Yüksek İrakımlı Hipoksik Durumların Simülasyonu Sıçanlarda Yara İyileşmesini Geciktiriyor

Özet

Bu çalışma, yüksek irtifa hipobarik hipoksi koşullarında gecikmeli yara iyileşmesine dair bir fare modeli geliştirmiş ve ön doğrulamıştır.

Özet

Yüksek irtifa hipobarik koşulları uzun süreli yara hipoksisine ve iyileşmenin bozulmasına neden olabilir, ancak standart modeller hâlâ azdır. Bu çalışmada, yara gecikmeli iyileşme modeli geliştirdik ve kontrollü hipobarik sistem kullanarak yüksek irtifa hipoksisini simüle ederek ön doğrulamayı yaptık. Sıçanlar, güvenlik eşikleri belirlenmek için 3000 m (hava basıncı: 70,1 kPa, kısmi oksijen basıncı: 14,7 kPa) ile 8000 m (hava basıncı: 35,6 kPa, kısmi oksijen basıncı: 7,5 kPa) arasında simüle edilmiş irtifada barındırıldı; oksidatif stres ve cilt hipoksisi değerlendirildi. Sonuçlar, simüle edilmiş 6000 m irtifada artan ölüm riskini, 5000 m'nin altında toleransın gözlemlendiğini gösterdi. Yükselen irtifalar, oksidatif stresin kötüleşmesi ve cilt hipoksisinin artmasıyla ilişkilendirildi; yara iyileşmesinde irtifaya bağlı gecikmeler, azalan perfüzyon, kolajen yeniden şekillendirilmesini bastırmış ve inflamatuar yanıtlar şiddetlenmiştir. Damar rejeneratif faktörlerinin yukarı regulasyonuna rağmen, mikrovasküler yoğunluk azaldı. Genel olarak, bu çalışma yüksek irtifa hipoksi kaynaklı kronik yaralarda mekanizm ve müdahaleleri incelemek için uygun bir fare modeli geliştirdi ve ön onayladı.

Giriş

Deri yara onarımı yaygın ve önemli bir klinik zorluk sunar. Akut travmadan çeşitli iyileşmeyen yaralara kadar, bu durumlar sağlık sistemleri ve hastaların yaşam kalitesi üzerinde kalıcı bir yük^oluşturur 1,2,3,4,5,6. Yara iyileşmesi tek bir olay değil, son derece koordineli, üst üste binen çok aşamalı bir süreçtir: inflamatuar hücreler, stromal hücreler, keratinositler ve mikrovasküler sistem, ekstraselüler matriks ve çeşitli sinyal ağlarının eklem düzenlemesi altında bariyerleri yeniden inşa eder ve dokuları yeniden^{şekillendirir} 7,8,9,10 . Onarımın enerji yoğun doğası ve iç çevreye aşırı hassasiyeti göz önüne alındığında, sistemik metabolizma ve fizyolojik durumlardaki değişiklikler—örneğin oksidatif stres, bağışıklık düzensizliği ve mikro dolaşım perfüzyonu bozulmuş—normal onarım zincirini birden fazla noktada bozabilir ve uzun süreli iltihaba, yetersiz yenilenmeye ve anormal yeniden şekillendirmeye ^{yol açabilir} 9,11,12,13.^14,15.

Oksijen tedarik, yara onarım süreçlerini sınırlayan kilit bir faktördür; enerji metabolizması ve hücre göçü/çoğalma süreçlerine katkıda bulunurken, aynı zamanda anjiyogenez ve inflamatuar yanıtları hipoksi sinyal yolları aracılığıyla modüle^eder 16,17,18. Erken yara fazında geçici hipoksi, hipoksiye indüklenebilir faktörü stabilize eder ve adaptif onarım programlarını başlatır. Ancak, hipoksi aşırı veya kalıcı hale geldiğinde, anjiyogenez sinyalleri telafi edici olarak yükseltilse de, etkili mikrovasküler rekonstrüksiyona dönüşemeyebilirler. Bu arada, makrofaj fenotip değişimi ve inflamatuar regresyon dengesizliğe daha yatkın hale gelir ve "hipoksi-iltihap-revaskülarizasiya eksikliği" gibi kötü bir döngü oluşturur19,20,21,22. Bu özellikle yüksek irtifa ortamlarında önemlidir: azalan atmosfer basıncı, havalı oksijen kısmi basıncını düşürür ve kalıcı hipoksiye yol açar ve yara iyileşmesinin bozulması ile enfeksiyonla ilgili komplikasyon riskini artırır 23,24,25,26.

