Drosophila bileşik gözlerinin yüksek çözünürlüklü z-stack görüntülemesi için bant montaj protokolü

Si Luo; Ruoting Gu; Ping Wei

doi:10.3791/71043

Method Article

Drosophila bileşik gözlerinin yüksek çözünürlüklü z-stack görüntülemesi için bant montaj protokolü

DOI:

10.3791/71043

⸱

April 3rd, 2026

Si Luo*¹ , Ruoting Gu*¹ , Ping Wei¹

¹Shanghai Diabetes Institute, Shanghai Key Laboratory of Diabetes Mellitus, Shanghai Clinical Center for Diabetes, Shanghai Sixth People's Hospital Affiliated to Shanghai Jiao Tong University School of Medicine

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokolün temel amacı, Drosophila bileşik gözlerinin yıkıcı olmayan görüntülemesi ve nicel analizini mümkün kılmaktır. Bant montaj stratejisini, stereomikroskopik Z-yığını alımı ve Genişletilmiş Odak Derinliği yeniden yapılandırmasıyla birleştirerek yüksek çözünürlüklü, artefaktsız görüntüler üretir.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, Drosophila bileşik gözünün yüksek çözünürlüklü fenotipik analizi için yıkıcı olmayan montaj ve görüntüleme protokolü sunuyoruz. Drosophila bileşik gözünün doğru fenotiplenmesi, genellikle konveks geometrisi ve kullanım sırasında mekanik kırılganlığı nedeniyle sınırlıdır. Bunu ele almak için, birden fazla açıdan yüksek çözünürlüklü görselleştirme imkanı sağlayan, çok yönlü, invaziv olmayan bir görüntüleme iş akışını detaylandırıyoruz. Protokol, ters bant platformunda özel bir yapışkan montaj stratejisi kullanır; sinekleri gövde ve kanatlardan sabitlerken, başı tamamen dokunulmadan bırakır. Önemli olarak, bu esnek konfigürasyon belirgin montaj yönelimlerini destekler: bireysel gözlerin tam dışbükey konumunu yakalamak için lateral pozisyon ve tüm baş simetrisini değerlendirmek için ön pozisyon. Bu yöntem aynı zamanda yüksek yoğunluklu dizilerin düzenlenmesini kolaylaştırır ve seans başına 20–30 örnek hızlı işlenmesini sağlar. Yansıtılan ışık stereomikroskopisini Z-stack alımı ve Genişletilmiş Odak Derinliği (EDF) yeniden yapılandırmasıyla entegre ederek, iş akışı eşit derecede keskin, yarı-3D bileşik görüntüler üretir. Bu yaklaşım, doğal pigmentasyonu korur ve organ ölçeğinde nicel fenotipik analizine uygun yüksek isabetli, kontrast açısından zengin görüntüler üretir.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Drosophila melanogaster bileşik gözü, organ büyümesi, desenlenmesi ve gelişim sırasında sağlamlığını incelemek için klasik ve güçlü bir modeldir. Yaklaşık 800 yüksek sıralı ommatidiyden oluşan sinek gözü, proliferasyon, farklılaşma ve doku organizasyonunu etkileyen genetik bozulmaların hassas ve ölçülebilir bir okumasını^sağlar ^1,2,3. Göz gelişiminin genetik manipülasyonu, korunan sinyal yolları hakkında temel içgörüler sağlamıştır. Seminal çalışmalar, transkripsiyon faktörü eyeless'in ektopik ekspresyonunun retina dışı dokul....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Örnek toplama ve senkronizasyon

NOT: Deneysel karşılaştırılabilirliği sağlamak için, eklozyon zamanlamasının sıkı kontrolü gereklidir. Standart kültür koşulları altında, 25 °C sıcaklıkta, eklozyon genellikle yumurta bırakıldıktan 10 ila 12 gün sonra gerçekleşir. Bu dönemde pupalar yakından izlenmelidir, çünkü pupa kılıfının kararması yakın zamanda eklosyona işaret eder.

Doğrudan dokunma yöntemi (Standart yöntem)
1. Standart 24 x 95 mm plastik Drosophila kültür şişesine (köpük tıpla kapatılmış) yumuşak bir pede hafifçe vurarak yetişkin sinekleri dipten çıkarır.....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Örnek toplamadan görüntü edinimine kadar olan tüm deneysel ürün hattı Şekil 1'de özetlenmiştir. Değiştirilmiş protokolün verimliliği, yüksek yoğunluklu örnek dizilerinin oluşturulmasıyla gösterilmiştir. Şekil 2A'da gösterildiği gibi, 20–30 anestezi edilmiş sinek tek bir ters bant platformunda ızgara şeklinde bir desen şeklinde düzenlenebilir. Bantın yapışmaz uçlarına yazılan yön işaretleyicileri, tutarlı baş yönü sağlar; bu da m.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Drosophila bileşik gözü, genetik tarama için güçlü bir fenotipik okuma görevi görür; burada göz boyutu, pürüzlülüğü veya ^{pigmentasyonda gözlemlenebilir değişiklikler} ^2,3,8 genellikle Hippo ^5,6 veya Hedgehog 7 gibi temel sinyal yollarındaki bozulmaları gösterir. Ancak, bu tür ekranların verimliliği uzun sü.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar çıkar çatışması belirtmemektedir.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (32071135) tarafından desteklenmiştir.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
Name	Company	Catalog Number
Karbondioksit (CO₂) gaz silindiri	Yerel tedarikçi	Yok
CO₂ anestezi üfleme tabancası	T& L	DG-08
Dijital mikroskop kamerası	Leica	DMC6200
İnce cımbızlar	VETUS	MOS-167B
Köpük tıplar	Dongpeng	Yok
Görüntü edinim yazılımı (LAS X)	Leica	3.7.1
Görüntü işleme yazılımı (FIJI/ImageJ)	NIH	Açık kaynak
LED Kubbe Aydınlatma Cihazı	Leica	LED5000 HDI
LED Gooseneck aydınlatma cihazı	Cossim	LG-10
Motorlu stereomikroskop	Leica	M205 FCA
Objektif lens	Leica	1.0x PlanApo NA0.2
Pnömatik ayak pedalı valfi	DELIXI	FV-320
Standart Drosophila kültür şişeleri	LAIBOER	2424951
Standart Drosophila yemek ortamı	Yok	Mısır unu-agar-pekmez
Standart cam mikroskop slaytları	Citotest	10127101P-G
Standart stereomikroskop	Nikon	SMZ745
Beyaz kağıt maskeleme bandı	UBWIN	25mm genişlik

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Drosophila bileşik gözlerinin yüksek çözünürlüklü z-stack görüntülemesi için bant montaj protokolü

In This Article

Summary

Abstract

Introduction

Protocol

Results

Discussion

Disclosures

Acknowledgements

Materials

Reprints and Permissions

Tags

Related Articles