Burada, Promega Çift GloTM Lusiferaz Testi Sistemi kullanılarak bir lusiferaz tabanlı muhabiri gen yaklaşımı ile fagositoz indüklenen gen ekspresyon değişiklikleri incelemek için prosedürler açıklanmaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Membran Biyogenez bir Lusiferaz Tabanlı Reporter Gen Testi ile incelenmesi
Bu makalede
Özet
Özet
Membran biyogenezi sırasında farklı lipid sentez yollarının koordinasyon çalışma için, membran biyogenezi indüklenebilir bir şekilde ve hızla oluşan bir deneysel sistemi ile çalışmak için yararlıdır. Biz hücreler hızla parçacık engulfment sırasında malzeme sarma gibi kayıp membran havuzları doldurmak için membran lipidleri sentez olarak lateks boncuk fagositoz bu amaçlar için pratik olduğunu bulduk. Burada, Promega Dual-Glo Lusiferaz Testi Sistemi kullanılarak bir lusiferaz tabanlı muhabiri gen yaklaşımı ile fagositoz indüklenen gen ekspresyon değişiklikleri incelemek için prosedürler açıklanmaktadır.
Protokol
Hücre Kültürü
- İnsan embriyonik böbrek 293 (HEK293) hücreleri Stok kültürler antibiyotik bir kokteyl (penisilin ml başına 100 birimleri ve 100 mikrogram ile desteklenmiş Dulbecco'nun Modifiye Kartal Kullanıcı Orta (DMEM) oluşan 'orta A', 10-cm kültür yemekleri büyüdü. başına ml streptomisin sülfat) ve% 10 fetal sığır serumu (FBS).
- Bir deney için hücreler kurmak için, orta emdi, ve hücreler 5 ml fosfat ile iki kez yıkanır tamponlu salin (PBS) çözümü.
- PBS sonra kaldırılır ve 0.6 ml% 0.25 'lik tripsin içeren bir çözüm ile değiştirilir.
- Hücreleri ayırmak başlamıştır kadar çanak 37 ˚ C'de yaklaşık 2 dakika süreyle....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların beyan edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Yeniden basım ve izinler