Yüksek irtifalara maruz kalmak insanlarda belirgin bir hipoksik stres tepkisini tetikler²⁷. Yüksek irtifa ortamları, kalıcı doku hipoksisine, yetersiz perfüzyona ve yara bölgelerinde iltihap yanıtlarına yol^{açabilir 28}. Bu patofizyolojik değişiklikler, aşırı reaktif oksijen türlerini teşvik ederek, proteazları aktive eder ve hücresel yaşlanmayı tetiklerken, aynı zamanda mezenkimal kök hücrelerin işlevini bozarak iyileşme sürecini^{bozabilir 29,30}. Yüksek irtifada maruz kalmanın insan derisi yara iyileşmesi üzerindeki etkilerini doğrudan değerlendiren çalışmalar sınırlı kalmaktadır. Bu nedenle, hipobarik hipoksik hayvan modellerinin kullanımı, irtifaya bağlı faktörlerin yara onarımı üzerindeki etkisini doğrulamaya yardımcı olabilir.

Sabit irtifalardaki önceki hayvan modelleri yara iyileşmesinin gecikmesini bildirmişti; Ancak, irtifaya bağlı etkiler, hipobarik durumlara uzun süre maruz kalma için güvenlik eşiği ve yerel cilt hipoksisinin doğrudan kanıtları belirsiz²⁶. Ayrıca, iyileşme bozukluklarının sistematik olarak değerlendirilmesi, altta yatan mekanizmalar ve potansiyel müdahale hedeflerinin belirlenmesi üzerine sınırlı araştırmalar^{yaşanmaktadır 31}. Bu çalışmada, yüksek irtifa hipobarik hipobarik hipoksisini kontrollü koşullarda simüle etmek için hipobarik kontrol sistemine dayalı bir deri yarası modeli geliştirdik ve ön doğrulamayı sağladık. Dereceli simüle irtifa maruziyeti stratejisi uygulayarak, önce sürekli hipobarik maruziyet için güvenlik sınırlarını tanımladık ve hipobarik hipoksinin biyolojik etkilerini sistemik göstergeler aracılığıyla değerlendirdik. En önemlisi, hipobarik ortamın gerçekten lokal cilt oksijen tedariki kısıtlamasına neden olduğunu in vivo daha doğruladık. Daha sonra, devam eden hipobarik hipoksinin, irtifaya bağlı bir şekilde yara kapanmasını geciktirdiğini, bunun histolojik değişiklikler ve ana yol anormallikleriyle birlikte olduğunu gösterdik. Genel olarak, bu çalışma yüksek irtifa hipoksisiyle ilişkili kronik yaralar için bir hayvan model platformu geliştirmiş ve ön doğrulamıştır; böylece sonraki terapötik stratejilerin mekanizma açıklaması ve sistematik olarak değerlendirilmesini^{mümkün kılmıştır 32}.

Protokol

Hayvanları içeren tüm deneysel prosedürler, Çin Elektronik Bilimleri ve Teknolojisi Üniversitesi (No. 106142025091534170) ve Ordu Tıp Üniversitesi (No. AMUWEC20265509). Bu çalışmada yer alan deneysel tasarım ve analizin grafiksel iş akışı Şekil 1'de gösterilmiştir. Ayrıca, bu çalışmada kullanılan reaktifler ve ekipmanlar Malzeme Tablosu'nda listelenmiştir.

Deneysel hayvanlar ve etik ifade
Bu çalışma, Çin'deki Chengdu Dashuo Laboratuvar Hayvan Şirketi, Ltd.'den satın alınan erkek Sprague-Dawley (SD) fareleri kullanıldı. Tüm hayvanlar, deneyden önce standart koşullarda 7 günlük bir aklimatizasyon dönemi geçirdi.

