Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Araştırma makalesi

MiR-483-3p, Küçük Hücre Olmayan Akciğer Kanserinde Prognostik Belirteç Olarak: KIF3B Aşağı Regulasyonu Yoluyla Tümör İlerlemesini Bastırmak

143 görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/71006

⸱

5 Haziran 2026

 , 
1Department of Respiratory and Critical Care Medicine, The Affiliated Taizhou People's Hospital of Nanjing Medical University, Taizhou School of Clinical Medicine, Nanjing Medical University, 2Department of Oncology, The Second Affiliated Hospital of Nanjing Medical University

Bu makalede

Özet

MIR-483-3p'nin aşağı regulasyonu, NSCLC'de kötü bir prognostik belirteçtir. miR-483-3p'nin aşırı ekspresyonu, NSCLC hücrelerinin kötü huylu fenotiplerini baskılar; bu hücrelerin fonksiyonu KIF3B'nin aşırı ekspresyonu ile tersine çevrilmiştir.

Özet

MikroRNA'lar, küçük hücreli olmayan akciğer kanserinde (NSCLC) geniş roller oynar. MIR-483-3p'nin NSCLC'deki klinik değerini ve moleküler hedefini araştırmak için bu çalışmada 350 NSCLC hastası alındı. RT-qPCR sonuçları, tümör düğümü metastazi (TNM) aşaması yükseldikçe miR-483-3p'nin tümör histolojik ekspresyonunun kademeli olarak azaldığını gösterdi. Alıcı operasyonel karakteristikli (ROC) eğrisi, histolojik miR-483-3p seviyesinin yüksek TNM evresi (III) olan NSCLC hastalarını düşük evre (I+II) hastalardan (ROC eğrisinin altındaki alan = 0.869) etkili şekilde ayırt edebildiğini gösterdi. Kaplan-Meier eğrisi, düşük miR-483-3p ekspresyona sahip NSCLC hastalarının 5 yıllık genel sağkalım oranının daha düşük olduğunu gösterdi. Diğer karıştırıcı faktörler dikkate alındıktan sonra, çok değişkenli Cox analizi miR-483-3p'yi NSCLC hayatta kalma için bağımsız bir koruyucu faktör olarak daha da belirledi. Mekanik olarak, RNA pull-down testi, miR-483-3p'nin yukarı regulasyonunun KIF3B mRNA ile birlikte çökeldiğini ve ekspresyonunu inhibe ettiğini, böylece NSCLC hücrelerinin kötü huylu fenotiplerini bastırdığını ve apoptozu indüklediğini gösterdi. Sonuç olarak, miR-483-3p'nin aşağı regülasyonu NSCLC'de kötü bir prognostik belirteç olarak hizmet eder ve KIF3B'yi olumsuz düzenleyerek kanserin ilerlemesini etkileyebilir.

Giriş

Kanserle ilişkili ölümler arasında, küçük hücreli olmayan akciğer kanseri (NSCLC) başlıca nedenlerden biridir. Yüksek ölüm oranı öncelikle tümörlerin agresif büyümesi, erken metastaz ve edinilmiş direnç 1,2,3 gelişimine bağlanır. Mevcut klinik stratejilerdeki ilerlemelere rağmen, NSCLC hastalarının genel prognozu hâlâkötü 4,5,6. Biyolojik zorlukların yanı sıra, NSCLC hastaları genellikle ağrı, nefes nefesi, yorgunluk ve psikolojik sıkıntı gibi ağır bir semptom yükü yaşar; bu da yaşam kalitelerini önemli ölçüde düşürür ve klinik yönetimi zorlaştırır. Semptom değerlendirmesi, hasta eğitimi, psikososyal destek ve çok disiplinli bakım koordinasyonu gibi etkili hemşirelik bakımı, hasta sonuçlarının ve tedavi uyumunun iyileştirilmesinde kritik bir rol oynar. Bu nedenle, NSCLC'nin gelişimini ve ilerlemesini yönlendiren temel moleküler mekanizmaların derinlemesine incelenmesi, yeni prognostik biyobelirteçlerin ve etkili terapötik stratejilerin geliştirilmesi ile hem hastalık hem de hasta odaklı ihtiyaçları karşılayan hedefli hemşirelik müdahalelerinin bilgilendirilmesi için son derece önemlidir.

