatments. Food Chem. 175, 439-444 (2015).
  26. Zhang, S., et al. 8-Epidiosbulbin E acetate triggers apoptosis via metabolic activation-mediated crosstalk between mitochondria and endoplasmic reticulum. Ecotoxicol Environ Saf. 302, 118614(2025).
  27. Li, W., et al. A metabolic activation-based chemoproteomic platform to profile adducted proteins derived from furan-containing compounds. ACS Chem Biol. 17 (4), 873-882 (2022).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Hepatotoksisite TaramasUHPLC HRMSReaktif MetabolitlerKaraci er MikrozomlarP450 MetabolizmasGlutatyon YakalamaFuranoditerpenoidler
Video yakında

İlgili makaleler