Dahil Etme ve Dışlama Kriterleri
Hayvan dahil etme kriterleri şu şekildeydi: 6 ila 8 haftalık erkek SD fareler, vücut ağırlığı 200–250 g, sağlıklı görünen ve normal davranış sergileyen ve deri lezyonları veya enfeksiyonları yoksun.

Hayvan dışlama kriterleri şöyleydi: yara modellemesi sonrası belirgin enfeksiyon gösteren yaralar; standart olmayan iyileşme veya kesik yaraları; deney sırasında ölüm veya anestezi nedeniyle kazara ölüm.

Veri noktası hariç tutma kriterleri şunlardı: yaygın kabuklanma, saç tıkanıklığı veya düzensiz aydınlatma içeren yara görüntüleri; hareket artefaktlarını gösteren lazer benek kontrast görüntüleme (LSCI) görüntüleri; bariz kırışıklıklar, parçalanma veya eksik hedef bölgeler gösteren doku kesitleri; serum örneklerinde belirgin hemoliz gösteriliyor; İmmünofluoresans (IF) veya immünohistokimya (IHC) görüntüleri, aşırı maruz kalma veya yanlış antikor lokalizasyonu ile

Dışlamaların yönetimi:
Tüm hariç tutulan hayvanlar veya veri noktaları için, geçerli veriler ek deneylerle yeniden elde edildi ve her grup için nihai geçerli örneklem büyüklüğünün tüm uç nokta analizleri için N ≥ 3 olması sağlandı.

Hipobarik kontrol sistemi ve simüle edilmiş yüksek irtifa hipoksi ortamı
Simüle edilen yüksek irtifa hipoksik ortamı, hipobarik kontrol sistemi kullanılarak oluşturuldu. Bu sistem, kabin hava basıncının hassas şekilde düzenlenmesini sağlayarak farklı irtifalara karşılık gelen atmosfer basıncını yeniden üretir, böylece ortam oksijen kısmi basıncını düşürür ve kontrollü hipoksik maruziyeti oluşturur (Şekil 2A).

Kabin basıncı, 3000 m, 4000 m, 5000 m, 6000 m, 7000 m ve 8000 m irtifalarını simüle etmek üzere ayarlandı ve detaylı parametreler Tablo 1'de verildi. Deney boyunca, SD fareleri deneysel dağılımlarına göre gruplar halinde yerleştirildi. Kabin işletmesi sırasında, iç basınç, sıcaklık ve nem sürekli izlenerek basınç dışında tüm çevresel koşulların standart laboratuvar konutlarıyla karşılaştırılabilir kalmasını sağladı. Konut ortamı 22–24 °C sıcaklık, %50–60 göreceli nem olarak 12 saat ışık/karanlık döngü olarak korundu ve standart yemek ile içme suyuna ücretsiz erişim sağladı.

Hipobarik maruziyet ve hayatta kalma analizinin güvenlik değerlendirmesi
Sürekli hipobarik maruziyet için güvenlik marjlarını değerlendirmek amacıyla, fareler bireysel olarak numaralandırıldı ve bilgisayar tarafından oluşturulan rastgele sayı dizisi (Excel'deki RAND fonksiyonu) kullanılarak deneysel gruplara rastgele atandı. Tahsis, sonraki hayvan bakımı, veri toplama veya sonuç değerlendirmesi ile ilgilenmeyen bir araştırmacı tarafından gerçekleştirildi. Yüksek irtifa gradyanlarına maruz kalma içeren referans hayvan çalışmalarına dayanarak, her grubun örneklem büyüklüğü^12.33 olarak belirlendi. Fareler, deniz seviyesinden 500 m yükseklikte normoksik kontrol grubuna ve 3000 m, 4000 m, 5000 m, 6000 m, 7000 m ve 8000 m yüksekliklerde simüle edilmiş irtifa gruplarına ayrıldı. Her gruptaki fareler 30 gün boyunca kendi ortamlarında sürekli olarak tutuldu. Her 2 günde bir, hipobarik kontrol sistemi kısa bir süreliğine 30 dakika boyunca deniz seviyesine geri getirilerek kafes temizliği ve yiyecek ile su sağlanmasına olanak tanır. Dekompresyon ve yeniden kompresyon sırasında, barotravma riskini en aza indirmek için basınç değişim hızı yaklaşık 300 m/dakika olarak tutulur. Bu dönemde, tüm farelerin genel durumu ve ölüm olayları günlük olarak gözlemlenip kaydedildi. Hayatta kalma eğrileri Kaplan-Meier yöntemiyle çizildi ve gruplar arasındaki hayatta kalma farklarını karşılaştırmak için log-rank testleri yapıldı.