MikroRNA'ların (miRNA'lar), hedef mRNA'ların translasyonunu engelleyerek ya da transkripsiyon sonrası seviyede bozulmalarını teşvik ederek gen ifadesinidüzenlediği yaygın olarak bildirilmiştir 7. Kapsamlı araştırmalar, miRNA'ların NSCLC dahil olmak üzere çeşitli kanserlerde kritik bir düzenleyici rol oynadığını göstermektedir. Düzensizlikleri, tümör hücre malign fenotipi ve kemoterapi direnci 7,8,9,10,11 ile yakından ilişkilidir. Bu nedenle, NSCLC'de anormal şekilde eksprese edilen ve önemli fonksiyonel rollere sahip miRNA'ların tespit edilmesi, günümüz tümör araştırmalarında sıcak bir konu haline gelmiştir. Ön biyoinformatik analizimiz, hem NSCLC hastalarında hem de ilaç dirençli hücre hatlarında miR-483-3p'nin tutarlı aşağı regülasyonunu ortaya koydu ve bunun hastalık ilerlemesiyle potansiyel ilişkisini gösterdi. Bu nedenle, bu çalışma miR-483-3p'nin NSCLC'deki işlevini incelemek için odaklanmaktadır. Mevcut kanıtlar, miR-483-3p'nin çeşitli insankanserlerinde (12,13,14,15) tümör baskılayıcı gen olarak işlev gördüğünü ve bu kanserlerin susturulmasının NSCLC16'da gefitinib direnciyle ilişkili olduğuna inanıldığını göstermektedir. Ancak, NSCLC'deki spesifik ifade modeli, klinik prognostik değeri ve altta yatan moleküler mekanizmalar henüz tam olarak anlaşılmamaktadır.

Bu çalışmanın amacı, NSCLC'de miR-483-3p'nin klinik önemini ve biyolojik işlevlerini sistematik olarak netleştirmek ve onun aşağı yönlü hedef kinesin aile üyesi 3B'nin (KIF3B) rolünü açıklamaktı. Bunu başarmak için önce klinik doku örneklerindeki ekspresyonunu ve hastaların klinik-patolojik özellikleri ile prognozuyla ilişkisini analiz ettik. Daha sonra, miR-483-3p'nin NSCLC hücre fonksiyonları üzerindeki etkilerini incelemek için in vitro fonksiyonel testler yapıldı. Ayrıca, biyoinformatik tahmin ve moleküler biyoloji deneyleriyle KIF3B'yi miR-483-3p'nin ana aşağı akım hedef geni olarak belirledik ve fonksiyonel kurtarma testleriyle düzenleyici ilişkiyi doğruladık. KIF3B'nin yüksek ekspresyonu kanser hücrelerinde proliferasyon, artan göç ve kemoterapi direnciyleilişkilidir 17,18,19,20,21,22, ancak NSCLC'deki fonksiyonel rolü belirsizdir. Bildiğimiz kadarıyla, bu çalışma NSCLC'de miR-483-3p/KIF3B ekseninin rolünü ve klinik önemini üç açıdan — klinik prognoz, hedef gen tanımlama ve fonksiyonel mekanizmalardan — karakterize eden ilk çalışmadır; böylece NSCLC prognozu ve hedefli tedavi değerlendirmesi için potansiyel olarak yeni içgörüler sağlamaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Nanjing Tıp Üniversitesi İkinci Bağlı Hastanesi Etik Komitesi bu çalışmayı onaylamıştır. Helsinki Bildirgesi'nin temel ilkeleri, tüm araştırma süreci boyunca tutarlı şekilde uygulanmıştır. Çalışmaya dahil edilen tüm bireysel katılımcılardan yazılı bilgilendirilmiş onay alındı. Tüm malzemeler ve reaktifler hakkında ayrıntılı bilgiler Malzeme Tablosu'nda verilmiştir.