Serum oksidatif stresle ilgili belirteçlerin tespiti
Hipobarik maruziyetin 21. gününde, anestezi altındaki farelerden venöz kan örnekleri alındı. Oda sıcaklığında bekledikten sonra, serum santrifüjle (1.000 × g , 4 °C'de 15 dakika boyunca) ayrılır ve sonraki kullanım için -80 °C'de saklanırdı. Serum laktat dehidrojenaz (LDH), malondialdehit (MDA) ve süperoksit dismutaz (SOD) seviyeleri, ilgili test setleri kullanılarak ölçüldü.

Cilt dokusunda hipoksik durumların değerlendirilmesi
Hipoksi tespit kiti, cilt dokusunda hipoksi değerlendirmek için kullanıldı. Kısaca, hipobarik maruziyetin 4. ve 7. günlerinde, farelere intraperitoneal olarak pimozid (60 mg/kg) enjekte edildi; Sıçanlar enjeksiyondan 1 saat sonra ötenazi edildi ve analiz için sırt deri dokusu toplandı. Detaylı ötenazi prosedürü şöyledir: Amerikan Veteriner Tıp Birliği'nin ötenazi yönergelerine göre, hayvan bir indüksiyon odasına yerleştirildi ve %4–5 isofluran içeren oksijen kullanılarak anestezi yapıldı. Hayvan bilinçini kaybettikten sonra, izofluran konsantrasyonu %2–3'e düşürüldü ve en az 10 dakika boyunca korunur. Servikal dislokasyonu doğrulama yöntemi olarak uygulamadan önce, kalp atışı ve nefes almanın durduğu doğrulanmalıdır. Doku örnekleri sıvı azotta kriyokonserve edilip sonraki kullanım için -80 °C sıcaklıkta saklandı. Bölümler kriyostat mikrotomu kullanılarak hazırlandı. IF boyama işlemi doku içindeki hipoksik bölgeleri işaretlemek için yapıldı.

Tüm floresans görüntüleri otomatik bir slayt tarayıcı kullanılarak alındı. Floresans parametreleri ayarları şöyleydi: DAPI (uyarılma dalga boyu 365 nm ± 10 nm, emisyon dalga boyu 440 nm ± 40 nm), Cy3 (uyarılma dalga boyu 542–566 nm, emisyon dalga boyu 579–611 nm) ve Cy5 (uyarılma dalga boyu 628 nm, emisyon dalga boyu 692 nm). Hipoksi sinyalleri ImageJ yazılımı kullanılarak nicel olarak analiz edildi.

Sıçanlarda tam kalınlıkta deri yarası modeli
Uzun süreli hipobarik koşullar altında deri yarasının iyileşmesindeki değişiklikleri değerlendirmek için, fareler önce gruplanıp yara modellemesinden önce kendi ortamlarına alıştırıldı. Fareler bireysel olarak numaralandırıldı ve rastgele olarak ya normoksik kontrol grubuna ya da hipobarik maruziyet gruplarına yerleştirildi; bu gruplar bilgisayar tarafından oluşturulan rastgele sayı dizisi (Excel'deki RAND fonksiyonu) kullanılarak 3000 m, 4000 m ve 5000 m irtifakları simüle etti. Randomizasyon, sonraki yara oluşumu, ameliyat sonrası bakım veya sonuç değerlendirmesinde yer almayan bir araştırmacı tarafından gerçekleştirildi. Her grup için ayrıntılı parametreler şunlardır: normoksik kontrol grubu deniz seviyesinden 500 m yükseklikte bulunuyordu (atmosfer basıncı: 101 kPa, kısmi oksijen basıncı: 21 kPa); 3000 m grubu (70,1 kPa, 14,7 kPa); 4000 m grubu (61,6 kPa, 13,1 kPa); ve 5000 m grubu (54 kPa, 11,3 kPa).

7 günlük adaptasyon döneminden sonra, SD fareleri anestezi altına alındı ve %2 izofluran solumasıyla anestezi altında tutuldu. Aynı zamanda, işaretli cerrahi bölgeye %5 lidokain içeren yerel infiltrasyon enjeksiyonu uygulanarak perioperatif analjezi ve hemostaz sağlanır. Biyopsi punch (tabanında 10 mm çapında dairesel bıçakla) kullanarak deri kesisi oluşturun. Biyopsi darbesini farenin dorsal derisine bastırın, sonra nazikçe döndürün ve yuvarlak bıçağın deriyi yavaş yavaş kesip yüzeysel deri altı fasyaya ulaşmasını sağlar. Biyopsi darbesi çıkarıldıktan sonra, yaklaşık 10 mm çapında normal dairesel bir cilt kesisi oluşur.

Yara oluşumunun ardından, her gruptaki fareler orijinal ortamlarına geri döndürüldü ve deneysel son noktaya kadar orada tutuldu, böylece yara iyileşme sürecinin önceden belirlenmiş oksijen koşulları altında devam etti.

Yara iyileşme sürecinin makro değerlendirmesi
Yaranın fotoğrafları, yara sonrası formasyonun 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 ve 14. günlerde uniform ışık altında ve tutarlı görüntüleme mesafesi altında çekildi. Yara alanı Görüntü J kullanılarak ölçüldü. Kısaca, her zaman noktasında alınan yara görüntüleri Görüntü J'ye aktarıldı, ölçek çubuğuna göre kalibre edildi ve yara kenarları elle çizilerek yara^{alanı 34} belirlendi. Yara iyileşmesi şu şekilde hesaplandı: Yara iyileşmesi (%) = (Başlangıç yara alanı − Mevcut yara alanı)/İlk yara alanı %100 ×.

Yara mikrosirkülasyonunun değerlendirilmesi
Yara iyileşmesinin 7. gününde, yara bölgesinde mikro dolaşım kan perfüzyonu LSCI sistemi kullanılarak değerlendirildi. Muayeneden önce, fareler %2 izofloran ile solunma yoluyla anestezi edildi ve vücut sıcaklığını korumak için sıcaklık kontrollü ameliyat masasına sabitlendi. Sırt yara bölgesi tamamen açıkta kalmıştı ve lazer speckle probu yaradan yaklaşık 20 cm yukarıda dikey olarak konumlandırıldı. Prob gücü 110 mW, örnekleme frekansı 30 Hz ve pozlama süresi 3 saniyeye ayarlandı. Karanlık koşullarda, yara alanının kan akışı perfüzyon pseudocolor görüntüsünü alın. LSCI yazılımını kullanarak kan akışı perfüzyon psödocolor görüntüsünde yara alanını manuel olarak çizin; yazılım daha sonra o bölge için kan akışı perfüzyon değerini 3 saniyelik bir süre boyunca otomatik olarak hesaplayacak (rastgele birimler halinde [A.U.]). Son olarak, perfüzyon değerlerini grafik için uygun bir yazılıma aktarın.

Histolojik boyama ve kolajen yeniden modelleme analizi
Hayvanlar belirlenen zaman noktalarında ötenazi edildi, sağlam yara ve çevresindeki cilt dokuları toplandı, sabitlendi, kurutuldu, parafinle gömülüp kesitlendi. Hematoksilin ve eozin (HE): yara genişliği, yeniden epitelizasyon kapsamı ve yenilenmiş epidermal kalınlığı değerlendirmek için kullanılır; Masson trikrom boyama: kolajen lifi birikimini değerlendirmek ve kolajen hacim fraksiyonunu hesaplamak için kullanılır; Sirius kırmızı boyama: polarize ışık mikroskopisinde kolajen tip I (COL I) ve kolajen tip III (COL III) ayırt etmek ve COL I/COL III oranını hesaplamak için kullanılır.