Biyoinformatik analiz:

Gen İfadesi Omnibus veritabanı (www.ncbi.nlm.nih.gov) NSCLC ile ilgili veri setlerinde arama yapmak için uygulandı. GSE171517, NSCLC hastalarından ve sağlıklı kontrol gruplarından alınan serum örneklerine dayanan kodlamayan bir RNA analizidir. GSE110815, gefitinibibe dirençli ve hassas NSCLC hücrelerinde yapılan kodlamayan bir RNA dizisi analizidir. Bu iki veri setindeki diferansiyel olarak ifade edilen miRNA'lar, |log2FC| eşiği belirlenerek tarandı. ≥ 2, < 0.05. Bu veri setleri farklı bölümlerden (serum, hücre hatları) gelse de, tamamlayıcı bir strateji kullandık: invaziv olmayan biyobelirteç potansiyeli için serum teşneli miRNA'lar ve ilerleme ile dirençli hücre hattı teşneli miRNA'lar. Kesişim, çapraz bölüm düzensizliğinin NSCLC için güçlü biyolojik öneme sahip olduğunu varsayarak, doku doğrulaması için miR-483-3p'yi aday göstermiştir.

miR-483-3p'nin potansiyel hedefleri, miRDB (https://mirdb.org/custom.html) ve yıldız üssü (https://rnasysu.com/encori/index.php) veritabanlarında eşzamanlı olarak tahmin edilmiştir. Bu iki veritabanındaki tarama eşiği sırasıyla Target Score ≥ 60 ve TDMDScore ≥ 1 idi. Daha sonra, bu hedeflerin kesişimi kullanılarak GO analizi için bir Biyoinformatik Analiz Platformu (www.bioinformatics.com.cn) kullanıldı.

Klinik örnek dahil edilme:

Bu çalışma, cerrahi olarak rezek edilmiş NSCLC örneklerine dayanan retrospektif gözlemsel bir kohort çalışmasıdır. Bu çalışma, hastanede cerrahi tedavi gören 350 NSCLC hastasını kapsıyordu; bunların 96'sı tümör düğümü metastazı (TNM) evre I, 96'sı evre II hastalığı ve 158'i evre III hastalığı olan hasta yer alıyordu. Detaylı klinik özellikleri Tablo 1'de sunulmuştur. Bu hastaların hepsine histolojik muayene yoluyla NSCLC teşhisi kondu. Dışlama kriterleri arasında kalp, karaciğer veya böbrek fonksiyonunun bozulması, aktif enfeksiyonlar veya otoimmün hastalıklar, ağır psikiyatrik bozukluklar veya bilişsel bozukluk, eksik veya eksik klinik kayıtlar ve hastalardan bilgilendirilmiş onay alınamaması yer alır. Klinik analiz, tümör dokusu örnekleri ve teşhisten sonraki beş yıl içinde sağkalım durumu toplanarak gerçekleştirildi. Takip yöntemi şöyledir: Tüm hastalar ameliyat tarihinden ölümüne, takibe kaybına veya çalışmanın sonuna kadar takip edilmiştir. İlk yıl boyunca her 3 ayda bir takip yapıldı. Sonrasında, her 6 ayda bir ayaktan muayeneler ve telefon görüşmeleriyle gerçekleştirildi. Her takipte sağkalım durumu, ölüm nedeni, hastalık tekrarı ve sonraki tedavi bilgileri kaydedildi. Genel hayatta kalma süresi, ameliyat tarihinden herhangi bir nedenle ölüm tarihine kadar olan dönem olarak tanımlanmıştır.

Hücre işleme:

BEAS-2B, normal bir insan akciğer epitel hücre hattı, %10 fetal sığır serumu (FBS) ve %1 penisilin/streptomisin (P/S) içeren DMEM'de kültürlendi. Tüm NSCLC hücre hatları (HCC827, H1299, H520, A549) aynı tedarikçi tarafından sağlanan özel büyüme ortamında kültürlenmiştir. HCC827, H1299 ve H520 için özel ortamın temel formülasyonu RPMI-1640 + %10 FBS + %1 P/S'dir; A549 için ise Ham'ın F-12K + %10 FBS + %1 P/S'dir. Dondurulmuş hücreler 37 °C su banyosunda hızla çözülür, kriyokoruma ortamı gidermek için santrifüjlenir ve taze kültür ortamında yeniden süspansiyona alınır. Hücreler %90 birleşime ulaştığında, %0,25 tripsin-EDTA ile sindirilir ve 1:3 oranında geçiş yapılır. Tüm hücre hatları STR analiziyle (Ek Dosya 1) doğrulanmış ve mikoplazma kontaminasyonundan arınmıştır. Tüm in vitro deneylerde 4. nesildən 10. nesle kadar hücreler kullanıldı.