İmmünohistokimyasal boyama
Parafin kesitleri IHC veya IF boyamadan önce mumdan arındırma, rehidrasyon ve antijen alımından geçti. Birincil antikorlar gece boyunca 4 °C'de kuluçka altına alındı, ardından karşılık gelen ikincil antikorlar eklendi. Özel antikor bilgileri ve ilgili seyreltme Malzeme Tablosu'nda yer almaktadır. IHC kesitleri DAB ile geliştirilirken, IF bölümlerinde^{çekirdekler 35,36} için DAPI karşı boyama ile floresan ikincil antikorlar kullanıldı. Tüm görüntüler aynı koşullar altında alındı ve ImageJ yazılımı kullanılarak nicelendirildi.

İstatistiksel analiz
Tüm veriler ortalama ± standart sapma olarak sunulur. İstatistiksel analizler GraphPad Prism yazılımı kullanılarak gerçekleştirildi. Tek bir zaman noktasında birden fazla grup arasında yapılan karşılaştırmalar için tek yönlü varyans analizi (ANOVA) uygulandı ve anlamlı genel fark tespit edildiğinde, sonraki gruplar arası analizler için Tukey'nin çoklu karşılaştırma testi kullanıldı. Yara iyileşme verileri birden fazla zaman aralığında değerlendirildiğinde, iki yönlü ANOVA uygulandı; tedavi grubu ve zaman ana etkileri ve etkileşimlerini değerlendirmek için bağımsız faktörler olarak dahil edildi. Sonradan yapılan analizler de Tukey'nin çoklu karşılaştırma testi kullanılarak yapıldı. İstatistiksel gücü daha fazla değerlendirmek için, G*Power yazılımında birincil son noktaya (14. günde yara iyileşmesi) dayalı bir sonradan güç analizi yapıldı.

Hayatta kalma analizi, hayatta kalma eğrilerini çizmek için Kaplan-Meier yöntemini kullandı; gruplar arasındaki hayatta kalma farklarını karşılaştırmak için log-rank testleri kullanıldı. Birden fazla grup arasında çift karşılaştırmalar için, Bonferroni düzeltmesi birden fazla karşılaştırmadan Tip I hatalarının riskini kontrol etmek için uygulanmıştır. Tüm istatistiksel testler iki kuyrukluydu ve P < 0.05 istatistiksel olarak anlamlı olarak kabul edildi.

Yara alanı ölçümleri, histolojik ve immünohistokimyasal nicel analizler ile LSCI analizleri dahil tüm sonuç değerlendirmeleri, çalışma grubunun atamalarına kör olan tek bir araştırmacı tarafından gerçekleştirildi.

Sonuçlar

Düşük basınçla indüklenen kalıcı hipoksi için güvenlik marjlarının doğrulanması
Kaplan–Meier hayatta kalma analizi, simüle edilen irtifa arttıkça hayatta kalma eğrilerinde kademeli bir düşüş kaydığını gösterdi ve ölüm olayları ilk olarak 6000 m grubunda gözlemlendi (Şekil 2B). Bonferroni düzeltmesiyle yapılan çift karşılaştırmalar, kontrol grubu ile 6000 m ile 8000 m arasındaki gruplar arasında hayatta kalma oranlarında istatistiksel olar...