miR-483-3p agonisti ve onun negatif kontrolü (agonist-NC), KIF3B'nin küçük interferenze RNA'sı (si-KIF3B) ve negatif kontrolü (si-NC), ayrıca KIF3B aşırı ekspresyon vektörü (oe-KIF3B) ve boş kontrolü (oe-NC) transfeksiyon reaktifi kullanılarak transfeksiyon yapıldı. miR-483-3p agonisti veya agonist-NC'nin çalışma konsantrasyonu 100 nM, oe-KIF3B plazmidinin miktarı ise 2,5 μg (6-kuyu plakası) idi. Hücreler, transfeksiyondan 48 saat sonra sonraki deneyler için alındı.

RT-qPCR:

Tümör doku örnekleri ve hücrelerindeki toplam RNA TRIzol reaktifi kullanılarak çıkarıldı. Ters transkripsiyona edilmiş cDNA, RT reaktif kiti kullanılarak hazırlandı ve ardından QPCR, SYBR Green Pro Taq HS Premix kullanılarak 7500 Hızlı RT-PCR sisteminde gerçekleştirildi. miR-483-3p ve KIF3B'nin göreli ekspresyonu, 2-ΔΔCT yöntemiyle ev bakım U6 ve GAPDH ile normalleştirildi. İlgili primer dizileri aşağıdaki gibidir:

miR-483-3p (F), 5'-ACACTCCAGCTGGGTCACTCCTCTCCTCCTCCTCCTCCTCCTCC-3'

miR-483-3p (sağ), 5'-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGCAATTCAGTTGAAGAAGAGACGGG-3'

KIF3B (F), 5'-ATCCTGGAGCAAACAGG-3'

KIF3B (Sağ), 5'-GTTCCAAGGTCTCCTCATCTCG-3'

U6 (F), 5'-ATGTTCCAGTATGACTCTA-3'

U6 (Sağ), 5'-ATGTTCCAGTATGACTCTA-3'

GAPDH (F), 5'-GTAACCCGTTGAACCCCATT-3'

GAPDH (Sağ), 5'-CCATCCAATCGGTAGCG-3'

RT-qPCR, üç bağımsız biyolojik replika ile gerçekleştirildi.

Hücre yaşamı:

HCC827 (3000 hücre/kuyruk) ve A549 (2000 hücre/kuyuyu) hücreleri, transfeksiyonlu veya transfeksiyonsuz, farklı kültür dönemleri için 96 kuyu tabakasına tohumlanmıştır. Hücreler yüzeye yapıştıktan sonra, hücre canlılığı belirli zaman noktalarında belirlenmiş kuyularda değerlendirildi. Özellikle, 37 °C'de 2 saatlik kuluçka için kuyulara 10 μL Hücre Sayma Kiti (CCK-8) ve 90 μL ortam eklendi. Her kuyunun emilimi mikroplaka okuyucu kullanılarak 450 nm olarak ölçüldü. Hücre canlılığı üç bağımsız biyolojik kopya ile gerçekleştirildi.

Transwell testi:

İstila/göç testi için taban membran matris kaplamalı veya kaplamasız Transwell odası cihazı (8 μm) kullanıldı. Üst oda transfekte edilen NSCLC hücreleri (8 × 104, 500 μL) tohumlandıktan sonra, alt oda 700 μL DMEM (%10 FBS) ile dolduruldu. 37 °C'de 24 saat süren bir kuluçka gerçekleştirildi. Chamber membranının üst katmanındaki hücreler pamuk çubukla nazikçe silindikten sonra, zarın alt yüzeyindeki hücreler oda sıcaklığında 20 dakika boyunca %4 paraformaldehit ile sabitlenmiş, ardından oda sıcaklığında %0,1 kristal menekşe çözeltisiyle 10 dakika boyanmış, ardından fazla lekeyi temizlemek için akan musluk suyla kısa bir yıkama yapılmıştır. Göç eden hücreler optik mikroskop kullanılarak manuel olarak sayıldı. Her Transwell odası için, üç örtüşmeyen görüş alanı rastgele seçildi ve her alandaki boyalı hücre sayısı sayıldı. Sonrasında ortalama hücre sayısı hesaplandı. Bu sayım, deneysel koşullardan habersiz iki bağımsız araştırmacı tarafından yapıldı ve elde edilen ortalama değerler istatistiksel analiz için kullanıldı. Transwell testi, üç bağımsız biyolojik kopya ile gerçekleştirildi.

Hücre apoptozu tespiti

NSCLC hücre apoptozu tespiti için bir Annexin V-FITC/PI boyama kiti kullanıldı. Kısaca, 6 × 104 hücre içeren bir süspansiyon ilk olarak 195 μL Annexin V-FITC bağlama tamponu kullanılarak hazırlandı. Daha sonra Annexin V-FITC (5 μL) ve PI boyama çözeltisi (10 μL) ardışık olarak eklenerek oda sıcaklığında karanlıkta 20 dakika kuluçka yapıldı. Kuluçka tamamlandıktan sonra, akış sitometresi hemen kullanılarak test edilecek hücreler tespit edildi. Her örneklem için 10.000 olay alındı. Kapı stratejisi şöyleydi: hücreler önce FSC-A ile SSC-A arasında kapalı olarak döküntü dışlanıyor, ardından FSC-A ile FSC-H arasında singlet kapı kapatma yapılıyordu. Apoptotik hücreler daha sonra Annexin V-FITC vs. PI nokta grafiklerinde tanımlandı. Kadranlar lekesiz ve tek boyalı kontrollerle ayarlandı. Apoptoz yüzdesi, erken apoptotik (Annexin V⁺/PI⁻) ve geç apoptotik (Annexin V⁺/PI⁺) hücrelerinin toplamı olarak hesaplandı. Hücre apoptozu tespiti üç bağımsız biyolojik replika ile gerçekleştirildi.

RNA aşağı çekimiyle

KIF3B mRNA'nın segmenti (KIF3B/NM004798.4/NP004789.1: 32334713–32334791, 5'-AGAAATCTGTCACCTTTCTGCCTTGTTTTTTGAATGAAATGCTTCTGGGTTTATTTATTTATGAAAGGAGTGATCCT-3', 78 nt) in vitro sentezlendi ve RNA 3' End Desthiobiotinylation kiti kullanılarak biotin etiketiyle etiketlendi. Hücre ekstraktları, 4 °C'de 1,5 saat boyunca biotin etiketli KIF3B mRNA ile kuluçka edildikten sonra, oda sıcaklığında 2 saatlik kuluçka için streptavidin manyetik boncukları eklendi. Son olarak, her reaksiyondaki miR-483-3p seviyesi RT-qPCR ile üç bağımsız biyolojik replikasyonla tespit edildi.

İstatistiksel analiz

Bu çalışmadaki sürekli değişkenler ortalama ± standart sapma (ortalama ± SD) olarak ifade edildi, kategorik veriler ise sayılar olarak sunuldu. İstatistiksel analiz için uygun istatistiksel analiz yazılımı kullanıldı. Deneysel veri analizi için tek taraflı/iki taraflı ANOVA kullanıldı, ardından Tukey'nin sonradan yaptığı test yapıldı. P < 0.05 istatistiksel olarak anlamlı olarak kabul edildi.

Alıcı operasyonel karakteristikli (ROC) eğrisi analizi, miR-483-3p ekspresyonunun, yüksek evre (III) olan NSCLC hastalarını düşük evre (I + II) TNM sınıflandırmasına sahip hastalardan ayırt etme yeteneğini belirlemek için gerçekleştirildi. Youden indeksi (hassasiyet + özgüllük – 1), hassasiyet ve özgüllük arasındaki dengeyi en üst düzeye çıkaran kesme değerini belirlemek için kullanıldı. Eğriyi altındaki alan (AUC), miR-483-3p ekspresyonunun genel ayırt edici yeteneğini değerlendirmek için hesaplandı. 0.7 > bir AUC kabul edilebilir sayıldı. Tüm ROC analizleri GraphPad Prism kullanılarak gerçekleştirilmiştir.