Tartışma

Yüksek irtifa koşulları, doku hipoksisi, azalan kan perfüzyonu ve inflamatuar yanıtlar oluşturarak yara iyileşme sürecini zayıflatır; bu da reaktif oksijen türlerinin aşırı üretimini, proteaz aktivasyonunu, hücresel yaşlanmanı ve mezenkimal kök hücrelerin işlev bozukluğunu^{teşvik eder} 27,28,29,30 . Yüksek irtifanın etkileri üzerine insan araştırmalarındaki mevcu...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Otomatik kaydırma tarayıcı	Olympus	VS200	Doku Kesitleri Taraması
Sığır serum albümini (BSA)	Servicebio	GC305010	IHC/IF için engelleyici reaktif
CD206 antikoru	Proteintech	18704-1-AP	M2 makrofajlarının tespiti (Sulandırma 1:200)
CD31 antikoru	Abcam	AB182981	Mikrodamar yoğunluğunun tespiti (Sulandırma 1:800)
CD86 antikoru	HuaBio	ER1906-01	M1 makrofajlarının tespiti (Sulandırma 1:200)
CK19 antikoru	HuaBio	ET1601-6	Yeniden epitelizasyonun değerlendirilmesi (Sulandırma 1:200)
DAB Substrat Kiti	ZSGB-BIO	ZLI-9018	IHC boyama için kromojenik substrat
FITC ile bağlanmış keçi anti-tavşan IgG	Servicebio	GB22303	IF için floresan ikincil antikor (Sulandırma 1:100)
G*Power	Duisburg-Essen Üniversitesi, Almanya	www.gpower.hhu.de	İstatistiksel Gücün Hesaplanması
GraphPad Prism yazılımı	GraphPad Yazılımı	https://www.graphpad.com/	İstatistiksel analiz ve grafik oluşturma
Hematoksilin boyama çözeltisi	J& K Scientific	LM10N13	H& E boyama
HIF-1α Antikor	Biyografi	BS-0737R	Hipoksiye bağlı sinyalizasyonun tespiti (Sulandırma 1:100)
HRP ile bağlanmış keçi anti-tavşan IgG	Servicebio	GB23303	IHC için ikincil antikor (Sulandırma 1:100)
Hipobarik kontrol sistemi	Şanghay Yuyan Enstrümanları A.Ş., Ltd.	LP-1500	Dereceli yüksek irtifa hipobarik hipoksisini simüle etmek için kullanılır
Hypoxyprobe-1 Kiti	Hypoxyprobe Inc.	HP1-100	In vivo hipoksi tespiti için kullanılır
IF555 Tyramide sinyal yükseltme kiti	Servicebio	G1233	Gelişmiş floresans sinyal güçlendirmesi için kullanılır
IL-10 antikoru	HuaBio	HA722032	Anti-inflamatuar sitokin tespiti (Sulandırma 1:100)
IL-1β Antikor	HuaBio	HA723965	Pro-inflamatuar sitokin tespiti (Sulandırma 1:100)
ImageJ yazılımı	Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH), ABD	https://imagej.net/ij/download.html	Görüntü niceliği
İzofluran	RWD Yaşam Bilimleri Şirketi, Ltd.	R510-22-16
Ki-67 antikoru	HuaBio	HA721115	Keratinosit proliferasyonunun tespiti (Sulandırma 1:400)
Lazer lekeli kan akışı görüntüleme sistemi	RWD Yaşam Bilimleri Şirketi, Ltd.	RFLSI ZW	Değerlendirme  Kan Perfüzyonu
LDH Test Kiti	Nanjing Jiancheng Biyomühendislik Enstitüsü	A005-1-2	Serum LDH ölçümü
Masson' s trikrom boyama kiti	Servicebio	G1006-100ML	Kolajen biriktirme analizi
MDA test kiti	Nanjing Jiancheng Biyomühendislik Enstitüsü	A003-1-1	Lipid peroksidasyon değerlendirmesi
Sirius kırmızı lekeleme kiti	Servicebio	G1078-100ML	Kolajen I/III farklılaşması
SOD test kiti	Nanjing Jiancheng Biyomühendislik Enstitüsü	A001-1-1	Serum SOD aktivite ölçümü
TNF-α Antikor	HuaBio	ER65189	Pro-inflamatuar sitokin tespiti (Sulandırma 1:200)
VEGF-A antikoru	HuaBio	ET1604-28	Anjiyogenezle ilişkili sinyalizasyonun tespiti (Sulandırma 1:200)