Hayatta kalma analizi için, genel hayatta kalma eğrilerini tahmin etmek için Kaplan-Meier yöntemi kullanılmıştır. Log-rank testi, gruplar arasındaki sağ kalma dağılımlarını karşılaştırmak için uygulandı (miR-483-3p yüksek ve düşük ekspresyonlu gruplar). Kaplan-Meier eğrileri %95 güven aralığı (CI) ile çizildi. Çok değişkenli Cox orantılı risk regresyon modeli için aşağıdaki değişken seçim stratejisi uygulandı: Her aday değişken için önce tek değişkenli analiz yapıldı. Tek değişkenli analizde p-değeri 0.10 < değişkenler potansiyel tahmin ediciler olarak değerlendirilmiş ve daha sonra çok değişkenli Cox regresyon modeline dahil edilmiştir. Çok değişkenli analiz, olasılık oranı testine dayalı ileri adım (koşullu) seçim yöntemiyle yapıldı; giriş ve çıkarma kriterleri sırasıyla p < 0.05 ve p > 0.10 olarak belirlendi. Her değişken için orantılı tehlike varsayımı, Schoenfeld kalıntıları kullanılarak doğrulandı (p > 0.05 ihlal olmadığını gösterdi). Sonuçlar %95 CI ile tehlike oranları (HR) olarak bildirildi. Tüm testler iki taraflıydı ve p-değeri < 0.05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi, aksi belirtilmedikçe.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Aşağı regülasyona miR-483-3p, NSCLC'de kötü bir prognozdur

Venn diyagramı (Ek Şekil 1), miR-483-3p'nin hem NSCLC hastalarının serum örneklerinde hem de kemoterapiye dirençli NSCLC hücre hatlarında aşağı regülasyona uğradığını göstermektedir. Tek yönlü bir ANOVA analizi, tümördeki miR-483-3p ekspresyonunun TNM evresi arttıkça kademeli olarak azaldığını göstermiştir (Şekil 1A). ROC ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu çalışma, miR-483-3p'nin NSCLC tümörlerini baskılamadaki rolünü ve bunun altında yatan mekanizmayı klinik örnek analizi ve moleküler mekanizma keşfiyle sistematik olarak incelemiştir. Bu çalışmanın amacı iki aşamadan oluşuyordu: (1) miR-483-3p'nin NSCLC'de bağımsız bir prognostik belirteç olarak hizmet edip etmediğini belirlemek ve (2) miR-483-3p'nin KIF3B'yi hedefleyerek malign fenotipleri bastırabileceği moleküler mekanizmayı açıklamak. Bulgularımız, miR-483-3p'nin bağımsız bir progn...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
%0,1 kristal menekşeSolarbio/ÇinG1064
0,25% tripsin-EDTAGibco/USA25200056
%4 paraformaldehitBeyotime/ÇinP0099
7500 Hızlı RT-PCR sistemiUygulamalı Biyo-sistemler/ABD4351106
A549Procell/ChinaCL-0016
A549'a özgü ortamProcell/ChinaCM-0016
Annexin V-FITC/PI boyama KitiBeyotime/ÇinC1062S
BEAS-2BSTEM RECELL/ÇinSTM-CL-5102
Hücre Sayma Kiti-8 (CCK-8)Solarbio/ÇinCA1210
DMEM ortamıMeilunBio/ChinaPWL003
Fetal sığır serumuGibco/USAA5256701
GraphPad Prism yazılımı GraphPadSürüm 7.0
H1299Procell/ChinaCL-0165
H1299'a özgü ortamProcell/ChinaCM-0165
H520Procell/ChinaCL-0402
H520'ye özgü ortamProcell/ChinaCM-0402
HCC827Procell/ChinaCL-0094
HCC827'ye özgü ortamProcell/ChinaCM-0094
KIF3B mRNAGenscript Biotech/ÇinÖzelleştirilmiş
Lipo6000 reaktifiBeyotime/ÇinC0526
miR-483-3p agonist/agonist-NCMedChemExpress/ABDHY-R01451A 
oe-KIF3B/oe-NCRiboBio/ÇinÖzelleştirilmiş
Penisillin/streptomisinSolarbio/ÇinP1400
Pierce RNA 3' Son Destiyobiotinylasyon KitiThermo Fisher Scientific/ABD20163
PrimeScript RT Reaktif Kiti (Mükemmel Gerçek Zaman)TaKaRa/JaponyaRR037A
si-KIF3B/si-NCRiboBio/ÇinÖzelleştirilmiş
SPSS IBMSürüm 23.0
Streptavidin manyetik boncuklarıNew England Biolabs/ABDS1420S
SYBR Green  Pro Taq  HS PremixDoğru Biyoloji/ÇinAG11701
Transwell odasıCorning/ABD3428
TRIzol reaktifiInvitrogen/ABD15596026CN

Kaynaklar

  1. Lee, J. W., et al. Characterization of chemoresistant human non-small cell lung cancer cells by metabolic and lipidomic profiling. Metabolomics. 19 (9), 80(2023).
  2. Ziolkowska-Suchanek, I., Rozwadowska, N. Advancements in gene therapy for non-small cell lung cancer: current approaches and future prospects. Genes Basel. 16 (5), 569(2025).
  3. Zhang, W., et al. Investigating the mechanism of beta-elemene-mediated LINC00511 modulation to suppress cisplatin resistance in lung cancer. J Vis Exp. (222), e68825(2025).
  4. Miller, M., Hanna, N. Advances in systemic therapy for non-small cell lung cancer. BMJ. 375, n2363(2021).
  5. Qian, D., et al. Potentially functional genetic variants in the complement-related immunity gene-set are associated with non-small cell lung cancer survival. Int J Cancer. 144 (8), 1867-1876 (2019).
  6. Liu, Y., Sun, Y., Chen, N. A nursing intervention combining case management and CBT for postoperative NSCLC patients: effects on anxiety, depression, and quality of life. J Vis Exp. (228), e69622(2026).
  7. Mao, X., Peng, S., Lu, Y., Song, L. Regulatory functions of microRNAs in cancer stem cells: mechanism, facts, and perspectives. Cells. 14 (14), 1073(2025).
  8. Hassanein, S. S., Ibrahim, S. A., Abdel-Mawgood, A. L. Cell behavior of non-small cell lung cancer is at EGFR and microRNAs hands. Int J Mol Sci. 22 (22), 12496(2021).
  9. He, B., et al. miRNA-based biomarkers, therapies, and resistance in cancer. Int J Biol Sci. 16 (14), 2628-2647 (2020).
  10. Salunkhe, S. S., Ghatage, T., Prabhakar, B. S. Multi-oncogene targeting in cancer therapy: a miRNA-driven pharmacological approach. Biochem Pharmacol. 242, 117417(2025).
  11. Samson, J. S., Parvathi, V. D. Prospects of microRNAs as therapeutic biomarkers in non-small cell lung cancer. Med Oncol. 40 (12), 345(2023).
  12. Li, W., et al. Curcumin inhibits prostate cancer by upregulating miR-483-3p and inhibiting UBE2C. J Biochem Mol Toxicol. 38 (2), e23645(2024).
  13. Liang, H., et al. MiR-483-3p regulates oxaliplatin resistance by targeting FAM171B in human colorectal cancer cells. Artif Cells Nanomed Biotechnol. 47 (1), 725-736 (2019).
  14. Menbari, M. N., et al. miR-483-3p suppresses the proliferation and progression of human triple negative breast cancer cells by targeting the HDAC8 oncogene. J Cell Physiol. 235 (3), 2631-2642 (2020).
  15. Wu, W., et al. circZNF609 promotes the proliferation and migration of gastric cancer by sponging miR-483-3p and regulating CDK6. Onco Targets Ther. 12, 8197-8205 (2019).
  16. Yue, J., et al. Epigenetic silencing of miR-483-3p promotes acquired gefitinib resistance and EMT in EGFR-mutant NSCLC by targeting integrin beta3. Oncogene. 37 (31), 4300-4312 (2018).
  17. Gu, R., Li, X., Yan, X., Feng, Z., Hu, A. Circular RNA circ_0032462 enhances osteosarcoma cell progression by promoting KIF3B expression. Technol Cancer Res Treat. 19, 1533033820943217(2020).
  18. He, Z. C., Zhao, J. J., Yan, T. miR-127-3p inhibits cell stemness and docetaxel resistance in triple-negative breast cancer by targeting KIF3B. Kaohsiung J Med Sci. 42 (3), e70113(2025).
  19. Liu, Z. H., Dong, S. X., Jia, J. H., Zhang, Z. L., Zhen, Z. G. KIF3B promotes the proliferation of pancreatic cancer. Cancer Biother Radiopharm. 34 (6), 355-361 (2019).
  20. Wang, C., et al. Silencing of KIF3B suppresses breast cancer progression by regulating EMT and Wnt/beta-catenin signaling. Front Oncol. 10, 597464(2020).
  21. Ji, L., Zhu, Z. N., He, C. J., Shen, X. MiR-127-3p targets KIF3B to inhibit the development of oral squamous cell carcinoma. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 23 (2), 630-640 (2019).
  22. Yao, F. Z., Kong, D. G. Identification of kinesin family member 3B (KIF3B) as a molecular target for gastric cancer. Kaohsiung J Med Sci. 36 (7), 515-522 (2020).
  23. Chen, Y., Fu, D., Zhao, H., Cheng, W., Xu, F. GSG2 (Haspin) promotes development and progression of bladder cancer through targeting KIF15 (Kinase-12). Aging Albany NY. 12 (10), 8858-8879 (2020).
  24. Lafanechere, L. The microtubule cytoskeleton: an old validated target for novel therapeutic drugs. Front Pharmacol. 13, 969183(2022).
  25. Merino-Casallo, F., Gomez-Benito, M. J., Hervas-Raluy, S., Garcia-Aznar, J. M. Unravelling cell migration: defining movement from the cell surface. Cell Adh Migr. 16 (1), 25-64 (2022).
  26. Simoes-da-Silva, M. M., Barisic, M. How does the tubulin code facilitate directed cell migration? Biochem Soc Trans. 53 (1), BST20240841(2025).
  27. Zheng, C., et al. YY1 modulates the radiosensitivity of esophageal squamous cell carcinoma through KIF3B-mediated Hippo signaling pathway. Cell Death Dis. 14 (12), 806(2023).
  28. Zhou, L., Ouyang, L., Chen, K., Wang, X. Research progress on KIF3B and related diseases. Ann Transl Med. 7 (18), 492(2019).
  29. Guan, L. Y., Lv, J. Q., Zhang, D. Q., Li, B. Collective polarization of cancer cells at the monolayer boundary. Micromachines Basel. 12 (2), 112(2021).
  30. Lopez-Charcas, O., et al. Pharmacological and nutritional targeting of voltage-gated sodium channels in the treatment of cancers. iScience. 24 (4), 102270(2021).
  31. Saadh, M. J., et al. The emerging role of kinesin superfamily proteins in Wnt/beta-catenin signaling: implications for cancer. Pathol Res Pract. 269, 155904(2025).
  32. Pupo, E., et al. Kinesin-2 controls the motility of RAB5 endosomes and their association with the spindle in mitosis. Int J Mol Sci. 19 (9), 2575(2018).
  33. Zhou, M., Han, Y., Jiang, J. Ulk4 promotes Shh signaling by regulating Stk36 ciliary localization and Gli2 phosphorylation. Elife. 12, RP88637(2023).
  34. Wang, B., Liang, Z., Liu, P. Functional aspects of primary cilium in signaling, assembly and microenvironment in cancer. J Cell Physiol. 236 (5), 3207-3219 (2021).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

RT-qPCRRNA Pull-DownKaplan-Meier EğrisiCox AnaliziApoptoz İndüksiyonu
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.